用透明质酸,其衍生物或其它天然或半合成聚合物涂覆物体表面的方法

专利名称：：用透明质酸,其衍生物或其它天然或半合成聚合物涂覆物体表面的方法
技术领域：
：本发明是关于用透明质酸、其衍生物或其它天然或半合成聚合物涂覆物体的外表面以便用于外科手术、医疗保健或诊断等领域的方法。该方法能够使这些聚合物与多种材料制成的物体的表面牢固结合。按照本发明方法处理过的表面其特征在于在水性环境中具有高度的润湿性和粘滑性，并改善了与生物相相互作用方面的特性。例如，它们能够抑制生物体液中细胞或细菌与之粘附。
背景技术：
：透明质酸是实际上以不同浓度存在于所有组织中的一种天然粘多糖。正如本领域技术人员都知道的，透明质酸或其盐或其衍生物、或一般多糖的水溶液其特征在于特别的稠密，粘滑及减少摩擦的能力，该特征基于与人或其它动物体内存在的透明质酸同族的多糖的存在及其功能(MichelsR.G.等，“透明质酸钠在前后节段手术中的应用”(“Sodiumhyaluronateinanteriorandposteriorsegmentsurgery”)，透明质酸的生理化学和药物学特征，(PhysicochemicalandPharmacologicalCharateristicsofHyaluronicAcid)1-15，1989)。由于这些性质，人们对透明质酸族的多糖(包括天然的多糖和在天然化合物基础上化学合成的那些)进行大量的研究。尤其对鉴定一种能将透明质酸(透明凝集素(hyalectin)组份，欧洲专利No.0138572)或其衍生物(U.S.专利No.4,851,521)薄层与其它材料表面永久性固定的方法投注了大量的努力。这方面研究的目的是发明各种物体，具有经改善的表面特性，同时又保留了其制成材料的所有特性(所述的材料在下文中称为基材)。尤其是，透明质酸及其衍生物由于它们高度的亲水性而特别适于制造要求其表面能够抵制存在于组织或生物体液中细胞的粘附作用的物体。这样的表面在材料与细胞间的粘附会损伤生物组织的应用中尤其有意义(Kaufman，H.E.等，科学(Science)，189，525，1977)。许多研究者证明，用透明质酸或其衍生物对材料表面进行改性十分困难。一个人们首先注意到的问题是透明质酸具有相当高的表面张力，相当于或略低于水(F.H.Silver等，应用生物材料杂志(JournalofAppliedBiomaterial)，5，89，1994)。众所周知的是，要通过溶液涂覆获得均匀的涂层，涂覆材料必须具有低于基材的表面张力以得到完全而均匀的覆盖。而且，几乎所有可用作基材的聚合物材料其表面张力都低于水，该特征使得无法形成均匀覆盖基材表面的透明质酸薄层(GarbassiF.等、“聚合物表面，从物理到技术”(“PolymerSurfaces，fromPhysicstoTechnology)，Wiley，Chichester，304，1994)。必须指出，透明质酸是水溶性的，所以任何通过简单地涂以一层透明质酸溶液得到的物体在与包括生物体液在内的水溶液接触后马上失去其涂层。透明质酸衍生物，即使是水不溶性的那些也都具有极强的亲水性，在水或水溶液存在下具有强烈的膨胀倾向(H.N.Joshi和E.M.Topp，国际药物学杂志(InternationalJourn.ofPharm.)80(1992)，213-225)。在水性环境中，该特征迅速导致利用简单的水溶液涂覆法涂在基材上的亲水性表层的脱离。由于以上原因，人们对涉及基材表面与透明质酸或其衍生物之间化学成键的方法进行了研究。稳定的化学键的存在防止了表层的溶解，而且使得物体具有更强的、更持久的表面性能。在基材与表面层之间形成化学键要求以上两者都具有合适的化学基团。虽然透明质酸的化学结构保证具有多种合适的官能团，大多数合成材料表面却并不特别适合这种操作。因此，在透明质酸或其衍生物表面层与合成基材之间形成化学键的过程通常包括两步。第一步，在表面引入合适的化学基团，然后在第二步中，在引入基材表面上的化学基团与透明质酸或其衍生物之间引发反应。例如，US专利4,657,820，4,663,233，4,722,867，4,801,475，4,810,586，4,959,074，5,023,114和5,037,677描述了在基材和透明质酸之间使用一层中间层。该中间层与基材物理粘合并包含了适合与透明质酸的化学基团成键的化学基团。为了促进利用透明质酸涂覆基材时的扩散和均匀涂覆，上述专利还描述了白蛋白的利用，白蛋白在加入透明质酸后能够改善其均匀润湿中间层的能力。其它文献还描述了利用等离子体技术在基材上引入反应性基团。该技术(GarbassiF.等，“聚合物表面，从物理到技术”(“PolymerSurfaces，fromPhysicstoTechnology”)，Wiley，Chichester，6，1994)，能够快速而有效的改性聚合物材料表面。例如，国际专利申请No.WO94/06485描述利用甲醇等离子体处理在聚合材料表面引入官能团。然后令处理过的材料与表氯醇(epihydrochlorine)溶液接触以确保适合与多糖反应的基团的存在。其它文献(斯堪的那维亚生理学校(ActaPhysiologicaScandinavia)，116,210,1982；生物医学材料研究杂志(JournalofBiomedicalMaterialResearch)，18，953，1984，Elan等)描述了使用氧等离子体处理后再使用3-缩水甘油氧基丙基三甲氧基硅烷。如此处理后的表面被用于与多糖形成共价键。虽然上述方法一般说来是令人满意的，但是它们各自都具有某些困难。具体地说，使用中间层要求其组成适合基材的特性，以尽可能加强粘合力。用新材料或非常用材料生产物体时，需要花费大量的时间和精力来鉴定最合适的中间层配方。如果要被涂覆的物体是不同材料构成的，很难对每一种组成使用合适的中间层而不造成中间层在不合适的地方交叠和凸起。而且，使用白蛋白来加强基材的润湿性可能是不合要求的，尤其在产品要用于生物医学用途的时候。至于应用引用的其它例子，最好不要使用表氯醇(epihydrochlorine)和3-缩水甘油氧基丙基三甲基硅烷，因为已知这两种化合物严重影响健康。实际上，根据欧洲共同体发布的危险性材料分类，这些化合物的编号分别为“R45”和“R40”，表明具有健康威胁，正如大多数化学产品和试剂目录中所记录的。上述指定表示，在第一种情况下，该产品能够致癌，在第二种情况下是具有造成不可逆作用的危险性。更为一般的是，固定化在表面的官能团与多糖之类的大分子之间的反应都受到众所周知的立体障碍的严重限制。多糖分子的巨大体积阻止或阻碍了反应性基团之间的接触，使得有效的反应性接触的机率之低成为决定性制约。现有技术中的其它方法涉及多糖与氨基之间的反应。日本专利JP04126074(1992年4月7日)描述利用氨等离子体处理在聚合物基材表面引入氨基。然后利用缩合剂令这些氨基与透明质酸或其它多糖反应。在专利No.US4,810,784中，聚合材料制成的物体的表面用反应性溶液处理以在表面本身引入负静电荷。这样处理后的表面与聚乙烯亚胺(PEI)水溶液接触，聚乙烯亚胺的特征在于具有氨基和带正静电荷。不同电荷间的相互作用使得PEI与改性后的表面结合，形成富含氨基的表面。肝素及其它多糖在用亚硝酸盐溶液处理后与氨化表面结合。在有机化学中这是一个已知的事实，即亚硝酸盐的作用引起醛基的形成。与氨化表面的这些反应将多糖与表面本身不可逆地结合。在利用高碘酸盐温和氧化引入醛基时也使用相同的反应(C.Brink等，“胶体与表面”(“ColloidsandSurfaces”)，149，66，1992)。而且，PEI和存在于或引入多糖的各种醛基基团之间的反应有时被用于将各种构象的多糖与物体表面结合(E.Ostenberg等，生物医学材料研究杂志(JournalofBiomedicalMaterialsResearch)，29，741，1995)。专利No.5,409,696描述了利用含有水蒸气的等离子体处理来改性材料表面，以及其后的处理后表面与PEI之间的反应。这样处理后的表面富含氨基而且能够通过缩合剂的作用与肝素及其它多糖不可逆地结合。通常，乙基二甲基氨基丙基碳化二亚胺(EDC)促进多糖的羧基与表面的氨基之间的反应。P.V.Narayanan描述了用该方法涂覆将要与血液接触的导管内表面(生物材料科学杂志，聚合物篇(JournalofBiomaterialsScience，PolymerEdition)，6，181，1994)。研究表明，就制造具有经透明质酸或其衍生物改性表面的物体而言，以上引用的专利和论文中的方法都不能完全令人满意。实际上，例如专利No.JP04126074(1992年4月27日)所述的利用氨等离子体引入氨基类官能团在生产过程中并不十分可行。本领域专家知道，通过该技术在基材表面引入的官能团其密度相当低，而且过多地依赖于用于等离子体处理的反应器的精确的几何特性，基材的特性，基材表面或内部是否存在添加剂和/或杂质，以及处理前后基材的保存条件。因此，该技术难以应用于工业生产。本领域工作人员已经认识到这些不利方面，并在上述US专利No.4,810,874和5,409,696通过使用能够获得高密度氨基的PEI加以克服。虽然，以上最后加工有效地解决了该方法第一阶段的问题，即在材料的表明引入反应性基团，但是它们在涉及将透明质酸或其衍生物与表面结合的第二阶段并不同样有效。实际上，如前所述，美国专利4,810,874推荐利用化学处理来活化肝素或其它多糖。所以，不能使用原本的多糖而必须首先通过化学操作将其改性，这会带来时间、试剂、劳力和废物处置方面的额外消耗。而且，不同于其它多糖，透明质酸对于将反应性醛类基团引入到多糖上的部分氧化反应只有弱敏感性(J.E.Scott和M.J.Tigwell，生物化学杂志(Biochem.J.)，173，103，1978；B.J.Kvam等，碳水化合物研究(CarbohydrateResearch)230，1，1992)。就US专利5,409,696而言，当实施该专利所述的方法时，它并不形成能够最充分利用透明质酸本身特性的表面结构。另一方面，使用US专利5,409,696所述的方法时，如在此陈述的对比试验所示，不能够获得抑制细胞粘附的表面结构。在不用透明质酸本身而使用其水溶性半合成酯时，观察到类似的结果(EPA0216453)。很明显，使用该方法时，氨化表面与多糖之间的成键方式不能够最充分地利用透明质酸或其衍生物的亲水特性。必须注意，US专利5,409,696所述的方法只能用于对聚合材料的表面改性，正如其标题“经射频等离子体处理的具有固定化抗血栓形成剂的聚合物表面”及其操作说明书所说明的。在一般生物医学和外科操作中，常使用陶瓷和金属材料，所以人们希望改性方法也能用于这些材料。以上说明表明，必须发明一种方法，利用该方法能够简便而牢靠地在各种特性的基材和透明质酸或其衍生物之间形成化学键，成键方式能够充分利用透明质酸或衍生物的内在特性。发明概述本发明具体涉及用一层透明质酸或其衍生物、或半合成聚合物薄层涂覆生物医学物体的方法，其中，薄层与下面的材料牢固结合。由此形成了一种组合结构，其中的主体具有其制造材料的性能，而其表面具有透明质酸或其衍生物、或半合成聚合物的特性。所述的特性能够为按照本发明方法处理的材料表面提供高度的亲水性。例如，按照本发明方法处理的物体表面能够抑制生物体液中存在的细胞的粘附，并减少细菌的粘附。而且，按照本发明用天然材料涂覆物体能够确保更好的与生物相相互作用的性能。通过以下说明和附图，能够更充分地理解本发明，给出附图只是为了说明，所以并不限定本发明的范围，其中图1a样品1的ESCA谱，实施例1图1b样品2的ESCA谱，实施例1图2a对浸在PEI溶液中的钢样品进行ESCA分析获得的Cls峰图2b对如实施例4所述用透明质酸改性的钢样品进行ESCA分析获得的Cls峰图3a证明L-929成纤维细胞不在样品A表面粘附的光学显微镜照片，实施例6(放大200倍)图3b证明L-929成纤维细胞在样品B表面粘附的光学显微镜照片，实施例6(放大200倍)图4a证明L-929成纤维细胞不在样品D表面粘附的光学显微镜照片，实施例6(放大200倍)图4b证明L-929成纤维细胞在样品F表面粘附的光学显微镜照片，实施例6(放大200倍)图5a证明L-929成纤维细胞在钛表面粘附的光学显微镜照片，实施例6(放大200倍)图5b证明L-929成纤维细胞不在如实施例8所述用透明质酸酯改性的表面粘附的光学显微镜照片(放大200倍)图6a证明L-929成纤维细胞不在如实施例10所述用透明质酸改性的眼内透镜表面粘附的光学显微镜照片(放大50倍)图6b证明L-929成纤维细胞非改性眼内透镜表面粘附的光学显微镜照片(放大50倍)图7a证明L-929成纤维细胞不在如实施例10所述用透明质酸改性的眼内透镜表面粘附的光学显微镜照片(放大200倍)图7b证明L-929成纤维细胞非改性眼内透镜表面粘附的光学显微镜照片(放大200倍)本发明的具体说明根据下文的具体说明，本发明的其它目的和实用性范围将变得显而易见。但是必须理解，具体说明和具体实施例虽然说明了本发明的优选实施方式，但它们只是说明性的，因为根据下文的具体说明，本发明范围内的各种变动和修改对本领域的熟练技术人员将是显而易见的。广义地说，本发明用一层透明质酸或其衍生物(例如含有羧基的多糖)、或下文所述的半合成聚合物通过与基材的表面形成化学键来涂覆物体。本发明人论述了两种不同的新的优良方法，都是本发明的一部分。它们在下文中分别被称为“方法A”和“方法B”。在本发明的方法A和方法B中，除了透明质酸或其衍生物(例如它的部分衍生物(EPA0216453)或含羧基的多糖)之外，可以将上述方法用于各种半合成聚合物，例如透明质酸的多元醇酯(EP0265116)，酸性多糖的内酯(EPA0341745)，羧甲基纤维素、羧甲基几丁质和羧甲基酰胺的酯(EP0342557)，羧基多糖的活性酯(意大利专利申请No.PD94A000043)，透明质酸的硫酸酯(意大利专利申请No.PD94000054)，藻酸酯(EP0251905)，gellan酯(EPA0518710)，gellan的内酯(WO94/03499)，几丁质和脱乙酰几丁质酯(EPA0603264)，果胶酸和果胶酯酸酯(EPA0621877)。方法A本发明方法A提供了一种利用一层透明质酸或其衍生物、或半合成聚合物通过与基材表面形成化学键来涂覆物体的新方法。已知的和上文描述的方法涉及多糖分子上的官能团与表面上的官能团之间的反应，具有得率低的问题，与之相比，本发明可以分两步实施，而且克服了已知的和描述过的方法中的问题。在新方法A的第一步，在某种溶液中，透明质酸或其衍生物、或半合成材料单一性地与某种合适的化合物反应，该化合物是烷氧基硅烷偶合剂。由于在第一步中不需要与固定于基材表面的官能团(因而是固定的)反应，可以消除在第一步反应过程中多糖分子立体障碍的负面影响。在新方法A的第二步中，按照常用的物理涂覆方法，将透明质酸或其衍生物、或半合成聚合物与烷氧基硅烷偶合剂的反应产物以溶液形式涂在基材表面。于是，当涂料溶液与基材接触时，在去除涂料溶液中的溶剂的过程中，所述反应产物的烷氧基硅烷部分和基材之间形成化学键，反应的发生机率相当高。已有实验证明，与本领域的常规方法，即涉及固定在表面的官能团与多糖大分子上的官能团之间反应的那些方法相比，在以上述两步实施方法A时，其效率高得惊人。所以，在本发明的方法A中，透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物在水溶液、或通常是在某种合适的溶剂中与烷氧基硅烷偶合剂分子反应，后者一端能够与透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物反应，另一端则与基材反应。如上所述，本发明方法A中，透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物与烷氧基硅烷类化合物反应。化工领域的技术人员都知道，这些化合物是偶合剂，可用于加强有机和无机材料之间的粘合(“硅烷类偶合剂”(“SilaneCouplingAgents”)，E.P.Plueddemann，PlenumPress，NewYork，1982)。这类烷氧基硅烷偶合剂中代表性的是含有卤素的分子，例如氯丙基三甲氧基硅烷；含有不饱和有机基团的分子，例如乙烯基三乙氧基硅烷和异丁烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷；含有巯基的分子，例如巯基丙基三甲氧基硅烷；含有氨基的分子，例如氨基丙基三甲氧基硅烷和氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷。但是，本发明的方法并不局限于这些烷氧基硅烷偶合剂的具体种类。在本发明的方法A中，透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物与烷氧基硅烷之间的反应可能需要使用一种或多种能够使透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物的官能团与烷氧基硅烷的官能团发生反应的分子。这类分子中包括通常被称为缩合剂的二酰亚胺族的化合物，例如环己基碳化二亚胺和乙基二氨基丙基碳化二亚胺，以及所有那些蛋白质化合物合成领域技术人员已知的、被称为双官能剂的分子，例如羰基二咪唑和二羰基二咪唑。催化或促进透明质酸或其衍生物的官能团与烷氧基硅烷的官能团反应的分子也可以用于本发明方法中。部分说明性实例是N-羟基琥珀酰亚胺，羟基磺基琥珀酰亚胺，水合1-羟基苯并三唑以及具有相同功能的类似化合物。要指出的是，这些化合物同样用于下文的本发明方法B中。在方法A中，要被涂覆的基材经等离子体处理进行了改性，以便更好地与包含透明质酸、其衍生物、或半合成聚合物的反应产物反应。除了特定的理论之外，对基材的等离子体处理被认为具有提高基材的表面张力的作用，从而均匀地加强其被含有透明质酸和烷氧基硅烷以及其它分子的溶液的可润湿性。而且，这样可以将能够加强与烷氧基硅烷反应的基团引入到基材表面上。具体地说，将使用引入羟基、羧基的处理，通常还有那些被定义为普遍认可的化学意义上的酸的官能团。由于有许多能够加强基材表面与硅烷偶合剂之间反应的化学官能团，等离子体处理与现有技术中描述的处理方法相比，其条件的限制性要少得多。一些合适的处理方法的实例是利用氧、空气、氮气、氩气和其它稀有气体、水、醇、以及上述气体或蒸汽的混合物的等离子体。对基材的特性没有限制，只要在等离子体处理后能够产生能加强与硅烷反应的表面官能团。在新方法A一种特别好的方式中，透明质酸或其衍生物与烷氧基硅烷偶合剂之间的反应在水溶液中进行，其中透明质酸或其衍生物的浓度在0.01至2％之间，0.1至1.2％之间更好。烷氧基硅烷最好是根据反应式计算得到的化学计算量的氨基硅烷，或者略微过量。在这种优选情况中，反应溶液最好还含有根据透明质酸或其衍生物上可用的羧基与氨基硅烷上的氨基之间反应计算得到的化学计算量的乙基二氨基丙基碳化二亚胺，或者略微过量。该反应借助于N-羟基琥珀酰亚胺的存在，存在量为碳化二亚胺摩尔浓度的10％至100％。在室温下反应数小时后，根据用于表面薄层溶液涂覆的常用方法将溶液涂在物体的表面，物体表面刚刚用等离子体处理过。较好的是，用氧气或空气等离子体进行等离子体处理，功率负荷为1至400W，10至150W更好，压力在10毫托至10托，处理时间为1秒钟至1小时，10秒钟至30分钟更好。真空或常压，加热或常温蒸发溶剂。这一步操作取决于创造必要条件以使烷氧基硅烷偶合剂的活性末端与等离子体处理后基材表面存在的官能团反应的要求。操作结束后，可以通过其后的洗涤或类似方法去除任何反应残留物以及没有牢固结合的分子。方法B根据本发明的另一种实施方式，用空气、氧气、氩气、氮气等离子体、或能够在表面引入氧化官能团和/或具有清洁和去除有机杂质功能的其它气体或蒸汽的等离子体处理各种基材。但是，在本发明的方法中不需要如US专利5,409,696所述使用含水蒸气的等离子体。如此处理后的材料的表面然后与PEI(或一种聚阳离子物质，例如聚赖氨酸等)水溶液接触，以形成氨基基团的高表面浓度。由此获得的材料在缩合剂，如EDC的存在下，在水溶液或二环己基碳化二亚胺(DCC)有机溶液中，与透明质酸、其衍生物或半合成聚合物(例如，其他含羟基的多糖)反应。同时存在有能够加强由EDC启动的反应的分子。这类分子包括但不限于N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，羟基磺基琥珀酰亚胺，水合羟基苯并三唑以及类似分子。本发明的方法B是基于这样一个惊人的观察结果，NHS之类的分子能够对EDC引发的缩合反应起作用，即使不存在本领域技术人员所知的称为“间隔基臂”的分子结构的情况下基团也能与表面结合。具体就透明质酸而言，已知，在溶液中，在没有NHS存在下，会有通常被称为N-酰基脲的中间反应产物生成，该产物阻止反应进行完全(X.Xu等，TransIVWorldBiom.Cong.，170，1992)。如果将氨基与表面结合，必须使用“间隔基臂”使它们具有充分的反应性。“间隔基臂”是将反应性基团与表面隔开使其更自由并提高其反应性的碳原子序列。例如，产物COVALINK(Nunc)是由含有仲氨基的聚苯乙烯制成的，通过含9个碳原子的间隔基臂将氨基与表面隔开(K.Gregorius等；J.Immunol.Meth.，181，65，1995)，而且NHS被证明能够有效提高由EDC引发的反应的得率(J.V.Staros等，分析生物化学(Anal.Biochem.)，156，220，1986)。显然，在表面形成复合分子结构，例如由间隔基臂支持的官能团，其成本很高，因而限制了生产方法。在本发明的方法B中，氨基基团与表面结合并在PEI结构内部，不需要使用间隔基臂或注意任何其它结构问题。即使在没有间隔基臂存在下而且不特别考虑表面的其它分子问题时NHS仍能够促进由ECD引起的表面氨基基团的缩合反应，这一发现是令人惊奇的，而且是本发明方法B的决定性因素。更令人惊奇、以现有知识无法预见的发现是，NHS在反应混合物中的存在对用透明质酸或其衍生物涂覆的表面的抗细胞粘附性能具有决定性的影响。实际上，如US专利No.5,409,696所述，在无NHS下反应时，不能够使被透明质酸涂覆的表面具有抗粘附性能以防止细胞的粘附。但是另一方面，根据本发明方法进行操作时，能够获得对细胞粘附具有完美抗性的表面。虽然本发明人没有义务对获得的结果进行解释，而且不想局限于任何一种理论，但他们假设，表现的不同可能是因为以下原因之一或者，没有NHS，反应得率太低，使得透明质酸虽然的确与表面结合但并没有以能够完全覆盖下面的基材的充分量进行结合；或者，没有NHS存在下形成的化学键改变了与表面结合的透明质酸的性质。形成的结构失去了根据化学常识预计的这类聚合物的一般结构。在本发明的一种特别好的实施方式中，用空气或氧气等离子体，以1至400W之间，10至150W之间更好的功率负荷，压力为10毫托至10托，用1秒钟至1小时，更好是10秒钟至30分钟之间的处理时间处理聚合物、金属或陶瓷材料。但是，处理的条件并不一定，而且取决于产品的形状。如果涉及对管道的内表面或其它难以达到的部分进行改性，处理时间可能较长，平整或开放表面所需的处理时间较短。将处理后的材料放在0.01％至10％浓度的PEI溶液中，0.5％至2％更好。反应时间并不一定，可持续10分钟至10小时。在这一步骤结束时，材料经洗涤后放在透明质酸或其衍生物或其它含有羧基的多糖的溶液中。多糖的浓度在0.005至5％之间，0.05至1％更好。在溶液中补充NHS和EDC，浓度在0.001至1％之间。在室温下或略微加热，进行反应，可持续10分钟至48小时。如果多糖和基材的类型合适，反应可以在有机溶剂中进行，使用上述浓度的DCC和NHS。对本领域的任何技术人员来说，本发明(方法A和方法B)的重要性是明显的。实际上，利用本发明的方法，能够获得因存在透明质酸或其衍生物涂层而具有良好表面特性的物体，该涂层因涂层与基材之间有化学键存在而可长时间保持稳定。而且，这些物体的表面表现出抵制生物体液中存在的细胞和细菌粘附的突出特性。我们在下文引用了一些说明性的实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，在本发明范围内的各种改动是显而易见的。制备实施例实施例1从细菌学级佩特里培养皿(Corning)上取得一份聚苯乙烯样品，用平行板反应器(GambttiKenologia)进行等离子体处理。处理在100毫托压力的氧气下进行，功率负荷为50W，流速为20cm3(Std)/min，处理时间为30秒。处理后的样品在0.5％的PEI(Aldrich)水溶液中浸泡2小时。然后将它们取出，用水洗涤，浸在含有5ml以下溶液的试管中1)按重量计，1％透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers，Brindisi)2)按重量计，1％透明质酸，0.02g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.02gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。3)按重量计，1％透明质酸，用苄醇酯化25％(FidiaAdvancedBiopolymers)4)按重量计，1％透明质酸，用苄醇酯化50％(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.02g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。5)按重量计，1％透明质酸，用苄醇酯化50％(FidiaAdvancedBiopolymers)6)按重量计，1％透明质酸，用苄醇酯化50％(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.02g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.02gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。样品在室温下在试管中静止12小时，然后用水将他们漂洗过夜。利用ESCA分析(化学分析用电子能谱法)评价处理的效率。已知(GarbassiF.等，“聚合物表面，从物理到技术”(“PolymerSurfaces，fromPhysicstoTechnology)，Wiley，Chichester，3，1994)，利用这一技术能够测出材料表面的化学组成。用PerkinElmerPHI5500ESAC系统进行分析。除了上述样品之外，另一份等离子体处理过的样品只与PEI接触，以此作为参照。</tables>这些数据显示，正如在引入透明质酸或其酯之后所预计的，在用改进后的方法处理后，表面的氧含量明显增加。另一方面，没有ECD和NHS，表面的组成仍然与参照物相似。而且，对Cls峰的详细分析显示存在着大量的C-O键，这与预计的分子结构一致。在图1a和1b中给出了样品1的ESCA谱。实施例2将按照实施例1中的方法制备的其它样品在水中浸2个月。重复ESCA分析。没有发现表面氧浓度的降低或改变，由此证实了多糖与表面之间化学键的稳定性。实施例3如实施例1所述，将一张用于包装的聚乙烯薄膜用等离子体处理后浸在PEI中。准备两份样品，浸在以下二甲基亚砜(Fluka)溶液中1)1％用苄醇酯化75％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)。2)1％用苄醇酯化75％的透明质酸，0.02g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺，0.02gN-羟基琥珀酰亚胺。在用二甲基亚砜洗涤24小时后，用ESCA分析样品。得到以下结果实施例4316钢样品(生物医学中常用的品种)经空气等离子体处理15分钟后与0.5％PEI溶液接触2小时。用实施例1所述的溶液2将透明质酸与材料的表面结合。然后用ESCA分析材料。图2中记录了获得的Cls峰图2a代表与PEI接触的样品，图2b表示经完全改性的样品的Cls峰。在这最后一种情况中，可以观察到典型的宽幅、多组成形状，具有多糖Cls峰的特征(参见，例如，上文引用的E.Ostenberg等的论文，生物医学材料研究杂志(JournalofBiomedicalMaterialsResearch)，29，741，1995)，这证实了透明质酸在表面的存在。实施例5如实施例1所述将用于细胞培养的佩特里培养皿(Corning)改性(每次处理用3个培养皿)。在如此准备的培养皿中加入5ml细胞悬浮液(极限必需Eagle培养基中的鼠结缔组织的成纤维细胞L-929，培养基中补充以10％胎牛血清，抗生素青霉素、链霉素和两性霉素B，以及L-谷氨酰胺-SPA，Milan)，放置在37℃，大气中含5％二氧化碳，湿度为98％的培养箱(Forma)中。定期用光学相差显微镜(Leica)检测细胞与细胞间的相互作用和如实施例1所述进行了处理的聚苯乙烯底。具体地说，我们检测细胞是否能够与用不同方法处理的支持体粘附，程度如何，一个佩特里培养皿只用等离子体处理因而具有最大粘附性，将其作为对照。在本实施例中(根据24小时观察结果的平均值)，分值5表示最大粘附，分值0表示不粘附。样品标号分值对照5142034405460</table></tables>本实施例证实了亲水层的存在，其结合牢固，并能够防止细胞的粘附。实施例6按照实施例1中描述的改性方法用透明质酸溶液液2处理4个聚苯乙烯佩特里培养皿，这些样品将被称为A。用US专利5,409,696实施例11所述的透明质酸涂覆方法处理另外4个培养皿(这些样品被称为B)。如前一实施例所述，将改性后的培养皿与L-929细胞悬浮液接触。如前述实施例所述进行细胞粘附的检测，结果如下样品分值对照5A0B4</table></tables>图3a和3b是用光学显微镜获得的照片，显示了在测试结束时的表面状况。图3a代表样品A，3b代表样品B。两种方法获得的细胞粘附抗性程度上的差异是十分明显的。实施例7按照实施例1中描述的改性方法用透明质酸酯4和6的溶液处理4个聚苯乙烯佩特里培养皿，这些样品将分别被称为C和D。用US专利5,409,696所述的透明质酸涂覆方法，用相同的透明质酸酯处理另外4个培养皿(这些样品分别被称为E和F)。如前述实施例所述，将改性后的培养皿与L-929细胞悬浮液接触。如前述实施例所述进行细胞粘附的检测，结果如下图4a和4b是用光学显微镜获得的照片，显示了在测试结束时的表面状况。图4a代表样品D，4b代表样品F。两种方法获得的细胞粘附抗性程度上的差异是十分明显的。实施例8如实施例4所述用等离子体处理一小片钛(Aldrich)，并用PEI处理。如此处理后的表面与实施例1中的溶液6反应。如前述实施例所述，将4份没有改性的钛样品和4份改性后的样品与L-929细胞悬浮液接触。24小时后，用甲苯胺蓝进行细胞染色并用金相显微镜观察孵育后的样品，由此评价细胞粘附。观察结果显示于图5a和5b。图5a代表未改性的钛，图5b代表按照本发明方法用透明质酸酯改性后的钛。很明显，细胞对两种表面的表现是不同的。对于改性后的材料，细胞保持圆形，而不是与表面牢固粘附的细胞所特有的扁平、扩散状，后者可在未改性的材料上观察到(图5a)。实施例9对一载玻片进行实施例8的改性处理。将改性后的玻璃，未改性的玻璃样品和等离子体处理过的聚苯乙烯培养皿(用作最大粘附对照)放在L929细胞悬浮液中。24小时后检测细胞粘附。结果如下实施例10使用0.5％眼科级透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymer)，0.4％EDC和0.4％NHS溶液，对两片眼内透镜(SanitariaScaligera)进行实施例1所述的改性处理。如前述实施例所述，将改性后的透镜与相同数量的未改性的透镜放在佩特里培养皿中，并与L929细胞悬浮液接触。图6和7表明了样品对细胞粘附的抗性。这些是按照本发明方法改性(6a和7a)和未改性(6b和7b)的透镜表面的照片。这些照片清楚地表明了两种表面不同的抑制细胞粘附的能力。实施例11从细菌学级佩特里培养皿(Corning)上获取聚苯乙烯样品，在平行板反应器(GambettiKenologia)中用等离子体进行处理。处理的压力为100毫托氧，功率负荷为100W，流速为20cm3(Std)/min，处理时间为1分钟。处理后的样品在于6小时前制备的以下水溶液中浸入和提起5次，然后在室温下反应1)1％透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)2)按重量计，1％透明质酸，0.4g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)，1％按体积计的3-氨基丙基三甲氧基硅烷(Sigma)。3)按重量计，1％用苄醇酯化25％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.35g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)，1％按体积计的3-氨基丙基三甲氧基硅烷(Sigma)。4)按重量计，1％用苄醇酯化50％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.35g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)，1％按体积计的3-氨基丙基三甲氧基硅烷(Sigma)。样品在烘箱中于60℃干燥过夜，然后用水洗涤，用喷射压缩空气干燥。为了检查涂层的完整性，将样品浸在1％甲苯胺蓝(Aldrich)水溶液中。透明质酸和其它多糖立刻被染成亮蓝紫色。用0至5的分值范围来评价处理方法的效率，5代表极其均匀的染色(表明透明质酸或其衍生物涂层的完整性)，0代表没有染色。根据实施例所述制备的样品(用浸渍所用的溶液的号码表示)其分值如下</tables>实施例12根据实施例11所述制备部分样品。将样品在室温下水中浸20天，然后进行染色测试。以下是获得的结果<tablesid="table8"num="008"><tablewidth="891">样品编号分值10253544</table></tables>实施例13以下实施例能够检查所述的处理方法的效率，所述的方法即多糖与官能团在溶液中反应，这与常规的涉及固定于表面的基团与多糖上的基团间反应的方法相反。将聚硅氧烷导管切割成3cm长的样品。根据实施例11所述的方法，用溶液2，3和4处理一系列的样品。另一系列的样品经等离子体处理后涂以1％(体积)3-氨基丙基三甲氧基硅烷(Sigma)水溶液。干燥后，即令样品与以下溶液接触2a)按重量计，1％透明质酸，0.4g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。3a)按重量计，1％用苄醇酯化25％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.351g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。4a)按重量计，1％用苄醇酯化50％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)，0.35g1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(Sigma)，0.3gN-羟基琥珀酰亚胺(Sigma)。样品在烘箱中于60℃干燥过夜，然后用水洗涤，用喷射压缩空气干燥。染色测试结果如下<tablesid="table9"num="009"><tablewidth="892">样品编号分值2535452a13a04a0</table></tables>实施例14按照实施例11所述，用溶液1，2和3处理细菌学级的聚苯乙烯佩特里培养皿(Corning)(每种处理方法3个培养皿)。在这样处理后的培养皿中加入5ml细胞悬浮液(极限必需Eagle培养基中的鼠结缔组织成纤维细胞L-929，培养基中补充以10％胎牛血清，抗生素青霉素、链霉素和两性霉素B，以及L-谷氨酰胺-SPA)，放置在37℃，大气中含5％二氧化碳，湿度为98％的培养箱(Forma)中。定期用光学相差显微镜(Leica)检测细胞与细胞间的相互作用和如实施例11所述进行了处理的聚苯乙烯底。具体地说，我们检测细胞是否能够与用不同方法处理的支持体粘附，程度如何，一个佩特里培养皿只用等离子体处理因而具有最大粘附性，将其为对照。在本实施例中(根据24小时观察结果的平均值)，分值5表示最大粘附，分值0表示不粘附。本实验证实了牢固结合并能防止细胞粘附的亲水层的存在。该亲水层可从用溶液1处理的样品上去除，该样品上不能形成化学键。实施例15将聚硅氧烷导管(Silkomed)切割成7cm长的段。用实施例11所述的条件用溶液1，2，3和4处理4份样品。用以下方法来检测导管在水性环境中的滑动性在试管中装入0.7％浓度琼脂糖(Sigma)。将试管水平固定，将一段7cm的导管放在其中，一端略微突出在琼脂糖外。通过一根线在该末端施加重力，线绕在一个滑轮上，使得重力的作用可将导管从浸渍的琼脂糖中拔出。由于琼脂糖的特性，这样就可以检测导管在水性环境中的滑动性。将导管从琼脂糖中拔出的时间与导管的滑动性成反比。测试得出以下结果实施例16以下实施例证明了一种利用等离子体作用于表面组成的方法，该方法被证明也对不同化学组成的材料有效。而且，本实施例显示该方法在要被涂覆的物体由几种不同材料组成时同样有效。制备3cm长的导管样品。它们由以下物质构成a)聚硅氧烷，b)聚亚胺酯，c)聚氯乙烯，d)乳胶。还使用了一片用于显微镜观察的盖玻片。如实施例1所述用等离子体处理样品，然后如实施例3所述用溶液3处理。染色测试得出以下结果实施例17将用苄醇酯化75％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)在二甲基亚砜(Aldrich)中制备成1％的溶液。取一份该溶液，在其中加入1.1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g二环己基碳化二亚胺(Aldrich)。反应6小时后，如实施例14所述用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在加有氨基硅烷的酯溶液中，然后缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果>实施例18将用苄醇酯化50％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)在二甲基亚砜(Aldrich)中制备成1％的溶液。取一份该溶液，在其中加入1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g二环己基碳化二亚胺(Aldrich)。反应6小时后，如实施例14所述条件用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在加有氨基硅烷的酯溶液中，然后缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果</tables>实施例19将用苄醇酯化100％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)在二甲基亚砜(Aldrich)中制备成1％的溶液。取一份该溶液，在其中加入1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g羰基二咪唑(Aldrich)。反应6小时后，如实施例14所述条件用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在加有氨基硅烷的酯溶液中，然后缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果</tables>实施例20将用乙醇酯化100％的透明质酸(FidiaAdvancedBiopolymers)在二甲基亚砜(Aldrich)中制备成1％的溶液。取一份该溶液，在其中加入1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g羰基二咪唑(Aldrich)。反应6小时后，如实施例14所述条件用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在加有氨基硅烷的酯溶液中，然后缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果</tables>实施例21制备交联透明质酸(10％羧基参与内酯化反应，90％羧基与钠成盐)的1％二甲基亚砜(Aldrich)溶液。取一份该溶液，在其中加入1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g二环己基碳化二亚胺(Aldrich)。反应6小时后，按照实施例4的条件用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在酯和氨基硅烷的溶液中，然后将它们缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果实施例22制备藻酸(50％羧基被苄醇酯化，50％羧基成盐)的1％二甲基亚砜(Aldrich)溶液。取一份该溶液，在其中加入1％体积浓度的氨基乙基氨基丙基三甲氧基硅烷和0.5g二环己基碳化二亚胺(Aldrich)。反应6小时后，按照实施例14的条件用等离子体处理两份前述导管样品。将一份该样品浸在酯溶液中，另一份浸在酯和氨基硅烷的溶液中，然后将它们缓慢提起。样品在60℃，100托的真空烘箱中放置48小时。染色测试得以下结果:所以，本发明的目的是提供用于生产涂有与基材化学结合的透明质酸或其衍生物或其它半合成聚合物薄层的物体的创新方法。所述的方法可以用于制造表面性能被改善的材料和设备，具体地说就是以亲水性表面为特征的材料和装置。更具体地说，该方法可用在制备泌尿学，矫形学，耳鼻喉科学，胃肠病学，眼科学，心血管区和诊断方面的生物医学及外科用途的材料。有关生物医学用途，包括体周或体外用途的装置，例如导管，血袋，导引槽，探针，注射器，外科设备，容器，过滤设备；用于修补或手术用途或移植时，可以对人工腱、关节、销、心瓣膜、骨和心血管替代品、移植物、静脉管、眼内透镜、软组织替代品等等进行涂覆。可涂覆的半永久性装置的实例是接触透镜。还包括模拟生理过程的复杂装置，例如人工肾，血液增氧器，人工心脏、胰脏和肝。最后，在诊断和实验室设备方面，可涂覆用于细胞或组织培养和/或再生的平皿，和肽、蛋白质及抗体之类活性要素的载体。本说明书对在此引用和/或参考的出版物和专利文献全部收编在此作为参考。以上对本发明进行了描述，显然，可以对上述方法进行各种形式的修改。这些修改不应被视为背离了本发明的精神和目的，任何对本领域熟练技术人员来说显而易见的修改都在后文权利要求所述的本发明范围之内。权利要求1.用透明质酸或其衍生物涂覆物体表面的方法，它包括以下步骤在缩合剂或双官能剂存在下，在水溶液或有机溶剂中令透明质酸或其衍生物与烷氧基硅烷偶合剂反应，形成含有透明质酸或其衍生物与烷氧基硅烷偶合剂反应产物的溶液；用等离子体处理物体表面；用含有透明质酸或其衍生物与烷氧基硅烷偶合剂反应产物的溶液涂覆所述物体经处理后的表面；去除所述物体表面的溶液，令所述的透明质酸或其衍生物与烷氧基硅烷偶合剂的反应产物与所述物体的表面反应。2.根据权利要求1所述的方法，其中的烷氧基硅烷偶合剂含有巯基或氨基。3.根据权利要求1所述的方法，其中的烷氧基硅烷偶合剂是γ-氨基丙基三乙氧基硅烷或N-β-(氨基乙基)-γ-氨基丙基三甲氧基硅烷。4.根据权利要求1所述的方法，其中烷氧基硅烷偶合剂与透明质酸或其衍生物之间的反应发生在(i)在含有1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺作为所述的缩合剂的水溶液中；或(ii)在含有二环己基碳化二亚胺作为所述缩合剂的有机溶剂中。5.根据权利要求1所述的方法，其中烷氧基硅烷偶合剂与透明质酸或其衍生物之间的反应还发生在N-羟基琥珀酰亚胺、羟基磺基琥珀酰亚胺、水合羟基苯并三唑或具有相同功能的类似化合物存在下。6.一种用半合成聚合物涂覆物体表面的方法，它包括以下步骤在缩合剂或双官能剂存在下，在水溶液或有机溶剂中令半合成聚合物与烷氧基硅烷偶合剂反应，形成含有半合成聚合物与烷氧基硅烷偶合剂反应产物的溶液；用等离子体处理物体表面；用含有半合成聚合物与烷氧基硅烷偶合剂反应产物的溶液涂覆所述物体经处理后的表面；去除所述物体表面的溶液，令所述的半合成聚合物与烷氧基硅烷的反应产物与所述物体的表面反应。7.根据权利要求1或6所述的方法，其中所述的等离子体是氧等离子体、空气等离子体、水等离子体、醇等离子体、丙酮等离子体，含氧化合物等离子体、氮等离子体、氩等离子体或两种或多种等离子体的混合物。8.根据权利要求6所述的方法，其中半合成聚合物与烷氧基硅烷偶合剂之间的反应发生在(i)在含有1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺作为所述的缩合剂的水溶液中；或(ii)在含有二环己基碳化二亚胺作为所述缩合剂的有机溶剂中。9.根据权利要求6所述的方法，其中烷氧基硅烷偶合剂与半合成聚合物之间的反应还发生在N-羟基琥珀酸酰亚胺、羟基磺基琥珀酰亚胺、水合羟基苯并三唑或具有相同功能的类似化合物存在下。10.一种用透明质酸或其衍生物涂覆物体表面的方法，它包括以下步骤用等离子体处理物体表面；将处理后的物体表面浸在含有聚乙烯亚胺的溶液中；在碳化二亚胺和一种选自N-羟基琥珀酰亚胺、羟基磺基琥珀酰亚胺、水合羟基苯并三唑等物质的存在下令浸渍处理过的物体表面与透明质酸或其衍生物反应。11.根据权利要求1或10所述的方法，其中的透明质酸衍生物是(I)透明质酸的完全或部分苄酯；(ii)透明质酸的完全或部分乙酯；12.根据权利要求10所述的方法，其中处理后表面与透明质酸或其衍生物之间的反应发生在(i)在含有羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺的水溶液中；或(ii)在含有羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳化二亚胺的有机溶剂中。13.用半合成聚合物涂覆物体表面的方法，它包括以下步骤用等离子体处理物体表面；将处理后的物体表面浸在含有聚乙烯亚胺的溶液中；在碳化二亚胺和一种选自N-羟基琥珀酰亚胺、羟基磺基琥珀酰亚胺、水合羟基苯并三唑等物质的存在下令浸渍处理过的物体表面与半合成聚合物反应。14.根据权利要求6或13所述的方法，其中的半合成聚合物选自透明质酸的多元醇酯，酸性多糖的内酯，羧甲基纤维素酯，羧甲基几丁质酯，羧甲基酰胺酯，羧基多糖的活性酯，透明质酸的硫酸酯，藻酸酯，几丁质酯，脱乙酰几丁质酯，果胶酸酯和果胶酯酸酯。15.根据权利要求13所述的方法，其中处理后表面与半合成聚合物之间的反应发生在(i)在含有羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺的水溶液中；或(ii)在含有羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳化二亚胺的水溶液中。16.根据权利要求1、6、10或13所述的方法，其中要被涂覆的物体包含具有与生物体液相容性的材料。17.根据权利要求10或13所述的方法，其中要被涂覆的物体包含聚合材料，陶瓷材料或金属材料。18.根据权利要求10或13所述的方法，其中要被涂覆的物体包含选自钛、钛合金，钢，和铬-钴合金的金属材料。19.根据权利要求1、6、10或13所述的方法，其中要被涂覆的物体选自导管，血袋，导引槽，探针，注射器，手术设备，容器，过滤系统，人工腱、关节、销、心瓣膜、骨和心血管替代品，移植物，静脉管，眼内透镜，接触透镜，软组织替代品，人工肾，血液增氧器，人工心脏、胰脏和肝脏。20.根据权利要求1、6、10或13所述的方法，其中要被涂覆的物体选自实验室设备零件，细胞和组织培养皿，细胞和组织再生培养皿，肽、蛋白质及抗体这些活性要素的载体。全文摘要本发明提供了一种用透明质酸、其衍生物或其它天然或半合成聚合物涂覆物体表面的方法,以便用于外科手术、医疗保健和诊断等领域。该方法能够使这些聚合物与多种材料制成的物体的表面牢固结合。按照本发明方法处理过的表面其特征在于高度的润湿性,并能够抑制生物体液中细胞或细菌与之粘附。文档编号A61L29/08GK1173824SQ96191809公开日1998年2月18日申请日期1996年2月7日优先权日1995年2月7日发明者M·莫拉,C·卡西里尼,L·贝内代蒂,L·卡利加罗申请人:菲迪亚高级生物多聚合物有限公司