一种利那洛肽的纯化方法
【专利摘要】本发明属于药物化学【技术领域】，公开了一种利那洛肽的纯化方法。本发明所述纯化方法以多孔石墨化碳为固定相，结合流动相中加入一定浓度的γ-环糊精作立体选择剂，采用高效液相色谱法对利那洛肽粗肽进行分离纯化，然后利用高效液相色谱将纯化制得的利那洛肽洗脱液中的γ-环糊精及磷酸盐脱除并转成醋酸盐，冻干制得利那洛肽精肽。本发明所述纯化方法操作简单，从而使得操作成本低。此外，本发明所述纯化方法利那洛肽收率高，从而适合于利那洛肽的大规模产业化生产，并且经纯化得到的利那洛肽精肽纯度可达99%以上，纯度高、杂质含量低，因此具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。
【专利说明】一种利那洛肽的纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物化学【技术领域】，尤其涉及一种利那洛肽的纯化方法。
【背景技术】
[0002]便秘是一种常见病，从病因上可分为器质性和功能性两类。其中功能性便秘是由患者肠道蠕动异常而非肠道发生形态学病变所引起。功能性便秘部分患者为慢传输型便秘和肠易激综合征(IBS)型便秘。慢传输型便秘，是由于肠道收缩运动减弱，使粪便从盲肠到直肠的移动减慢，或由于左半结肠的不协调运动而引起。最常见于年轻女性，在青春期前后发生，其特征为排便次数减少(每周排便少于I次)，少便意，粪质坚硬，因而排便困难；肛直肠指检时无粪便或触及坚硬粪便，而肛门外括约肌的缩肛和用力排便功能正常；全胃肠或结肠传输时间延长；缺乏出口梗阻型的证据，如气囊排出试验和肛门直肠测压正常。IBS属胃肠道功能紊乱性疾病。发病多与胃肠道动力异常或内脏感觉高敏感性有关，其症状常表现为腹痛、腹泻或便秘以及腹胀、内急等。
[0003]利那洛肽(Linaclotide)，是美国食品与药物管理局(FDA)批准的一种具有新型作用机制的用于治疗慢传输型便秘和肠易激综合征(IBS)型便秘的口服药物。它是一种鸟苷酸环化酶-C激动剂，可激活肠上皮细胞顶端表面的GC-C受体，导致细胞内和细胞外环鸟苷酸增多。净效应是氯和碳酸氢盐分泌进入肠腔增加，进而导致液体分泌增多以及大便通过加速。利那洛肽 (15(T300yg/d)可使每周的自发性排便数量增加，改善大便性状，减轻大便用力程度，以及便秘的严重程度。因此利那洛肽可作为治疗功能性便秘的一线用药之一，市场前景广阔。
[0004]利那洛肽，由14个氨基酸组成的多肽，分子式为C59H79N15O21S6,分子量为1526.74。利那洛肽肽链中包含在Cys与Cys之间成环的三对二硫键(三对二硫键为1_6、2_10、5_13)，
其结构式如下:
[0005]
【权利要求】
1.一种利那洛肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1:采用高效液相色谱法对利那洛肽粗肽进行纯化，所述高效液相色谱法以多孔石墨化碳为固定相，粗肽溶液上样后，以含有Y -环糊精的磷酸盐缓冲溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱，收集洗脱液； 步骤2:采用高效液相色谱法对步骤I所得洗脱液进行转盐，所述高效液相色谱法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，步骤I所得洗脱液上样后，以冰醋酸水溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相进行梯度洗脱，收集洗脱液，冻干即得。
2.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，按g/mL计，步骤I所述流动相A相中的Y-环糊精浓度为0.2%-1.0%。
3.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤I所述流动相A相中的磷酸盐的摩尔浓度为10mM~30mM。
4.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤I所述流动相A相中的磷酸盐选自磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸铵或磷酸二氢铵中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤I所述流动相A相溶液的pH为2.0~4.0。
6.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤I所述梯度按照流动相B相的百分比为
7.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤2所述流动相A相中的冰醋酸水溶液中冰醋酸的体积百分浓度为0.1%~θ.5%。
8.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤2所述梯度为
9.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，步骤2所述冻干前还包括对收集的洗脱液进行浓缩步骤。
【文档编号】C07K1/20GK103848893SQ201210523956
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月7日 优先权日:2012年12月7日
【发明者】覃亮政, 潘俊锋, 马亚平, 袁建成 申请人:深圳翰宇药业股份有限公司