071] 本实施例中枯草芽胞杆菌R31生物菌肥所采用配方为，以重量百分比计，枯草芽胞 杆菌R31菌液为60 %、市售海藻酸5 %、市售氨基酸10 %、市售磷酸氢二钾7 %、市售硫酸锰 为2.5%、市售D-425为0.5%，余量为水。
[0072] 枯草芽胞杆菌生物菌肥的制备:将海藻酸、氨基酸、磷酸氢二钾、硫酸锰、D-425依 次加入实施例1所得菌液中，充分搅拌，得枯草芽胞杆菌生物菌肥。其中采用CK培养基的菌 肥编号为"菌肥CK"，采用3号发酵培养基的菌肥编号为"菌肥3#"，将两个样品于室温下静 置，定期测定产品总活芽胞数，所得数据见下表2。
[0073] 表2不同贮藏时间枯草R31菌肥的芽胞存活率
[0075] 试验结果显示:产品中总活芽胞数在3个月之内未有明显下降，6个月内未大幅下 降，保存至12个月时，依旧符合国家标准(见表2)。但在加入了决明子的发酵培养基制备的 菌肥(菌肥3#)中，其芽胞的稳定性明显更高。从表2中可以看出，培养基中加入决明子，菌肥 中芽胞的存活率明显提高。
[0076] 实施例3:添加硫酸锰与否对菌肥的增效试验对比
[0077]选择重茬严重，病害发生重的地块进行药效试验。供试作物为辣椒，防治对象为青 枯病，试验地点在湛江市徐闻县，供试地块种植面积约2亩左右，由于连续种植，病害严重， 死苗现象很难控制。
[0078]参试药剂A为对比试验2中"菌肥3#"配方，参试药剂B为在"菌肥3#"配方中将硫酸 锰用水代替而得。菌肥采用稀释500倍，灌根处理。试验结果如下表3:
[0079]表3枯草R31菌剂中硫酸锰对辣椒青枯病的防病效果
[0081] 从表3的结果可以看出，含有硫酸锰的菌肥A防病效果明显好于不含硫酸锰的菌肥 B。说明硫酸锰与枯草R31菌肥混合使用，具有增效作用。在本发明的菌肥中加入硫酸锰，对 菌肥药效的提高有明显作用。
[0082] 实施例4:本发明最优菌肥对作物的防病促长试验 [0083]本发明优选菌肥配方工艺如下：
[0084] (1)发酵培养基的配制
[0085]发酵培养基，按重量配比计算:决明子30g、豆柏10g、玉米粉20g、氯化钠2g、硫酸镁 2g、碳酸钙3g、磷酸二氢钾2g，聚硅氧烷消泡剂SXP-1010.3g，余量为水，总体积为lL，pH为 7.2。
[0086] (2)枯草芽胞杆菌R31菌种液制备
[0087]将4°C条件下保存的R31菌株置于35°C条件下活化培养2小时，将其划线接种于琼 脂牛肉膏培养基上，35°C条件下培养24小时。待菌株充分生长后，挑取菌落，接种到LB培养 基中，于35°C、180rpm条件下培养12小时，备用。
[0088] (3)枯草芽胞杆菌R31菌液的制备
[0089] 30L发酵罐空消后，在发酵罐内装入20L发酵培养基，灭菌30分钟，降温后接种1 % (V/V)上述菌种液，于35°C、180rpm下培养，发酵22小时后开始检测，发酵液中芽胞形成率达 95 %以上，发酵完成，得枯草芽胞杆菌R31菌液。
[0090] (4)枯草芽胞杆菌R31生物菌肥的制备
[0091]菌肥3#:按重量百分比，含上述枯草芽胞杆菌R31菌液为60 %、市售海藻酸5 %、市 售氨基酸10 %、市售磷酸氢二钾7 %、市售硫酸锰为2.5 %、市售D-425为0.5 %，余量为水，搅 拌均匀，检测合格，包装，得到本发明产品枯草芽胞杆菌R31生物菌肥，编号"菌肥3#"。
[0092]同时将采用实施例1中CK培养基所得菌液、其它成分与"菌肥3#"完全一样的样品， 编号为"菌肥CK"。
[0093]将该"菌肥3#"及"菌肥CK"分别在叶菜、辣椒、前果等作物上进行了大田试验，均取 得了很好抗病、促长的效果。具体试验结果见下表，其中表4至表5为其对不同植物的促长效 果，表6至表7为不同作物的防病效果。
[0094]表4枯草菌肥对菜心的促长作用田间效果
[0097] 从表4中结果可以看出，使用本发明所述生物菌肥14天后，菜心的长势优于对照处 理的长势，施用一个月后增产效果明显。
[0098] 表5枯草菌肥对辣椒的促长作用田间效果
[0099]
[0100] 从表5中结果可以看出，使用本发明所述生物菌肥20d后，辣椒的长势比对照处理 组好;施用一个月后亩产量增加达20.3%。
[0101] 表6枯草菌肥对叶菜软腐病田间防治效果
[0104] 从表6的结果可以看出，应用本发明所述生物菌肥14天后，菜心和芥菜的软腐病的 发病率，与空白对照相比均明显降低，而"菌肥3#"的效果又明显优于"菌肥CK"。
[0105] 表7枯草R31菌肥对番茄青枯病田间防治效果
[0106]
[0107] 从表7的结果可以看出，应用本发明所述生物菌肥14天后，番茄青枯病的发病率与 空白对照相比，均显著降低;而"菌肥3#"的效果又明显优于"菌肥CK"。
[0108] 综合表4至表7中的结果可知，本发明所述实施列4菌肥3#对不同作物均具有促长 作用，还可以降低植株的发病率，提高农产品的产量，在防止病害和提高产量上均具有很好 的应用空间。菌肥3#的效果不仅明显优于空白对照，也优于菌肥CK。说明本发明所采用的发 酵工艺比传统发酵培养基，在提高菌肥抗病性方面有明显提高。
[0109] 实施例5:对不同枯草芽胞杆菌菌株进行发酵，试验结果见表8。
[0110] (1)发酵培养基的配制
[0111] 发酵培养基，按重量配比计算:决明子30g、豆柏10g、玉米粉20g、氯化钠2g、硫酸镁 2g、碳酸Ii3g、磷酸二氢钾2g，聚硅氧烷消泡剂SXP-101 0.3克，余量为水，总体积为lL，pH为 7.2。
[0112] (2)枯草芽胞杆菌菌种液制备
[0113] 将4°C条件下保存的菌株置于32~37°C条件下活化培养2小时，将其划线接种于琼 脂牛肉霄培养基上，32~37°C条件下培养20~28小时。待菌株充分生长后，挑取菌落，接种 到LB培养基中，于32~37°C、180rpm条件下培养10~18小时，备用。
[0114] (3)枯草芽胞杆菌菌液的制备
[0115] 30L发酵罐空消后，在发酵罐内装入20L发酵培养基，灭菌30分钟，降温后接种 0.5 %~2 % (V/V)上述菌种液，于32~37°C、180rpm下培养，发酵22小时后开始检测，发酵液 中芽胞形成率达95 %以上，发酵完成，得枯草芽胞杆菌菌液。
[0116] 表8采用决明子发酵不同菌株产孢量比较
[0117]
[0118] 从表8可以看出多种枯草芽胞杆菌菌株，采用决明子作为营养物质均能正常发酵。 此外，发酵液的粘度也普遍比采用传统发酵配方提高了 3倍以上。
[0119] 实施例6:将菌株B2按照实施例4的工艺制备菌肥H，将菌株BS-916按照实施例4的 工艺制备菌肥M，同时采用实施例2的方法制备的相应的菌肥H-CK和菌肥M-CK。用于大田试 验，结果见表9和表10。
[0120]表9H菌肥对黄瓜枯萎病田间防治效果 [0121]
[0122] 从表9的结果可以看出，使用本发明所述生物菌肥40天后，黄瓜枯萎病的发病率与 空白对照相比，有显著差异(P〈〇.〇l)。且明显好于菌肥H-CK。
[0123] 表10枯草Μ菌肥对草莓根腐病田间防治效果
[0126] 从表10的结果可以看出，应用本发明所述液态