剂盒(解放军总医院科技开发中心放免所）；兔抗鼠TGF-Pi-抗、生物素标记的羊抗兔IgG、DAB显色系统(北京中山生物技术有限公司）。
[0018] 2动物模型的建立与分组 lg40U2X00、、黄芪浸膏、得，均漉液回收乙醇并浓缩至清膏，将30只SD雄性大鼠随机 分为正常组、模型组、本发明药物组，每组10只。禁食l〇h后，模型组和本发明药物组给予 2%的STZ55mg/Kg(溶于0.lmmol/L枸橼酸钠缓冲液，pH=4. 3,新鲜配制）单次尾静脉注射， 72h后经尾血测血糖（PG)，凡空腹血糖（FTG)> 16. 7mmol/L为模型组实验动物，本发明药 物组以脑络通颗粒4. 5mg?Kg4 ?cf1 (用蒸馏水配制成0. 8%水溶液）灌胃，正常组和模型组 以等量蒸馏水灌胃。
[0019] 3标本收集与检测 治疗8周。留尿后，麻醉动物，于下腔静脉取血，并分离血浆与血清，取双肾，右肾做匀 浆，左肾制作光镜及电镜切片，光镜行HE、PAS、PAM染色，并采用SABC法制作TGF- 0i阳性物 质灰度值（阳性物质灰度值与其含量呈反比)，每个肾脏随机选择20个肾小球，取其平均值 作为该标本的结果。采用放免法测定UAER、血浆ET(SET)、尿液ET(UET)及肾组织ET(KET)， 考马斯亮蓝法测定匀浆液蛋白含量，肾组织匀浆液ET的含量由ET浓度/蛋白浓度计算得 来，以ng/g蛋白表示。在透射电镜下，对肾小球基底膜（GBM)摄影，每例标本取6张不同部 位的照片，用图像分析仪测定肾小球基底膜厚度（GB-MT)，取其平均值作为该标本结果。
[0020] 4统计分析 数据以(；x 表示。组间比较用方差分析法，P〈〇. 05有统计学意义，采用SPSS软件 进行分析。
[0021] 5 结果 5. 1相对肾重（勝/81)、？6、说113、(：(^的变化，模型组和本发明药物组大鼠？6水平接近， 明显高于正常组，而KW/BW、UAER、Ccr均明显高于正常组，提示存在肾小球肥大及肾小球高 滤过，而本发明药物组KW/BW、UAlb、Ccr较模型组明显降低，结果见表1。
[0022] 5. 2血、尿、肾ET水平的变化：8周时各组大鼠血ET水平无明显差异，模型组与本 发明药物组尿、肾ET水平明显高于正常组，经脑络通颗粒治疗后尿、肾ET水平明显低于模 型组组，结果见表2 5. 3肾组织TGF-0i免疫组化结果：8周时模型组肾组织着色浓集，于肾小球系膜细胞、 血管内皮细胞及肾小管上皮细胞胞浆均可见明显表达，而正常组肾组织着色浅淡稀疏，经 灰度值测定两组间差异有非常显著性意义；而模型组TGF-h的表达范围及强度明显小于 本发明药物组结果见表2。
[0023] 5. 4肾形态学分析 5. 4. 1光镜检查：8周后正常组大鼠肾小球及小管间质未见明显的病理改变。模型组大 鼠肾组织光镜检查可见肾小球明显增大，肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚，系膜区增宽， 系膜基质PAS阳性物质及PAM银染区扩大，近端肾小管上皮细胞呈现大量空泡变性。本发 明药物组肾组织病理改变较模型组明显改善，肾小球系膜区增宽、基底膜增厚均较轻，肾小 管空泡变性较少。
[0024] 5. 4. 2电镜观察结果：FBM局灶性或弥漫性增厚，系膜区扩大，基质增多，系膜细胞 轻度增生。图像分析仪定量分析：模型组GBM较正常组明显增厚，但本发明药物组GBMT较 模型组明显降低，具有统计学意义表，结果见表2。
【主权项】
1. 脑络通制剂在制备治疗肾脏疾病及其并发症的药物中的应用。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的并发症包括肾炎、肾病综合症或慢性 肾功能衰竭。
3. 如权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的脑络通制剂按照重量组分计算， 由丹参浸膏20-80份、盐酸托哌酮20-80份、川芎浸膏20-80份、甲基橙皮苷5-15份、黄芪 浸膏30-70份和维生素B 60. 5-3. 5份及辅料制备而成。
4. 如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的脑络通制剂按照重量组分计算，由丹 参浸膏50份、盐酸托哌酮50份、川弯浸膏50份、甲基橙皮苷10份、黄苗浸膏50份和维生 素仏2份及辅料制备而成。
5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的脑络通制这样制备：取丹参浸膏、盐 酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黄芪浸膏和维生素B 6，加入一种或多种药学上可以接受 的辅料，再按照药学领域的常规方法，制备成医药领域中可接受的剂型。
6. 如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述剂型包括口服制剂、注射制剂或外用制 剂。
7. 如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述口服制剂包括糖浆剂、口服液、胶囊剂、 丸剂、颗粒剂或片剂。
8. 如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述胶囊剂的制备方法为：以上六味药，丹 参浸膏、川芎浸膏和黄芪浸膏粉碎成细粉，混匀，加入盐酸托哌酮、甲基橙皮苷和维生素B 6 及制成量59. 6%的淀粉，混匀，干燥，装入胶囊，即得。
9. 如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述片剂的制备方法为：以上六味药，丹参 浸膏、川芎浸膏和黄芪浸膏粉碎成细粉，混匀，加入盐酸托哌酮、甲基橙皮苷和维生素B6,力口 入制成量3%的硬脂酸镁，用90%乙醇为润湿剂制颗粒，干燥，压片，包衣，即得。
10. 如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述颗粒剂的制备方法为：以上六味药，丹 参浸膏、川芎浸膏和黄芪浸膏粉碎成细粉，混匀，加入盐酸托哌酮、甲基橙皮苷和维生素B6， 加入制成量20%的糊精和制成量20%的蔗糖混匀，制成颗粒，干燥，即得。
【专利摘要】本发明提供了脑络通制剂在制备治疗肾脏疾病及其并发症的药物中的应用。所述脑络通制剂由丹参浸膏、盐酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮苷、黄芪浸膏和维生素B6及辅料制备而成，所述脑络通制剂能有效治疗肾脏疾病及其并发症，所述并发症包括肾炎、肾病综合症或慢性肾功能衰竭，疗效显著，具有良好的应用前景。
【IPC分类】A61K31-7048, A61K36-537, A61K31-4415, A61K31-4453, A61P13-12
【公开号】CN104523828
【申请号】CN201410754982
【发明人】黄文荣, 马静, 周菲娅, 武小赟
【申请人】百花医药集团股份有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月11日