一种氧化ldl抑制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种氧化LDL抑制剂，所述抑制剂可(i)与氧化LDL特异性结合、(ii)抑制氧化LDL的生理活性、以及(iii)抑制氧化LDL进入到细胞内。本发明所涉及的氧化LDL抑制剂的有效成分为Del-1蛋白质。Del-1蛋白质由一些氨基酸序列组成，例如，序列编号1所示的氨基酸序列。
【专利说明】一种氧化LDL抑制剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及氧化低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein, LDL)抑制剂领域，该 抑制剂可（i)与氧化LDL特异性结合、（ii)抑制氧化LDL进入到细胞内、以及（iii)抑制 氧化LDL依赖性的细胞反应。本发明所涉及的氧化LDL抑制剂，靶向作用于氧化LDL，并抑 制氧化LDL与其受体的相互作用。
【背景技术】
[0002] 已知，低密度脂蛋白经氧化所生成的氧化LDL，会促进动脉硬化的进展，通过降低 血液中氧化LDL的量，可起到抗动脉硬化作用。例如，公开了一种动脉硬化预防剂，按照干 燥重量换算，其以含有低于重量的95%的原花青素的松树皮提取物为有效成分（例如，参 考专利文献1)。松树皮提取物能有效地抑制血管中脂类的氧化，因此，服用松树皮提取物， 可降低血液中氧化LDL的含量。
[0003] 另一方面，有关氧化LDL促进动脉硬化进展的作用，被认为是由于氧化LDL通 过凝集素样氧化 LDL 受体（LOX-l:Lectin_like oxidized low density lipoprotein rec印tori)进入到血管内皮细胞中而产生的。L0X-1已被鉴定为血管内皮细胞的氧化LDL 受体，但是，目前我们所了解到的是，L0X-1是一种促进炎症、动脉硬化、血栓、心肌梗死、导 管治疗后的血管再狭窄的心血管疾病的因子。总而言之，通过抑制氧化LDL与L0X-1的结 合、以及氧化LDL进入到血管内皮细胞，也可获得抗动脉硬化的效果。
[0004] 现有技术中，含有这类L0X-1抑制作用的预防剂，是一种含有以凤尾蕨科凤尾草 植物提取物为有效成分的、具有L0X-1对抗作用的组成物（例如，参考专利文献2)，或者是 含有以蜜柑科植物提取物为有效成分的、具有L0X-1对抗作用的动脉硬化抑制剂（例如，参 考专利文献3)，或者是具有L0X-1对抗作用的、以三聚体以上的原花青素为有效成分的凝 集素样氧化型LDL受体抑制药物（例如，参考专利文献4)等。
[0005] 但是，现有技术中，发展型内皮蛋白质1 (developmental endothelial locus-1， 以下称"Del-1"）是在血管内皮细胞或巨噬细胞中表达、分泌的蛋白质中的一种。Del-1具 有以下几个特点。
[0006] (1)Del-Ι在脑或肺组织中高度表达（例如，参考非专利文献1)。
[0007] (2)Del-Ι通过Del-Ι的C末端的Cl、C2结构域与磷脂酰丝氨酸（PS)相结合，促 进巨噬细胞吞食凋亡细胞（例如，参考非专利文献2)。
[0008] (3) Del-Ι会促进血管新生（例如，参考非专利文献3)。
[0009] (4) Del-Ι抑制白细胞与内皮细胞的黏合（抗炎作用）（例如，参考非专利文献1)。
[0010] (5)可通过损伤血管或低氧状态诱导Del-ι的表达（例如，参考非专利文献4)。
[0011] 早期抟术f献
[0012] 专利文献
[0013] 【专利文献1】日本专利公开公告"专利公开2005-23032号公报（
【公开日】：2005年 1月27日）"
[0014] 【专利文献2】日本专利公开公告"专利公开2007-297381号公报（
【公开日】：2007 年11月15日）"
[0015] 【专利文献3】日本专利公开公告"专利公开2007-320956号公报（
【公开日】：2007 年12月13日）"
[0016] 【专利文献4】日本专利公开公告"专利公开2011-6326号公报（
【公开日】：2011年 1月13日）"
[0017] 非专利文献
[0018] 【非专利文献 1 】Choi EY et al. Del-1, an endogenous leukocyte-endothelial adhesion inhibitor, limits inflammatory cell recruitment. Science 2008, Vol. 322, n o. 5904，pll01-1104。
[0019] 【非专利文献 2】Hanayama R et al· Expression of developmental endothelial locus-lin a subset of macrophages for engulfment of apoptotic cells.The Journal of imuunology 2004, vol. 172, no. 6, p3876-3882〇
[0020] 【非专利文献 3】Penta K et al· Dellinduces integrin signaling and angiogenesis by ligation of alphaVbeta3. JBiol. Chem., 1999, Vol. 274, no. 16,plll01-11109。
[0021] 【非专利文献 4】Rezaee M et al· Dellmediates VSMC adhesion，migration，and proliferation through interaction with integrin alpha(v)beta(3). Am J Physiol Hert Circ Physiol 2002,vol.282,no. 5,pl924_1932。
[0022] 【非专利文献5】Scheurer SB et al· Modulation of gene expression by hypoxia in human umbilical cord vein endothelial cells:A transcriptomic and proteomic study. Proteomics 2004, vol. 4, no. 9, pl737_1760〇
[0023] 【非专利文献 6】Steinbrecher UP. Receptors for oxidized low density lipoprotein. Biochim Biophys Acta. 1999, vol. 436, no. 3, p279_298。
【发明内容】
[0024] 众所周知，氧化LDL进入到细胞内时，不仅仅是通过L0X-1进行，而且还会通过一 种称为清道夫受体的一组氧化LDL受体进行（参考非专利文献6)。除L0X-1以外的氧化 LDL受体，还存在以下几种，例如清道夫受体A(scavenger receptor-A 1/11，SR-A)、CD36、 B 族 I 型清道夫受体（scavenger receptor class B type I，SR_BI)等。
[0025] 专利文献2-4中所记载的药物，为抑制L0X-1的药物，因此，这种药物对于通过 L0X-1摄取氧化LDL的细胞是有效的，但是，未必对通过其他氧化LDL受体摄取氧化LDL的 细胞有效。因此，仅仅依靠专利文献2-4中所记载的药物，有时未必是一种有效治疗动脉硬 化的方法。
[0026] 为了解决上述问题，需要分别准备抑制各种氧化LDL受体的抵抗体、或者是准备 一种能够有效抑制全部氧化LDL受体的单一性抵抗体。但是，这类抵抗体目前尚未被发现。 [0027] 因此，本发明所要解决的问题在于提供一种氧化LDL抑制剂，该氧化LDL抑制剂， 并不是以氧化LDL受体为靶向物，而是以氧化LDL本身为目标起作用，进而抑制氧化LDL受 体与氧化LDL的结合。
[0028] 本发明的发明人等，为了得到所述的抑制剂，进行了各种深入研究，最终发现血管 内皮细胞或巨噬细胞中分泌的蛋白质Del-Ι，这种蛋白质具有以下特性，即可（i)与氧化 LDL特异性结合、（ii)抑制氧化LDL进入到细胞内、以及（iii)可抑制氧化LDL依赖性的细 胞反应，至此本发明完成。也就是说，本发明包括以下几个发明。
[0029] 本发明所涉及的氧化LDL抑制剂，其有效成分中含有Del-1 (Developmental endothelial locus-1)蛋白质。
[0030] 本发明所涉及的氧化LDL抑制剂中，所述Del-1蛋白质，可以是
[0031] (a)由序列编号1所示氨基酸序列组成的蛋白质，或者
[0032] (b)由新的氨基酸序列组成的、且具有氧化LDL抑制活性的蛋白质，该新的氨基酸 序列由序列编号1所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入、或添加 而获得。
[0033] 而且，本发明也包括，含有所述本发明涉及的氧化LDL抑制剂的药学组成物。
[0034] 本发明中得到的氧化LDL抑制剂，并不是如以前所知的药物一样，以氧化LDL受体 为靶向物，而是以氧化LDL本身为目标进行结合，进而抑制氧化LDL进入到细胞内。因此， 发明人认为，本发明中得到的氧化LDL抑制剂，可以抑制所有的通过氧化LDL受体摄取氧化 LDL的细胞。所以，本发明中得到的氧化LDL抑制剂，将有可能成为有效治疗或预防因氧化 LDL引起的动脉硬化性疾病等的药物。
[0035] 而且，更为让大家惊叹的是，本发明中得到的氧化LDL抑制剂，可抑制氧化LDL依 赖性细胞反应（例如，NF- κ B以及SRF的激活）。
[0036] 本发明中得到的氧化LDL抑制剂中所含有的有效成分Del-Ι，有关其存在上述作 用的情况，人们此前对其一概不知，这种新型作用是由本发明的
【发明者】新发现的。因此，即 使是同行技术人员也无法轻易地完成本发明，而且，本发明所起到的效果，也是同行技术人 员所无法预想得到的。
【专利附图】
【附图说明】
[0037] 图1表示Del-Ι的结构以及氨基酸序列。
[0038] 图2中（a)表示对ELISA检测Del-Ι与LDL或氧化LDL结合的原理进行说明的概 念图，图2中（b)表示对结合LDL或氧化LDL后的Del-Ι进行ELISA检测的结果。
[0039] 图3表示对Del-Ι影响LDL受体表达细胞或L0X-1表达细胞摄取氧化LDL或LDL 进行评价的结果，图3中（a)表示在不存在Del-Ι的条件下，对LDL受体表达细胞摄取Dil 标记LDL的细胞的荧光显微镜图像；图3中（b)表示在Del-1存在条件下（30 μ g/ml)，对 LDL受体表达细胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光显微镜图像；图3中（c)表示在不存在 Del-Ι的条件下，对L0X-1表达细胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光显微镜图像；图3中（d) 表示在Del-1存在条件下（30 μ g/ml)，对L0X-1表达细胞摄取Dil标记氧化LDL的细胞的 荧光显微镜图像；图3中（e)表示对LDL受体表达细胞，在Del-Ι不存在或存在（30 μ g/ml) 条件下，摄取Dil标记LDL的细胞的荧光强度、以及对L0X-1表达细胞，在Del-1不存在或 存在（30 μ g/ml)条件下，摄取Dil标记氧化LDL的细胞的荧光强度。
[0040] 图4表示Del-Ι是否可以抑制各种氧化LDL受体表达细胞（L0X-1表达细胞、SR-A 表达细胞、⑶36表达细胞、SR-ΒΙ表达细胞）摄取氧化LDL的研究结果。
[0041] 图5表示Del-ι是否可以抑制内源性表达氧化LDL受体的人血管内皮细胞 (HUVEC)以及巨噬细胞（分化诱导为巨噬细胞的THP-1)摄取氧化LDL的研究结果，图5中 (a)表示采用人血管内皮细胞（HUVEC)时的荧光显微镜图像以及图表，图5中（b)表示采用 巨噬细胞（分化诱导为巨噬细胞的THP-1)时的荧光显微镜图像以及图表。
[0042] 图6表示对Del-Ι抑制氧化LDL依赖性细胞反应（NF- κ B以及SRF的激活）的效 果进行评价的结果，图6中（a)表示对NF- κ B激活的研究结果，图6中（b)表示对SRF激 活的研究结果。
[0043] 图7中的（a)以及（b)，表示使24周龄的野生型小鼠（图中以"WT"表示）自由摄 取高脂肪饲料20周，其主动脉根部的脂质染色图像（oil Red 0染色图像），（c)以及（d) 表示24周龄的Del-1过度表达小鼠（图中以"Del-1-Tg"表示）的主动脉根部的脂质染色 图像（oil Red 0染色图像），（e)表示对主动脉根部所观察到的脂质沉降面积进行定量测 定后的结果。
【具体实施方式】
[0044] 以下，将对本发明进行详细阐述，但本发明的范围并不仅仅局限于这些说明，除了 以下示例以外，在不影响本发明主旨的范围内，也可通过其他方式进行适当变更而得到本 发明。另外，本说明书中所记载的全部已公开文献，在本说明书中将作为参考进行引用。
[0045] [本发明中得到的氧化LDL抑制剂]
[0046] 本发明中得到的氧化LDL抑制剂，以含有Del-1 (developmental endothelial locus-1)蛋白质为有效成分。
[0047] 已知，此处的"Del-1"是在人血管内皮细胞或巨噬细胞中表达、分泌的蛋白质（例 如，参考非专利文献2)。图1表示Del-Ι的结构及其氨基酸序列。Del-Ι也被称为"Homo sapiens EGF-like repeats and discoidin I-like domains3(EDIL3)，'，其氨基酸序列以 及核苷酸序列，在基因数据库（Genbank)中以登录号：NM005711进行了公开。序列编号1表 示Del-Ι的氨基酸序列、序列编号2表示其核苷酸序列。
[0048] Del-Ι是由480个氨基酸组成的蛋白质，从N末端开始分为S、E1、E2、E3、C1、C2结 构域。"S"表不 Signal peptide、"E"表不 EGF-like domain、"C"表不 factor5/8C-terminal domain。尤其是，Del-1在C末端的Cl、C2结构域与磷脂酰丝氨酸（PS)结合，促进巨噬细 胞对凋亡细胞的吞食（例如，参考非专利文献2)。已知Del-Ι具有促进血管新生的作用 (例如，参考非专利文献3)、以及抗炎症作用（例如，参考非专利文献1)。另外，在Del-Ι的 E2中存在由精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸组成的RGD序列（RGD肽）。在多种构成细胞矩阵 (ECM)的蛋白质中，RGD序列是一种通用的氨基酸序列，与细胞黏合紧密相关。
[0049] 本发明的
【发明者】等，发现了 Del-Ι的新型作用，S卩（i)可与氧化LDL特异性结合、 (ii)可抑制氧化LDL进入到细胞内、以及（iii)可抑制氧化LDL依赖性的细胞反应，最终完 成了有效成分中含Del-Ι的氧化LDL抑制剂的发明。
[0050] 此处，本发明中的"Del-Ι蛋白质"，不仅仅是指（a)由序列编号1所示的氨基酸 序列所组成的Del-Ι，而且指（b)由新的氨基酸序列组成的、且具有氧化LDL抑制活性的 Del-Ι的突变体，该新的氨基酸序列由序列编号1所示氨基酸序列，经过一个或多个氨基酸 残基的取代、缺失、插入、或添加而获得。在此值得说明的是，只要"Del-Ι蛋白质"具有氧化 LDL抑制活性，就也包括上述（a)以及（b)所示的蛋白质。另外，"Del-1蛋白质"并不仅限于 序列编号1所示的人源Del-Ι，也包括其他哺乳动物源的Del-Ι。例如，猴源Del-1 (Genbank 登录号：NM001132845 等）、牛源 Del-1 (Genbank 登录号：XM618255)、猪源 Del-1 (Genbank 登录号：XM003123766)、鸡源 Del-1 (Genbank 登录号：XM424906)、大鼠源 Del-1 (Genbank 登 录号：XM002728994)、小鼠源Del-1 (Genbank登录号：NM001037987)等，皆可适用于本发明。 而且，"Del-1蛋白质"中具有序列编号1所示氨基酸序列以外的其他氨基酸序列，且也包 括与"Del-Ι"具有相同活性的Del-Ι样蛋白质。总而言之，除非本说明书中有特殊说明，则 "Del-Ι"就是指由序列编号1所示氨基酸组成的蛋白质，"Del-Ι蛋白质"也表示Del-Ι、人 源以外的Del-1、Del-Ι突变体、Del-Ι部分蛋白质、以及Del-Ι样蛋白质。
[0051] 此处所述"经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入、或添加"，是指根据定 位诱发突变方法等已公开的突变体多肽制作方法，对多个（优选10个以下、更优选7个以 下、最优选5个以下）可进行取代、缺失、插入或添加的氨基酸，进行取代、缺失、插入、或添 加操作。这种蛋白质突变体，并不仅局限于，具有通过已公开的突变体多肽制作方法人为导 入的突变的蛋白质，也可以是天然存在的、将突变蛋白质进行单离精制操作后的物质。
[0052] 在此值得说明的是，本发明中的Del-Ι蛋白质，也可包括附加的多肽。附加的多 肽，可列举以下几种，例如，His或Myc、Flag等表位标记多肽。
[0053] 另外，本发明中的Del-Ι蛋白质，也可以是将编码Del-Ι蛋白质的多核苷酸（称为 "Del-Ι基因"）导入到宿主细胞，然后在细胞内表达该蛋白质的状态；也可以是从细胞、组 织等中进行单离精制的情况。另外，Del-Ι蛋白质也可以是化学合成的物质。
[0054] 此处所述"具有氧化LDL抑制活性"，是指Del-Ι的突变体具有（i)与氧化LDL特 异性结合、（ii)抑制氧化LDL进入到细胞内、以及（iii)抑制氧化LDL依赖性的细胞反应 的作用。有关Del-Ι的突变体是否具有氧化LDL抑制活性，可根据实施例中所记载的方法 进行确认。
[0055] 具体而言，如果可以根据实施例1所记载的方法，可以确认Del-Ι的突变体与氧化 LDL特异性结合的话，则可判断所述（i)与氧化LDL特异性结合的事实。另外，如果根据实 施例2所记载的方法，在Del-Ι突变体存在条件下氧化LDL对细胞内的进入，较Del-Ι突变 体不存在条件下明显减少的话，则可判断Del-Ι突变体（ii)抑制氧化LDL进入到细胞内的 事实。另外，如果根据实施例3所记载的方法，Del-Ι突变体存在条件下的NF-κ B以及SRF 信号，较Del-Ι突变体非存在条件下明显减少的话，则可判断Del-Ι突变体（iii)抑制氧化 LDL依赖性的细胞反应的事实。在此值得说明的是，有关Del-Ι突变体存在条件下的数据， 对于Del-Ι突变体不存在条件下的数据而言是否存在显著减少的情况，可通过以下进行判 断，例如，实施Student t检验，如果前者数据较后者数据存在显著减少的话（危险率5%以 下），则可判断"显著减少"。
[0056] 因此，同行业技术人员将能够理解记载在说明书中的"（b)由新的氨基酸序列组 成的、且具有氧化LDL抑制活性的Del-Ι的突变体，该新的氨基酸序列由序列编号1所示氨 基酸序列，经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入、或添加而获得"。此外，同行业技 术人员无需进行过多的实验，即可根据本说明书的记载得到Del-Ι的突变体。
[0057] 本发明中得到的氧化LDL抑制剂中所含有的Del-Ι蛋白质的量，无特别限制，只要 是充分的能使氧化LDL抑制活性奏效的量即可，可考虑到Del-Ι蛋白质的精炼度、剂型或摄 取方法等，适当的进行决定。例如，在本发明中，为了能更为充分地发挥氧化LDL抑制活性， Del-Ι蛋白质的含有率，优选为氧化LDL抑制剂的50% (w/w)以上、更优选80% (w/w)以 上、最优选100% (w/w)。
[0058] [本发明中得到的药学组成物]
[0059] 本申请发明的药学组成物，含有所述本发明中得到的氧化LDL抑制剂。本发明中 得到的药学组成物，可抑制氧化LDL进入到细胞内，且也可抑制氧化LDL依赖性细胞反应， 因此，可以预见该药学组成物在治疗或预防氧化LDL引起的各种疾病、尤其是动脉硬化性 疾病方面，起到一定的效果。
[0060] 本发明中得到的药学组成物，在不影响氧化LDL抑制活性的前提下，也可以添加 药学上允许的、氧化LDL抑制剂以外的其他成分（例如，药学上可接受的载体等）。
[0061] 此处，将对所述"药学上可接受的载体"进行如下说明。本说明书中"药学上可接 受的载体"（以下，只称为"载体"），是指在生产药品、或农药（如兽药）时，以辅助处方为 目的而采用的物质，该物质不影响有效成分。而且，在接受本发明所涉及的药学组成物的个 体中，应该是无毒性的、且载体本身也不会诱导有害抗体的产生。
[0062] 所述载体，采用可作为药剂材料使用的各种有机或无机载体物质，可根据后述的 药学组成物的给药形式以及剂型，进行适当选择。例如，可配合固体制剂中的赋形剂、润滑 齐IJ、结合剂、崩解剂等；液体制剂中的溶剂、溶解辅助剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、舒缓剂等； 防腐剂；抗氧化剂；稳定剂；调味剂等，但本发明不仅仅限于此。
[0063] 所述"赋形剂"可以为以下物质，例如，乳糖、白糖、D-甘露糖醇、木糖醇、山梨糖醇、 赤藓糖醇、淀粉、结晶纤维素等，但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即 可。
[0064] 所述润滑剂可以为以下物质，例如，硬脂酸镁、硬脂酸钙、石蜡、滑石、胶态硅石等， 但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0065] 所述"结合剂"可以为以下物质，例如，α-淀粉、甲基纤维素、结晶纤维素、白糖、 D-甘露糖醇、海藻糖、糊精、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯比咯烷酮等，但无特 殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0066] 所述"崩解剂"可以为以下物质，例如，淀粉、羟甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、 羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉纳等，但无特殊限定，只要是在制药领域中 通常可采用的物质即可。
[0067] 所述"溶剂"可以为以下物质，例如，注射用水、酒精、丙二醇、聚乙二醇、香油、玉米 油、三辛酸甘油酯等，但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0068] 所述"溶解辅助剂"可以为以下物质，例如，聚乙二醇、丙二醇、D-甘露糖醇、海藻 糖、苯甲酸苄酯、乙醇、三氨基甲烷、胆固醇、三乙醇胺、碳酸钠、柠檬酸钠等，但无特殊限定， 只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0069] 所述"悬浮剂"可以为以下物质，例如，硬脂、月桂基硫酸钠、月桂胺基丙酸、卵磷 月旨、苯扎氯铵、苄索氯铵、单硬脂酸甘油酯等界面活性剂，或者聚乙烯醇、聚乙烯比咯烷酮、 羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素等亲水性高分 子等，但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0070] 所述"等渗剂"可以为以下物质，例如，氯化钠、甘油、D-甘露糖醇等，但无特殊限 定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0071] 所述"缓冲剂"可以为以下物质，例如，磷酸盐、醋酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐等的缓冲 液等，但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0072] 所述"舒缓剂"可以为以下物质，例如，苯甲醇等，但无特殊限定，只要是在制药领 域中通常可采用的物质即可。
[0073] 所述"防腐剂"可以为以下物质，例如，对羟基苯甲酸酯类、丙酮氯仿、苯甲醇、苯乙 醇、脱氢乙酸、山梨酸等，但无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0074] 所述"抗氧化剂"可以为以下物质，例如，亚硫酸盐、抗坏血酸等，但无特殊限定，只 要是在制药领域中通常可采用的物质即可。
[0075] 另外，所述稳定剂、调味剂，无特殊限定，只要是在制药领域中通常可采用的物质 即可。
[0076] 本发明所涉及的药学组成物，其给药形式可以是口服给药，也可以是非口服的、静 脉内、直肠内或皮下给药，可根据制剂形态选择适当的给药途径。其中，从方便给药的观点 来看，本发明所涉及的组成物，优选口服给药。在此值得说明的是，本说明书中，上述"非口 服"是指包括脑室内、静脉内、肌肉内、腹腔内、胸骨内、皮下以及关节内注射、以及注入给药 的形式。
[0077] 对本发明所涉及的药学组成物进行口服给药时，相关药学组成物（以下，也称为 "口服剂"）的剂型，可以是以下几种剂型，例如，粉剂、颗粒剂、片剂、微脂粒、胶囊剂（包括 软胶囊、微胶囊）、散剂等固体制剂、或糖浆剂等的液体制剂。
[0078] 所述"液体制剂"的载体，可采用以下物质，例如，水；甘油、乙二醇、聚乙二醇等有 机溶剂；这些有机溶剂与水的混合物等，在制药领域按照通常所采用的方法即可制得。另 外，所述液体制剂，也可包括溶解辅助制剂、缓冲剂、等渗剂、稳定剂等。
[0079] 所述"固体制剂"的载体，可采用以下物质，例如，赋形剂、润滑剂、结合剂、崩解剂、 稳定剂、调味剂等，在制药领域按照通常所采用的方法即可制得。
[0080] 配制所述口服剂时，根据使用目的，也可进一步配合润滑剂、流动促进剂、着色剂、 香料等。
[0081] 另外，对本发明所涉及的药学组成物进行非口服给药时，相关药学组成物（以下， 也称为"非口服剂"）的剂型，可以是以下几种剂型，例如，注射剂、栓剂、丸剂、点滴剂等。相 关非口服剂，可以按照制药领域已公开的方法，将本发明所涉及的药学组成物，溶解或悬浮 到稀释剂（例如，注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、香油、花生油、玉 米油、丙二醇、聚乙二醇等）中，根据使用目的，进一步添加杀菌剂、稳定剂、等渗剂、舒缓剂 等进行配制。
[0082]另外，作为本发明所涉及的药学组成物的具体实施形式之一，在制药领域也可按 照通常所采用的技术，制成缓释制剂。
[0083] 本发明所涉及的药学组成物，可单独给药，也可联用其他药剂进行给药。本发明对 联用给药的方法并无限定，可以是以下几种方法，例如，可以作为与其他药物的混合物进行 给药，也可作为单独的药物与其他药物同时或并行给药，或者也可随时间的推移进行给药。
[0084] 另外，本发明所涉及的药学组成物，其每天的给药次数无特殊限定。只要是本发明 中得到的氧化LDL抑制剂的给药量，在每天所需的给药量的范围之内，可以一天给药一次， 也可分多次给药。
[0085] 在此值得说明的是，本发明中得到的药学组成物，不仅可对人体给药，也可应用于 人类以外的其他哺乳类动物（例如，小鼠、大鼠、家兔、犬、猫、牛、马、猪、以及猴子等），这对 于同行业技术人员而言，应该很容易理解。
[0086] 本发明中得到的药学组成物中氧化LDL抑制剂（或Del-Ι蛋白质）的量无特别限 制，只要是充分地能使氧化LDL抑制活性奏效的量即可，可考虑到Del-Ι蛋白质的精炼度、 剂型或摄取方法、或摄取对象者的性别、年龄、体重、健康情况等因素，适当的进行决定。 [0087] 为了得到氧化LDL抑制活性的效果，可以使本发明中得到的药学组成物中所含 Del-Ι蛋白质的量如下，例如，以干燥重量计，成人每天摄取量10?3000mg、优选150? lOOOmg。
[0088] 以下将结合实施例，对本发明的实施方式进一步详细说明。当然，本发明并不仅限 于以下实施例，有关细节可能会有各种各样的实施方式，这就不用再说了。
[0089] 实施例
[0090] [实施例 1]通过 ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay :酶联免疫吸附测 定法）评价Del-Ι与氧化LDL的结合
[0091](方法）
[0092] (1) Del-1
[0093] 实验中所使用的人源Del-1，从R&D公司购入。该Del-1是在C末端添加 His标记 后的重组蛋白，经CH0细胞表达、精制而得。
[0094] (2)配制 LDL
[0095] 通过将健康者的血液采集到添加有ACD (acid-citrate-dextrose)缓冲液的采血 管内，从该血液中分离回收血浆。向所得到的血浆中加入溴化钾，将比重调整至1. 019后， 在58000转/每分钟（rpm)条件下离心分离20小时。回收下层，通过溴化钾将比重调整至 1. 063后，在58000转/每分钟（rpm)条件下离心分离20小时。超离心机米用Beckman公 司生产的L-80。
[0096] 米用透析膜（Slid-A-Lyzer Dialysis CassetteslOK MWC0、Pierce 公司生产）， 将PBS(-)作为外液，对所回收到的上层进行透析（更换外液4次），得到精制的人LDL。
[0097] (3)配制氧化LDL
[0098] 采用BCA蛋白测定仪（BCA Protein Assay Kit,Pierce公司生产），对精制人LDL 的蛋白质量进行测定，通过PBS(-)调整浓度至3mg/ml，向该溶液中加入硫酸铜，调整浓度 至7. 5μΜ，然后，在37°〇、5%0)2的培养箱内培养16小时。接着，以含2mM EDTA的0. 15M 氯化钠溶液作为透析外液，对该溶液进行透析（更换外液4次），作为人氧化LDL。在此值 得说明的是，在表示实施例结果的图中，有时会将氧化LDL表述为"oxLDL"。
[0099] (4) ELISA
[0100] 在384孔微孔板（Greiner公司生产）中，将抗ΑροΒ抗体（Bindingsite公司生 产）固相化，通过25% Block Ace封闭液（大日本住友制药株式会社生产）进行封闭后，结 合氧化LDL或LDL。用PBS(-)洗净微孔板2次后，添加经溶液（10mM HEPES，150mM NaCl， pH7. 4)稀释的Del-1，室温下使之反应1小时，通过抗His抗体（Invitrogen公司生产）检 测已结合的Del-Ι。图2 (a)表示利用ELISA检测Del-Ι与LDL或氧化LDL结合的原理进行 说明的概念图。
[0101](结果）
[0102] 图2 (b)表示通过ELISA对结合LDL或氧化LDL后的Del-Ι进行检测的结果。
[0103] 根据图2(b)，可确认到Del-Ι在1μ g/ml、3y g/ml、10y g/ml的浓度下与氧化LDL 特异性结合。另一方面，未观察到Del-1对LDL的特异性结合。
[0104] [实施例2]评价Del-Ι对氧化LDL进入细胞的抑制效果
[0105] (方法）
[0106] (1)制作 Dil 标记 LDL 或 Dil 标记氧化 LDL(Dil-oxLDL)
[0107] 采用含2mM EDTA的0. 15M氯化钠溶液，稀释人LDL或人氧化LDL，调整至lmg/ml。 分别向该溶液中添加 Dil (D282, Invitrogen公司生产）调整最终浓度至0. 3mg/ml、添加低 脂蛋白血清（Lipoprotein deficient serum, Sigma公司生产）调整最终浓度至5mg/ml，在 37°C条件下使之反应18小时。Dil采用悬浮在DMS0中的浓度为30 μ g/ml的溶液。
[0108] 反应后，通过氯化钠以及溴化钾将比重调整至1. 15,然后，在58000转/每分钟 (rpm)条件下离心分离处理20小时。米用透析膜（Slid-A-Lyzer Dialysis CassetteslOK MWC0)，将含2mM EDTA的0. 15M氯化钠溶液作为透析外液，对所回收的上层进行透析（更换 外液4次），得到Dil标记LDL或Dil标记氧化LDL。在此值得说明的是，在表示实施例结 果的图中，有时会分别以"Dil-LDL"以及"Dil-oxLDL"来表述Dil标记LDL以及Dil标记 氧化LDL。
[0109] (2)各种受体表达细胞
[0110] 采用含10% FBS的DMEM培养基（GIBC0公司），在37°C、5% C02的条件下，对培养 48小时后的各种细胞应用在本实施例中。各种受体表达细胞，以如下方式制作。
[0111] 采用Lipofectamin2000 (Invitrogen)，向C0S7细胞中导入各种氧化LDL受体的表 达载体或LDL受体表达载体。有关各种氧化LDL受体的表达载体或LDL受体表达载体的详 细信息，如下所述。
[0112] 通过在人cDNA程序库中，克隆人L0X-lcDNA(Genbank登录号：NM002543)、人SR-A cDNA(Genbank 登录号：NM002445)、人 CD36cDNA(Genbank 登录号：NM000072)、人 SR-BI cDNA(Genbank 登录号：NM005505)以及人 LDLR cDNA(Genbank 登录号：NM000527)，来制作 L0X-1 表达载体（pcDNA6. 2-human L0X-1-V5)、SR-A 表达载体（pcDNA6. 2-human SR-A-V5)、 CD36 表达载体（pcDNA6. 2-human CD36-V5)、SR-BI 表达载体（pcDNA6. 2-human SR-BI-V5)、 以及LDL受体（LDLR)表达载体，然后将它们分别插入到哺乳动物表达载体pcDNA6. 2/V5/ GW/D_T0P0(Invitrogen公司生产）中，制作各种受体表达载体。在此值得说明的是，各种受 体的C末端侧添加有V5标记。
[0113] (3)HUVEC(Human umbilical vein endothelial cells :正常人胳静脉内皮细胞）
[0114] 人脐静脉内皮细胞（HUVECs)是从L0NZA公司购入。培养时采用EGM-2培养基 (L0NZA公司生产），在37°C、5% C02条件下进行培养。实验中采用继代次数为7次以下的 细胞。
[0115] (4)THP-1 (人单核细胞白血病细胞株）
[0116] 采用RPMI1940培养基（GIBC0公司生产），该培养基包括含有20 μ Μ 10 % FBS的2-Mercaptoethanol，在37 °C、5 % C02条件下进行培养。实验时，在ΙΟΟηΜ PMA(Phorboll2Myristatel3Acetate)存在条件下培养72小时，采用被分化诱导为巨噬细 胞样的细胞。
[0117] (5)细胞摄取氧化LDL或LDL的试验
[0118] 通过无血清DMEM培养基，洗净接种在384孔微孔板（Greiner公司生产）上的各 种细胞后，加入Del-Ι与Dil标记LDL或Dil标记氧化LDL的混合液，在37°C、5% C02条件 下使其反应。通过INCell Analyzer 1000 (GE healthcare公司生产），对被摄取到细胞中 的Dil标记LDL或Dil标记氧化LDL的突光信号，进行检测、定量评价。
[0119] (结果）
[0120] 就Del-Ι对LDL受体表达细胞或L0X-1表达细胞摄取氧化LDL或LDL的影响进 行了评价，图3表示其评价结果。图3 (a)表示在Del-Ι不存在条件下，对LDL受体表达细 胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光显微镜图像；图3(b)表示在Del-Ι存在条件下（30 μ g/ ml)，对LDL受体表达细胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光显微镜图像。另外图3(c)表示 在Del-Ι不存在条件下，对L0X-1表达细胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光显微镜图像；图 3 (d)表示在Del-Ι存在条件下（30 μ g/ml)，对L0X-1表达细胞摄取Dil标记氧化LDL的细 胞的荧光显微镜图像。
[0121] 另外图3(e)表示在Del-Ι不存在或存在（30 μ g/ml)条件下，对LDL受体表达细 胞摄取Dil标记LDL的细胞的荧光强度，以及在Del-Ι非存在或存在（30 μ g/ml)条件下， 对L0X-1表达细胞摄取Dil标记氧化LDL的细胞的荧光强度。在图3(e)中，在Del-Ι存在 (30 μ g/ml)下摄取Dil标记LDL(或Dil标记氧化LDL)时的荧光强度，以对Del-Ι不存在 下摄取Dil标记LDL(或Dil标记氧化LDL)时的荧光强（100)度的相对值来表示。
[0122] 观察Del-Ι对表达氧化LDL受体L0X-1的细胞摄取氧化LDL的影响时，发现Del-1 在30 μ g/ml的浓度下，抑制了 90 %以上的L0X-1表达细胞对氧化LDL的摄取（根据Student t检验的显著差异检验，危险率5%以下时存在显著差异）。而另一方面，Del-1未抑制LDL 受体表达细胞（LDLR表达细胞）对LDL的摄取。
[0123] 另外，图4表不Del_l是否可以抑制各种氧化LDL受:体表达细胞（L0X-1表达细胞、 SR-A表达细胞、⑶36表达细胞、SR-ΒΙ表达细胞）摄取氧化LDL的研究结果。
[0124] 根据图4可知，Del-Ι不仅对表达L0X-1的细胞，而且对表达其他氧化LDL受体 SR-A、⑶36、SR-BI的细胞，也可抑制其对氧化LDL的摄取。因此，认为Del-Ι并不是以氧化 LDL为靶向物，来抑制细胞摄取氧化LDL的，而是以氧化LDL本身为靶向物，来抑制细胞摄取 的。
[0125] 其次，图5表示Del-Ι是否可以抑制内源性表达氧化LDL受体的人血管内皮细胞 (HUVEC)以及巨噬细胞（分化诱导为巨噬细胞的THP-1)摄取氧化LDL的研究结果。图5(a) 表示采用人血管内皮细胞（HUVEC)时的结果，图5(b)表示采用巨噬细胞（分化诱导为巨噬 细胞的THP-1)时的结果。图5(a)以及图5(b)中的照片为荧光显微镜图像，记载"+Del-1 30 μ g/ml"的照片，为Del-1存在（30 μ g/ml)条件下摄取氧化LDL时的荧光显微镜图像， 未记载"+Del-130 μ g/ml"的照片，为Del-Ι不存在条件下摄取氧化LDL时的荧光显微镜图 像。
[0126] 根据图5可知，通过基因导入，Del-Ι不仅仅可以抑制强制性表达氧化LDL受体的 细胞（参考图4)，而且还可抑制内源性表达氧化LDL受体的人血管内皮细胞（HUVEC)以及 巨噬细胞（分化诱导为巨噬细胞的THP-1)对氧化LDL的摄取。
[0127] 在此值得说明的是，在图5所示的实验中，采用了 BSA作为Del-Ι的对照，但是，未 观察到BSA的摄取抑制作用（参考图5中记载BSA的部分）。图5中记载BSA的部分显示， 使BSA浓度保持在30 μ g/ml下，摄取氧化LDL时的Dil标记氧化LDL的摄取量。
[0128] [实施例3]评价Del-Ι对氧化LDL依赖性细胞反应的抑制效果
[0129] (方法）
[0130] (1)为了研究氧化LDL引起的细胞反应，采用了 TetOn hL0X-l-V5-His/HA-Flag hATl/CHO 细胞（称 "L0X-1-AT1/CH0 细胞"）。
[0131] L0X-1-AT1/CH0细胞以如下方式进行制作。将人LOX-lcDNA(Genbank登录号： NM002543)编入到表达载体pTRE2hyg(Clontech公司生产）中，制作h L0X-1表达载体 (pTRE2hyg-hL0X-l)。采用 Lipofectamin2000 将 pTRE2hyg-hL0X-l 对 CH0 细胞进行基因导 入。为了得到稳定表达株，在lOOyg/ml的G418(Calbiochem公司生产）以及400yg/ml 的hygromycin B (和光纯药株式会社生产）存在条件下进行培养，将因药物选择而剩余的 细胞进行克隆后用于了实验中。
[0132] 对上述所得到的 Tet0n-hL0X-l-V5His 细胞，采用 Lipofectamin2000 共转 染 pTRE2hyg-HA_Flag-hATl 与 pSV2bsr (Funakoshi 公司生产）。为了 得到稳定表达 株，在 hygromycin B(和光纯药株式会社生产）400yg/ml 与 blasticidin SlOOyg/ ml (Funakoshi公司生产）存在条件下进行培养，将因药物选择而剩余的细胞进行克隆后用 于了实验中。
[0133] 对上述所得到的 L0X-1-AT1/CH0 细胞，采用含 10 % FBS、100 μ g/ml 的 G418、 400 μ g/ml 的潮霉素 B (hygromycin B)、以及 10 μ g/ml 的杀稻癌菌素 S (blasticidin S)的 F12培养基（GIBC0公司），在37°C、5% C02条件下进行培养。
[0134] (2)荧光素酶检测
[0135] 在对氧化LDL引起的细胞反应进行评价时，采用了荧光素酶检测。同行业技术人 员对通过氧化LDL激活NF-κ B以及SRF的情况，都充分了解（例如，参考"Circulation Research. 2011 ； 108:797-807, Myocardin-Related Transcription Factor A Mediates OxLDL-Induced Endothelial Injury"）。将突光素酶报告载体pGFI-NFk B或pGFl-SRF(均 为System Biosciences公司生产）与pRL_CMV(Promega公司生产）混合后，采用 Lipofectamin LTX(invitrogen公司生产），对L0X-1-AT1/CH0细胞进行基因导入。基因导 入16小时后，更换为含0. 1 % FBS以及300ng/ml的多西环素（doxycycline)的F12培养 基，在5% C02条件下培养24小时。
[0136] 用PBS(-)洗净细胞后,添加含0· 1% FBS和100ng/ml的多西环素（doxycycline) 的200 μ 1/well的F12培养基。在Del-1存在或不存在条件下添加氧化LDL，在0. 5% C02 培养箱内使其反应20小时。
[0137] 进行突光素酶检测时，采用双突光酶报告测定系统（Dual-Luciferase Reporter Assay System, Promega公司生产）。具体而言，是将反应后的细胞用PBS (-)洗净1次后， 通过Passive lysis buffer回收细胞，溶解，在lOOOOrpm下离心处理2分钟后，取上清作 为样本。采用光度计Centro LB960(Berthold公司生产），测定发光强度，计算出荧光虫荧 光素酶/海萤突光素酶（firefly luciferase/Cypridina luciferase)的值。将未添加氧 化LDL条件下的发光强度作为1，将各发光强度进行图表化（参考图6)。
[0138] (结果）
[0139] 根据图6可知，在11?-1-六1'1/010细胞中，〇61-1(1(^8/1111以及3(^8/1111的浓度） 显著抑制了氧化LDL引起的NF-κ B以及SRF的激活。此时，未观察到BSA的抑制作用。图 6所示数据已进行显著差异检验（Student t检验），危险率不足5 %时存在显著差异的情 况，在图6中附有标记；危险率不足1%时存在显著差异的情况，在图6中附有"**"标 记。
[0140] 因此，确认到了 Del-Ι可抑制氧化LDL依赖性细胞反应的情况。
[0141] [实施例4]评价Del-Ι的动脉硬化抑制效果
[0142] (方法）
[0143] (1)制作Del-Ι高表达小鼠
[0144] Del-Ι高表达小鼠（称"Del-1-Tg小鼠"）以如下方式进行制作。
[0145] 通过人脑cDNA克隆人Del-Ι基因（序列编号2)，插入到哺乳动物表达载 体 pcDNA6. 2/V5/GW/D-T0P0(Invitorogen 公司生产）中，制作人 Del-Ι 表达载体 pcDNA6. 2-hDel-l。
[0146] Del-1-Tg 小鼠的制作，通过 Gordon 等的方法（1980. Proc. Nalt. Acad. Sci. 77:7380-7384)的改良版方法实施。也就是说，用限制酶（MfeI、SmaI)处理人Del-1表 达载体（pcDNA6. 2-hDel-l)，配制含CMV启动子与Del-Ι基因的DNA片段。将该DNA片段显 微注射到C57BL/6JJcl原核阶段胚胎的雄性原核中。麻醉状态下将该DNA注入胚胎，移植 到假妊娠雌性小鼠（ICR小鼠）的输卵管内，使其自然分娩，得到第一代（Founder)小鼠幼 崽（Del-1-Tg 小鼠）。
[0147] (2)脂质染色
[0148] 使24周龄的Del-Ι高表达小鼠（称为"Del-1-Tg小鼠"）以及野生型小鼠，自由 摄取高脂肪饲料（商品名：Atherogenic Rodoent Diet (型号：D12336)、Research Diets 公 司生产）20周。对这些小鼠进行解剖，从各个体中切除主动脉，通过oil Red 0染色液（和 光纯药工业株式会社生产），对主动脉中的脂质进行染色。具体操作如下。
[0149] 对进行20周高脂肪饮食负荷的小鼠，在异氟醚吸入麻醉状态下，进行开腹以及开 胸，并使用生理盐水（大塚制药生产）灌注主动脉，然后，从小鼠体内切除主动脉。对离体 主动脉，在生理盐水中用手将周边组织剥离，然后，采用4% (v/v)多聚甲醛-PBS进行固定。 通过60% (v/v)异丙醇洗净以及平衡已固定的主动脉后，使用oil Red 0染色液（和光纯 药工业株式会社生产），对沉降到主动脉上的脂质进行染色。然后，使用60% (v/v)异丙醇 进行脱色。
[0150] 对染色后的组织，进行光学显微镜观察。
[0151] (结果）
[0152] 结果如图7所不。图7 (a)以及（b)为自由摄取20周商脂肪词料后的、24周龄野 生型小鼠（图中以"WT"表示）的主动脉根部的脂质染色图像（oil Red 0染色图像）。另 夕卜。图7(c)以及⑷为24周龄的Del-Ι过度表达小鼠（图中以"Del-1-Tg"表示）的主 动脉根部的脂质染色图像（oil Red 0染色图像）。图7(a)_(d)中，用箭头表示阳性染色部 位。另外，图7(e)表示在主动脉根部中所观察到的脂质沉降面积的定量结果。
[0153] 通过图7,可见Del-1-Tg小鼠中的脂质沉降现象明显少于野生型小鼠 （p <0.001)。因此，可确认到通过在小鼠中过度表达Del-1，可抑制动脉硬化的进展。也就是 说，通过在药理学上采用Del-Ι蛋白质，存在抑制动脉硬化等循环系统疾病的可能性。
[0154] 从上述阐述，发明人认为，本发明可（i)与氧化LDL特异性结合、（ii)抑制氧化 LDL进入到细胞内、以及（iii)抑制氧化LDL依赖性的细胞反应。因此，本发明中得到的氧 化LDL抑制剂，将有可能成为有效治疗或预防因氧化LDL引起的动脉硬化性疾病等的药物。
[0155] 故，本发明可应用于某些工业领域，例如，医疗以及医药品相关工业。
[0001] 序到表 <ι!σ:媲，)·行政法人N:/iW坏器病巧究中 CEMTE1) ^ ? ?,0> f:lV4it Ι·ΠΙ ?Φ：，Μ;?:1 ((hnHxi'c! ] oH-dsMss i y I ? [>upru： i1 ? -- Innih'U'r) <130； \i：VMM <!50> JF 2012-027793 <131； 2012-02-10 <160> 2 <170> Patentln version 3.5 <2i0> 1 <2il> -ISO <2I2> PRT <213> 人36 (Horao sapiens) <400：；- 1 Me t Λ rg Ser Vh I A ! a Vh I T rp L e u I.e ：i Vn 1 G 1 >· leu Sv r Leπ G 1 y 15 10 15 Val Fro Gin Fhe Gly Lys Giy Asp lie €ys Asp Pro Asn Pro Cys Glu 20 25 30 Asn G]y G1y lie Cys Leu Pro Gly Leu Ala Asp Gif Ser Phe Ser Cys 35 40 45 G1 is Cys Pro Asp Gly F h e I h r Asp F r o ：\ s n Lys Ser Ser a I V a i G1 u 50 55 60 Val Ala Ser Asp Glu Glu Gly Pro Thr Ser A La Gly Pro Cys Thr Pro 65 70 75 80 As n Pro Cys His Λ s n Giy l·: i y 11r C y s G ? n lie S e r G]u Λ]a 1 y r Λ rg 85 30 95 G1 j Asp Thr Phe He Gly Ijr Val Cys Lys Cys Pro Arg Gly Phe Asn too 105 m
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[0003] Fro Λ rg L ys ΛI u A r- g I.en Asf) Ly s G1 n Gif Ly s Val Asri Ala Trp Thr 355 3(50 365 Sc r (r 1 y \\ i s ksn. Asp Gin Ser Gin Trp Ley Gin Val Asp Leu Leu Val 370 375 380 Prol.ys Thi- Giy Hd1"、Thr G卜](Hy Λ!" 38a 390 ：m ?00 His Val Gin Phe Val Gif Ser lyr l.ys Lcj \1a lyr Ser Asn Asp G\y 405 ?ΙΟ -II5 Glu flis Trp Thr Val Tyr GI r Asp Gin l.ys Gin Ar^ l.ys Asp l.ys Val ?20 125 130 Phe Gin Giy Asn Phe Asp Asi Asp Tfir II i s Arg l.ys Asn Vr. I Me Asp 43〇 MO 1-15 Pro P ro I i e lyr Ala Arg His He Arg lie Leu V r〇 Trp Ser Trp Tyr 450 455 160 (i I y Λ rg lie Thr Leu Λ r |4 Ser G I η I. e u l.e i ?.? 1 y C y s Thr (? I u (? i u (? i u 465 -170 475 480 <2?0> 2 <21 Γ> 14 13 <212> ΠΧΛ d3> 人源（Homo s;ij>ieny) algaagCKCl CMgUigec'M】 c? MKCI c t ? κ g! cggKC ! ch gee! eggt g! ccxccaM" c· 60 ? K ii, a Π i g;i ! rrr-iia I ννα ： κ \ ^,ιηηη?! g π I r S ^ UfHrr;ig|〇s i 20 I I g^ct gn ! g I t ! Η.· Γ? gl g；:g! Kl t：C；Ma ? g^Cl I C；!C；igiU；CC ?：?!?：.： ? g! 1 Ct ! I gi ? I KM ngg l ? ; r ηρ,-- : ^aarr;i;ir ! I i rr r ? i rr t 2 10 ;i/i f cc^i ? gcc a ! aui ? ggaug a;a:c t gt >iaa a 1 nu^tiinnn ca face gagg * aca i ! c 300 ?!! η^,?{(： ? /? ? μ ? I [gi a;m! g f ww^nt/j-in t ι i i "e;ic 丨 KH.'a ^cariiMCH f h 3150 iia! gnu t gi-g iiHgttgagrc: l i ^caiu.aat ^ : ! ii l g! ncagai ci IκΠ gc I aac 420
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【权利要求】
1. 一种氧化LDL抑制剂，其特征在于，所述氧化LDL抑制剂的有效成分为Del-ι蛋白 质。
2. 根据权利要求1所述的氧化LDL抑制剂，其特征在于，所述Del-Ι蛋白质是， (a) 由序列编号1所示氨基酸序列组成的蛋白质，或者 (b) 由新的氨基酸序列组成的、且具有氧化LDL抑制活性的蛋白质，所述新的氨基酸序 列是由序列编号1所示氨基酸序列，经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入、或添 加而获得。
3. -种药学组成物，其特征在于，所述药学组成物包含如权利要求1或2所述的氧化 LDL抑制剂。
【文档编号】A61P43/00GK104105498SQ201380008513
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年2月7日 优先权日:2012年2月10日
【发明者】沢村达也, 垣野明美 申请人:独立行政法人国立循环器病研究中心