专利名称：一种抗肿瘤活性化合物氮烯菲林及其制法的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种抗肿瘤活性化合物氮烯菲林及其制法与医药用途。
背景技术：
1962年在美国发明了氮烯脒胺DTIC这一新结构类型的细胞毒类抗癌药，并在恶性黑色素瘤的治疗上获得成功。但由于其化学性质不稳定，故使用受到很大限制。
发明内容
本发明提供一类新型化学性质稳定、抗肿瘤活性高、毒性较低的抗肿瘤活性化合物氮烯菲林，其结构式如下 本发明三氮烯类化合物的合成方法以茶碱为原料，经过硝化、还原、重氮化、偶合，再经乙基化反应得到氮烯菲林。合成反应的路线如下 具体合成步骤1.茶碱(I)在冰醋酸中与浓硝酸回流发生硝化反应生成8-硝基茶碱(II)2. 8-硝基茶碱(II)与保险粉反应还原生成8-氨基茶碱(III)3. 8-氨基茶碱(III)经重氮化反应生成8-重氮基茶碱(IV)4. 8-重氮基茶碱(IV)与二甲胺偶合生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)5. 8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)与硫酸二乙酯进行乙基化反应即生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)-7-乙基茶碱(VI)，亦即氮烯菲林。
具体实施例方式氮烯菲林(VI)的制备1)8-硝基茶碱(II)的制备取700ml的冰醋酸置2000ml反应瓶中，边搅拌边加热，同时加入茶碱(I)420g(2.3mol)，然后再加入140ml冰醋酸，密封加温搅拌至全溶，慢慢滴加浓硝酸294ml(3mol)，反应温度控制在90℃左右，然后搅拌反应30分钟，放置冷却，过滤，抽干，用冰冷的蒸馏水约200ml抽洗，70℃烘干，研细备用。得406g(1.8mol)8-硝基茶碱(II)，产率为77.3％，熔点为285～287℃。
2)8-氨基茶碱(III)的制备将盛有1000ml蒸馏水的烧杯，放到控温式磁力搅拌器上，搅拌加热，加入8-硝基茶碱150g(0.67mol)，边加连二亚硫酸钠250g(1.4mol)边加20％KOH溶液，反应温度控制在90℃以下，反应液酸碱度由PH5逐步升至PH9，最后呈强碱性，待反应液澄明，加活性炭脱色，趁热抽滤，滤液以2∶1的盐酸调PH值至3～4，放置沉淀2小时，抽滤，100ml蒸馏水洗2次，80℃烘干，研细得106g(0.54mol)8-氨基茶碱(III)，产率为81.6％，熔点300℃以上。
3)8-重氮基茶碱(IV)的制备烧杯中加入8-氨基茶碱(III)45g(0.23mol)和5％的盐酸溶液1500ml，加热至全溶，趁热过滤，滤液移至反应瓶于冰浴上冷至10℃以下，边搅拌边慢慢加入22.5g(0.33mol)亚硝酸钠，快速搅拌至搅不动为止，冰浴放置反应30分钟，过滤，甲醇洗2次，抽干，得重氮盐湿品约67g，将湿品折算成干品直接投入下步反应。
4)8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)的制备将67g湿重氮盐，相当于干品41.4g(0.2mol)，放入反应瓶中，加入丙酮3000ml，室温搅拌，滴加33％的二甲胺50ml，冰浴搅拌反应1小时，过滤，丙酮洗，真空干燥，得黄色晶体46g(0.18mol)，熔点218-9℃。产率为91.6％。
5)氮烯菲林(VI)的制备取8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)98g(0.39mol)于烧杯中，加入5％KOH溶液1000ml，微热溶解，过滤，将滤液移至反应瓶中，控制温度为50℃左右，滴加硫酸二乙酯91ml(0.59mol)，继续搅拌反应约30分钟，停止加热，室温搅拌反应2小时，析出大量淡黄色纤维状结晶。滤取结晶，抽干，滤饼用水洗涤，再用少量乙醚洗，80℃干燥。得8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)-7-乙基茶碱即氮烯菲林(VI)88g，熔点为191～2℃。产率为81％。
6)氮烯菲林(VI)的精制方法取丙酮1000ml，加入上述制得的氮烯菲林50g，水浴加热回流搅拌溶解成溶液，加入10g活性炭，加热搅拌脱色15分钟，趁热滤去活性炭，放置析晶，滤取淡黄色针状结晶，即为精制的氮烯菲林(VI)，80℃烘干，熔点为192～3℃，收率93％。
本发明抗肿瘤活性化合物氮烯菲林是一种高效低毒的抗肿瘤活性化合物，对肺癌、恶性黑色素瘤等多种肿瘤有明显抑制活性，其主要药效学试验结果如下。
1.试验方法1)C57BL/6小鼠B16黑色素瘤的实验肺转移疗效试验取对数生长期的B16黑色素瘤体外单层培养细胞，除去上清液加入0.2％胰酶和0.02％EDTA液进行细胞脱壁消化，以后除去消化液，加入RPM1640培养基制备成2.5×105/ml浓度的细胞悬液，每只小鼠静脉接种0.2ml(5×104细胞)。接种后24小时开始治疗，三周后解剖动物取肺脏计算肺克隆指数CI(克隆指数＝克隆分数×系数)，与对照组进行比较，计算肺克隆抑制率。
克隆抑制率＝1-(CI试验/CI对照)×100％2)istar大鼠模型对W256疗效试验取生长旺盛的W256瘤源，无菌条件下抽取腹水液以生理盐水稀释成1～2×107/ml浓度的细胞悬液，接种于宿主右腋皮下0.2ml/只，次日随机分组，按方案进行治疗，二周后解剖所有动物剖取肿瘤称重，与对照组进行比较，按常规方法求出肿瘤抑制率。
3)体肺腺癌LAX及小细胞肺癌SPC的治疗试验取对数生长期荷LAX或SPC的裸小鼠，无菌条件取出瘤源制成1～2×107/ml浓度的细胞匀浆悬液，接种于裸小鼠腋皮下，每只0.2ml，次日随机分组，按方案进行治疗，实验动物置于SPF条件饲养和操作，2～3周间结束实验剖取各组肿瘤与相应对照组进行比较，按规定方法进行计算，量效关系试验按各组抑制率以直线回归方程求出ED50值。
试验对照空白对照为试验组相应溶剂静注用生理盐水，口服用0.5％CMC-Na液；阳性对照为临床用抗癌药氮烯脒胺(DTIC)。2.试验结果(见表1)体内疗效结果表明氮烯菲林对动物肿瘤模型W256、B16肺转移及人体肿瘤异种移植模型肺腺癌(LAX)及小细胞肺癌(SPC)的静脉和口服两种途径给药均有不同程度显著的抗肿瘤效果，效果确切且具有量效关系，静脉给药对B16肺转移ED50为1.26mg/kg(3.78mg/m2)，其化疗指数达到130.98，而DTIC的ED50是22.32mg/kg(66.96mg/m2)，化疗指数仅为28.67。
表1 氮烯菲林体内抗肿瘤疗效试验结果剂 量谱 给药途径 抑瘤率％mg/kgmg/m210 42 静注 87.29～89.8W256 14.2静注 50.17～59.670.1 0.42 静注 7.26～21.7260 252口服 91.74～94.68W256 30 126口服 73.87～80.5015 63 口服 32.32～35.0210 30 静注 93.95～96.56B1613 静注 82.80～90.000.1 0.3静注 42.36～47.5030 90 口服 91.61～95.94B1610 30 口服 81.94～87.883.3 15 口服 62.90～68.0110 30 静注 90.95～93.59LAX515 静注 81.93～84.722.5 7.5静注 50.52～59.0430 90 口服 90.07～91.46LAX15 45 口服 67.24～73.027.5 22.5 口服 51.05～54.8810 30 静注 56.86～59.06SPC515 静注 42.16～49.552.5 7.5静注 25.00～30.8030 90 口服 63.21～66.68SPC15 45 口服 44.81～47.207.5 22.5 口服 29.25～32.31研究证明氮烯菲林对肺癌转移瘤、各种转移性肝癌、恶性网组织细胞瘤和恶性淋巴瘤等多种恶性肿瘤有明显疗效，可用于制备抗肿瘤药物。
权利要求
1.一种抗肿瘤活性的化合物氮烯菲林，其特征在于该化合物的结构式为
2.权力要求1所述的抗肿瘤活性化合物氮烯菲林的制备方法，其特征在于合成路线如下 具体合成步骤为(1)茶碱(I)在冰醋酸中与浓硝酸回流发生硝化反应生成8-硝基茶碱(II)；(2)8-硝基茶碱(II)与保险粉反应还原生成8-氨基茶碱(III)；(3)8-氨基茶碱(III)经重氮化反应生成8-重氮基茶碱(IV)；(4)8-重氮基茶碱(IV)与二甲胺偶合生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)；(5)8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶碱(V)与硫酸二乙酯进行乙基化反应生成氮烯菲林(VI)。
3.权利要求1所述的抗肿瘤活性化合物氮烯菲林用于制备抗肿瘤药物的用途。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域,是一种具有抗肿瘤活性化合物氮烯菲林及其制备方法与医药用途。氮烯菲林的化学结构式如右式,本发明以茶碱为原料,经过硝化、还原、重氮化、偶合反应,再进行乙基化反应即得到氮烯菲林。本发明的化合物氮烯菲林对肺癌转移瘤、各种转移性肝癌、恶性网组织细胞瘤和恶性淋巴瘤等多种恶性肿瘤有明显疗效,可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号C07D473/00GK1374308SQ0211089
公开日2002年10月16日 申请日期2002年2月26日 优先权日2002年2月26日
发明者张万年, 徐卫明, 吕加国, 周有骏, 朱驹, 季海涛, 宋云龙 申请人:中国人民解放军第二军医大学