专利名称：草果油在制备治疗阴道炎的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及草果油的新用途，属医药卫生领域。
背景技术：
阴道炎是阴道粘膜及粘膜下结缔组织的炎症，是妇科门诊的常见疾病。正常健康妇女，由于解剖学及生物化学特点，阴道对病原体的侵入有自然防御功能，当阴道的自然防御功能遭到破坏，则病原体易于侵入，导致阴道炎症。目前，对阴道炎的治疗以抗感染、抗炎为主，同时辅以物理治疗，常用的治疗方法有药用阴道冲洗、局部放药、口服用药等。常见的阴道炎有细菌性阴道炎、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎、老年性阴道炎。
细菌性阴道炎，是阴道内正常菌群失调所致的一种混合感染，是阴道内有大量的细菌、伴有阴道分泌物性质改变的一组症候群，主要症状为阴道分泌物增多，呈稀薄均质状或稀糊状，为灰白色或灰黄色，有鱼腥臭味，性交后加重，可伴有轻度外阴瘙痒或烧灼感，有的人可发生下腹部疼痛、性交困难或尿痛。治疗细菌性阴道炎的常见药物为四环素等抗生素和磺甲硝咪唑等广谱抗细菌化药。念珠菌性阴道炎，是由念珠菌感染引起的阴道炎，主要致病菌为白色念珠菌，表现为白带增多，外阴、阴道瘙痒、灼烧感，小便疼痛，外阴周围常发红、水肿，表皮变化多种多样；可发生很浅的水疱丘疹，成群出现；亦可形成湿疹状糜烂，局限于外阴或向周围扩展至会阴、肛门周围及股生殖皱襞，直至大腿内侧、外表，完全类似急性或亚急性湿疹；阴唇及阴蒂附近黏膜增厚，互相接触的皮肤表面潮红糜烂；个别可引起微小的白色脓疱，严重时发生溃疡、外阴疼痛及局部淋巴结肿大。治疗念珠菌性阴道炎的常见药物为制霉菌素等抗生素和氟康唑、伊曲康唑等广谱抗真菌化药。滴虫阴道炎(trichomonas vaginitis)是常见的阴道炎，由阴道毛滴虫所引起。临床上以白带增多、质稀有泡沫、秽臭，阴道瘙痒为主要表现。检查时可见阴道粘膜充血，严重者有散在的出血斑点，后穹窿有多量白带，呈灰黄色、黄白色稀薄液体或为黄绿色脓性分泌物，常呈泡沫状。常见治疗药物为甲硝唑等灭虫化药。老年性阴道炎常见于绝经后的老年妇女，因卵巢功能衰退，雌激素水平降低，阴道壁萎缩，粘膜变薄，上皮细胞内糖原含量减少，阴道内PH值上升，局部抵抗力降低，致病菌容易入侵繁殖并且引起炎症。主要症状为阴道分泌物增多及外阴瘙痒、灼热感。检查见阴道呈老年性改变，上皮萎缩，皱襞消失，上皮变平滑、菲薄。阴道粘膜充血，有小出血点，有时见浅表溃疡，若溃疡面与对侧粘连，阴道检查时粘连可被分开而引起出血，粘连严重时可造成阴道狭窄甚至闭锁，炎症分泌物引流不畅可形成阴道积脓甚或宫腔积脓。补充少量雌激素是老年性阴道炎的治疗原则，可使阴道黏膜增厚，增强抵抗力。目前，常用治疗阴道炎的药物大多为抗生素和广谱抗菌药物，副作用大，且广泛使用会产生耐药。中药来源广泛，毒性小，药效长，因此，从中草药中寻求治疗阴道炎的新药非
常必要。草果为姜科豆蘧属植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果实，主产于云南、广西、贵州等地。中医认为，其性温，味辛，归脾、胃经，有燥湿，温中的功效，用于寒湿阻中证，适用于胸腹满闷，不思饮食，或胸闷脘痛，气逆作呕，噎膈反胃及痰饮积聚等。草果含有挥发油和黄酮类物质，其挥发油为黄色油状透明物质，具有特殊的刺激性气味。草果油在食品、医药工业中被广泛应用，其具有抗氧化、抗诱变、镇定、抗乙肝病毒以及抗霉菌等作用(冯雪等，调味香料草果挥发油的研究进展，中国调味品，2009年8期。)此夕卜，草果油还具有抗炎、驱虫、镇咳、治疗肠胃病等功效，如专利申请号200410022726. 1，发明名称一种含草果挥发油的制剂、制备方法及用途的专利申请，公开了姜科植物草果Amomumtaso-kocrevost etIemaire的果仁、果实、莖、叶、根提取挥发油制得的中药制剂可用于治疗肠胃病的药剂；专利申请号200410008132. 5，发明名称草果精粉及其制备方法的专利申请，公开了草果挥发油制备的草果精粉可用作食品增香调味料和抗炎、驱虫、镇咳、化痰、散寒等的药物。
发明内容
本发明的发明目的在于提供草果油的新用途，即草果油在制备治疗阴道炎的药物中的新用途，还提供了以草果油为活性成分的治疗阴道炎的药物组合物。
本发明提供了草果油在制备治疗阴道炎的药物中的用途。其中，所述药物是治疗念珠菌性阴道炎或者滴虫性阴道炎的药物。优选地，所述药物是治疗白色念珠菌引起的念珠菌性阴道炎。其中，所述的草果油来源于姜科豆蘧属植物草果Amomum tsa-ko Crevost etLemaire的成熟果实提取的挥发油。其中，所述的草果油是通过如下方法制备得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸馏水，浸泡I飞小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2飞小时，即得草果油。本发明还提供了一种治疗阴道炎的药物组合物，它是以草果油为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。其中，所述的草果油是通过如下方法制备得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸馏水，浸泡I飞小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2飞小时，即得草果油。其中，所述的药剂是外用制剂、口服制剂或注射制剂。优选地，所述外用制剂为洗剂、栓剂、涂膜剂或搽剂。其中，所述的制剂中含有草果油的含量为0. 1% 100% w/w。本发明草果油具有治疗阴道炎的作用，尤其是对念珠菌性阴道炎和滴虫性阴道炎具有确切的疗效，具有良好的临床应用前景。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
图I本发明药物对阴道毛滴虫超微结构的影响。图A为未经任何药物作用的阴道毛滴虫的正常超微结构，其中I为细胞核，2为粗面内质网，3为过氢化酶体，4为鞭毛横断面；图B至图H为药物作用后阴道毛滴虫的超微结构变化，a :空泡，b :自噬泡，c :核周隙增宽，d :粗面内质网扩张，e :染色质积聚，f :核糖体消失，g :核膜消失，细胞核逐渐崩解，h :核固缩，i :细胞器崩解，j :胞膜损坏，胞浆漏出，虫体死亡。
具体实施例方式实施例I本发明草果油的制备取草果，粉碎过20-40目筛，加入10-14倍重量的蒸馏水，浸泡1-5小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时，即得本发明草果油。本发明草果油也可按照药典(2005年版)附录XD挥发油测定法提取，还可采用有机溶剂提取、超临界CO2萃取等现有技术进行提取，或者通过购买市售产品的方式获得。以下通过药效试验证明本发明的有益效果 实验例I本发明草果油治疗念珠菌性阴道炎的活性I材料及仪器I. I实验菌株①标准株白色念珠菌标准株(ATCC14053)，来自美国临床实验室菌种保藏中心；白色念珠菌标准株(CICC32819)和白色念珠菌标准株(CICC31284)，购自中国工业微生物
菌种保藏管理中心。②临床分离株14株，于2011年9月至12月期间分离于四川省妇幼保健院妇科门诊患者的阴道分泌物，并经BIO-KONT公司的KC-16鉴定板条与药敏纸片鉴定为白色念珠菌。I. 2 药物试验药物本发明药物草果油。阳性药物克霉唑阴道片(济南利民制药有限公司，批号1108148)，洁尔阴洗液(四川恩威制药有限公司，批号:1107102)。I. 3实验动物小鼠(SPF级)[成都中医药大学实验动物研究中心，生产许可证号SCXK (川)2008-11，使用合格证号=SCXK (川)2008-049]。I. 4培养基、试剂及耗材沙氏琼脂培养基(每升含氯霉素O. lg，广东环凯微生物科技有限公司)。苯甲酸雌二醇注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批号1007061)，一次性无菌培养皿(江苏康健生物有限公司)等。I. 5主要仪器多点接种仪(日本佐久间制作所，SAKUMA MIT-P型)，实验室用高压灭菌器(SANYO，MLS-3780型)，C02INCUBAT0R (SANY0，M0C_15A)，节能净化工作台(成都新光非兰特净化工程有限公司)。2实验方法2. I本发明药物治疗念珠菌性阴道炎的体内活性( I)念珠菌性阴道炎模型的建立
受试菌活化将白色念珠菌标准株CICC32819接种于沙氏琼脂培养基，37 °C培养48h，活化后备用。模型制备通过预实验对影响模型建立的各项因素进行优化，确定念珠菌性阴道炎小鼠模型的建立方法。在正式实验中，选取SPF昆明小鼠70只，体重(20±2) g，其中60只在感染前6天开始，每只小鼠隔日背部皮下注射lmg/ml苯甲酸雌二醇油剂O. 1ml，并于最后I次注射后接种白色念珠菌I. 5 X IO7CFU/只，24h后重复感染I次。并于最后I次感染后48h和72h分别取阴道分泌物进行涂片镜检，观察菌丝及芽生孢子生成情况，同时接种于沙氏琼脂平板上，观察菌株的生长情况；并观察阴道分泌物等变化。在最后I次感染48h后用接种环取小鼠阴道分泌物接种于沙氏琼脂平板上培养24tT48h，观察平板上白色念珠菌的菌落生长情况，显微镜观察菌丝生长情况。若小鼠阴道出现明显分泌物，且阴道分泌物在沙氏琼脂平板中生长有典型的白色念珠菌，显微镜下观察到菌丝及芽生孢子，说明念珠菌性阴道炎模型小鼠制备成功。
(2)实验分组待小鼠造模成功后，每只小鼠用O. Iml无菌生理盐水进行阴道冲洗，将冲洗液进行菌落计数，根据小鼠阴道菌落计数结果将小鼠随机分为6组，包括本发明药物高、中、低三个剂量组，阳性药物克霉唑组和洁尔阴组，模型组，每组10只。另以10只未感染白色念珠菌的小鼠作为空白对照。其中各组小鼠阴道感染白色念珠菌的情况分析见表I。表I :各组小鼠阴道感染白色念珠菌的情况分析
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圍落数(X^'
O. 00±0. 00 36.00 土 .8δΑ 36. 00 土 7.仍1 35. 00 ±28. 06A 10.00 土 28,5 )Α K). 0(丨 I 16. 37, 12 土 24.32A
I O3CFUZiiil)注A表示与空白组比较有极显著统计学意义(P < 0.01)。(3)念珠菌性阴道炎模型小鼠的治疗采用药物阴道内给药法对念珠菌性阴道炎模型小鼠进行治疗，即每天分别采用高、中、低三个剂量的本发明草果油对造模成功的小鼠进行治疗，每天I次，连续20d。阳性药分别用克霉唑和洁尔阴，模型组用生理盐水。分别在给药前(0d)，以及第3d、5d和7d给药6h后用O. Iml无菌生理盐水冲洗阴道，对冲洗液内的白色念珠菌进行菌落计数，统计分析给药前(0d)、给药3d、给药5d和给药7d小鼠阴道内菌落数的变化情况，观察药物对感染小鼠阴道内白色念珠菌的杀灭或抑制作用。在给药第7d后每天接种观察阴道分泌物的菌丝及芽生孢子生长情况以及在沙氏琼脂平板中的生长情况，并每天观察小鼠阴道分泌物等的变化情况。分别统计给药14d和给药20d的治愈时间和治愈率。以连续3d阴道内容物在沙氏琼脂平板上未见白色念珠菌生长，且阴道无分泌物，无明显充血、肿胀等临床症状判定为治愈，治愈小鼠不再用药。采用SPSS 17. O软件中的单因素方差分析法比较分析各组之间的差异显著性，用配对T检验分析本发明草果油各剂量组在给药前后及不同给药时间的差异显著性。2. 2本发明药物抗白色念珠菌的体外活性含药平板的制备采用倍比稀释法对本发明药草果油进行稀释，分别稀释成I :2^1 :1024共11个梯度，在一次性无菌培养皿中分别加入不同浓度梯度的药液Iml和14ml灭菌的沙氏琼脂培养基，即各药物在平板中的稀释梯度分别为30. 70mg/mf59. 95yg/ml,充分混匀，烘干后备用，以平板内加入等量生理盐水代替药物制备阳性对照平板。菌液配置将白色念珠菌标准株和临床分离株用无菌生理盐水调至菌液浓度
I.5X106CFU/ml。最低抑菌浓度(MIC)的测定采用多点接种仪将实验菌株的菌液加入不同浓度梯度的含药平板和阳性对照平板，并以生理盐水代替菌液作阴性对照。37°C恒温培养24tT48h，观察各菌株在含不同浓度梯度药物平板中的生长情况。结果判定以平板内无白色念珠菌生长的药物最小浓度为此药对该菌株的最低抑菌浓度。3、实验结果3. I本发明药物体内活性其中菌落计数分析结果见表2，治愈时间和治愈率分析见表3。表2 :本发明草果油对阴道炎模型小鼠阴道内白色念珠菌生长的影响
权利要求
1.草果油在制备治疗阴道炎的药物中的用途。
2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于所述药物是治疗念珠菌性阴道炎或者滴虫性阴道炎的药物。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述药物是治疗白色念珠菌引起的念珠菌性阴道炎。
4.根据权利要求f3任意一项所述的用途，其特征在于所述的草果油来源于姜科豆蘧属植物草果Amomum tsa-ko Crevost et Lemaire的成熟果实提取的挥发油。
5.根据权利要求f3任意一项所述的用途，其特征在于所述的草果油是通过如下方法制备得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸馏水，浸泡1飞小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2飞小时，即得草果油。
6.一种治疗阴道炎的药物组合物，其特征在于它是以草果油为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述的草果油是通过如下方法制备得到的取草果，粉碎成粗粉，加入1(T14倍重量的蒸馏水，浸泡1飞小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2飞小时，即得草果油。
8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是外用制剂、口服制剂或注射制剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于所述外用制剂为洗剂、栓剂、涂膜剂或搽剂。
10.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述制剂中草果油的含量为.0. I 100% w/w。
全文摘要
本发明公开了草果油在制备治疗阴道炎的药物中的用途。本发明还公开了一种治疗阴道炎的药物组合物，它是以草果油为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明草果油具有治疗阴道炎的作用，有较强的实际应用价值。
文档编号C11B9/02GK102716408SQ20121021559
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月27日 优先权日2012年6月27日
发明者代敏, 彭成, 曹小玉 申请人:成都中医药大学, 成都医学院