本发明属于分离提取技术领域，涉及一种从茶叶中提取儿茶素的制备方法。
背景技术：
茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，主要由儿茶素、类黄酮、花青素与酚酸等四类物质组成，其中最重要的是以儿茶素为主体的黄烷醇类,其含量约占多酚类总量70%以上，毛清黎等将儿茶素类的保健及药理功能总结为“三抗(抗癌、抗衰老、抗氧化)”、“三降(降血糖、降血脂、降血压)”及“三消(消毒、消炎、消臭)” (“茶叶儿茶素保健及药理功能研究新进展”，毛清黎等，《食品科学》，第28卷第8期，第584-589页, 2007年8月)，儿茶素是茶树次生代谢的重要成分,也是茶叶保健功效的重要成分,对茶叶的色、香、味品质的形成有重要作用。
现有技术中，在茶叶中提取儿茶素常用的制备方法主要包括有机溶剂萃取法，超临界流体萃取法，离子沉淀法等。其中，有机溶剂萃取法主要是在整个过程使用多种有机溶剂，且有机溶剂用量大，工序多，工艺繁琐，有效成分含量和提取率低。超临界流体萃取法主要表现在一次的提取率很低，同时还与其他的一些因素如萃取时间、流体的流速等有关。离子沉淀法，由于该法沉淀转溶要调节pH值，在此期间部分儿茶素已氧化因而产品颜色一般较深，影响品质，还由于提取工艺的限制，产品中往往杂质含量高，使其仅停留在实验室少量制备而不易于工业化生产，限制了茶叶提取物的推广应用。
技术实现要素：
本发明的目的是克服现有技术中操作复杂，溶剂消耗量大，提取率不高，不易于工业化控制的问题。为此，本发明提供了一种从茶叶中提取儿茶素的制备方法。
该制备方法包括以下工艺流程：
1）、原料前处理：将茶叶在80～120℃的条件下烘干，磨碎成茶叶样品；
2）、微波辅助浸提：称取茶叶样品于聚四氟乙烯消解罐中，加入质量浓度为60%~80%的乙醇溶液，拧紧罐口，然后置于微波消解仪内，进行微波浸提，过滤浓缩滤液；
3）、分离纯化：将提取液用等量氯仿反复萃取，静置分层，合并水溶液，再用等量的乙酸乙酯反复萃取水溶液，除去水相，酯相减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后制得儿茶素粗提品；
4）、成品加工：将儿茶素粗提品先经层析预分离，再用制备型HPLC纯化精制，制得高纯度儿茶素。
上述一种从茶叶中提取儿茶素的制备方法，所述的磨碎是过80目筛。
上述一种从茶叶中提取儿茶素的制备方法，所述的微波消解仪，设定功率为720~900 W，时间为5~7min，温度为80～90℃，料液比为1:80。
上述一种从茶叶中提取儿茶素的制备方法，所述的成品加工具体如下所示：
粗提取儿茶素10g，加水溶解至100ml，过滤，上Sephadex LH-20柱，先以纯水500ml洗脱，然后依次以1000ml体积分数为30%、45%、60%、80%的丙酮梯度洗脱，每100ml为一个单位流份，分别收集作HPLC分析，儿茶素粗品得到四种流份：在用纯水和30%丙酮洗脱时，流出主要含有咖啡因物质的流份一；接着非酯型儿茶素和酯型儿茶素被分离，并先后流出的流份二和流份三，其中所述非酯型儿茶素包括表没食子儿茶素EGC、儿茶素C和表儿茶素EC，所述酯型儿茶素包括表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG和没食子儿茶素没食子酸酯GCG；最后在用体积分数为80%的丙酮洗脱时，流出主要含有色素杂质的流份四。
经层析预分离，含有咖啡因的流份一和含有色素物质的流份四被除去，合并流份二和流份三经浓缩除去丙酮，将经浓缩除去丙酮后的溶液，用纯水和80％甲醇溶液作为洗脱剂洗脱，并作HPLC分析，将分别含有表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、没食子儿茶素没食子酸酯GCG、表儿茶素没食子酸酯ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素，所得儿茶素产品纯度较高。
本发明的有益效果：通过对比现有技术，本发明采用微波辅助浸提，其加热快、升温高，消解能力强，消耗的溶剂少，减少了儿茶素在提取时的氧化，提取物品质大大提高；用多次萃取、层析分离、HPLC精制的方法连续提取分离得到儿茶素纯品，其方法操作简单，所得样品纯度高，易于工业化控制。
具体实施方式
下面通过实施例进一步详述。
实施例一
将茶叶在80℃的条件下烘干，过80目筛成茶叶样品；称取100g茶叶样品于聚四氟乙烯消解罐中，按料液比为1:80加入质量浓度60%的乙醇溶液，拧紧罐口，然后置于微波消解仪内，设定功率为720W，时间为5min，温度为80℃，进行微波浸提，然后过滤洗涤，减压蒸馏回收乙醇，得提取液；将提取液用等量氯仿反复萃取，静置分层，合并水溶液，再用等量的乙酸乙酯反复萃取水溶液，除去水相，酯相减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后制得儿茶素粗提品。将儿茶素粗提品先经层析预分离, HPLC纯化精制具体如下所示：
粗提取儿茶素10g，加水溶解至100ml，过滤，上Sephadex LH-20柱，先以纯水500ml洗脱，然后依次以1000ml体积分数为30%、45%、60%、80%的丙酮梯度洗脱，每100ml为一个单位流份，分别收集在三角瓶中，然后对每个瓶中流份作HPLC分析，儿茶素粗品得到四种流份：在用纯水和30%丙酮洗脱时，流出主要含有咖啡因物质的流份一；接着非酯型儿茶素和酯型儿茶素被分离，并先后流出的流份二和流份三；其中所述非酯型儿茶素包括表没食子儿茶素EGC、儿茶素C和表儿茶素EC，所述酯型儿茶素包括表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG和没食子儿茶素没食子酸酯GCG；最后在用体积分数为80%的丙酮洗脱时，流出主要含有色素杂质的流份四。经层析预分离，含有咖啡因的流份一和含有色素物质的流份四被除去，合并流份二和流份三经浓缩除去丙酮，将经浓缩除去丙酮后的溶液，用纯水和80％甲醇溶液作为洗脱剂洗脱，并作HPLC分析，将分别含有表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、没食子儿茶素没食子酸酯GCG、表儿茶素没食子酸酯ECG的流份合并，40℃减压真空回收洗脱溶剂，得各单体儿茶素，所得儿茶素产品纯度较高。装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达90％以上。
实施例二
将茶叶在90℃的条件下烘干，过80目筛成茶叶样品；称取100g茶叶样品于聚四氟乙烯消解罐中，按料液比为1:80加入质量浓度70%的乙醇溶液，拧紧罐口，然后置于微波消解仪内，设定功率为800W，时间为6min，温度为90℃，进行微波浸提，然后过滤洗涤，减压蒸馏回收乙醇，得提取液；将提取液用等量氯仿反复萃取，静置分层，合并水溶液，再用等量的乙酸乙酯反复萃取水溶液，除去水相，酯相减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后制得儿茶素粗提品。将儿茶素粗提品先经层析预分离，再用制备型HPLC纯化精制（同实施例一的相应步骤），制得高纯度儿茶素。装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达90％以上。
实施例三
将茶叶在100℃的条件下烘干，过80目筛成茶叶样品；称取100g茶叶样品于聚四氟乙烯消解罐中，按料液比为1:80加入质量浓度80%的乙醇溶液，拧紧罐口，然后置于微波消解仪内，设定功率为900W，时间为7min，温度为100℃，进行微波浸提，然后过滤洗涤，减压蒸馏回收乙醇，得提取液；将提取液用等量氯仿反复萃取，静置分层，合并水溶液，再用等量的乙酸乙酯反复萃取水溶液，除去水相，酯相减压蒸馏回收乙酸乙酯，再经真空浓缩、冷冻干燥后制得儿茶素粗提品。将儿茶素粗提品先经层析预分离，再用制备型HPLC纯化精制（同实施例一的相应步骤），制得高纯度儿茶素。装入密闭容器避光防潮保存，备用。经检测，其纯度均达90％以上。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。