醇各治疗组小鼠脑内APP和PS-1蛋白表达水平显著降低（P< 0. 05或P < 0. 01);化拉西坦组也能显著降低模型小鼠脑内APP蛋白表达水平（P< 0. 05)，但不能显 著降低PS-1蛋白表达水平（P> 0. 05) ;VE组可W显著降低模型小鼠脑内PS-1蛋白表达水 平（P< 0. 05)，而对于APP蛋白表达水平无明显影响（P> 0. 05)。
[0120] 应用免疫组织化学染色方法观察各组小鼠皮层和海马CA1区APP表达的变化，在 光镜下可见APP免疫组化染色阳性标记物为栋褐色颗粒，主要分布于神经元胞浆。图像分 析系统分析结果显示，与正常组相比，模型组小鼠皮层和海马CA1区神经元APP阳性细胞数 明显增多，胞浆着色加深，光密度值增高（P< 0. 05或P< 0. 01)。与模型组相比，径基酪醇 各剂量组均能减少小鼠皮层和海马CA1区APP阳性细胞数（P< 0. 05或P< 0. 01)，但均 不能显著改善胞浆着色程度（高剂量除外），即光密度值（P> 0. 05) ;VE组和化拉西坦组 均能明显减少小鼠皮层APP阳性细胞数（P< 0. 05或P< 0. 01)，但不影响海马CA1区APP 阳性细胞数（P> 0. 05)。
[0121] 应用免疫组织化学染色方法观察各组小鼠顶叶皮层和海马CA1区PS-1表达的变 化，在光镜下可见PS-1阳性标记的神经元表现为核周围的胞质中呈现栋黄色颗粒。图像 分析结果显示，与正常组相比，模型组小鼠皮层和海马CA1区PS-1阳性细胞数量明显增加 (P< 0. 01)，细胞着色明显加深，光密度值增大（P< 0. 01)。与模型组相比，径基酪醇治疗 组各组小鼠皮层PS-1阳性细胞数目显著减少（P< 0.01)，但光密度值无显著性差异（P> 0. 05)，而在海马CA1区低剂量组和高剂量组均能明显减少PS-1阳性细胞数（P< 0. 05)，但 光密度值无显著性差异（P> 0. 05) ;VE组能够显著减少模型小鼠海马CA1区PS-1阳性细 胞数（P< 0. 05)，但皮层PS-1阳性细胞数无显著差异（P> 0. 05);化拉西坦组对模型小鼠 皮层和海马CA1区PS-1阳性细胞数无显著差异（P> 0. 05)。
[0122] 3小结及讨论：
[0123] 动物行为学实验发现，模型组小鼠较空白对照组小鼠学习记忆能力明显下降。给 药各组小鼠学习记忆能力均有不同程度的增强趋势。通过对各组动物血清中各项指标的检 巧。，结果模型组血清中乙酷胆碱醋酶（A化巧活性、一氧化氮合酶（NO巧活性、一氧化氮（NO) 和丙二醒（MDA)含量明显高于正常对照组，而总抗氧化能力（T-A0C)明显低于空白对照组； 通过对各组动物脑组织中各项指标的检测，结果模型组脑组织中一氧化氮合酶（NO巧活 性、一氧化氮（NO)和丙二醒（MDA)含量明显高于正常对照组，而胆碱乙酷基转移酶（ChAT) 活性、总抗氧化能力（T-A0C)和超氧化物歧化酶（T-S0D)活性明显低于空白对照组，该模型 与临床血清检测指标相似。
[0124] 给予径基酪醇后，各给药组均能不同程度的降低血清和脑组织中乙酷胆碱醋酶 (A化巧活性、一氧化氮合酶（NO巧活性、一氧化氮（NO)和丙二醒（MDA)含量，升高胆碱乙酷 基转移酶（ChAT)活性、超氧化物歧化酶灯-SOD)活性和总抗氧化能力灯-A0C)，其作用与阳 性药VE和化拉西坦相当。并不同程度降低小鼠脑组织中P淀粉样前提蛋白（AP巧、P分 泌酶度ACE1)、糖原合成酶激酶-3P(GSK3b)mRNA水平和蛋白水平的表达W及升高膜岛素 降解酶（IDE)mRNA水平的表达。
[0125] 径基酪醇对双侧颈总动脉反复夹闭再通造成的小鼠学习记忆障碍有一定的治疗 和保护作用。
[0126] 实施例3径基酪醇对小鼠局灶性脑缺血再灌注（MCA0)模型的影响：
[0127] 1实验方法：
[0128] 1.1造模及给药方法：
[0129]Wistar雄性大鼠，体重200g至220g;实验分5组，每组8只：（1)假手术（空白） 对照组；（2)模型对照组；（3)径基酪醇低剂量组（Img/kg);(4)径基酪醇中剂量组巧mg/ kg) ;(5)径基酪醇高剂量组（25mg/kg);参照ZeaLonga等的方法，模型对照组和各径基 酪醇低剂量组中的Wistar雄性大鼠用质量百分比为10 %的水合氯醒350mg/Kg腹腔注射 麻醉，体积百分比为75%的酒精颈前皮肤消毒，颈正中切口，分离暴露右侧颈总动脉（CCA) 与颈内（ICA)、颈外动脉巧CA)，夹闭CCA;结扎颈总动脉和颈外动脉，距颈总动脉分叉处约 7mm处结扎，导入头端圆纯浸蜡的鱼线插入颈内动脉，W颈动脉分叉处为标记，推进18mm至 20mm感阻力后结扎，阻断脑血流量，同时开放夹闭的CCA;缺血化后，固定Wistar雄性大 鼠，将鱼线抽拉出实现再灌注；假手术组大鼠线栓只插入10mm，不造成脑栓塞；造模前后维 持Wistar雄性大鼠体溫34°C，室溫28°C;各径基酪醇剂量组分别在再灌注后即时和再灌注 后2小时灌胃给药，假手术对照组和模型对照组在造模后相同再灌注时间点给予等剂量的 生理盐水。
[0130] 1. 2神经功能缺损评分：
[0131] 参照Bederson等确立的5级评分法，对造模后的假手术（空白）对照组、模型对 照组和各径基酪醇剂量组中的Wistar雄性大鼠的神经功能缺损进行评分：0级：未观察到 神经症状；1级：提尾悬空时，Wistar雄性大鼠的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲、肩内旋、肘 外展、紧贴胸壁；2级：将Wistar雄性大鼠置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动，阻力降 低；3级：Wistar雄性大鼠自由行走时向手术侧倾倒或转圈；4级：Wistar雄性大鼠软擁，肢 体无自发活动。
[0132] 1. 3脑梗死范围和脑含水量测定：
[0133] Wistar雄性大鼠进行神经功能缺损评分后，断头处死，迅速取出完整大脑，W预冷 的生理盐水洗去血迹，-20°C冻存化后，从前面起作冠状切片共5片（2mm)，置1 %TTC溶液 中溫度37°C水浴中染色lOmin，避光，计算机分析脑梗塞面积和水肿程度。
[0134] 1.AWesternblot检测：
[0135] 将取出的大脑提取总蛋白，定量后进行聚丙締酷胺凝胶电泳，转膜、封闭化，一抗 37°C解育2h，TBST缓冲液洗膜3次，二抗37°C解育比，TBST缓冲液洗膜3次，曝光、洗片， 扫描，软件分析光密度值。
[0136] 1.5统计学处理：
[0137] 实验结果数据均W均数+标准差表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比 较，样本均数间比较采用t检验，P< 0. 05表示差异有统计学意义。
[013引 2结果：
[0139] 2. 1径基酪醇对脑局灶性脑缺血再灌注Wistar雄性大鼠的神经功能缺陷评分、脑 梗死范围和脑水肿的平均影响：
[0140] 径基酪醇对脑局灶性脑缺血再灌注Wistar雄性大鼠的神经功能缺陷评分、脑梗 死范围和脑水肿的影响结果可W看出，与假手术对照组相比，模型组Wistar雄性大鼠神经 功能缺陷明显严重（P< 0.05或P< 0.01)，脑梗死范围（P< 0.05或P< 0.01)和脑水 肿程度均明显增大（P< 0. 05或P< 0. 01);与模型组相比较，各径基酪醇给药组均能减轻 Wistar雄性大鼠的神经功能缺陷（P< 0. 05或P< 0. 01)，W及减少脑梗死范围（P< 0. 05 或P< 0. 01)和减轻脑水肿程度（P< 0. 05或P< 0. 01)。
[014U 2. 2径基酪醇对调亡相关基因bcl-2、caspase-3表达的平均影响：
[0142] 缺血再灌注2地后模型组脑组织bcl-2表达量显著降低，而caspase-3表达量显 著升高；各径基酪醇剂量组能够显著升高bcl-2表达量W及降低caspase-3表达量；结果 显示径基酪醇能够通过抑制细胞调亡，保护缺血再灌注损伤，控制损伤进一步恶化。
[0143] 3 结论：
[0144] 径基酪醇能够减轻神经功能缺陷，减少脑梗死范围和减轻脑水肿程度；从而抑制 细胞调亡，最终保护局灶性脑缺血再灌注造成的损伤。
【主权项】
1. 一种羟基酪醇在制备抗血管性痴呆的药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的羟基酪醇在制备抗血管性痴呆药物中的应用，其特征在于羟 基酪醇以干品重量计质量百分含量为50%-99. 9%。
【专利摘要】本发明涉及一种羟基酪醇在制备抗血管性痴呆的药物中的应用，本发明经体内外实验验证，羟基酪醇能够减轻神经功能缺陷，减少脑梗死范围和减轻脑水肿程度，有效抑制血管性痴呆大鼠神经组织形态学改变，提高血管性痴呆大鼠的认知、学习和记忆能力，减轻痴呆症状。
【IPC分类】A61K31/05, A61P25/28
【公开号】CN105213356
【申请号】CN201510671740
【发明人】闫明, 霍仕霞, 李建梅, 高莉, 彭晓明
【申请人】新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所, 闫明
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月15日