专利名称：类维生素a拮抗剂及其用途的制作方法
类维生素A(retinoid)是一类结构上与维生素A有关的化合物，包括天然的和合成的化合物。临床上，发现类维生素A可用于治疗皮肤和肿瘤疾病。
具有类维生素A受体激动活性的类维生素A不仅在皮肤和肿瘤疾病的模型系统中，还在1型T-辅助细胞(T-helper cell type1，Thl)介导的免疫疾病模型中表现出治疗活性。具有类维生素A受体激动活性的类维生素A在佐剂性关节炎[Brinckerhoff等人，Science221，756-758(1983)]和实验性过敏性脑脊髓炎的治疗中表现出活性[Massacesi等人，J.Clin.Invest.88，1331-1337(1991)；Racke等人，J.Immunol.154，450-458(1995)]，它们还分别在类风湿关节炎和多发性硬化的动物模型中表现出活性。这两种疾病都被认为是Thl介导的免疫疾病。
实验证明，具有类维生素A受体拮抗活性的类维生素A(类维生素A拮抗剂)可有效抵消具有类维生素A受体激动活性的类维生素A(类维生素A激动剂)的多种性质，例如抑制细胞增殖，诱导细胞分化，诱导细胞凋亡和抑制血管生成[Bollag等人，Int.J.Cancer70，470-472(1997)]。类维生素A拮抗剂还抑制类维生素A激动剂的毒副作用，例如维生素A过多综合症和畸胎发生的体征和症状[Standeven等人，Toxicol.Appl.Pharmacol.138，169-175(1996)；Eckhardt和Schmitt，Toxicol.Letters70，299-308(1994)]。因此，在临床上，它们可用于预防或治疗由类维生素A激动剂产生的副作用。
临床上，建议类维生素A拮抗剂用于预防和治疗由类维生素A引发的毒副作用，尤其是所谓维生素A过多综合症。还建议类维生素A拮抗剂与类维生素A受体激动剂或其它核受体激动剂联合用于预防和治疗肿瘤发生前或肿瘤形成损伤，玻璃体视网膜病变和视网膜剥离。此外，由于类维生素A拮抗剂具有抗增殖作用，建议它们可单独用于治疗某些对类维生素A受体激动剂不敏感的肿瘤[WO97/09297]。
一方面，本发明涉及新的类维生素A拮抗剂。因此，本发明涉及式I化合物及式I羧酸的可药用盐， 其中的虚线键可以存在或不存在；当虚线键存在时，R1是低级烷基且R2是氢；和，当虚线键不存在时，R1和R2一起是形成顺式取代的环丙基环的亚甲基；R3是羟基或低级烷氧基；R4是烷基或烷氧基；并且R5和R6独立地是C4-12烷基或者单环或多环的C5-12烃基，它们通过季碳原子与苯环相连。
本文采用的术语“烷基”是指直链，支链或环状的烷基，尤其是包含1-12个碳原子的那些基团，例如甲基，乙基，丙基，异丙基，叔丁基，癸基，十二烷基，环戊基，环己基，环庚基等。术语“低级烷基”是指包含1-7个，优选1-4个碳原子的烷基。最优选的低级烷基是甲基和乙基。R4所指的烷基和烷氧基优选包含1-8个碳原子，更优选包含1-4个碳原子。特别优选的基团R4是乙氧基和丁氧基。R5或R6表示的C4-12烷基的实例是叔丁基，1，1-二甲基丙基，1-甲基-1-乙基丙基，1-甲基-1-乙基己基和1，1-二甲基癸基。其中，优选是叔丁基。R5和R6表示的单环或多环烃基的实例是1-金刚烷基和1-甲基环己基。
其中R3是羟基的式I化合物与可药用碱形成盐，例如碱金属盐，如Na和K盐，以及铵盐或取代的铵盐，如三乙铵盐，它们均包括在本发明的范围内。
在一个方案中，本发明包括式Ia化合物及式Ia的羧酸的可药用盐 其中R1是低级烷基并且R3～R6如式I中所定义。
在另一个方案中，本发明包括式Ib化合物及式Ib的羧酸的可药用盐 其中R3～R6如式I中所定义。
其中R1和R2一起是亚甲基的式I化合物可以纯对映体形式或外消旋体形式存在。当式Ib任意地以一种特定的对映体形式描述时，应该理解本发明也包括相反的对映体以及外消旋体。
特别优选是式Ia化合物，其中R1是甲基，R4是乙氧基或丁氧基并且R5和R6是叔丁基。
上述式I化合物特异性地与类维生素AX受体(RXR)结合，但不激活它们。因此，本发明的化合物可用于减弱或消除皮肤或肿瘤疾病患者中产生的副作用。实施例1-3描述了有关该主题的实验研究。
第二方面，本发明涉及类维生素A拮抗剂用于制备治疗2型T-辅助细胞(Th2)-介导的免疫疾病，例如免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏性疾病或Th2-有关的细胞因子介导疾病的药物的应用，以及所述活性物质用于治疗此类疾病的应用，所述拮抗剂包含具有选择性视黄酸受体(RAR)拮抗活性，类维生素AX受体(RXR)拮抗活性或混合的RAR-RXR拮抗活性的类维生素A。
依据本发明的该方面，术语“类维生素A拮抗剂”被用作具有RAR，RXR或混合的RAR-RXR拮抗活性的类维生素A或化合物。它包括具有受体中性拮抗活性(中性拮抗剂)，受体相反的激动活性(相反的激动剂)和负性激素活性(负性激素)的化合物[Klein等人，J.biol.Chem.271，22692-22696(1996)]。
因此，术语“类维生素A拮抗剂”包括a)上述式I的RXR拮抗剂，尤其是式Ic的那些化合物 其中的虚线键可以存在或不存在；当虚线键存在时，R1是甲基且R2是氢；和，当虚线键不存在时，R1和R2一起是形成顺式取代的环丙基环的亚甲基；并且R41是C1-4烷氧基；b)式III，IV，V和VI的RARα-拮抗剂 其中R7是C5-10-烷基，并且R8和R9彼此独立地是氢或氟；这类化合物记载于美国专利5391766和J.Med.Chem.1997，40，2445中；c)式VII，VIII和IX的RARα，β-拮抗剂 其中R10是金刚烷基(diamantyl)，X是O或NH，R11是苯基或苄基，并且其中的A环或B环可以存在或不存在；这类化合物记载于Med.Chem.Res.1991，1，220；Biochem.Biophys.Res.Com.1997，231，243；J.Med.Chem.1994，37，1508；d)式X的RAR β，γ-拮抗剂 其中R12和R13彼此独立地是羟基，C1-4-烷氧基，任选地(optionnaly)分支化的C1-5-烷基或金刚烷基；此类化合物记载于J.Med.Chem.1995，38，4993；e)式XI和XII的RARγ-拮抗剂 此类化合物记载于Cancer Res.1995，55，4446；f)式XIII，XIV，XV和XVI的RARα，β，γ-拮抗剂 其中Y是-CH2-或硫并且Z是-CH＝或氮，并且R14是氢或C1-4-烷基；此类化合物记载于J.Med.Chem.1995，38，3163和4764；J.Biol.Chem.1996，271，11897和22692；g)式XVII的RXR拮抗剂 其中R15是C1-4-烷氧基；此类化合物记载于J.Med.Chem.1996，39，3229；和Nature1996，383，450，以及式III～XVII化合物的可药用盐和药用可水解酯。
在本发明的范围中，可药用盐包括类维生素A拮抗剂的在该领域中任何化学上允许的并且可以药用制剂形式用于人类患者的盐。可使用类维生素A拮抗剂的任何常规的可药用盐。可利用的常规可药用盐是碱盐，包括，例如碱金属盐，如钠或钾盐；碱土金属盐，如钙或镁盐；以及铵盐或烷基铵盐。
依据本发明的第二方面，发现施用类维生素A拮抗剂，其可药用盐和药用可水解酯可以有效治疗具有2型T辅助细胞(Th2)介导的疾病的患者。还发现，施用类维生素A拮抗剂可有效治疗Th2-相关的细胞因子，例如白介素-4(IL-4)和IL-5介导的疾病患者。
因此，在一个实施方案中，本发明涉及类维生素A拮抗剂，它们的可药用盐或药用可水解酯用于制备治疗2型T-辅助细胞(Th2)介导的免疫疾病的药物的用途。在另一个方案中，本发明涉及类维生素A拮抗剂，它们的可药用盐或可药用酯用于制备治疗Th2-相关的细胞因子，例如白介素-4(IL-4)和IL-5介导的疾病的药物的用途。具体地说，本发明此方面涉及治疗2型T-辅助细胞(Th2)介导的免疫疾病患者的方法，该方法包括向所述人类患者施用一种选自类维生素A拮抗剂，其可药用盐和药用可水解酯的化合物，所述化合物以有效治疗所述疾病的量施用。术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。
本文采用的术语“2型T-辅助细胞(Th2)介导的免疫疾病”是指由于变应原-特异性Th2细胞的发育和活化牵涉免疫球蛋白E(IgE)和肥大细胞的疾病，包括过敏性疾病，如特应性皮炎，与特应性有关的其它皮肤疾病；变应性鼻炎或枯草热，伴随或不伴随支气管炎的轻度或严重的急慢性变应性支气管哮喘。免疫球蛋白E(IgE)的血浆水平升高和嗜酸性细胞增多与这些疾病有关。类维生素A拮抗剂对所有与Th2细胞活性增强和有关细胞因子，例如IL-4和IL-5的分泌增加的这些免疫疾病都有效。类维生素A拮抗剂的治疗作用被认为是由于通过活化骨髓单核细胞而降低Th2细胞活性，减少有关细胞因子，例如IL-4和IL-5的分泌和/或增强Th1细胞活性。[S.Romagnani，Ann.Rev.Immunol.12，227-257(1994)；Romagnani等人，健康与疾病中的Th1和Th2细胞，Chem.Immunol.，Karger，Basel，63，pp.187-203(1996)；Abbas等人，Nature383，787-793(1996)]。
本发明的类维生素A拮抗剂表现出正调节Th1细胞活性或者诱导/刺激细胞因子，例如IL-12，IFNr，TNF的产生；和/或负调节Th2细胞活性，或者抑制细胞因子，如IL-4和IL-5的产生的能力(参见下面的实施例4和5)。
类维生素A拮抗剂对变应性支气管哮喘具有治疗活性。与哮喘有关的炎症的标志是存在活化的嗜酸性细胞，呼吸道的敏感性增加(过度反应性)，水肿，粘液分泌过度和咳嗽。该炎症过程是通过Th2-类型的细胞的产生和活化介导的。类维生素A拮抗剂能促进Th1-类型细胞的反应并由此抑制Th2-类型细胞的反应被认为是这类化合物在变应性肺部炎症/哮喘中产生功效的机理。类维生素A拮抗剂作用于Th1-类细胞，抑制变应性肺部炎症/哮喘的体征和症状[Gavett等人，J.exp.Med.182，1527-1536(1995)；Kips等人，Am.J.Respir.Crit.Care Med.153，535-539(1996)]。它们对抗原/过敏源(如卵清蛋白)-敏感的和激发的动物具有活性。类维生素A拮抗剂，无论是由气雾剂通过系统或局部给药，都能有效缓解，抑制或逆转支气管收缩，呼吸道水肿和粘液的过度分泌，呼吸道炎症，嗜酸性细胞和嗜中性白细胞分别在支气管-肺泡组织中和支气管-肺泡灌洗液中的的累积以及呼吸道(airway)对非特应性刺激物的过度反应性(参见下面的实施例6)。
用于治疗时，活性化合物，即类维生素A拮抗剂、其可药用盐或药用可水解酯可全身性或局部给药。所述化合物优选以含有所述活性化合物和与所述活性化合物相容的可药用载体或稀释剂的组合物形式给药。在制备这类组合物时，可使用任何常规的可药用载体。当药物口服时，通常以固定的时间间隔给药，一般是在进餐时服用或每日服用一次。已经确认，在口服或局部给药时，这类化合物在不表现出副作用或者仅表现出轻微副作用的剂量下就有效。因此，活性化合物常优选口服或局部给药。对于皮肤、口腔、鼻、咽、喉、支气管等疾病的治疗，采用口服与局部途径结合给药是有益的。
第三方面，本发明发现施用类维生素A拮抗剂、其可药用盐和药用可水解酯可有效地治疗骨质疏松。
因此，本发明涉及类维生素A拮抗剂、其可药用盐或药用可水解酯用于制备治疗骨质疏松的药物的用途。
本发明还涉及治疗骨质疏松患者的方法，包括给所述患者施用选自类维生素A拮抗剂、其可药用盐和药用可水解酯的化合物，所述化合物以有效治疗所述疾病的量施用。术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。
在本发明的该方面，术语“类维生素A拮抗剂”包括上文定义的a)-g)组的化合物。
本文采用的术语“骨质疏松”包括原发性和继发性骨质疏松，还包括以导致骨脆性增高进而导致骨折危险性增高的低密度骨质和骨组织的微体系结构损害为特征的疾病。
原发性骨质疏松的两种最常见的形式是1.骨高速改变的妇女经绝后骨质疏松(I型骨质疏松)，也称为快速更新形式的骨质疏松。小梁骨吸收的增加最经常地是导致椎骨和腕的骨折。2.发生于大多超过70岁的男性和女性的骨低速改变的老年性骨质疏松(II型骨质疏松)，也称为慢速更新形式的骨质疏松。小梁骨和皮质骨吸收的增加经常导致椎骨和股骨颈的骨折。
继发性骨质疏松与下列许多情况有关，例如疾病(如类风湿关节炎、伴随或不伴随高钙血的肿瘤引发的骨质溶解、肠或肾病)、固定不动/缺乏锻炼、营养不良、钙摄取或维生素D摄取及其代谢疾病、甲状旁腺激素代谢失调和药物治疗(如，皮质类固醇、肝素)。
本发明的类维生素A拮抗剂表现出影响骨改建的能力，骨改变是骨吸收和骨形成的结果。骨的吸收主要通过具有用以吸收无机物质以及有机基质成分的特化细胞器和原生质膜结构的多核破骨细胞完成。骨形成是成骨细胞的主要功能，其构建由蛋白多糖、I型胶原、非胶原性蛋白、骨连接素、骨钙素和其它成分组成的胞外基质。成骨细胞的另一个功能是骨矿化，包括诱导某些酶(如，碱性的磷酸酶)，使钙和其它成分结合到无机骨结构，如羟磷灰石中。
当骨吸收速率高于骨形成速率时，导致骨质的净损失，这种情况发生于骨质疏松中。类维生素A拮抗剂降低骨吸收和/或增加骨形成，因此可用于预防和治疗骨质疏松。
在生理和病理条件下，已知有一系列化合物影响，特别是诱导或刺激骨吸收，例如激素、维生素、生长因子、细胞因子、前列腺素、脂多糖等(有关综述的书Principles of Bone Biology，J.B.Bilezikian等人编辑，Academic Press，San Diego1996；Horowitz MC等人，《骨的局部调节剂》(Local regulators of bone)，pp.687-700；Pilbeam CC等人，《前列腺素与骨代谢》(Prostaglandins and bone metabolism)，pp.715-728；Mundy GR，《细胞因子、甲状腺旁腺素和生长因子在恶性肿瘤中的作用》(Role of cytokines，parathyroid hormone and growthfactors in mal ignancy)，pp.827-836；Rodan GA等人，《骨质疏松的病生理学》(Pathophysiology of osteoporosis)，pp.979-990；JonesG，《维生素D及其类似物的治疗药理学机制》(Pharmacologicalmechanism of therapeuticsVitamin D and analogs)，pp.1069-1081；Hakeda等人，《骨细胞破骨细胞的生长与培养》(The growth and cultureof bone cellsOsteoclastic)，pp.1217-1228；Geddes AD，骨疾病的动物模型(Animal models of bone diseases)，pp.1343-1354)。
对已知诱导/刺激骨吸收的下列化合物进行了测定甲状旁腺素(PTH)、甲状旁腺素有关的肽(PTHrP)、骨化三醇(1，25-二羟基维生素D3)、全反式视黄酸(全反式RA)、9-顺式视黄酸(9-顺式RA)、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白介素Iα(IL-1α)；Vaes G，骨吸收的细胞生物学和生物学机制，Clinical Orthopaedics and relatedResearch，1988，231，239-271。Houghs S.等人，维生素A过多症对大鼠的骨和矿物质代谢的影响，Endocrinology1988，122，2933-2939。Tullberg-Reinert H.等人，环孢菌素A和环孢菌素A-醋酸酯体外对小鼠颅盖在脂多糖、白介素-1、1，25-二羟基维生素D3和甲状旁腺素刺激下的钙和溶酶体酶释放的不同抑制作用，Agents and Actions 1991，32，321-332。Ammann P.等人，双磷酸盐(biphosphonate tiludronate)对骨吸收、钙平衡和骨矿物质密度的影响，J.Bone Miner.Res.1993，8，1491-1498。Bonjour JP等人，二膦酸盐骨药理学与安全性，Bone1995，17，473S-477S。Kindmark A等人，9-顺式和全反式视黄酸对1，25-(OH)2维生素D3-诱导的骨吸收的抑制作用，Calcif.Tissue Int.1995，57，242-244。Saneshige S.，视黄酸直接刺激破坏骨的骨吸收和组织蛋白酶K/OC-2的基因表达。Biochem.J.1995，309，721-724。
可以证明类维生素A拮抗剂抑制由上述吸收刺激性化合物诱导的骨吸收。这可以在广泛使用的新生小鼠颅盖(头盖骨)组织培养模型、预测用于临床预防和治疗骨质疏松的药物，如二磷酸盐的模型中得到证实。下面的实施例7描述了该实验。
第四方面，本发明涉及包含具有选择性视黄酸受体(RAR)拮抗活性、类维生素AX受体(RXR)拮抗活性或者混合的RAR-RXR拮抗活性的类维生素A的类维生素A拮抗剂用于治疗下列疾病的用途肿瘤发生前的和肿瘤发生疾病，例如皮肤和粘膜的癌症前期损伤，或皮肤、粘膜、头颈、肺、胃、结肠、乳腺、卵巢、宫颈和前列腺实体瘤；还涉及所述类维生素A拮抗剂在制备治疗此类疾病的药物中的应用(参见下面的实施例8)。
对于上述疾病的治疗，活性化合物，即类维生素A拮抗剂、其可药用盐或药用可水解酯可以全身性或局部给药。所述化合物优选以包含所述活性化合物及与所述活性化合物相容的可药用载体或稀释剂的组合物形式给药。在这类组合物的制备中，可使用任何常规的可药用载体。当药物口服时，通常以固定的时间间隔，一般是在进餐时给药或每日给药一次。已经确认，在口服或局部给药时，这类化合物在不表现出副作用或者仅表现出轻微副作用的剂量下就有效。因此，活性化合物常优选口服或局部给药。对于皮肤、口腔、鼻、咽、喉、支气管等疾病的治疗，采用口服与局部途径结合给药是有益的。
在上述疾病的治疗中，当口服给药时，类维生素A拮抗剂不会引起或轻微地引起属于维生素A过多症的中毒综合症的副作用，例如粘膜与皮肤的、肌与骨骼的、神经病学的表现以及转氨酶，甘油三酯和胆固醇升高。此外，与临床上用于治疗皮肤和肿瘤疾病的受体拮抗剂类维生素A，如全反式视黄酸(维A酸)、13-顺式视黄酸(异维A酸)、阿维A酯和阿维A相比较，它们不引起或很少引起畸形发生。
在2型T-辅助细胞介导的免疫疾病的治疗中，类维生素A拮抗剂、其可药用盐或药用可水解酯可单独或与其它物质联合使用，例如与其它药物活性物质，如局部或系统性皮质类固醇，抗组胺药和支气管扩张剂联合使用。如果与其它物质联合使用，类维生素A拮抗剂和所述其其它物质可单独给药或以有效量结合在同一种药物组合物中。
在骨质疏松的治疗中，类维生素A拮抗剂、其可药用盐或药用可水解酯可单独或与其它物质联合使用，例如与药物活性物质，如钙、维生素D衍生物、雌激素、合成代谢剂、降钙素或二磷酸盐联合使用。如果与其它物质联合使用，类维生素A拮抗剂与所述其它物质可单独给药或以有效量结合到同一种药物组合物中。
依据本发明，类维生素A拮抗剂还可以药用可水解酯形式给药。任何药用可水解酯均可用于本发明的组合物和方法中。优选的酯是芳族酯，例如苄基酯，其中苄基部分是未取代的或被低级烷基、卤素、硝基、硫代或取代的硫代基团取代的；或者低级烷基酯，如乙基、叔丁基、环戊基、环己基或环庚基的酯；或者9-芴基甲基酯。
前述类维生素A拮抗剂、其盐或酯尤其可以药学上可接受的口服或局部给药方式使用。这些药物组合物含有所述活性化合物与相容性可药用载体。可使用任何常规载体材料。载体材料可以是适于口服的无机或有机的惰性载体材料。适合的载体包括水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物油、聚烷二醇类、凡士林等。此外，药物活性制剂可含有其它药物活性物质。根据药物配制实践，可加入的其它添加剂是芳香剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂和缓冲剂等。
药物制剂尤其可配制成常规形式，特别包括(a)口服的固体形式，如片剂、胶囊(如，硬和软明胶胶囊)、丸剂、扁囊剂、粉末、颗粒等；(b)局部给药制剂，如溶液、悬浮液、软膏、油膏、乳液、凝胶、微粉化的粉末、喷雾剂、气雾剂等。药物制剂可被灭菌或者可包含辅剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于改变渗透压的盐和/或缓冲剂。
对于皮肤或粘膜的局部给药，上述衍生物优选制成软膏、酊剂、乳液、凝胶、溶液、洗剂、喷雾剂；吸入用气雾剂和干粉、悬浮液、香波、洗发皂和香水等。事实上，在本发明中可使用任何常规的组合物。在优选的应用方法中，含有本发明药物的组合物是软膏、凝胶、乳液、洗剂、喷雾剂；吸入用气雾剂或干粉等形式。局部给药于皮肤的药物制剂可通过将上述活性成分与非毒性的、治疗学上惰性的、常用于此类制剂中的固体或液体载体混合来制备。这类制剂一般含有占组合物总重0.01-5.0％(重量)，优选0.1-1.0％(重量)的活性成分。
在上述局部制剂的制备中，可使用添加剂，如防腐剂、增稠剂、香精等局部制剂药物配制领域中常用的那些。此外，常规的抗氧剂或常规抗氧剂的混合物也可掺入含有上述活性物质的局部制剂中。可用于这类制剂的常规抗氧剂包括N-甲基-α-生育胺、生育酚类、丁基化的羟基苯胺、丁基化羟基甲苯和乙氧喹等。含有本发明活性物质的霜基药物制剂由含有脂肪酸醇(fatty acid alcohol)、半固体石油烃、乙二醇和乳化剂的水性乳液组成。
含有本发明活性物质的软膏制剂含有半固体石油烃与活性物质的溶剂分散体的混合物。含本发明活性成分的乳液组合物优选包含由湿润剂、粘性稳定剂和水的水相，脂肪酸醇、半固体石油烃和乳化剂的油相以及含分散于稳定剂-缓冲剂水溶液中的活性物质的相形成的乳液。稳定剂可加到局部制剂中。本发明可使用任何常规的稳定剂。在油相中，脂肪酸醇作为稳定剂。这类脂肪酸醇起稳定剂的作用。这类脂肪酸醇由含有至少14个碳原子的长链饱和脂肪酸还原得到。本发明了使用常用于毛发局部制剂的常规香水和乳液。此外，如果需要，本发明的局部制剂可使用常规乳化剂。
可使用喷鼻和吸入气雾剂来治疗变应性鼻炎和变应性支气管的局部。这类气雾剂记载于Drugs and Pharmaceutical Sciences，Marcel Dekker，New York，1996，Vol.72，pp.547-574。此外，活性化合物也可通过干粉吸入释放。这类制剂和装置记载于Pharmaceutical Technology，June1997，pp.117-125。
优选的口服制剂包括片剂、丸剂、扁囊剂或者硬明胶、软明胶、甲基纤维素或者其它易溶于消化道的适合材料的胶囊。每片、丸、扁囊或胶囊优选含有约5-200mg，更优选含约20-100mg活性成分。依据本发明，本发明规定的口服剂量可根据个体患者的需求由处方医师决定。但通常，使用的每日剂量为0.05-20mg/kg患者体重，优选0.1-7mg，最优选约0.3mg-1.5mg/kg患者体重。该剂量可根据医师按照患者的需求确定的任何剂量方案进行给药。
治疗剂量一般取决于给药途径、个体患者的年龄、体重和疾病症状。适合的剂型是本领域已知的或者可容易地以已知方式获得。乳剂、凝胶、霜剂、喷雾剂、吸入用气雾剂和干粉、硬或软明胶胶囊、片剂和扁囊剂特别适合于本发明或者按照本领域的上述技术可容易地进行调整。
上述类维生素A拮抗剂的药理活性可通过各种如下面实施例1-8所示的各种试验模型来证明。在实施例1-8中，使用下列化合物化合物A(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-乙氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸(octatrienoic acid)化合物B(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基]-3-甲基-
2，4，6-辛三烯酸化合物C全反式视黄酸化合物D13-顺式视黄酸化合物E9-顺式视黄酸化合物F4-(5，6，7，8-四氢-5，5，8，8-四甲基-2-萘-甲酰氨基)苯甲酸化合物G(2E，4E)-3-甲基-5-[(1S，2S)-2-(5，5，8，8-四甲基-5，6，7，8-四氢-萘-2-基)-环丙基]-戊-2，4-二烯酸化合物Hp-[(E)-2-[3’，4’-二氢-4’，4’-二甲基-7’-(庚氧基)-2’H-1-苯并噻喃-6’-基]丙烯基]苯甲酸1’，1’-二氧化物化合物I4-(7，7，10，10-四甲基-1-吡啶-3-基甲基-4，5，7，8，9，10-六氢-1H-萘并(naphto)[2，3-g]吲哚-3-基)-苯甲酸表1
实施例2对全反式视黄酸引起的无毛大鼠皮肤刺激的抑制作用用试验化合物的丙酮/乙醇(1/1)混合溶液经表皮处理动物(0.025ml/2cm2)，每天处理一次，每周处理5天(周一至周五)，连续进行4周。
从开始研究后大约24小时开始，从周一至周五，每天观察动物各试验部位的红斑和水肿迹象。根据下列等级标准以粗略的数据记录引发的所有皮肤反应的强度0＝没有皮肤反应1＝轻微皮肤反应(轻微至明确的红斑)2＝意义明确的反应(意义明确的红斑至显著红斑)3＝中度皮肤反应(中度至伴随明确水肿的显著红斑)4＝严重皮肤反应(严重至强烈的红斑并有显著水肿)附
图1和2表示每次处理后计算得到的平均累积皮肤刺激评分。
附图3显示出各种浓度的化合物A与恒定浓度的全反式视黄酸(化合物C)的相互作用。在实验期间，C保持1×10-6mol/l的恒定浓度。化合物A的浓度从1×10-9mol/l升至2×10-6mol/l。随着化合物A浓度的增加，间充质细胞的分化从约5％增至约30％。
附图4显示了各种浓度的化合物A(1×10-9mol/l～2×10-6mol/l)与化合物D的相互作用，培养期间化合物D保持在1×10-6mol/l的恒定浓度。随着化合物A浓度的增加，间充质细胞的分化率从约30％增至约70％。
附图5显示了各种浓度的化合物A(1×10-9mol/l～2×10-6mol/l)与化合物E的相互作用，培养期间化合物E保持在5×10-7mol/l的恒定浓度。随着化合物A浓度的增加，间充质细胞的分化率从约5％增至约80％。
附图6显示了各种浓度的化合物A(1×10-9mol/l～2×10-6mol/l)与化合物F的相互作用，培养期间化合物F保持在1×10-8mol/l的恒定浓度。随着化合物A浓度的增加，间充质细胞的分化率从约5％增至约75％。
附图7显示了各种浓度的化合物A(1×10-9mol/l～2×10-6mol/l)与化合物G的相互作用，培养期间化合物D保持在1×10-6mol/l的恒定浓度。随着化合物A浓度的增加，间充质细胞的分化率从约5％增至约110％。
或者，在37℃下，将0.5×106人外周血单核细胞(PBMC)(在48孔培养板中的1ml培养物)用huIFN-y(1000U/ml)启动(primed)16小时，然后用SAC(1/1000)激发。48小时后收集上清液并于-20℃冷冻直至测定时[Panina-Bordignon等人，J.Clin.Invest.100，1513-1519(1997)]。
如文献所述，通过特异性酶联免疫吸附测定法(ELISA)，使用20C2抗体(大鼠抗人IL-12杂二聚体p40-p35)(2.5pg/ml包被缓冲液)和250ng/ml的过氧化物酶-结合的4D6抗体(大鼠抗人IL-12)测定IL-12的产生[Zhang等人，J.Clin.Invest.93，1733-1739(1994)]。将用缓冲液稀释的标准品(重组人IL-12，800pg/ml～6pg/ml)和样品(100μl)一式两份地加到孔中。在450-650nm处读取吸收值。由相应的标准曲线并乘以相应的稀释系数可以读出样品的未知的IL-12浓度。最大IL-12产量为200～400pg/ml。
在黄光下，于冰上在DMS0中以2mM浓度稀释冻干的类维生素A拮抗剂。用完全RPMI培养基制备系列稀释液(1μM～1pM)。将10μl的各种稀释液加到1ml培养物中。
实验结果表明试验的类维生素A拮抗剂影响IL-12的产生。具体地说，试验的类维生素A拮抗剂通过活化人单核细胞刺激IL-12的产生，见表2和3。
表2类维生素A拮抗剂通过活化单核细胞特异性地促进IL-12的产生
表3类维生素A拮抗剂促进通过用IFNγ引发和SAC刺激过的PBMC和THP-1细胞的IL-12的产生
*类维生素A拮抗剂(1μg)在0时与IFNγ一起加入或者在16小时后与SAC一起加入。
实施例5体外测定类维生素A拮抗剂对人原初(naive)T细胞分化为2型T辅助细胞(Th2)的抑制作用从脐带血液分离初T细胞并按照文献所述进行处理[PaninaBordignon等人J.Clin.Invest.100.1513-1519(1997)]。概括地说，将由脐带血液得到的单核细胞与抗-CD45RA和抗-CD4单克隆抗体一起培养。培养20分钟后，将细胞洗涤并与山羊抗小鼠Ig包被的磁珠一起培养。分离阳性细胞分离并将其以1×106个细胞/ml的密度接种于24孔平板中；在有或没有1mM化合物H或化合物B的存在下，与自体固有的粘附细胞、PHA和IL-4一起培养5天。然后洗涤细胞并在IL-2(100U/ml)的存在下将其放回培养物中。10天后，收集细胞并用PMA(50ng/ml)和伊屋诺霉素(1pg/ml)再刺激4小时。在后2小时中，加入布雷非德菌素A(10g/ml)。然后用4％多聚甲醛固定细胞并用皂甙渗透。固定的细胞用FITC-抗IFNγ和PE-抗-IL-4mAbs染色后，进行细胞荧光(cytofluorimetric)分析。
实验结果表明试验的类维生素A拮抗剂降低原初T细胞向IL-4-分泌性Th2细胞的分化(表4)。
表4类维生素A拮抗剂对Th2细胞中IL-4表达的抑制
实施例6过敏原引发的呼吸道(airway)炎症和过度反应性的鼠模型在第0天，使C57BL/6小鼠(8-9周龄)对卵清蛋白(OA)敏感，在第14天通过腹膜内注射10μg OA+1mg Al(OH)3(凝胶悬浮体)在0.2ml无菌盐水中的混合物。在第21天，用5.0％OA气雾剂刺激小鼠18分钟。气雾剂通过De Vilbiss Ultra-Neb90超声雾化器形成，该雾化器的出口与装有动物的小的有机玻璃室相连。在用OA刺激前48小时、24小时和临刺激前，对小鼠给予RXR拮抗剂化合物B(10和30mg/kg，腹膜内)，每日一次(共三天)。在第21天对动物进行实验。呼吸道炎性细胞的累积在第24天，即用OA气雾剂刺激后3天，用尿烷(2.4g/kg)麻醉动并用23规(gauge)导管切开气管。用不含钙和镁离子的等份无菌Hank’s平衡盐溶液(2×1ml)灌洗肺部。轻轻吸入30秒后回收灌洗液并按每只动物合并。然后在5℃以2000rpm将样品离心15分钟。用0.5ml蒸馏水使沉淀的血红细胞溶解，沉淀中剩余的细胞用5mlHBSS重新处理。使样品在5℃以2000rpm再离心15分钟。将使得的沉淀悬浮于1ml HBSS中。用血细胞计数器测定等份细胞悬浮液中的细胞总数。对于细胞学制品，将细胞固定于细胞离心玻片上，用改性Wright’s染料染色。采用标准形态学标准，进行至少300个细胞差数(Differentialcounts)的细胞分类。
实验结果表明试验的类维生素A拮抗剂抑制过敏原引发的呼吸道炎性细胞的累积。(表5)表5过敏原引发的呼吸道炎症小鼠模型中类维生素A拮抗剂对呼吸道炎性细胞积累的抑制作用
呼吸道过度反应性在第24天，即用OA刺激后3天后，动物用戊巴比妥钠(100mg/kg，i.p.)麻醉并切开气管(PE-190)。用硅橡胶管地颈静脉插套管，用于静脉给药药物。在用泮库溴铵(0.1mg/kg，i.v.)处理后，立即将动物置于安有呼吸速度描记器和机械通风的整体体积描记器中(Vf＝150/分，Model683，Harvard Apparatus，S.Natic，MA)。用差示压力转换仪(ValidyneDP103-08，Northridge，CA)整合呼吸流量信号得到波动的体积。用差示压力转换仪(Validyne DP45-30，Northridge，CA)，以气管内的压力与胸膜内压力(由插入肋间的套管获得)的差形式测定跨肺压。使用Modular Instrument Signal Processing System(Malvern，PA)从跨肺压、波动的体积和呼吸流量计算随醋甲胆碱剂量递增(30，100，300，1000 pg/kg，i.v.)肺耐受性的变化(cm H2O/ml/s)。
实验结果表明类维生素A拮抗剂可预防或逆转变应性呼吸道炎症并抑制抗原引发的支气管收缩，即变应性呼吸道疾病，如变应性支气管哮喘的典型症状。
实施例7类维生素A拮抗剂对骨吸收的影响的实施例骨吸收测定已知有一系列物质诱导或刺激骨吸收。该测定试验类维生素A拮抗剂抑制或对抗骨吸收诱导剂的骨吸收活性的能力。
材料和方法在一个组织培养系统中，通过定量从新生小鼠颅盖(头盖骨)释放到培养基上清液中的钙测定骨吸收。由控制时间交配的4日龄瑞士白化病小鼠(体重4-4.5g)制备颅盖。在立体显微镜下切割下前部和顶部颅盖部分并沿中缝一分为二。将所有动物的一半颅盖随机分布到内有支持骨于空气与培养基界面的不锈钢栅板的6孔培养板(NUNC)中。根据补加1mg/mlBSA(牛血清白蛋白，SIGMA)的特定配方，在BGJ培养基(Bioconcept，Switzerland)中培养该组织。使颅盖在37℃下，5％CO2和95％空气的湿润气氛下培养。预培养24小时后，将它们转移到有1.7ml新鲜培养基和试验物质的新培养板中。骨吸收诱导剂和类维生素A拮抗剂作为单独或结合的试验物质进行试验。然后进行72小时的培养。每次培养结束后，立即测定培养物上清液中的钙浓度。试验包含甲基百里酚蓝的试剂盒(Biomerieux)，用分光光度法测定25μl样品中的稳定的和游离的钙(E.M.Gindler和J.D.King，Am.J.Clin.Pathol.1972，58，376-382)。吸收反应以在3天处理期间每半个颅盖释放的钙(μg)表示。
还进行了测定颅盖中残留钙的试验。用5％三氯乙酸(TCA)萃取钙，用NaOH中和后，测定50μl样品中的钙。此外，测定骨组织的生存力，以排除细胞毒性。该测定可通过NITT四唑盐比色试验定量进行(T.Mosmann，J.Immunol.Methods1983，65，55-63)。
在该试验中，使用类维生素A拮抗剂H和B。
使用下列骨吸收诱导/刺激剂骨化三醇(1，25-二氢维生素D3)，全反式视黄酸(全反式RA)，和9-顺式视黄酸(9-顺式RA)，由Roche Laboratories Basel合成。
前列腺素E2(PGE2)，试验的细胞培养物(Sigma Chem.Co.)，
肿瘤坏死因子(TNFα)，鼠重组的，和白介素-1α(IL-1α)，鼠重组的(Calbiochem.)。
通过测量从一半颅盖释放到上清液培养基中的钙量测定各种物质诱导的骨吸收。钙释放以1.7ml培养基中每半个颅盖释放的钙(μg)表示。可测量从颅盖释放到培养基中的钙以及从培养基中摄取到颅盖中的钙。类维生素A拮抗剂抑制骨吸收诱导剂的活性以百分抑制率(％抑制)表示。由仅在骨吸收诱导剂作用下释放的钙量与所述诱导剂和类维生素A拮抗剂联合作用下释放的钙量的差计算。类维生素A拮抗剂本身即不诱导钙释放也不诱导钙摄取。载体对照的基础吸收率为5％或低于5％。
结果实验的结果(表6～11)证实类维生素A拮抗剂H和B对抗六种不同的物质诱导的骨吸收。据认为所述六种物质对骨吸收有贡献，而后者在哺乳动物和人的骨质疏松和骨折中起着责任性作用。从表6～11可以看出，全部的6种骨吸收剂诱导颅盖产生剂量依赖性的钙释放进入上清液培养基。类维生素A拮抗剂能抑制由这六种不同的骨吸收剂诱导的钙释放。
表6骨化三醇作为诱导剂
表7全反式视黄酸作为诱导剂
表89-顺式视黄酸作为诱导剂
表9前列腺素E2(PGE2)作为诱导剂
表10肿瘤坏死抑制α(TNF-α)作为诱导剂
表11白介素1α(IL-1α)作为诱导剂
实施例8局部施用化会物B治疗虚肤的癌前损伤(多发性光化性角化病)的功效在临床试验中，将含1％化合物B的乳膏施用于损伤部位，无需使用封闭的敷料，每日两次。表12给出了结果。如表12所示，当化合物B局部给药时，可有效治疗皮肤的癌前损伤，与其它视黄酸衍生物相比，它被良好耐受并对损伤部位和周围的皮肤不产生任何刺激作用。表12
*特别是对损伤部位和周围皮肤的刺激依据本发明式，I化合物可通过式XVIII化合物
与式XIX化合物反应得到其中R3是低级烷氧基的式I化合物，
其中A是甲酰基并且B是二-(低级烷氧基)氧膦基；R是低级烷氧基；并且R1，R2和R4～R6定义如上；且，如果需要，水解得到式I化合物中的低级烷氧基R3。
化合物XVIII与化合物XIX的反应可按照已知的Hornet(Wadsworth-Emmons)反应进行。该反应可在碱，优选在惰性有机溶剂的存在下，如在氢化钠的存在下在苯、甲苯、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二恶烷或1，2-二甲氧基烷烃中，或者在醇钠的存在下在链烷醇，如在甲醇钠的存在下在甲醇中，在0℃至反应混合物的沸点范围内进行。可用于该反应的另一种碱的实例是二(三甲硅烷基)氨基锂，在惰性溶剂，如THF中，在-78℃至0℃下进行。由此获得的式I的羧酸酯可通过已知方式水解，如用碱处理，特别是用氢氧化钠或钾的水-醇液在室温至反应混合物的沸点温度下水解。
如此获得的式I羧酸可以以其本身或其盐，如碱盐，尤其是钠或钾盐的形式用本身为已知方法分离。
式XVIII化合物是新化合物，因此也是本发明的主题。式XVIII化合物可按照下面的方案1和2所述进行制备
方案1
方案2
按照方案1，可获得式XVIII化合物，其中存在虚线键，R1是低级烷基并且R2是氢。在方案1中，通过与有机金属的亲核试剂，如烷基锂或烷基镁卤化物反应，化合物(1)被转化为化合物(2)。通过用氧化剂，如二氧化锰处理，化合物(2)可被氧化形成化合物(3)。通过与三甲硅烷基乙酸乙酯反应的Peterson烯化作用，化合物(3)可被转化为化合物(4)[Synthesis，384(1984)D.J.Ager，J.Org.Chem.33，780(1968)D.J.Peterson]。通过用金属氢化物，如二异丙基氢化铝处理，化合物(4)的羧基可被还原得到化合物(5)，化合物(5)再用二氧化锰进一步氧化得到式XVIII的化合物，其中R1是低级烷基并且R2是氢。
按照方案2可获得式XVIII化合物，其中不存在虚线键并且R1和R2一起是亚甲基。根据方案2，在四(三苯基膦)钯(O)和CuI的存在下，化合物(6)与三甲硅烷基乙炔反应得到化合物(7)，然后用四丁基氟化铵处理除去三甲硅烷基，再在碱，如丁基锂的存在下，将如此获得的化合物(8)用二甲基甲酰胺甲酰化得到化合物(9)。通过在乙醇中用金属氢化物，如硼氢化钠处理，化合物(9)的甲酰基可被还原为羟基，得到化合物(10)。借助Lindlar催化剂，化合物(10)中的三键可被还原，得到化合物(11)，然后通过改变的Simmons-Smith反应将其转化为化合物(12)[Tetrahedron24，53(1968)，J.Furukawa，N.Kawabata，J.Nishimura；J.Org.Chem.42，3031(1977)N.Kawabata等人]。该环丙烷化也可以按照Fujisawa等人的方法(Chem.Letters，61(1992))，用(R，R)或(S，S)-二乙基酒石酸酯作为手性助剂以对映体选择性方式进行。可用本领域已知的方法，例如用氯甲酸吡啶翁或者通过Swern-或Dess-Martin氧化法，将化合物(12)氧化得到式XVIII的化合物，其中A是甲酰基，不存在虚线并且R1和R2一起是亚甲基。
所有这些反应均以本身已知的方式进行。
本发明通过下列实施例进一步加以说明。
将3.5g3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯甲醛溶于30ml乙醚中并在搅拌下冷却到0℃。通过注射器加入11.4ml甲基锂(1.55M乙醚溶液)，将其搅拌10分钟后倾入1M氯化铵中并振摇。分离醚层、干燥(硫酸钠)并除去溶剂，得到3.7g油状物，经色谱(硅胶-5％乙醚/己烷)纯化，得到3.3g1-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)乙醇；1H NMR(CDCl3)δ7.34(dd，4H，芳香)，5.25(m，1H，-CH3CH-)，3.85(t，2H，-OCH2-).
将2.77g(9mmol)1-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)乙醇溶于120ml甲苯，然后用14g氧化锰(IV)处理。在75℃下充分搅拌5小时。使其冷却并滤过硅藻土。除去溶剂，得到2.27g1-(3，5-二叔丁基-2-丁基氧基苯基)乙酮。1H NMR(CDCl3)δ7.38(dd，4H，芳香)，2.62(s，3H，CH3C-)，3.72(t，2H，-OCH2-).
在-20℃下，将20ml四氢呋喃(THF)中的1.43g二异丙基胺用8.4ml正丁基锂(1.6M己烷溶液)处理。将其冷却到-78℃后，用2.26g三甲硅烷基乙酸乙酯处理。使其温热到0℃后，倾入水中并用己烷萃取。萃取液用水洗涤，干燥(硫酸镁)并除去溶剂，得到油状物。通过硅胶色谱(15％乙醚/己烷)纯化分离异构体，得到3.5(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯酸乙酯。1H NMR(CDCl3)δ7.05(dd，4H，芳香)，5.90(s，1H，2-H)，3.96(q，2H，-OCH2CH3)，3.70(t，2H，-OCH2-)，2.21(s，3H).
将0.9g(E)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯酸乙酯溶于20ml无水乙醚中。使其冷却到-78℃后用6.0ml二异丁基氢化铝(1.0M己烷溶液)处理。使温度温热到0℃后，用20％Rochelle盐的水溶液处理。在25℃下搅拌1小时。分离有机馏分，用水洗涤，干燥(硫酸钠)并除去溶剂，得到0.78g(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯-1-醇。1H NMR(CDCl3)δ7.08(dd，4H，芳香 )，5.90(t，1H，CH-OH)，3.80(t，2H，-OCH2-)，2.49(t，1H，-OH)，2.21(s，3H).
将0.66g(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯-1-醇溶于100ml乙醚中并冷却到15℃。往上述溶液中加入6.6g氧化锰(IV)在50ml乙醚中的浆状物。在室温搅拌3小时。使该混合物滤过硅藻土并除去溶剂。得到0.64g(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯-1-醛。1H NMR(CDCl3)δ9.45(d，1H，醛)，7.08(dd，4H，芳香)，5.90(t，1H，CH-OH)，3.80(t，2H，-OCH2-)，2.49(t，1H，-OH)，2.21(s，3H).
将635mg三乙基-3-甲基-4-膦酰基丁烯酸酯(CAS#41891-54-7)溶于5ml，THF，冷却到-78℃后用2.2ml(2.2mmol)(1.0M THF溶液)二(三甲硅烷基)氨基锂处理。在-78℃下，缓慢地加入600mg(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-丁烯-1-醛的5ml THF溶液。在-78℃搅拌0.5小时后，倾入稀氯化铵水溶液中。产物用己烷萃取，有机层用水洗涤，干燥(硫酸钠)并除去溶剂，得到粗品油。通过硅胶色谱(3％乙醚/己烷)得到540mg(2E，4E，6Z)-7-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-3，7-二甲基-2，4，6-庚三烯酸乙酯。1H NMR(CDCl3)δ7.12(dd，4H，芳香)，6.62(dd，1H，H-5)，6.20(d，1H，H-4)，6.18(d，1H，H-6)，4.15(q，3H，-OCH2CH3)，3.7(dt，2H，-OCH2-)，2.22(s，3H)，2.15(s，3H).
将520mg(2E，4E，6Z)-7-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-3，7-二甲基-2，4，6-庚三烯酸乙酯悬浮在5ml乙醇中，用5ml 6N NaOH处理并回流1.5小时。将其冷却并用稀盐酸酸化至pH3。用氯仿萃取沉淀的固体。有机部分用水洗涤，干燥(硫酸钠)并除去溶剂。所得固体在二氯甲烷/己烷中结晶得到(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸。1H NMR(CDCl3)δ7.08(dd，4H，-芳香)，6.65(dd，1H，H-5)，6.22(d，1H，H-4)，6.18(d，1H，H-6)，3.7(dt，2H，-OCH2-)，2.24(s，3H)，2.15(s，3H).M.p.148-151℃.
通过类似于上述的方法，制备下列化合物(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-甲氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，m.p.208-211℃(自THF/己烷)(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-乙氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，m.p.165-167℃(自THF/己烷)(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-己氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，m.p.156-160℃(自乙醚/己烷)(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-辛氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，m.p.137-139℃(自己烷)。
将10.1g1-溴-2-乙氧基-3，5-二叔丁基-苯溶于50ml哌啶。添加490mg四(三苯基膦)钯(O)，96mg碘化铜和140mg三苯基膦后，在氩气氛下将该反应混合物加热到90℃后，缓慢地用6.3g(三甲硅烷基)乙炔处理(约2小时)。该反应在90℃再保持10分钟后，用相同量的试剂重复该过程。使该反应混合物于90℃再加热1小时后，倾入冰水中，用80ml浓盐酸酸化，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，干燥并蒸发。所得油状物经色谱(硅胶，己烷/2.5％乙酸乙酯)纯化，得到8.3g浅黄色油状的3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基乙炔基)-三甲基硅烷。
将8.3g所述油溶于120ml四氢呋喃(THF)中，用6.03g四丁基氟化铵处理。在室温搅拌1小时后，将该反应混合物倾入冰水中，用乙醚萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。经色谱(硅胶，己烷)所得棕色油，得到4.2g无色油状的1，5-二叔丁基-2-乙氧基-3-乙炔基苯，在冰箱中使其结晶，m.p.46-47℃。在高真空下，有少量样品升华并在48-49℃融熔。
将4.1g该化合物溶于45ml THF中，在-78℃下用11ml正丁基锂(1.6摩尔于己烷中)处理。在-78℃下保持1小时后，该反应化合物用12mlDMF处理，温热到室温并搅拌6小时，倾入冰水中，用浓盐酸酸化，乙酸乙酯萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到5g棕色的油，使其经色谱(硅胶，己烷/2％乙醚)纯化。合并纯净的馏分，得到2.4g浅橙色油，在冰箱中结晶，m.p.55-57℃。
将2.4g3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-丙醛溶于25ml乙醇中，在0℃和1.5小时时间内，用90mg硼氢化钠处理。该反应化合物用6ml2N盐酸酸化，倾入冰水，用乙醚萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。所得橙色油经色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)并在戊烷中重结晶，得到2.2g白色结晶的3-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-丙-2-炔-1-醇，m.p.82-84℃。
将2g该化合物溶于350ml乙醇中，用100mg Lindlar催化剂处理并在常压下氢化7.5小时。在3、5和6小时后，分别加入100mg新鲜的Lindlar催化剂。滤除催化剂并蒸发反应溶液。所得的残余物经中压色谱(硅胶，己烷∶乙醚＝8∶2)纯化，在己烷中重结晶后得到1.3g(Z)-3-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-丙-2-烯-1-醇，mp.93-94℃。
将1.3g该化合物溶于50ml二氯甲烷中，在-5℃下，用13.7ml二乙基锌(diethylzinc)(1M己烷溶液)处理。在0℃搅拌15分钟后，使该反应混合物冷却到-20℃，滴加7.4g碘甲烷，在0℃搅拌1小时并在室温搅拌1.5小时。往该白色悬浮液中缓慢地滴加50ml饱和的氯化铵水溶液。该澄明的反应混合物倾入冰/饱和氯化铵溶液中，用乙醚萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。所得半结晶残余物经色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)，并在己烷中重结晶后，得到1.3g白色结晶状的(1RS，2SR)-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-甲醇，m.p.102-103℃。
将1.02g草酰氯溶于37ml CH2Cl2中，于-60℃用0.86ml二甲亚砜处理。短时温热到-35℃后，时该反应混合物再次冷却到-60℃并用1.2g(1RS，2SR)-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-甲醇在20mlCH2Cl2中的溶液处理。在-50℃搅拌15分钟后，滴加1.7ml三乙胺。该反应混合物在室温搅拌2小时欧，倾入冰水中，用乙醚萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。该粗品经快速色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)纯化并在己烷中重结晶，得到1.01g白色结晶的(1RS，2RS)-2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙烷甲醛，m.p.96-97℃。
将908mg3-甲基-4-膦酰基丁烯酸三乙酯溶于25ml THF，并在-78℃下用3.4ml二(三甲硅烷基)氨基锂(1.0摩尔于THF中)处理。0.5小时后，缓慢地滴加800mg上述的醛在25ml THF中的溶液。移走冷却浴并使温度温热到0℃。在0℃保持1.5小时后，该反应混合物倾入饱和的氯化铵水溶液中，用乙醚萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。粗产物经快速色谱(硅胶，己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)和中压色谱(硅胶，己烷/2％乙酸乙酯)纯化，在己烷/乙酸乙酯中重结晶后，得到650mg白色结晶的(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯，m.p.129-130℃和370mg(2Z，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯，m.p.123-126℃。
将600mg(2E，4E)-酯溶于20ml乙醇中，用840mg氢氧化钾在乙醇和水各4ml的溶剂中的溶液处理。加入10ml THF后，使该澄明溶液温热到45-50℃并保持7小时后，冷却到室温，倾入冰/1N盐酸中，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，干燥(硫酸钠)并蒸发。该粗品在乙酸乙酯中重结晶，得到440mg白色结晶的(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸，m.p.200-202℃。
按照同样的方法，将370mg(2Z，4E)-酯水解得到270mg(2Z，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸，m.p.169-174℃。实施例11类似于实施例2，用1-溴-2-丁氧基-3，5-二叔丁基-苯作为原料合成(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-T氧基苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸，m.p.175-178℃(己烷/乙酸乙酯)。
下列实施例描述本发明的药物制剂实施例12a)软明胶胶囊填充物活性化合物 5.0-200.0g油*1-3份蜡混合物** 1-5份填充体积 1-6最小量(minim)*天然植物油，如豆油、花生油和合成甘油酯**天然的和合成的蜡的组合物或者部分氢化的脂肪c)20mg软明胶胶囊组成 mg/胶囊活性化合物20.000dl-α-生育酚 0.028氢化蓖麻油4.200辛酸/癸酸/硬脂酸甘油三酯 56.000(合成甘油三酯)甘油三酯，中链199.772总计 280.000mg实施例13含20mg活性物质的硬明胶胶囊组成每枚明胶胶囊含有活性化合物20.0mg明胶Bloom30 70.0mg麦芽糖糊精MD05108.0mgdl-α-生育酚 2.0mg抗坏血酸钠10.0mg微晶纤维素48.0mg硬脂酸镁 2.0mg(胶囊内容物重量) 260.0mg方法在明胶、麦芽糖糊精、d1-α-生育酚和抗坏血酸钠的溶液中使活性物质润湿研磨。将湿润的研磨悬浮体喷雾干燥。将喷雾干燥粉末与微晶纤维素和硬脂酸镁混合。将260mg每份的该混合物填充到合适尺寸和颜色的硬明胶胶囊中。
实施例14含20mg活性物质的片剂片芯活性化合物20.0mg无水乳糖 130.5mg微晶纤维素80.0mgdl-α-生育酚 2.0mg抗坏血酸钠10.0mg聚乙烯吡咯烷酮K30 5.0mg硬脂酸镁 2.5mg(芯的重量)250.0mg膜包衣羟丙甲基纤维素3.5mg聚乙二醇6000 0.8mg滑石 1.3mg氧化铁，黄0.8mg二氧化钛 0.8mg(膜的重量)7.4mg方法将化合物与无水乳糖和微晶纤维素混合。该混合物用聚乙烯吡咯烷酮，dl-α-生育酚和抗坏血酸钠的溶液/悬浮液在水中制粒。将颗粒物质与硬脂酸镁混合后压制为250mg重的片芯。将片芯用上述成分的溶液/悬浮液进行膜包衣。
实施例15含活性物质的扁囊剂(sachet)活性化合物200.0mg乳糖，细粉990.0mg微晶纤维素1250.0mg羧甲基纤维素钠14.0mgdl-α-生育酚 5.0mg抗坏血酸钠20.0mg聚乙烯吡咯烷酮K30 10.0mg硬脂酸镁 10.0mg实施例16洗剂(溶液)优选活性化合物0.1-2.0g丙二醇5.00-20.00g 10.00gPEG-Glyceryl Cocoate*0.00-20.00g 10.00gdl-α-生育酚 0.001-0.50g 0.02g抗坏血酸棕榈酸酯 0.01-0.20g 0.10g没食子酸丙酯 0.001-0.02g 0.002g柠檬酸，无水的** 0.00-0.20g 0.01g异丙醇*** 40.00-90.00g50.00g水，dem.ad100.00g 100.00g resp.ml*或者其它的表面活性剂**或者其它配位剂，如，EDTA***或者其它醇，如，乙醇实施例17凝胶优选活性化合物 0.1-2.0g丙二醇 5.00-20.00g 10.00gPEG-Glyceryl Cocoate* 0.00-20.00g 10.00gdl-α-生育酚 0.001-0.50g 0.02g抗坏血酸棕榈酸酯 0.01-0.20g0.10g没食子酸丙基酯 0.001-0.02g 0.002g柠檬酸，无水的** 0.00-0.20g0.01g异丙醇*** 40.00-90.00g 50.00gHPMC**** 0.50-5.00g3.00g防腐剂*****适量 适量水，dem.ad 100.00g 100.00g resp.ml*或者其它表面活性剂**或者其它配位剂，如EDTA***或者其它醇，如乙醇****羟丙甲基纤维素或者其它聚合物，如中和的Carbomer、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠*****防腐剂，如对羟基苯甲酸酯(甲基、乙基、丙基、丁基)、山梨酸、苯甲酸实施例18乳膏剂优选活性化合物 0.1-2.0g甘油 0.00-10.00g5.00gEDTA二钠 0.001-0.50g0.03g甘油酯* 5.00-20.00g10.00g鲸蜡醇 0.50-5.00g 1.00g硬脂醇 0.50-5.00g 1.00g甘油单硬脂酸酯 1.00-8.00g 4.00gCeteareth** 0.50-5.00g 2.00gdl-α-生育酚 0.001-0.50g0.02g防腐剂***适量 适量水，dem.ad 100.00g100.00g*如，辛酸/癸酸/甘油三酯，辛酸/癸酸/亚油酸甘油三酯，天然甘油酯，以及例如丙二醇，二辛酸酯/二癸酸酯和蜡，如硬脂酰，硬脂酸酯、油酰油酸酯，豆蔻酸异丙基酯**Ceteareth5-30或者其它的乳化剂，如土温20-80，脂肪酸的脱水山梨醇酯、PEG的脂肪酸酯。料*防腐剂，如对羟基苯甲酸酯(甲基、乙基、丙基、丁基)，山梨酸，苯甲酸实施例19吸入气雾剂，计量剂量的吸入器活性化合物0.5％(0.1-2.0％)三油酸脱水山梨醇酯5％dl-α-生育酚 0.4％抛射剂(三氯氟甲烷和二氯二氟己烷的混合物) 94.1％实施例20干粉吸入剂活性化合物 0.5mg(0.1mg-2.0mg)(喷射研磨的，喷雾干燥的)一水乳糖 25mg
权利要求
1.式I化合物及式I的羧酸的可药用盐， 其中的虚线键可以存在或不存在；当虚线键存在时，R1是低级烷基且R2是氢；当虚线键不存在时，R1和R2一起是形成顺式取代的环丙基环的亚甲基；R3是羟基或低级烷氧基；R4是烷基或烷氧基；并且R5和R6独立地是C4-12烷基或者单环或多环的C5-12烃基，其通过季碳原子与苯环相连。
2.权利要求1的化合物，是式Ia化合物及式Ia的羧酸的可药用盐 其中R1是低级烷基并且R3～R6如权利要求1所定义。
3.权利要求2的化合物，是(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-乙氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸。
4.权利要求2的化合物，是(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸。
5.权利要求2的化合物，是(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸乙酯，(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-甲氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-己氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸，(2E，4E，6Z)-7-[3，5-二叔丁基-2-辛氧基苯基]-3-甲基-2，4，6-辛三烯酸。
6.权利要求1的化合物，是式Ib的化合物及式Ib的羧酸的可药用盐， 其中R3～R6如权利要求1所定义。
7.权利要求6的化合物，是(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯，(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-乙氧基-苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸，(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸。
8.式XVIII的化合物 其中A是甲酰基；并且R1、R2和R4～R6如权利要求1所定义。
9.药物组合物，含有权利要求1的式I化合物或式I的羧酸的可药用盐以及常用的药物载体材料。
10.类维生素A拮抗剂用于降低或消除接受类维生素A激动剂治疗的患者的副作用的应用。
11.权利要求10的应用，其中类维生素A激动剂治疗是用于治疗痤疮、牛皮癣或者恶化前的或者恶化疾病。
12.类维生素A拮抗剂用于治疗2型T-辅助细胞(Th2)介导的免疫疾病，例如免疫球蛋白E(IgE)-介导的过敏性疾病，或者用于治疗由Th2-有关的细胞因子，如IL-4和IL-5介导的疾病的应用。
13.权利要求12的应用，其中所述疾病是特应性皮炎、变应性鼻炎或变应性支气管哮喘。
14.类维生素A拮抗剂用于治疗骨质疏松的应用。
15.权利要求14的应用，其中骨质疏松是绝经后骨质疏松、两性老年性骨质疏松或者各种形式的继发性骨质疏松。
16.类维生素A拮抗剂用于治疗肿瘤发生前的或肿瘤发生疾病的应用。
17.权利要求16的应用，其中肿瘤发生前的疾病是皮肤和粘膜的癌前损伤，和肿瘤发生疾病是皮肤、粘膜、头颈部、肺、胃、结肠、乳腺、卵巢、宫颈和前列腺的实体瘤。
18.权利要求1的式I化合物或式I的羧酸的可药用盐在制备治疗减轻或消除接受类维生素A激动剂治疗的患者的副作用的药物中的应用。
19.权利要求18的应用，其中的类维生素A激动剂治疗是用于治疗痤疮、牛皮癣或者恶化前的或恶性疾病。
20.类维生素A拮抗剂在制备治疗2型T-辅助细胞(Th2)介导的免疫疾病，如免疫球蛋白E(IgE)-介导的过敏性疾病，或者由Th2-有关的细胞因子，如IL-4和IL-5介导的疾病的药物中的应用。
21.权利要求20的应用，其中的疾病是特应性皮炎、变应性鼻炎或变应性支气管哮喘。
22.类维生素A拮抗剂在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
23.权利要求22的应用，其中骨质疏松是绝经后骨质疏松、两性的老年性骨质疏松或者各种形式的继发性骨质疏松。
24.类维生素A拮抗剂在制备治疗肿瘤发生前的或肿瘤发生疾病的药物中的应用。
25.权利要求24的应用，其中肿瘤发生前的疾病是皮肤和粘膜的癌前损伤，和该肿瘤发生疾病是皮肤、粘膜、头颈部、肺、胃、结肠、乳腺、卵巢、宫颈和前列腺的实体瘤。
26.权利要求10-25任一项的应用，其中的视黄酸拮抗剂是权利要求1的式I化合物。
27.权利要求26的应用，其中的式I化合物是式Ic化合物。
28.权利要求27的应用，其中的式Ic化合物是(2E，4E)-(1RS，2RS)-5-[2-(3，5-二叔丁基-2-丁氧基苯基)-环丙基]-3-甲基-戊-2，4-二烯酸。
29.前述的新化合物、组合物和用途。
全文摘要
本发明涉及式I的新的类维生素A拮抗剂和式I的羧酸的可药用盐,其中的虚线键可以存在或不存在;当虚线键存在时,R
文档编号A61K31/19GK1337931SQ99816447
公开日2002年2月27日 申请日期1999年3月8日 优先权日1999年3月8日
发明者W·伯拉格, M·克劳斯, P·摩尔, P·帕尼纳－伯迪格农, M·罗森伯格, F·希尼加格利亚 申请人:巴斯利尔药物股份公司