本发明涉及水产养殖技术领域，具体地说，是表没食子儿茶素没食子酸酯作为防治对虾白斑综合症药物的应用。
背景技术：
对虾肉质鲜美营养丰富，富含钙、镁、磷、碘、钾等微量元素，是国际水产市场上最受消费者欢迎的水产品种之一。但是，高密度的对虾养殖业也深受病害的困扰，其中对虾白斑综合症病毒病(White spot syndrome virus,WSSV)是众多病害中较为严重的一种疾病，也是世界对虾养殖业面临的共同难题。WSSV是属于线极病毒科(Nimaviridae)、白斑病毒属(Whispovirus)，有囊膜的环状dsDNA病毒，约300kb。WSSV传染力强、致死率高、寄主谱广泛，其不仅能够感染对虾，还能感染克氏原鳌虾(Procambarus clarkii)、中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)等淡水和海水甲壳类动物。为了防控WSSV的传播和感染，现在主要采用筛选抗病力较强的品种进行繁育以期阻断病毒病的传播。1998年中国科学家利用扩增片段多态性技术选育出抗WSSV病毒的中国对虾新品种，2002年，通过家系选育技术培育出存活率高、生长速度快的抗WSSV的南美白对虾新品种。斑节对虾(Penaeus monodon)，Rout等和RajeshKumar等分别开发了DNA疫苗。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)Mejia-Ruiz等和Jia等分别开发了dsRNA疫苗。日本囊对虾(Marsupenneusjaponicas)Caipang等和Mavichak等分别开发了蛋白亚单位疫苗。克氏原螯虾(Procambarus clarkia)魏克强等、雷杰等和Jha等分别开发了蛋白亚单位疫苗。另外，分子诊断检测技术、生态养殖技术、免疫增强剂和功能性对虾饲料添加剂等也都先后应用于对虾白班综合征病害的防控应用中。虽然在部分地区或养殖场对虾白班综合征病毒得到了缓解和控制，但由于这些技术大都处于中试推广阶段以及使用成本等问题，对虾白班综合征病毒病依然是影响对虾养殖业的重要病害。
表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate，EGCG)是茶多酚中最有效的活性成分，属于儿茶素，其化学式为C22H18O11。EGCG具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的提取工艺已经公开，如绿茶中EGCG提取纯化方法及其与牛血清蛋白相互作用的研究(王进.绿茶中EGCG提取纯化方法及其与牛血清蛋白相互作用的研究[D].山东农业大学,2009.)绿茶910EGCG的提取工艺(陈团生,程祖锌,杨志坚,等.绿茶910EGCG的提取工艺[J].福建农林大学学报:自然科学版,2012,41(1):18-23.)六堡茶中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)提取工艺研究(韦丽娜,覃月宁,黄海月,等.六堡茶中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)提取工艺研究[J].化学工程与装备,2015(10):8-11.)粗茶多酚中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的提取方法研究(王辉.粗茶多酚中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的提取方法研究[J].安徽农业科学,2008,36(21):9130-9132.)本发明中涉及的各种纯度的表没食子儿茶素没食子酸酯产品已经商品化在市场上均可购买到。例如Sigma-Aldrich公司、芜湖天远生物科技有限公司、南京景竹生物科技公司等均可购买到。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供表没食子儿茶素没食子酸酯一种新用途。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：表没食子儿茶素没食子酸酯在制备防治对虾白斑综合症的药物中的应用。
表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗对虾白斑综合症病毒的药物中的应用。
表没食子儿茶素没食子酸酯的使用浓度为5～40μg/mL。
表没食子儿茶素没食子酸酯的使用浓度为10～40μg/mL。
表没食子儿茶素没食子酸酯的使用浓度为20～40μg/mL。
表没食子儿茶素没食子酸酯的使用浓度为20或40μg/mL。
本发明优点在于：
1、本发明首次通过试验证实，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)能够拮抗对虾白斑综合症病毒(WSSV)病毒的侵入感染，防治对虾白斑综合症。
2、本发明首次通过人工感染试验证实，随着EGCG浓度的升高，感染了WSSV病毒的对虾死亡率呈下降趋势，在EGCG浓度达到20μg/mL和40μg/mL时攻毒的对虾死亡率仅为20％左右。
附图说明
附图1：试验用EGCG纯度检测的HPLC图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
材料与方法
含量为98％表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)购自芜湖天远生物科技有限公司。灭菌超纯水分别配置成1μg/mL,5μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL的药物浓度备用。试验用南美白对虾(Penaeus vannamei)为SPF等级3-4g，经检验WSSV病毒为阴性，养殖中心暂养1周，选择游动状态良好，体色健康活力强的对虾进行试验。
WSSV病毒为本实验室分离纯化，取少量病毒悬液电镜观察确认病毒粒子。灭菌海水稀释1000倍待用。
注射液的制备，取50μL不同浓度EGCG，加入10μLWSSV病毒悬液室温孵育2h，灭菌海水作为阴性对照组。
试验用EGCG纯度的检测
检测方法：高效液相色谱法(HPLC)
色谱柱：C18柱(5μm，250mm×4.6mm)
流动相：甲醇：0.1％磷酸水溶液＝68:32(v/v)
检测波长：279nm
流速：1ml/min
进样量：10μL
HPLC图如附图1所示。本试验中所使用的含量为表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)提取物中组分单一符合试验要求。
安全浓度试验
分别取EGCG含量为1μg/mL,5μg/mL,10μg/mL,20μg/mL,40μg/mL的注射液50μL，相同含量的灭菌海水为对照组。注射对虾，每天换水，统计对虾死亡率。安全浓度试验结果如表1所示。
表1安全浓度试验结果
安全浓度试验结果显示，本试验中所使用的各浓度粗提物对虾均没有死亡。
人工感染试验
把各种不同浓度试验组的注射液分别注射暂养的对虾中，每天换水统计死亡情况。人工感染试验结果如表2所示。
表2人工感染试验结果
人工感染试验结果显示，随着EGCG浓度的升高，感染了WSSV病毒的对虾死亡率呈下降趋势，在EGCG浓度达到20μg/mL和40μg/mL时攻毒的对虾死亡率仅为20％左右。
实施例2
在常规对虾饲料配方中，添加适量的表没食子儿茶素没食子酸酯制成新型对虾饲料，可防治对虾白斑综合症。
实施例3
对虾饲养过程中，选择表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素或者茶多酚，拌料饲喂。
实施例4
对虾养殖过程中，在对虾养殖池塘中泼洒表没食子儿茶素没食子酸酯，可防治对虾白斑综合症。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。