一种枯草芽胞杆菌生物菌肥及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物菌肥及其制备方法，特别涉及一种枯草芽胞杆菌生物菌肥及 其制备方法，属于复合微生物菌肥领域。
【背景技术】
[0002] 由于长期以来化学农药和化肥的不合理应用，导致我国的农业生态环境受到污染 和破坏，水土流失，农用土地质量下降，病、虫产生抗性等问题越发严重，农产品的农药高残 留问题也成为影响食品安全的重要因素。在绿色农业已成为世界农业发展方向的今天，对 环境友好的生物源制剂越来越受到人们的关注和青睐，农业的可持续发展和有机农业兴 起，让微生物肥料和微生物农药的市场需求空前加大。
[0003] 微生物肥料是以有益微生物为主，配以有机、无机成分而制成的一种新型绿色肥 料。其利用有益微生物自身生命活动释放的生理活性物质，改善植物根系的微生物环境，调 节植物的生长发育，促进植物对营养元素的吸收，拮抗某些致病微生物，减轻作物病害，从 而有益于作物生长和产量增加。
[0004] 枯草芽胞杆菌是芽胞杆菌属的一种革兰氏阳性菌。广泛分布在土壤及腐败的有机 物中，易在枯草浸汁中繁殖，故得名。其对多种植物病原菌具有较好的防治作用，如：稻瘟 病、稻曲病、白粉病、灰霉病、枯萎病等。枯草芽胞杆菌能够在寄主植物上定殖，可以通过非 核糖体途径产生抗菌物，吸附在病原菌的菌丝上并随着菌丝的生长而生长，产生溶菌物质； 还可以促进作物生长从而使作物抗病能力提高。
[0005] 2012年2月1日授权公告的中国发明专利200910214430.2公开了一株广谱抗真菌 植物内生枯草芽胞杆菌及其应用，提到了枯草芽胞杆菌R31(Bacillus subtilis R31)菌株 (CCTCC Ν0:Μ 209261)的制备和应用，其应用如下:枯草芽胞杆菌能够对多种植物病原菌具 有较好的平板拮抗活性，尤其对各种尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、交链孢霉等土传维管束病害 具有很好的拮抗能力，并在温室和田间表现出良好的防治效果;在珠海斗门小赤坎进行灌 根防治巴西蕉枯萎病、皇帝蕉枯萎病和农科1号抗性香蕉枯萎病的大田试验，结果显示，其 对巴西蕉枯萎病2年综合防效达到91.71 %，对农科1号抗性蕉的防效达到82.71 %，对皇帝 蕉的防效达到85.07 %。
[0006] 上述应用在生物防治方面没有问题，但如果将其用于抗病菌株制备液态菌肥时， 有两个关键技术难题:一方面，菌株发酵液实际上是一个悬浮体系，孢子悬浮在水中，在长 期贮藏时孢子的聚集沉淀，会形成分层、成团或结块现象，影响使用，因此需要找到一个合 适的分散剂或增稠剂来解决这个问题。目前采用的方法主要是加入黄原胶来增稠，但黄原 胶本身在长期贮藏过程中会被微生物生长利用而变质、发臭，既不利于制剂的稳定性，也不 利于菌肥中的有效菌株的稳定性。另一方面，保证菌肥在一定的存储时间内药效的稳定性 也是一难题。菌肥里的微生物是一个活体，随着贮藏时间的延长，菌肥中芽胞的存活率会逐 渐下降，大量试验也证明了这一点，这是由于杂菌、温度条件变化等因素的影响而造成的。
[0007] 因此，提供一种同时达到增稠、杀菌、提高菌肥稳定性的枯草芽胞杆菌生物菌肥及 其制备方法就成为该技术领域急需解决的技术难题。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的之一在于提供一种同时达到增稠、杀菌、提高菌肥稳定性的枯草芽 胞杆菌生物菌肥。
[0009] 本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的：
[0010] -种枯草芽胞杆菌生物菌肥，其特征在于，组分以重量百分比计，包含:枯草芽胞 杆菌菌液10 %~95 %，余量为水；
[0011] 所述枯草芽胞杆菌菌液通过发酵得到，其发酵配方如下:组分以重量百分比计，决 明子粉5 %~45 %、玉米粉20 %~30 %、氯化钠1 %~3 %、硫酸镁1 %~3 %、碳酸钙2 %~ 4 %、磷酸二氢钾0.5 %~3 %，聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水。
[0012] 优选地，决明子粉的含量为5%~30%，更优选为15%~30%。
[0013]优选地，所述枯草芽胞杆菌生物菌肥还包括营养复合体5 %~30%，增效剂1 %~ 5%，助剂0.5%~1%，所述营养复合体为海藻酸、腐植酸、氨基酸、磷酸氢二钾、磷酸二氢 钾、尿素中一种或几种任意比例的混合;所述增效剂为硫酸锰;所述助剂为缩聚萘磺酸盐分 散剂D-425或其它常用分散剂。
[0014]优选地，所述枯草芽胞杆菌菌液的发酵配方中还含有豆柏5%~30重量％，更优选 10~15重量％。
[0015] 优选地，所述枯草芽胞杆菌生物菌肥的配方为:枯草芽胞杆菌菌液为60重量％、营 养复合体22重量％、硫酸锰为2.5重量％、D-425为0.5重量％，余量为水。
[0016] 优选地，所述22重量％的营养复合体包括：占枯草芽胞杆菌菌液5重量％的海藻 酸、占枯草芽胞杆菌菌液10重量％的氨基酸、占枯草芽胞杆菌菌液7重量％的磷酸氢二钾。 [0017]优选地，所述枯草芽胞杆菌为枯草芽胞杆菌R31、枯草芽胞杆菌B-001、枯草芽胞杆 菌S9、枯草芽胞杆菌B2、枯草芽胞杆菌Bs-916、枯草芽胞杆菌B-332、枯草芽胞杆菌BS-2等。 [0018]本发明的另一发明目的是提供一种上述枯草芽胞杆菌生物菌肥的制备方法。
[0019] 本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的：
[0020] -种枯草芽胞杆菌生物菌肥的制备方法，其步骤如下：
[0021] (1)枯草芽胞杆菌菌液的制备
[0022] 1)发酵液制备:发酵罐培养基采用的发酵配方为：决明子粉5~45重量份％、玉米 粉20~30重量份％、氯化钠1~3重量份％、硫酸镁1~3重量份％、碳酸钙2~4重量份％、磷 酸二氢钾0.5~3重量份％，聚硅氧烷消泡剂SXP-101适量，余量为水；
[0023] 2)接种用菌株种子液制备:将斜面保存的枯草芽胞杆菌菌株活化培养，并将其划 线接种于牛肉膏蛋白胨培养基上培养;待菌株充分生长后，挑取单菌落，接种到LB培养基中 培养，得到枯草芽胞杆菌的种子液，备用；
[0024] 3)菌液的制备:将步骤2)培养好的枯草芽胞杆菌的种子液以0.5 %~2 % (V/V)的 接种量接种到步骤1)所得发酵罐中的发酵液进行发酵;发酵后开始检测，当芽胞形成率达 95 %以上时，停止发酵，得菌液；
[0025] (2)枯草芽胞杆菌生物菌肥的制备:将步骤（1)所得菌液加入水，得枯草芽胞杆菌 生物菌肥。
[0026] 优选地，所述步骤（1)中之步骤1)中所述发酵罐培养基采用的发酵配方中还含有 豆柏5~30重量份％，更优选10~15重量份％;决明子粉的含量为5%~30%，更优选为15% ~30%〇
[0027] 优选地，所述步骤（1)中之步骤2)中所述斜面保存的温度为4°C，所述活化培养的 温度为32~37°C，活化培养的时间为1~2小时;在牛肉膏蛋白胨培养上培养的温度为32~ 37°C，活化培养的时间为20~28小时；在LB培养基上培养的温度为32~37°C，转速为 180rpm，时间为10~18小时。
[0028] 优选地，所述步骤(2)如下：将步骤（1)所得菌液中按比例将营养复合体、增效剂、 助剂及水，充分搅拌，得枯草芽胞杆菌生物菌肥；
[0029] 所述营养复合体为海藻酸、腐植酸、氨基酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尿素中一种 或几种任意比例的混合，所述增效剂为硫酸锰，所述助剂为缩聚萘磺酸盐分散剂D-425或其 它常用分散剂。
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