一种重组腺病毒及其构建方法与流程

文档序号:12697245阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组腺病毒,其特征在于:在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点Bgl II和Sal I酶切位点中插入猪瘟病毒E2基因,在腺病毒的CMV启动子下游Kpn I和Not I酶切位点中插入蓝耳病病毒GP5基因。

2.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒,其特征在于:所述猪瘟病毒为常规的市购病毒,该病毒的E2基因在GenBank中的登录号为:AY775178.2。

3.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒,其特征在于:所述蓝耳病病毒为常规的市购病毒,该病毒的GP5基因在GenBank中的登录号为:AY740012.1。

4.根据权利要求1所述的一种重组腺病毒,其特征在于:所述腺病毒为常规的市购人-5型非复制型腺病毒。

5.权利要求1所述重组腺病毒的构建方法,其特征在于包括以下步骤:

A.从市购的猪瘟病毒和蓝耳病病毒中分别扩增出E2和GP5基因;

B.将步骤A获得的猪瘟病毒E2基因通过Bgl II和Sal I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中,形成腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2;

C.将步骤A获得的蓝耳病病毒GP5基因通过Kpn I和Not I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中,形成腺病毒穿梭载体 pAdTrack-GP5;

D.将步骤C的腺病毒穿梭载体pAdTrack-GP5按常规的PCR方法扩增出含有CMV启动子的CMV-GP5基因,通过Xhol I和Xba I酶切位点插入至步骤B的腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2中的Xhol I和Xba I酶切位点中,形成重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2-CMV-GP5;

E.将步骤D的重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2-CMV-GP5经Pme I酶切线性化后,转化到含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,形成重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E2-CMV-GP5;

F.将重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E2-CMV-GP5经Pac I线性化后,转染人胚胎肾细胞HEK2983中,包装出重组腺病毒rAd-E2-CMV-GP5。

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