专利名称：用于治疗的新的活性化合物的制作方法
技术领域：
本发明是关于新的外消旋和(R)-对映体形式的3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃化合物的游离碱及药物上可接受的盐，关于含所述治疗活性化合物的药物组合物的制备方法以及关于所述活性化合物在治疗上的用途。
本发明的目的之一就是提供治疗上应用的一种化合物，特别是对动物，包括人的中枢神经系统(CNS)中亚组为(5HTIA)的5-羟色胺受体具有高度选择亲和性的化合物。
本发明的目的也是提供口服后具有治疗效果的化合物。
取代的-3-氨基苯并二氢吡喃用于中枢神经系统在治疗上的用途，在一些专利文献已有公开，特别中EP0222996及WO 91/09853。
各种中枢系统疾病如抑郁、焦虑等，看起来都有神经递质去甲肾上腺素(NA)及5-羟色胺(5-HT)的失调，后者也叫血清素。最常用于治疗抑郁的药物，被认为是通过促进任一种或两种这些生理上促效药的神经传递而实现的。看起来5-HT神经传递的加强主要影响压抑的情绪和焦虑，而去甲肾上腺素神经传递的加强影响出现于抑郁病人的迟滞症状。本发明是关于对5-HT神经传递有效用的化合物。
血清素，或5-HT，其活性被认为与很多不同类型的精神疾病有关。例如认为5-HT活性的增强与焦虑症有关，而5-HT释放的减少与抑郁有关，另外血清素对不同情况如饮食疾病、心血管调节及性行为也有联系。
5-HT受体血清素的多种作用可能与这一事实有关血清素神经元刺激其它激素例如皮质醇，催乳激素、β-内啡呔、加压素等的分泌。这些其它激素的每个分泌看起来都是一个特定的基础上，通过几种不同的5-HT(血清素)受体亚型调节的，由于分子生物学技术的帮助，至今这些受体已分类为5-HT1，5-HT2，5-HT3及5-HT4，而5-HT1受体进一步分类为5-HT1A、5-HT1B、5-HT1C及5-HT1D亚型。每种受体亚型与不同的血清素功能有关并具有不同的性质。
5-HT-受体激活剂当今常用于治疗精神压抑的药物的作用机理是间接的，例如它们通过阻碍由中枢神经系统末梢释放的神经介质(NA和/或5-HT)的重吸收而起作用。这些药物增大了神经介质在突触裂口的浓度，因而贮存了足够多的神经传递。
一种加强在中枢神经系统5-HT神经元中神经传递的完全不同的方式将是使用直接的5-HT受体激活剂，为了最大限度地减少副作用，或影响一特定类型的行为或血清素功能，对特定的5-HT受体亚型高度选择性是较优选的。激活剂可用于激活特定的受体。
本发明的目的是提供用于治疗的化合物，特别是用于治疗中枢神经系统中5-羟色胺调节的疾病，例如抑郁、焦虑、强迫观念与行为的疾病(OCD)，厌食，老年性痴呆、偏头痛、中风、Alzheimer′s疾病、高血压、温度调节及性障碍、疼痛以及可用于心血管系统失调的治疗。
已经证明，试验过的各种3-(N，N-二烷基氨基)-5-(N-烷基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃在生物利用率，5-HT1A受体刺激效果及选择性这三不同的参数上，具有极大的多样性。确定具有所有这三种优点的化合物是困难的，在已有技术中对如何得到具有这些性质的化合物无指导性的说明。
令人惊异的是已经发现本发明3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的外消旋化合物是有极好的生物利用率，并对CNS中5-羟色胺的特定亚型5-HT1A具有高度的亲和性。
而且，又发现有关化合物3-(N-异丙基-N-n丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃，对在CNS中的5-HT1A受体所显示的高度亲和性是严格立体特异性的。3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的(R)-对映体在CNS中的5-HT1A受体具有高度亲和性，而3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的(S)-对映体缺少对5-HT1A受体的活性。3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的(R)-对映体也具有好的生物利用率。因此，本发明化合物的外消旋及(R)-对映体可用来治疗哺乳动物包括人的由5-羟色胺调节的状态和疾病。
本发明化合物是具有通式Ⅰ
的3-(N-异丙基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的外消旋物及(R)-对映体，它们以游离碱或药物上可接受的盐的形式存在。
有机酸和无机酸都可采用来生成本发明化合物无毒的、药物上可接受的酸加成盐。酸的例子如硫酸、硝酸、磷酸、草酸、盐酸、甲酸、氢溴酸、柠檬酸、乙酸、乳酸、酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、棕榈酸、乙基二磺酸、氨基磺酸、琥珀酸、丙酸、乙醇酸、苹果酸、葡糖酸、丙酮酸、苯乙酸、4-氨基苯甲酸、氨茴酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、4-羟基苯甲酸、3，4-二羟基苯甲酸、3，5-二羟基苯甲酸、3-羟基-2-萘酚酸、烟酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、对氨基苯磺酸、萘磺酸、抗坏血酸、环己基氨基磺酸、富马酸、马来酸及苯甲酸。它们的盐可通过本领域已知的方法很容易地制得。
制备(R)-对映体可由已知的方法得到，如通过分步结晶从外消旋的非对映异构的盐中或通过层析从共价非对映异构体中得到。对映的拆分可在氨基的烷基化(方法A)之前完成或在N-烷基化(方法B)之后完成。下面的反应路线更详细地说明了方法A及方法B
化合物Ⅴ可采用已知的方法步骤转化成化合物Ⅵ，如采用N-烷基化、脱甲基化并最后转化离去基团Y。
制备本发明的外消旋化合物从5-甲氧基-3-苯并二氢吡喃-4-酮化合物(制备类似于EP222996所述)开始，接着采用已知方法如还原胺化、N-烷基化、脱甲基化，最后转化离去基团Y得到化合物Ⅵ的外消旋物。
本发明的外消旋及(R)-对映体形式的化合物，可按下面的方法制备
ⅰ转化通式Ⅵ化合物
其中Y是离去基团如三氟甲基磺酸酯(OSO2CF3)、卤化物例如Cl、或Br或I，这是采用零价过渡金属(M)如Pd或Ni通过催化循环实现的，该反应是在原位置发生的并且经历了芳基Y键上的氧化加成。接着采用异丙胺胺化处理CO得到通式Ⅰ化合物，之后如果需要将它转化成盐。
ⅱ通式Ⅵ化合物可选择性地转化成通式Ⅶ化合物
其中Z是Cl、Br、OH或ORp，而Rp是C1-C6烷基，这是采用零价过渡金属通过催化循环实现的，该反应能够在芳基-Y-键，例如芳基-SO3CF3键上发生氧化加成。芳基-CO-金属-Y复合物是用一氧化碳(CO)处理得到的。
更进一步的反应试剂是醇，如甲醇、乙醇，四级胺碱如三烷基胺，例如三乙胺，溶于一惰性有机溶剂中，优选的为极性非质子溶剂如二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、丙酮乙腈等。该反应通常是在+40℃至+120℃、100至500KPa压力(ⅱa)下完成。该反应可选择接着水解，用亚硫酰卤化物如亚硫酰氯处理，得到相应的酰卤化物。
式Ⅶ化合物在非极性质子溶剂中如甲苯、苯在回流温度或0-100℃下，用异丙胺胺化(ⅱb)，得到通式Ⅰ化合物。
药物制剂按照本发明，该化合物往往经口腔，直肠或注射给药，是以含活性组份的药物制剂的形式施用。该活性组份可为游离碱或药物上可接受的非毒性的酸加成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、乳酸盐、乙酸盐、磷酸盐、硫酸盐、氨基磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐及其类似物以一药物上可接受的剂量形式施用。剂量形式可为固体、半固体或液体制剂。通常活性组份占制剂重量的0.1-99%，更特别的用作注射时按重量占0.5-20%，而适于口服的制剂中，则按重量占0.2-50%。
制备含有剂量单位形式用于口服的本发明化合物的药物制剂时，所选择的化合物可与固体赋形剂如乳糖、蔗糖、山梨(糖)醇、甘露糖醇、淀粉如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉、纤维素衍生物、接合剂如明胶或聚乙烯吡咯烷酮及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钙、聚乙烯甘醇、蜡、石蜡及其类似物相混合，随后压成片剂。如果需要涂层的片剂，层心制备如上述，可采用含有如阿拉伯树胶、明胶、滑石、二氧化钛及它们的类似物的浓糖溶液涂层。片剂也可选择用对技术熟练的人员已知的，溶于易挥发的有机溶剂或有机溶剂的混合物中的一种聚合物来涂层。可在这些涂层中加入着色剂以便于区分含有不同活性物质或不同剂量活性物质的片剂。
制备软胶囊时，活性物质中可加入如植物油或聚乙烯甘醇。硬胶囊可含有活性物质的颗粒，采用任一种上述用于制备片剂的赋形剂如乳糖、蔗糖、山梨(糖)醇、甘露糖醇。淀粉(如土豆淀粉、玉米淀粉或支链淀粉)、纤维素衍生物或明胶。液体或半固体的这种药物也可填充硬胶囊中。
剂量单位直肠使用时，可为溶液、悬浮液或制备成含有活性物质混合中性脂基的栓剂的形式。或可为含有活性物质混合植物油或石蜡油的、直肠使用的胶囊。口服液体制剂可以糖浆或悬浮液的形式，例如含有大约0.2%至20%重量的本文所述活性物质的溶液，该平衡为糖与乙醇、水、甘油及丙烯甘醇的混合物的平衡。液体制剂可选择性地含有着色剂、调味剂、糖精及作为增稠剂的羧甲基纤维素或其它本领域人员已知的赋形剂。
非胃肠道使用的注射溶液可制备成活性物质水溶液药物上可接受的盐的水溶液，较优选的是在约0.5%到约10%重量浓度范围内。这些溶液可含有稳定剂和/或缓冲剂，并且可以很方便地提供各种剂量单位的安瓿。
治疗病人时本发明化合物每日合适的剂量，对每例口服给药时约为0.01-100mg/Kg体重，而对非胃肠道给药时约为0.001-100mg/Kg体重。
本发明由下列实施例说明。
实施例13-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃a)3-异丙基氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃盐酸化物5-甲氧基-3-苯并二氢吡喃-4-酮(16g，0.089mol)及异丙胺(6.4g，0.112mol)采用已知的方法通过还原胺化反应(Clinton F.Lane Synthesis 1975 Vol.46P.135)得到标题化合物。Mp.255℃。
b)3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃上面步骤a)产物(14g，0.06mol)、1-碘代丙烷(15g，0.08mol)、K2CO3及乙腈(250ml)的混合物搅拌下回流4天。层析后所得产物分离得到无色的油。GC-MS(CI-Mode)M+1＝264(100%)。
c)3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-羟基苯并二氢吡喃由上面步骤b)得到的产品(10g，0.038mol)在二氯甲烷中采用BBr3去甲基化。
GC-MS(CI-Mode)M+1＝250(100%)。
d)3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-三氟甲基磺酰氧基苯并二氢吡喃由上面步骤c)得到的产品(10g，0.04mol)溶于CH2Cl2并冷却到-30℃。加入吡啶(6g，0.076mmol)接着加入三氟甲基磺酸酐(14g，0.05mol)。溶液在-20℃搅拌3hr，并使之冷却到室温。该溶液用NaHCO3水溶液洗涤，Na2SO4干燥并蒸发到干，所得油状物通过闪层析纯化(硅胶)，用乙酸乙酯/己烷1∶9洗脱。
GC-MS(CI-Mode)M+1＝382(100%)。
e)3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃上面步骤d)所得产品(3g，0.008ml)、1，3-二(二苯膦)丙烷(150mg)、乙酸钯(Ⅱ)(75mg)及异丙胺(5ml)在30ml DMF中的混合物，置于-Parr玻璃容器中。通入CO压力为2巴，所得混合物在60℃摇动4hr。反应完成后层析纯化得到白色晶体的标题化合物，mp124℃(碱)。
实施例2(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃(Ⅰ)(方法A)a)3-氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃盐酸化物(Ⅱ)3-氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃可按照已知的方法制备(Acta Pharm.Suec.24，169-182，1987)。
MP237-238℃。
b)(R)-3-氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃(Ⅲ)以碱形式存在的3-氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃的外消旋物(1.0g;5.5mmol)及L(+)酒石酸(1.0g;0.6mmol)溶于水(20ml)中。溶液加热到70℃，清液在室温下放置过夜结晶。滤除沉淀得到0.7g酒石酸盐，为99%光学纯的(R)-异构体。碱化并用CH2Cl萃取再干燥(Na2SO4)，蒸发得到0.35g(35%)的标题化合物，为游离碱。25D＝-20.8°(C＝0.83，CH2Cl2)。
c)(R)-3-(N-异丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃(Ⅴ)(R)-3-氨基-5-甲氧基苯并二氢吡喃(1.0g，6mmol)及丙酮(2.5g，40ml)与甲醇(820ml)、乙酸(0.4g，6.6mmol)及NaCNBH3(1.2g，19mmol)混合，用乙酸调pH值到6。在室温下搅拌3天，混合物蒸发，残留物碱化并用CH2Cl2萃取。干燥(Na2SO4)和蒸发后得到是碱的标题化合物，可转化成盐酸盐，产量1.1g(83%)。
MP289℃分解。25D＝-29°(C＝0.015;MeOH)。
d)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃(R)-3-(N-异丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃(17.5g，0.079mol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(180ml)中，加入K2CO3(21.8g，0.18mol)及1-碘代丙烷(53.8g，0.32mol)。反应混合物在50℃搅拌5天。真空除去溶剂，残留物溶于乙醚/NH3(1M)中。分相后水相再用乙醚洗涤一次，合并醚层、干燥(MgSO4)，真空除去溶剂得到黄色油状的残留物，该油状物溶于无水乙醚中，在0℃下缓慢加入HCl，得到标题化合物的盐酸盐，产率66%(15.7g)。
Mp(盐酸盐)108-120℃。25D＝(碱)＝-95.5°(C＝0.1;MeOH)。
e)(R)-羟基-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)苯并二氢吡喃在氮气氛中，(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃的盐酸盐(15.5g，52mmol)与CH2Cl2(100ml)混合，冷却到-60℃。缓慢加入溶于CH2Cl2(50ml)中的BBr3(27.2g，110mmol)，接着反应升温到0℃，反应混合物在0℃下搅拌12h，并缓慢加到搅拌中的饱和碳酸氢钠溶液中。分层后水层再用CH2Cl2萃取一次。有机层合并后干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，得到酚的标题化合物。产率98%。25D(碱)＝-83.0°(0.1;MeOH)。Mp(HCl盐)215-222℃(分解)。
f)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-三氟甲基磺酰氧基苯并二氢吡喃(Ⅵ)在氮气氛中，(R)-5-羟基-3-(N-异丙基-N-n丙氨基)苯并二氢吡喃(13g，52mmol)溶于CH2Cl2(100ml)中，加入2，4，6-可力丁(8.2g，68mmol)，该混合物冷却到-60℃，在1小时内缓慢加入三氟甲磺酸酐(17.7g，62mmol)，升温到0℃，用饱和Na2CO3使反应骤冷。分层，该水层用NH3(2M)调到pH8，用CH2Cl2萃取一次，合并有机相干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到棕色的残留物，通过SiO2闪层析(CH2Cl2)纯化，得到triflate标题化合物。产率76%(15g)。25D＝-77.9℃(C＝0.01;MeOH)。
g)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃(Ⅰ)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-三氟甲基磺酰氧基苯并二氢吡喃(5.2g，14mmol)溶于DMF(30ml)中，加入异丙胺(10ml)，容器抽真空后通入CO气体，该步骤重复二次后加入乙酸钯(Ⅱ)(90mg)及1，3-双(二苯膦基)丙烷(144mg)。反应混合物在65℃搅拌10h，真空除去溶剂所得深棕色的残留物溶于二乙醚/NH3(1M)中，分层后水相再用乙醚萃取一次，合并醚层干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到黄色结晶的残留物，通过SiO2闪层析(CH2Cl2/EtOAc，10∶1)纯化。用CH2Cl2/己烷重结晶得到(R)-3-(N-异丙氨基-N-n-丙基氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的纯氨化物。产率35%(1.5g)。25D＝-87。0°(C＝0.1MeOH)。Mp94-95.4℃。
实施例3(R)-3-(N-异丙氨基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃(Ⅰ)(方法B)a)(R)-3-(N-异丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃(Ⅴ)将5-甲氧基-3-苯并二氢吡喃-4-酮(50g，0.28mol;如EP0222996所述)溶于甲醇中(300ml)，溶液冷却到0℃后加入异丙胺(70ml，过量)，加乙酸调pH值约为6，在1小时内分批添加NaCNBH3(12g，0.19mol)，pH值保持在6。移去冰浴，混合物在室温下搅拌过夜，真空除去溶剂，残留物溶于乙醚/NH3(1M)中，分层后，在醚层中的胺再用酸碱处理一次(HCl(1M)/NH3(1M))用MgSO4干燥，蒸去溶剂，得到无色结晶固体。
产率87%(54g)，Mp255-56℃(外消旋产物的盐酸盐)。
外消旋的3-(N-异丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃(Ⅳ54g，0.224mol)与等摩尔量的(+)-二-1，4-甲苯酰-D-酒石酸(98.6g，0.244mol)混合，混合物溶于沸乙醇(170ml)/丙酮(70ml)中，热溶剂的混合物中盐开始结晶，但溶剂冷却到室温(20℃)后再过滤，所得的盐用乙醇/丙酮(1∶5)重结晶9次，得到纯的非对映异构体盐。产率35%(54g)(99%e.e)。Mp166-168℃。游离碱的对映体(R)-3-(N-异丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃可采用乙醚/KOH(1M)由盐中萃取得到。产率32%，17.5g，[α]25D＝-32°(C＝0.1;MeOH)MP285-286℃(盐酸盐)。
b)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-甲氧基苯并二氢吡喃标题化合物可按实施例1b所述的同样方法制备，得到同样量的产品，具有实施例2d所给出的同样的物理数据。
c)(R)-5-羟基-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)苯并二氢吡喃标题化合物可按实施例2e所述的同样方法制备，得到同样量的产品，具有实施例2e所给出的同样的物理性质。
d)(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-三氟甲基磺酰氧基苯并二氢吡喃(Ⅵ)标题化合物可按实施例2f所述的同样方法制备，得到同样量的产品，具有实施例2f所给出的同样的物理数据。
e)(R)-3-(3-N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃(Ⅰ)标题化合物可按实施例2g所述的同样方法制备，得到同样量的产品，具有实施例2g所给出的同样的物理数据。
实施例4a)(R)-3-(N-异丙基，N-n-丙氨基)-5-甲氧基羰基苯并二氢吡喃(R)-3-(N-异丙基，N-n-丙氨基)-5-三氟甲基磺酰氧基苯并二氢吡喃(4.0g，10.5mmol)，三乙胺(2.3g、23.1mmol)及DMF/MeOH(18ml，6∶2)的混合物，在一三口圆底烧瓶中混合，烧瓶抽真空后通入CO气(重复2次)，最后加入1，3-二(二苯基膦)丙烷(0.11g)及乙酸钯(Ⅱ)(0.07g)，反应混合物在70℃下搅拌17hr后，混合物用乙醚稀释，用2M NH3洗涤并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂得到棕色油状的残留物，通过闪层析(SiO2，CH2Cl2/EtOAc;10∶1)纯化，得到标题化合物，产率82%(2.5g)。21D＝-131.6°(MeOH，0.1M)。
GC-MS(70ev)＝291(M+)，262(100%)b)(R)-3-(N-异丙基，N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)-氨基甲酰基苯并二氢吡喃(Ⅰ)(R)-3-(N-异丙基，N-n-丙氨基)-5-甲氧基羰基苯并二氢吡喃(0.46g，1.6mmol)溶于MeOH(10ml)中，再与NaOH(0.06g，1.6mmol)的水溶液(3ml)混合，该反应混合物回流3.5hr后真空除去溶剂，残留物溶于甲苯中，为形成共沸物以除去水再真空除去甲苯(重复2次)，残留物溶于SOCl2(5ml)中并回流1hr，真空除去过量的SOCl2，残留物溶于CH2Cl2中(20ml，用分子筛3 干燥)后，再加入4ml异丙胺，反应混合物在室温(21℃)下搅拌1hr，再用乙醚稀释、洗涤(2M NH3)、干燥(MgSO4)。真空移去溶剂得到黄色油状的残留物，通过闪层析(SiO2，CH2Cl2/EtOAc;5∶2)纯化得到纯的标题化合物，产率88%(0.46)。21D＝-90.4°(MeOH 0.1)MP93-94℃。
药物学对抑郁病人的药物治疗有证据表明抑郁病人中枢神经系统(CNS)中的神经传递可能失调，这些失调看来与神经介质去甲肾上腺素(NA)及5-羟色胺(5-HT)有关。常用来治疗抑郁的药物被认为是通过改进任一种或两种这些生理的促效药的神经传递而起作用。现有的数据表明5-HT神经传递的加强首先改善抑郁病人情绪及焦虑，而去甲肾上腺素神经传递的增强将更改善抑郁病人的迟滞症状。近年来，人们作了很多努力开发具有高度选择性，以改善在CNS中5-HT神经传递的新药。
当今精神抑郁的治疗中普遍采用药物作用的主要机理是通过阻碍从在CNS神经末梢释放出的、内源性神经介质(NA和/或5-HT)的重吸收，因此增加了这些神经介质在突触裂口的浓度，从而贮存了足够多的神经传递。
增强中枢5-HT-神经元中神经传递的一个完全不同的方法就是使用直接的5-HT-受体促效药。为最大限度地减少副作用最好选用对该种受体具有高度选择性。
令人惊异的是我们发现了3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的外消旋物及(R)-对映体具有高度的立体选择性、对CNS中5-HT1A-受体具有直接刺激作用并具有好的生物利用率。
体外试验受体结合试验为了测定5-HT-受体刺激效果及选择性，在体内用受体试验测定鼠脑内对各种受体的亲和性。本发明的立体有择的(R)-对映体化合物(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃具有Ki 8.6(nm)，而外消旋的化合物3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃具有Ki 24(nm)。Ki值对(S)-对映体来说超过1000nM。
方法5-HT1A结合试验。将从每只老鼠中取出的大脑皮质十海马解剖并在含有4.0mM CaCl2及5.7nM抗坏血酸的15ml冰冷的50mM Tris-HCl缓冲液中，pH7.5，用Ultra-Turrax(Janke & Kunkel，Staufen，FRG)搅匀10S。在17，000rpm转速下离心12.5min(39，800×g在Beckman离心机中使用冷冻JA-17转子)(Beckman Palo Alto，CA，USA)之后，小丸悬浮于同样的缓冲液中，重复匀浆及离心步骤，向每个小丸中加入5ml冰冷的0.32M蔗糖并匀浆5sec，这些样品在-70℃下冷冻，在使用时用缓冲液稀释到8mg组织/ml并匀浆10sec.，这些组织匀浆在37℃培养10分钟，然后给10μm的优降宁，再培养10分钟。
下面的结合试验按Peroutka，J.Neurochem.47，529-540，(1986)所述。培养混合物(2ml)含有3H-8-OH-DPAT(0.25-8nM)、5mg/ml组织匀浆物，溶在含有4.0mM CaCl2及5.7mM抗坏血酸、pH为7的50mM Tris-HCl缓冲液中，分析6个不同浓度的3H-8-OH-DPAT。结合试验由加入组织均浆物开始，再在37℃培养10分钟，培养混合用Brandel Cell Harvester(Gaithersburg，MD，USA)，通过Whatman GF/B玻璃滤器过滤。滤渣用pH7.5的5ml冰冷的50mM Tris-HCl缓冲液洗涤两次，并用Beckman LS 3801闪烁计数器中的5ml备好(Ready-Solv)的溶剂HP(Beckman)计数。非特异性结合是通过向反应混合物中加入10μm5-HT而测量的。用非线型的最小的二乘法计算机分析(Munson及Rodbard，Anal.Biochem.107，220-239，(1980))处理结合数据。
体内试验狗口服药物的生物利用率生物利用率试验按下面所述的方法进行，在测量狗血浆水平的基础上，得到化合物3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的(R)-对映体的生物利用率平均值为17%，而其外消旋物的平均值为21%。在鼠体内对皮下与口服给药比较之后的剂量有效性的研究进一步支持了口服在受体该化合物有高度的有效率。
方法对口服生物利用率(系统有效率)的评估是建立在血浆区域运用曲线法(AUC)的基础之上的。本发明化合物的盐溶液给动物静脉注射(i.v.)和口服(p.o.)，其在血浆的浓度在多个时间点测量。服用剂量对于静脉和口服给药分别为1μmol·Kg-1和10μmol·Kg-1，AUC是按照梯形规律(trapezoidal rule)测量的，血浆中试验化合物的测定是通过与电化学测量结合的HPLC方法进行的。
体内试验5-HT合成正如对一选择性的5-HT1A促效剂所预计的那样，5-HT的合成率，是由鼠脑中5-HTP水平的显著降低测量的，是在3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃化合物0.1mg/Kg皮下施用之后及0.2mg/Kg口服施用之后记录的。
方法鼠streatum中5-HT的合成率，是使用NSD 1015(脱羧酶抑制剂，100mg/Kg i.p.)抑制芳香L-氨基酸脱羧酶之后30min测量5-HTP的积累得到的，试验化合物在使用NSD 1015前30分钟服用，须检查的脑的区要解剖、冷冻并贮存。
5-HTP(5-羟色氨酸)的水平，是按Magnusson，Nilsson及Westerlund(1980)方法使用高性能液相色谱(HPLC)与电化学分析联用测定的。流动相是0.1M磷酸盐缓冲液(pH2.5)∶甲醇∶乙腈-89∶9∶2V/V，含有1mM硫酸辛酯。冷冻的样品称重并在含有2.5nM硫酸氢钠、1mM二乙胺四乙酸(EDTA)及作为内标的麻黄宁0.1M高氯酸中匀浆，上清液直接注入到-Supelcosil C18(3μM)柱中，该柱与检测器(ESA Coulochem 5100A)相接，定位到0.05/0.40V。
温度效应化合物3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的(R)-对映体在老鼠皮下注射0.3mg/Kg或口服1mg/Kg之后，得到显著的体温降低。
方法在每个试验中，使用重约250g的30只老鼠，分装在6个笼子中，每笼5只，这些老鼠可以自由饮食与饮水，试验开始前给这些老鼠标号并让它们不被打扰至少1小时。在施用化合物之前，每只老鼠的体温采用YSI2100 tele温度计测量。温度计探针插入直肠10cm并停留速度30秒，接着皮下注射或口服药物，在每种试验中媒介物和4种药物剂量予以试验。每只笼中的一只老鼠接收一次处理，这种处理顺序是轮流的，因为对笼子的打扰增加了老鼠的活动性，从而增加它们的体温。服药30分钟后再测量老鼠的体温该步骤在服药60、90.120分钟后再重复，所得体温数据进行方差分析。按时间互相作用的最显著的数据作为药物效果标志。为了得到最小有效量、服药组每只老鼠的平均体温在每个时间点与媒介物组的体温相比较，采用具有P＜0.02有效水平Donnett′s t-检验。生物利用率值可通过计算口服及皮下注射施药后最小有效量间的比值得到。
权利要求
1.具有通式Ⅰ的3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的
游离碱及其药物上可接受盐的外消旋物及(R)-对映体。
2.3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的游离碱及其药物上可接受的盐。
3.(R)-3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的游离碱及药物上可接受的盐。
4.含权利要求1-3中任一化合物作为活性组份的药物组合物。
5.权利要求1-3任意一条所定义的化合物在治疗上的用途。
6.权利要求1-3任意一条所定义的化合物作为5-HT1A促效药的用途。
7.权利要求1-3任意一条所定义的化合物在治疗中枢神经系统疾病，特别是5-羟色胺调节的疾病上的用途。
8.权利要求7所定义化合物，在治疗抑郁、焦虑、厌食、老年性痴呆、偏头痛、强迫观念与行为的疾病、中风、Alzheimer′s疾病、高血压、温度调节及性障碍、疼痛以及心血管系统失调上的用途。
9.权利要求1-3任意一条所定义化合物的用途是生产药物以治疗中枢神经系统疾病，特别是5-羟色胺调节的疾病。
10.按权利要求9的用途是生产药物以治疗抑郁、焦虑、厌食、老年性痴呆、偏头痛、强迫观念与行为的疾病、Alzheimer′s疾病、温度调节及性障碍、疼痛以及心血管系统失调的疾病。
11.治疗中枢神经系统疾病，特别是5-羟色胺调节的疾病的方法，是向动物或人施用权利要求1-3任意一条所定义的化合物。
12.按照权利要求11的方法，治疗抑郁、焦虑、老年性痴呆、偏头痛、强迫观念与行为的疾病、中风、Alzheimer′s疾病、温度调节及性障碍、疼痛及心血管系统失调。
13.制备权利要求1所定义化合物的方法，由ⅰ，转化通式Ⅵ化合物
其中Y是离去基团，这是采用零价过渡金属催化循环，用CO处理后再胺化实现的，ⅱ.采用异丙胺将通式Ⅶ化合物胺化
其中Z是Cl、Br、OH或ORp，而Rp为C1-C6烷基，可得到通式Ⅰ化合物，这里若需要，可转化为盐。
14.按权利要求13的方法。制备3-(N，N-异丙基，n-丙氨基)-5-三氟甲磺酰氧基苯并二氢吡喃是用异丙胺胺化得到权利要求1所定义的化合物。
15.按权利要求1及实质上描述的化合物，制备方法、药物制剂、治疗的方法和用途。
全文摘要
3-(N-异丙基-N-n-丙氨基)-5-(N-异丙基)氨基甲酰基苯并二氢吡喃的外消旋物及(R)-对映体和它们的盐，它们的制备方法、药物组合物，治疗CNS疾病的用途和方法。
文档编号C07D311/58GK1072411SQ9211282
公开日1993年5月26日 申请日期1992年10月8日 优先权日1991年10月8日
发明者E·M·哈马堡, L·G·约翰逊, S·B·罗斯, S·O·托堡 申请人:阿斯特拉公司