实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明 本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明 要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数，v/v表示溶液 的体积比。
[0034] 实施例1 :当归藤提取物的制备
[0035] 取IOkg当归藤粉碎，加入浓度为80%的乙醇水浴提取3次，每次的乙醇用量分别 为药材总重量的12倍、10倍、8倍，水浴温度为70°C，每次提取时间分别为60min、50min、 40min，合并提取液，浓缩，过滤，干燥，得当归藤提取物。
[0036] 以芦丁作对照品，测当归藤总黄酮得率为0. 35%。
[0037] 实施例2 :当归藤总黄酮的制备
[0038] 取IOkg当归藤粉碎，加入浓度为80%的乙醇，用780W微波提取2-3次，每次乙醇 用量为药材总重量的12倍，每次提取时间为15min，合并提取液，减压浓缩，加硅藻土过滤， 滤液过ADS17树脂吸附，用70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
[0039] 以芦丁作对照品，测当归藤总黄酮得率为0. 49%。
[0040] 实施例3 :当归藤总黄酮的制备
[0041] 取IOkg当归藤粉碎，加入浓度为60%的乙醇微波提取3次，每次乙醇用量分别为 药材总重量的15倍、10倍、8倍，每次提取时间分别为2〇11^11、151^11、1〇1^11，合并提取液，浓 缩，过滤，滤液过ADS17树脂吸附，用浓度为80 %的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当 归藤总黄酮。
[0042] 以芦丁作对照品，测当归藤总黄酮得率为0. 66%。
[0043] 实施例4 :当归藤总黄酮的制备
[0044] 取IOkg当归藤粉碎，加入浓度为50%的乙醇微波提取2次，每次乙醇用量为药材 总重量的8倍，每次提取时间为lOmin，合并提取液，浓缩，过滤，滤液过ADS17树脂吸附，用 浓度为50%的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
[0045] 以芦丁作对照品，测当归藤总黄酮得率为0. 45%。
[0046] 实施例5 :当归藤提取物的制备
[0047] 取IOkg当归藤粉碎，加入浓度为60%的乙醇水浴提取2次，每次的乙醇用量为药 材总重量的8倍，水浴温度为50°C，每次提取时间为40min，合并提取液，浓缩，过滤，干燥， 得当归藤提取物。
[0048] 以芦丁作对照品，测当归藤总黄酮得率为0. 32%。
[0049] 药效实验：抗大鼠肝纤维化
[0050] 1.实验材料
[0051] I. 1 动物
[0052] Wistar大鼠，雌性，SPF级，体重180~220g，60只，购自广西医科大学实验动物中 心。
[0053] 1.2 试剂
[0054] 四氯化碳（广州市海珠区化学试剂厂，RA);橄榄油（国药集团化学试剂有限公 司）；血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶检测试剂、白蛋白检测试剂（迈瑞医疗）；透明质酸检测 试剂、层粘连蛋白（LN)放免检测试剂（上海海军医学研宄所）。
[0055] 1.3 药品
[0056] 马洛替酯（亚宝欣，山西亚宝药业集团）、实施例1、实施例2、实施例3 (实施例1 一 3临用前用质量浓度为0. 2%羧甲基纤维素钠配制成浓度为15mg/ml)。
[0057] 2.实验方法
[0058] 2. 1造模、给药：将大鼠按体重随机分成5组，每组12只，分别为空白组、模型组、 实施例1组、实施例2组、实施例3组、马洛替酯片组（阳性药）。除空白组，其它组采用40% CCL4橄榄油溶液，2ml/kg体重腹腔注射，每周2次，持续8周。实施例组和阳性药组于第4 次造模后给药，实施例1 一 3组剂量为150mg/kg(以制备所得的干粉计），马洛替脂剂量为 60mg/kg，1次/天，空白组与模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为lml/lOOg体重，连续 给药6周。
[0059] 2. 2动物处理和指标检测：最后一次给药后，麻醉大鼠从腹主动脉采血，离心取血 清检测肝功能和纤维化指标；采血后取肝脏称重，计算肝脏系数，并取右叶肝组织用10% 的中性甲醛溶液固定，经HE染色观察肝纤维化程度。
[0060] 实验动物肝纤维化程度分级标准进行分级，共分为0~6级。0级：肝小叶结构完 整，无炎细胞浸润，无纤维化增生；1级：少量胶原纤维从汇管区或中央静脉区向外延伸；2 级：胶原纤维从汇管区或中央静脉周围向外延伸明显，但未包绕整个肝小叶；3级：胶原纤 维延伸明显，相互连接，包绕整个肝小叶；4级：胶原纤维包绕分割肝小叶，以致正常肝小叶 结构破坏，假小叶形成，但以大卵圆形假小叶形成为主；5级：肝小叶结构完全破坏，假小叶 形成，大卵圆形假小叶与小圆形假小叶各占50% ;6级：肝内布满圆形假小叶，假小叶间有 粗大增生的胶原纤维。
[0061] 3.统计学处理
[0062] 组织学检查中的肝纤维化病理分级按等级资料，各组间的差异比较采用秩和检 验；生化定量检测结果按计量资料以均数土标准差表示，各组间的差异分析采用t检验。 使用的统计软件为SPSS13. 0, P〈0. 05认为差异有显著性。
[0063] 4.实验结果
[0064] 4. 1动物一般情况
[0065] 大鼠 CC14注射后短期出现兴奋症状，表现为活动增加、奔跑等，而后为抑制症状， 表现为活动减少、团缩，全身被毛稀疏无光泽，从症状程度看，药物组均有减轻，且未见腹水 发生。各组动物肝重/体重比值见表1。
[0066] 表1.各组动物肝重/体重比值U±s, n=12)
[0067]
【主权项】
1. 当归藤在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。
2. 当归藤提取物在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。
3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述当归藤提取物通过以下步骤制备而 得：当归藤粉碎，加入浓度为60-80%乙醇50-70°C水浴提取2-3次，每次乙醇用量为药材总 重量8-12倍，每次提取时间为40-60min，合并提取液，浓缩，过滤，浓缩，干燥，得当归藤提 取物。
4. 当归藤总黄酮在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。
5. 根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述当归藤总黄酮通过以下步骤制备而 得：当归藤粉碎，加入浓度为50-80%乙醇微波提取2-3次，每次乙醇用量为药材总重量 8-15倍，每次提取时间为10-20min，合并提取液，浓缩，过滤，滤液过弱酸性阳离子交换树 脂吸附后，用浓度为60-80%乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
6. 根据权利要求4所述的用途，特征在于所述当归藤总黄酮通过以下步骤制备而得： 当归藤粉碎，加入浓度为60%乙醇，用780W微波提取2-3次，每次乙醇用量为药材总重量12 倍，每次提取时间为15min，合并提取液，减压浓缩，加硅藻土过滤，滤液过ADS17树脂吸附， 用70%乙醇洗脱，洗脱液浓缩、真空干燥，得当归藤总黄酮。
7. 当归藤提取物与医药学上可接受的载体配合成在制备治疗肝纤维化药物方面的新 用途。
8. 当归藤总黄酮与医药学上可接受的载体配合成在制备治疗肝纤维化药物方面的新 用途。
【专利摘要】本发明涉及当归藤的新用途，即当归藤在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途，特别是当归藤提取物及当归藤总黄酮在制备治疗肝纤维化药物方面的新用途。
【IPC分类】A61P1-16, A61K36-185
【公开号】CN104857040
【申请号】CN201510297286
【发明人】吴赛春, 徐文虹, 邱丹兰, 李柏霖
【申请人】广西梧州制药（集团）股份有限公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年6月3日