[0039]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0040]如图1所示，本发明原理为以壳聚糖为骨架，阳离子材料和疏水长链烷烃为核心，靶向配体和穿内涵体小肽通过PEG、腙键共价修饰的仿生型siRNA胶束纳米载体。
[0041]实施例1
[0042]I)胶束亲水外壳的构建:
[0043]①壳聚糖骨架上修饰羧基:首先进行壳聚糖的氨基保护。将邻苯二甲酸酐(1380mg)溶于15ml DMF/H20 (DMF与H2O的体积比优选95:5)溶液中，搅拌10分钟后将壳聚糖(500mg)加入到上述溶液中(邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比3:1)，加热至120度反应10小时。然后将上述反应液透析三天，旋干得到氨基保护的壳聚糖。然后将氨基保护的壳聚糖(300mg)跟溴代乙酸乙酯反应。首先将氨基保护的壳聚糖溶于1ml DMF溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴加溴代乙酸乙酯(450mg)到上述反应液中(氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯的摩尔比为1:2.5)，常温反应过夜。然后将上述反应液透析三天，旋干备用O
[0044]②PEG-RGD复合物的制备:将CH0-PEG-C00H(300mg)溶于5ml DMF溶液后，与肿瘤革巴向肽RGD (113.22mg)反应(PEG与RGD的摩尔比为1: 1.2)，采用DCC/NHS体系进行催化，PEG与DCC、NHS的摩尔比优选1: 1.2:1.5，常温反应6小时。然后将上述溶液透析，旋干。得到的CHO-PEG-RGD复合物(170mg)进一步与水合肼反应形成腙键，首先将CHO-PEG-RGD复合物溶于5ml无水乙醇溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴入水合肼(33mg)，CHO-PEG-RGD复合物与水合肼的摩尔比为1:10，常温反应过夜后旋干水合肼，得到PEG-RGD复合物(含腙键)。
[0045]③修饰了羧基的壳聚糖骨架与PEG-RGD复合物(含腙键)反应:将修饰了羧基的壳聚糖(200mg)溶于5ml DMF溶液中，搅拌10分钟后，加入DCC、NHS，壳聚糖单元体与DCC、NHS的摩尔比优选1:1.2:1.5，室温条件下搅拌过夜，离心去除副产物D⑶，加入PEG-RGD复合物(含腙键)(314.5mg)到上述反应液中(壳聚糖单元体与PEG-R⑶复合物(含腙键)的摩尔比为5:1)，常温反应过夜后将产物透析，旋干。然后将产物中壳聚糖上的氨基脱保护:将216.4mg壳聚糖与PEG-RGD复合物的连接产物溶于1ml DMF溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴入水合肼Ilmg(反应产物与水合肼的摩尔比优选1:3)，常温反应过夜后透析，旋干处理。
[0046]④穿内涵体融合肽HA2的修饰:首先要将氨基保护的HA2溶于5ml DMF溶液中，搅拌10分钟后加入EDC、NHS, HA2与EDC、NHS的摩尔比优选1: 1.2:1.5。然后将上述壳聚糖与PEG-RGD的连接产物加入到上述溶液中(壳聚糖单元体与HA2的摩尔比为1:0.7)，常温反应数小时后透析，旋干。
[0047]2)胶束疏水核心的构建
[0048]①Boc-L-赖氨酸与辛醛的反应:将10mg Boc-L-赖氨酸溶于甲醇溶液中，然后缓慢滴加157.4mg辛醛到上述溶液中，Boc-L-赖氨酸与烷烃链的摩尔比为1:3。搅拌过夜后再加入一定量的46mg硼氢化钠，反应6小时后停止反应。往反应液中加入乙醚溶液搅拌均匀后用分液漏斗进行萃取分离，最后浓缩有机层，旋干。将Boc-L-赖氨酸与辛醛的反应产物溶于二氯甲烷/三氟乙酸的体系(体积比优选7:3)，室温搅拌过夜，脱去L-赖氨酸氨基上的Boc保护，旋干三氟乙酸后备用。
[0049]②赖氨酸-辛醛复合物与精氨酸反应:将200mg精氨酸采用EDC/NHS体系活化，带正电荷的氨基酸与EDC、NHS的摩尔比优选1:1.2:1.5，常温反应过夜。将132mg赖氨酸-辛醛复合物与上述活化的精氨酸溶液混合(赖氨酸-辛醛复合物与精氨酸的摩尔比为1: 1.5)，反应12小时。最后加入足量乙酸乙酯萃取，收集有机层，旋干备用。
[0050]3)亲水疏水修饰壳聚糖自组装成胶束
[0051]将壳聚糖胶束的亲水外壳跟疏水核心连:将核心用5ml DMF溶液溶解，然后使用EDC/NHS体系活化过夜，核心与EDC、NHS的摩尔比优选1: 1.2:1.5，将壳聚糖骨架得到的胶束亲水外壳加入到上述活化液中(疏水核心与壳聚糖单元体的摩尔比为1:1)，反应12小时，生成的产物透析后在水溶液中可自组装成胶束。
[0052]实施例2
[0053]I)胶束亲水外壳的构建:
[0054]①壳聚糖骨架上修饰羧基:首先进行壳聚糖的氨基保护。将邻苯二甲酸酐(1380mg)溶于15ml DMF/H20 (DMF与H2O的体积比优选95:5)溶液中，搅拌10分钟后将壳聚糖(500mg)加入到上述溶液中(邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比3:1)，加热至120度反应10小时。然后将上述反应液透析三天，旋干得到氨基保护的壳聚糖。然后将氨基保护的壳聚糖(300mg)跟溴代乙酸乙酯反应。首先将氨基保护的壳聚糖溶于1ml DMF溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴加溴代乙酸乙酯(450mg)到上述反应液中(氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯的摩尔比为1:2.5)，常温反应过夜。然后将上述反应液透析三天，旋干备用O
[0055]②PEG-DG复合物的制备:将CHO-PEG-COOH (300mg)溶于5ml DMF溶液后，与肿瘤靶向配体氨基葡萄糖DG(54mg)反应(PEG与DG的摩尔比为1:2)，采用DCC/NHS体系进行催化，PEG与DCC、NHS的摩尔比优选1: 1.2:1.5，常温反应6小时。然后将上述溶液透析，旋干。得到的CHO-PEG-DG复合物(142.6mg)进一步与水合肼反应形成腙键，首先将CHO-PEG-DG复合物溶于5ml无水乙醇溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴入水合肼(33mg)，CHO-PEG-DG复合物与水合肼的摩尔比为1:10，常温反应过夜，然后旋干其中的水合肼，得到PEG-DG复合物(含腺键)。
[0056]③修饰了羧基的壳聚糖骨架与PEG-DG复合物(含腙键)反应:将修饰了羧基的壳聚糖(200mg)溶于5ml DMF溶液中，搅拌10分钟后，加入DCC、NHS,壳聚糖单元体与DCC、NHS的摩尔比优选1: 1.2:1.5，室温条件下搅拌过夜，离心去除副产物ECU，加入PEG-DG复合物(含腙键)(261.9mg)到上述反应液中(壳聚糖单元体与PEG-DG复合物(含腙键)的摩尔比为5:1)，常温反应过夜后将产物透析，旋干。然后将产物中氨基保护的壳聚糖脱保护:将184.1mg产物溶于1ml DMF溶液中，搅拌数分钟后缓慢滴入水合肼IImg (反应产物与水合肼的摩尔比优选1:3)，常温反应过夜后透析，旋干处理。
[0057]④穿内涵体小肽L2的修饰:将氨基保护的L2溶于5ml DMF溶液中，搅拌10分钟后加入EDC、NHS，小肽与EDC、NHS的摩尔比优选1:1.2:1.5。然后将上述壳聚糖-PEG-DG反应产物加入到上述溶液中(壳聚糖单元体与L2的摩尔比为1:0.2?2，优选0.7)，常温反应数小时后透析，旋干。
[0058]2)胶束疏水核心的构建
[0059]①Boc-L-赖氨酸与癸醛的反应:将10mg Boc-L-赖氨酸溶于甲醇溶液中，然后缓慢滴加192.2mg癸醛到上述溶液