非典型蛋白激酶C的氮杂喹唑啉抑制剂的制作方法

本申请要求2014年3月25日提交的美国临时申请第61/970,006号的权益，其整体通过引用并入本文。

背景

PKCι和PKCζ(分别地，存取编号NM_002740和NM_002744)一起定义蛋白激酶C(PKC)家族的非典型的子类。aPKC在结构上和功能上区别于其他PKC子类，是经典的/常规的且新颖的，因为aPKC的催化活性不取决于二酰甘油和钙(Ono,Y.,Fujii,T.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,Igarashi,K.,和Nishizuka,Y.(1989).Protein kinase C zeta subspecies from rat brain:its structure,expression,and properties.Proc Natl Acad Sci U S A 86,3099-3103)。结构上，PKCι和PKCζ包含C末端丝氨酸/苏氨酸激酶域(AGC类)和包含Phox Bem 1(PB1)域的N末端调节区，所述Phox Bem 1域涉及介导对于aPKC功能是重要的蛋白:蛋白相互作用。在氨基酸水平，aPKC共享72％总同源性(overall homology)，然而，激酶域共享84％同一性并且在活性位点中仅单个氨基酸不同。此显著的同源性表明，ATP竞争性配体将不被预期呈现明显的aPKC同种型选择性。

aPKC已经涉及不同数目的信号传导通路，证明冗余的和有区别的信号传导功能两者。两种同种型已经在调节在多细胞类型中的细胞极性的确定和保持的机制中作为核心选手出现(在Suzuki,A.和Ohno,S.(2006).The PAR-aPKC system:lessons in polarity.J Cell Sci 119,979-987中评述)。使用敲除小鼠的其功能的基因解剖还已经揭示PKCζ在调节NF-kB信号传导中的优先的作用(Leitges,M.,Sanz,L.,Martin,P.,Duran,A.,Braun,U.,Garcia,J.F.,Camacho,F.,Diaz-Meco,M.T.,Rennert,P.D.,和Moscat,J.(2001)。Targeted disruption of the zetaPKC gene results in the impairment of the NF-kappaB pathway.Mol Cell 8,771-780)以及PKCι在胰岛素分泌和行为中的优先的作用(Farese,R.V.,Sajan,M.P.,Yang,H.,Li,P.,Mastorides,S.,Gower,W.R.,Jr.,Nimal,S.,Choi,C.S.,Kim,S.,Shulman,G.I.等人(2007).Muscle-specific knockout of PKC-lambda impairs glucose transport and induces metabolic and diabetic syndromes.J Clin Invest 117,2289-2301)。此外，两种同种型已经涉及癌症的发病机理，提出强有力的理由以用于将抑制aPKC作为新颖的治疗手段。

在非小细胞肺癌(NSCLC)中，PKCι是已知的致癌基因。在一项研究中，示出在69％的NSCLC病例中PKCι在蛋白水平下过度表达。与此一致，示出PKCι基因(位于染色体3q26上的PRKCI)在36.5％的被检查的NSCLC肿瘤中扩增，包括96％的鳞状细胞癌亚型(Regala,R.P.,Weems,C.,Jamieson,L.,Khoor,A.,Edell,E.S.,Lohse,C.M.和Fields,A.P.(2005b).Atypical protein kinase C iota is an oncogene in human non-small cell lung cancer.Cancer Res 65,8905-8911)。3q26的扩增也已经在44％的卵巢癌中被报道，包括>70％的浆液性上皮卵巢癌(serous epithelial ovarian cancer)，其中3q26扩增被翻译为增加的PKCι蛋白表达中。此外，增加的PKCι表达与NSCLC和卵巢癌的不良预后相关，在NSCLC和卵巢癌中，PKCι可以用作侵袭性疾病(aggressive disease)的诊断生物标志物(Eder,A.M.,Sui,X.,Rosen,D.G.,Nolden,L.K.,Cheng,K.W.,Lahad,J.P.,Kango-Singh,M.,Lu,K.H.,Warneke,C.L.,Atkinson,E.N.等人(2005).Atypical PKCiota contributes to poor prognosis through loss of apical-basal polarity and cyclin E overexpression in ovarian cancer.Proc Natl Acad Sci U S A 102,12519-12524；Zhang,L.,Huang,J.,Yang,N.,Liang,S.,Barchetti,A.,Giannakakis,A.,Cadungog,M.G.,O'Brien-Jenkins,A.,Massobrio,M.,Roby,K.F.等人(2006).Integrative genomic analysis of protein kinase C(PKC)family identifies PKCiota as a biomarker and potential oncogene in ovarian carcinoma.Cancer Res 66,4627-4635)。3q26扩增已经在许多其他癌症包括食管鳞状细胞癌(Yang,Y.L.,Chu,J.Y.,Luo,M.L.,Wu,Y.P.,Zhang,Y.,Feng,Y.B.,Shi,Z.Z.,Xu,X.,Han,Y.L.,Cai,Y.等人(2008).Amplification of PRKCI,located in 3q26,is associated with lymph node metastasis in esophageal squamous cell carcinoma.Genes Chromosomes Cancer 47,127-136)和乳腺癌(Kojima,Y.,Akimoto,K.,Nagashima,Y.,Ishiguro,H.,Shirai,S.,Chishima,T.,Ichikawa,Y.,Ishikawa,T.,Sasaki,T.,Kubota,Y.等人(2008).The overexpression and altered localization of the atypical protein kinase C lambda/iota in breast cancer correlates with the pathologic type of these tumors.Hum Pathol 39,824-831)中被观察到，这表明PKCι还可以参与这些疾病的发病机理。

在NSCLC中，PKCι的主要功能是经由Rac1/PAK/MEK/ERK信号传导轴驱动被转化的生长。然而，PKCι还用于NSCLC存活、抵抗化学疗法以及经由独特的通路入侵(在Fields,A.P.和Regala,R.P.(2007).Protein kinase C iota:human oncogene,prognostic marker and therapeutic target.Pharmacol Res 55,487-497中评述)。在卵巢癌中，被转化的生长与解除管制的上皮细胞极性和增加的周期E表达有关(Eder等人,2005)，表明PKCι可以通过多种机制影响癌症表型。令人信服的证据已经出现以表明，抑制PKCι对战胜由增加的PKCι表达表征的肿瘤可能是有用的治疗方法。在转基因模型中，在结肠中具有升高的PKCι活性的小鼠更易患致癌物诱发的结肠癌发生，并且PKCι的激酶死亡突变体(kinase-dead mutant)的表达阻止肠道细胞通过致癌性Ras转化(Murray,N.R.,Jamieson,L.,Yu,W.,Zhang,J.,Gokmen-Polar,Y.,Sier,D.,Anastasiadis,P.,Gatalica,Z.,Thompson,E.A.和Fields,A.P.(2004).Protein kinase Ciota is required for Ras transformation and colon carcinogenesis in vivo.J Cell Biol 164,797-802)。最后，PKCι通过金衍生物-金硫代苹果酸盐(ATM)的基因抑制或药理学抑制阻止NSCLS细胞在软琼脂中的生长并且明显地减小NSCLC的异种移植模型中的肿瘤体积(Regala,R.P.,Thompson,E.A.,和Fields,A.P.(2008).Atypical protein kinase C iota expression and aurothiomalate sensitivity in human lung cancer cells.Cancer Res 68,5888-5895；Regala,R.P.,Weems,C.,Jamieson,L.,Copland,J.A.,Thompson,E.A.和Fields,A.P.(2005a).Atypical protein kinase Ciota plays a critical role in human lung cancer cell growth and tumorigenicity.J Biol Chem 280,31109-31115)。

尽管aPKC同种型之间高度的相似性，但PKCζ在癌症中的作用区别于PKCι在癌症中的作用。PKCζ通过响应于尼古丁磷酸化Bax和拮抗Bax的促凋亡效应在NSCLC细胞存活中起作用(Xin,M.,Gao,F.,May,W.S.,Flagg,T.和Deng,X.(2007).Protein kinase Czeta abrogates the proapoptotic function of Bax through phosphorylation.J Biol Chem 282,21268-21277)。PKCζ活性还已经与抵抗范围广泛的细胞毒性剂和基因毒性剂的抗性有关。例如，在人类白血病细胞中，PKCζ的过度表达赋予抵抗1-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(ara-C)、道诺霉素、依托泊苷、以及米托蒽醌诱发的细胞凋亡的抗性(Filomenko,R.,Poirson-Bichat,F.,Billerey,C.,Belon,J.P.,Garrido,C.,Solary,E.和Bettaieb,A.(2002).Atypical protein kinase C zeta as a target for chemosensitization of tumor cells.Cancer Res 62,1815-1821；Plo,I.,Hernandez,H.,Kohlhagen,G.,Lautier,D.,Pommier,Y.,和Laurent,G.(2002).Overexpression of the atypical protein kinase C zeta reduces topoisomerase II catalytic activity,cleavable complexes formation,and drug-induced cytotoxicity in monocytic U937leukemia cells.J Biol Chem 277,31407-31415)。此外，通过激酶死亡突变体的表达抑制PKCζ活性使白血病细胞对依托泊苷在体外和体内两者中的细胞毒性效应敏感(Filomenko等人,2002).Atypical protein kinase C regulates dual pathways for degradation of the oncogenic coactivator SRC-3/AIB1.Mol Cell 29,465-476)，并且已经假定这些蛋白质中的两者均在乳腺癌中在他莫昔芬抗性中起作用(Iorns,E.,Lord,C.J.和Ashworth,A.(2009).Parallel RNAi and compound screens identify the PDK1pathway as a target for tamoxifen sensitization.Biochem J 417,361-370；Osborne,C.K.,Bardou,V.,Hopp,T.A.,Chamness,G.C.,Hilsenbeck,S.G.,Fuqua,S.A.,Wong,J.,Allred,D.C.,Clark,G.M.和Schiff,R.(2003).Role of the estrogen receptor coactivator AIB1(SRC-3)and HER-2/neu in tamoxifen resistance in breast cancer.J Natl Cancer Inst 95,353-361)。这些研究一起表明，抑制PKCζ活性可以通过充当对大量的在临床中常用的化学毒性剂的化学敏化剂而具有有益的治疗效果。

PKCζ的小分子抑制可能具有重要的治疗益处的另外的证据最近已经从将PKCζ信号传导连接至mTOR通路的肿瘤模型中出现。PKCζ在滤泡性淋巴瘤中在构成上被激活并且已经被识别为用于抗CD20治疗抗体利妥昔单抗的新颖的靶标(Leseux,L.,Laurent,G.,Laurent,C.,Rigo,M.,Blanc,A.,Olive,D.和Bezombes,C.(2008).PKC zeta mTOR pathway:a new target for rituximab therapy in follicular lymphoma.Blood 111,285-291)。利妥昔单抗通过靶向PKCζ-MAPK-mTOR通路抑制滤泡性淋巴瘤增殖，表明PKCζ是利妥单抗的靶标以及其抗白血病效应的关键调节剂两者。mTOR/p70S6K通路通过PKCζ的调节还已经涉及将前列腺癌细胞转变成雄激素非依赖性状态(Inoue,T.,Yoshida,T.,Shimizu,Y.,Kobayashi,T.,Yamasaki,T.,Toda,Y.,Segawa,T.,Kamoto,T.,Nakamura,E.和Ogawa,O.(2006).Requirement of androgen-dependent activation of protein kinase Czeta for androgen-dependent cell proliferation in LNCaP Cells and its roles in transition to androgen-independent cells.Mol Endocrinol 20,3053-3069)。最后，包含Par4(PKCζ的负调节剂)的纯合子缺失的小鼠呈现极大地增强的PKCζ活性。这些小鼠自发地发展前列腺和子宫内膜的肿瘤，并且加强Ras诱发的肺癌发生，这与PKCζ在肺癌中的作用一致(Garcia-Cao,I.,Duran,A.,Collado,M.,Carrascosa,M.J.,Martin-Caballero,J.,Flores,J.M.,Diaz-Meco,M.T.,Moscat,J.和Serrano,M.(2005).Tumour-suppression activity of the proapoptotic regulator Par4.EMBO Rep 6,577-583；Joshi,J.,Fernandez-Marcos,P.J.,Galvez,A.,Amanchy,R.,Linares,J.F.,Duran,A.,Pathrose,P.,Leitges,M.,Canamero,M.,Collado,M.等人(2008).Par-4inhibits Akt and suppresses Ras-induced lung tumorigenesis.EMBO J 27,2181-2193)。

对于用作药物剂的aPKC抑制剂存在需求。

概述

本申请提供式(I)的化合物

和/或其盐，其中R¹、G和X如本文所定义。

式(I)的化合物和/或其盐具有aPKC抑制活性，并且可以被用于治疗aPKC依赖性紊乱或状况。

本申请还提供药物组合物，所述药物组合物包含式(I)的化合物和/或其盐连同至少一种其药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂。

在另一方面中，本申请提供治疗患有aPKC依赖性紊乱或状况的受试者的方法，所述方法包括：向受试者施用式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。

本申请还提供治疗受试者中的增殖性紊乱的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。

详述

I.定义

如本文所使用的“约”当指的是可测量的值例如量、短暂的持续时间及类似值时，意指涵盖该值的合理的变化，例如比如从该特定值的±10％。例如，措辞“约50”涵盖50的合理的变化，例如数值50的±10％，或从45至55。

“烷基(alkyl)”或“烷基(alkyl group)”指的是支链的或非支链的饱和烃链的单基团(monoradical)。实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、异丙基、叔丁基、异丁基等等。烷基典型地包含1-10个碳原子，例如1-6个碳原子或1-4个碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“亚烷基(alkylene)”或“亚烷基(alkylene group)”指的是支链的或非支链的饱和烃链的双基团(diradical)。实例包括但不限于亚甲基(–CH₂–)、亚乙基异构体(–CH(CH₃)–和–CH₂CH₂–)、亚丙基异构体(–CH(CH₃)CH₂–、–CH(CH₂CH₃)–、–C(CH₃)₂–、以及–CH₂CH₂CH₂–)等等。亚烷基典型地包含1-10个碳原子，例如1-6个碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“烯基(alkenyl)”或“烯基(alkenyl group)”指的是包含至少一个双键的支链的或非支链的烃链的单基团。实例包括但不限于乙烯基、3-丁烯-1-基、2-乙烯基丁基、以及3-己烯-1-基。烯基典型地包含2-10个碳原子，例如2-6个碳原子或2-4个碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“炔基(alkynyl)”或“炔基(alkynyl group)”指的是包含至少一个三键的支链的或非支链的烃链的单基团。实例包括但不限于乙炔基、3-丁炔-1-基、丙炔基、2-丁炔-1-基、以及3-戊炔-1-基。炔基典型地包含2-10个碳原子，例如2-6个碳原子或2-4个碳原子，并且可以是被取代的或未被取代的。

“芳基(aryl)”或“芳基(aryl group)”指的是苯基和7-15元单基团双环或三环烃环体系，包括桥环体系、螺环体系、和/或稠环体系，其中环中的至少一个是芳香族的。芳基可以是被取代的或未被取代的。实例包括但不限于萘基、茚满基(indanyl)、1,2,3,4-四氢萘基、6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基、以及6,7,8,9-四氢-5H-苯并环庚烯基。芳基可以包含6个环原子(即苯基)或9个至15个环原子，例如6个环原子(即苯基)或9-11个环原子，例如6个环原子(即苯基)、9个或10个环原子。

“亚芳基(arylene)”或“亚芳基(arylene group)”指的是亚苯基(–C₆H₄–)或7-15元双基团双环或三环烃环体系，包括桥环体系、螺环体系、和/或稠环体系，其中环中的至少一个是芳香族的。亚芳基可以是被取代的或未被取代的。例如，亚芳基可以包含6个环原子(即亚苯基)或9个至15个环原子；例如6个环原子(即亚苯基)或9-11个环原子；例如6个环原子(即亚苯基)、9个或10个环原子。亚芳基还可以包括在环碳上被一个或更多个-OH官能团(其可以进一步发生互变异构以给出环C＝O基团)取代的环体系。

“芳基烷基(arylalkyl)”或“芳基烷基(arylalkyl group)”指的是其中氢原子被芳基替代的烷基，其中烷基和芳基是如先前所定义的(即芳基烷基-)。芳基烷基可以是被取代的或未被取代的。实例包括但不限于苄基(C₆H₅CH₂–)。

“环烷基(cyclolalkyl)”或“环烷基(cyclolalkyl group)”指的是单基团非芳香族碳环体系，其可以是饱和的或不饱和的、被取代的或未被取代的，并且可以是单环、双环、或三环，并且可以是桥接的、螺环的、和/或稠合的。实例包括但不限于环丙基、环丙烯基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、降冰片基、降冰片烯基、双环[2.2.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.1]庚烯、双环[3.1.1]庚烷、双环[3.2.1]辛烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷、双环[3.3.1]壬烷、以及双环[3.3.2]癸烷。环烷基可以包含从3个至10个环原子，例如3个至7个环原子(例如3个环原子、5个环原子、6个环原子或7个环原子)。

“环烷基烷基(cyclolalkylalkyl)”或“环烷基烷基(cyclolalkylalkyl group)”指的是其中氢原子被环烷基替代的烷基，其中烷基和环烷基是如先前所定义的(即环烷基烷基-)。环烷基烷基可以是被取代的或未被取代的。实例包括但不限于环己基甲基(C₆H₁₁CH₂–)。

“卤代烷基(haloalkyl)”或“卤代烷基(haloalkyl group)”指的是其中一个或更多个氢原子被卤素原子替代的烷基。卤代烷基包括饱和的烷基以及不饱和的烯基和炔基两者，例如比如–CF₃、–CHF₂、–CH₂F、–CF₂CF₃、–CHFCF₃、–CH₂CF₃、–CF₂CH₃、–CHFCH₃、–CF₂CF₂CF₃、–CF₂CH₂CH₃、–CF＝CF₂、–CCl＝CH₂、–CBr＝CH₂、–CI＝CH₂、–C≡C-CF₃、–CHFCH₂CH₃以及–CHFCH₂CF₃。

“卤素”包括氟原子、氯原子、溴原子以及碘原子。

“杂芳基(heretoaryl)”或“杂芳基(heretoaryl group)”指的是(a)除了碳原子之外还包含至少一个杂原子例如氮、氧或硫的5元和6元单环芳香族环，以及(b)除了碳原子之外还包含至少一个杂原子例如氮、氧或硫并且其中环中的至少一个是芳香族的7-15元双环和三环。杂芳基可以是被取代的或未被取代的，并且可以是桥接的、螺环的、和/或稠合的。实例包括但不限于2,3-二氢苯并呋喃基、1,2-二氢喹啉基、3,4-二氢异喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,2,3,4-四氢喹啉基、苯并噁嗪基、苯并噻嗪基、色满基、呋喃基、2-呋喃基、3-呋喃基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基、嘧啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、或5-嘧啶基、吡唑基、吡咯基、2-吡咯基、或3-吡咯基、吡嗪基、哒嗪基、3-哒嗪基或4-哒嗪基、2-吡嗪基、噻吩基、2-噻吩基、3-噻吩基、四唑基、噻唑基、噻二唑基、三嗪基、三唑基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、哒嗪-4-基、吡嗪-2-基、萘啶基、蝶啶基、酞嗪基、嘌呤基、咯嗪基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、2H-1-苯并吡喃基、苯并噻二嗪基、苯并噻嗪基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、噌啉基、呋喃并吡啶基、吲哚啉基、吲嗪基、吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、或7-吲哚基、3H-吲哚基、喹唑啉基、喹喔啉基、异吲哚基、异喹啉基、10-氮杂-三环[6.3.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、12-氧杂-10-氮杂-三环[6.3.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、12-氮杂-三环[7.2.1.0^2,7]十二-2(7),3,5-三烯基、10-氮杂-三环[6.3.2.0^2,7]十三-2(7),3,5-三烯基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[d]氮杂环庚三烯基、1,3,4,5-四氢-苯并[d]氮杂环庚三烯-2-酮基、1,3,4,5-四氢-苯并[b]氮杂环庚三烯-2-酮基、2,3,4,5-四氢-苯并[c]氮杂环庚三烯-1-酮基、1,2,3,4-四氢-苯并[e][1,4]二氮杂环庚三烯-5-酮基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂环庚三烯基、5,6,8,9-四氢-7-氧杂-苯并环庚烯基、2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂环庚三烯基、1,2,4,5-四氢-苯并[e][1,3]二氮杂环庚三烯-3-酮基、3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚三烯基、3,4-二氢-2H-苯并[f][1,4]氧氮杂环庚三烯-5-酮基、6,7,8,9-四氢-5-硫杂-8-氮杂-苯并环庚烯基、5,5-二氧代-6,7,8,9-四氢-5-硫杂-8-氮杂-苯并环庚烯基以及2,3,4,5-四氢-苯并[f][1,4]氧氮杂环庚三烯基。例如，杂芳基可以包含5个、6个、或8-15个环原子。作为另一个实例，杂芳基可以包含5个至10个环原子，例如5个、6个、9个或10个环原子。

“杂芳基烷基(heteroarylalkyl)”或“杂芳基烷基(heteroarylalkyl group)”指的是其中氢原子被杂芳基替代的烷基，其中烷基和杂芳基是如先前所定义的(即杂芳基烷基-)。杂芳基烷基可以是被取代的或未被取代的。实例包括但不限于吡啶基甲基异构体

“杂环烷基(heterocycloalkyl)”或“杂环烷基(heterocycloalkyl group)”指的是可以是饱和的或不饱和的、可以是被取代的或未被取代的、可以是桥接的、螺环、和/或稠合的并且除了碳原子之外还包含至少一个杂原子例如氮、氧、硫或磷的3-15元单环、双环、以及三环非芳香族环。实例包括但不限于四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌啶基(piperidyl)、哌嗪基、吲哚啉基、异吲哚啉基、吗啉基、硫代吗啉基、高吗啉基(homomorpholinyl)、高哌啶基(homopiperidyl)、高哌嗪基(homopiperazinyl)、硫代吗啉基-5-氧化物、硫代吗啉基-S,S-二氧化物、吡咯烷基、四氢吡喃基、哌啶基(piperidinyl)、四氢噻吩基、高哌啶基、高硫代吗啉基-S,S-二氧化物、噁唑烷酮基(oxazolidinonyl)、二氢吡唑基、二氢吡咯基、二氢吡嗪基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基-5-氧化物、四氢噻吩基-S,S-二氧化物、高硫代吗啉基-5-氧化物、奎宁环基(quinuclidinyl)、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基、3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚基、3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛基、3,9-二氮杂-双环[4.2.1]壬基、2,6-二氮杂-双环[3.2.2]壬基、[1,4]氧膦杂环己基-4-氧化物、[1,4]氮膦杂环己基-4-氧化物、[1,2]氧磷杂环戊基-2-氧化物、膦杂环己基-1-氧化物、[1,3]氮磷杂环戊基-3-氧化物、[1,3]氧磷杂环戊基-3-氧化物以及7-氧杂双环[2.2.1]庚基。除了碳原子之外，杂环烷基可以包含至少一个氮、氧、或硫。例如，除了碳原子之外，杂环烷基可以包含至少一个氮或氧。除了碳原子之外，杂环烷基可以包含至少一个氮。杂环烷基可以包含碳原子和1个或2个氮原子。杂环烷基可以包含碳原子和氧原子。杂环烷基可以包含碳原子、氮原子、以及氧原子。杂环烷基可以包含碳原子、氮原子、以及硫原子。杂环烷基可以包含碳原子和硫原子。杂环烷基可以包含从3个至10个环原子。杂环烷基可以包含从3个至7个环原子。杂环烷基可以包含从5个至7个环原子，例如5个环原子、6个环原子或7个环原子。除非另外指示，否则前述杂环烷基可以是C附接的或N附接的(在这样是可能的情况下)并且导致产生稳定的结构。例如，哌啶基可以是哌啶-1-基(N-附接的)或哌啶-4-基(C-附接的)。

“亚杂环烷基(heterocycloalkylene)”或“亚杂环烷基(heterocycloalkylene group)”指的是可以是饱和的或不饱和的、可以是被取代的或未被取代的、可以是桥接的、螺环的、和/或稠合的并且除了碳原子之外还包含至少一个杂原子例如氮、氧、硫或磷的双基团3-15元单环、双环、以及三环非芳香族环体系。实例包括但不限于亚氮丙啶基异构体除了碳原子之外，亚杂环烷基可以包含至少一个氮、氧、或硫。除了碳原子之外，亚杂环烷基可以包含至少一个氮或氧。除了碳原子之外，亚杂环烷基可以包含至少一个氮。例如，亚杂环烷基可以包含从3个至10个环原子；例如从3个至7个环原子。亚杂环烷基可以包含从5个至7个环原子，例如5个环原子、6个环原子或7个环原子。除非另外指示，否则前述亚杂环烷基可以是C-附接的和/或N-附接的(在这样是可能的情况下)并且导致产生稳定的结构。亚杂环烷基还可以包括在环碳上被一个或更多个-OH官能团(其可以进一步发生互变异构以给出环C＝O基团)取代的和/或在环硫原子上被一个(1)或两个(2)氧原子取代以分别给出S＝O基团或SO₂基团的和/或在环磷上被氧原子取代以给出P＝O的环体系。

“杂环烷基烷基(heterocycloalkylalkyl)”或“杂环烷基烷基(heterocycloalkylalkyl group)”指的是其中氢原子被杂环烷基替代的烷基，其中烷基和杂环烷基是如先前所定义的(即杂环烷基烷基-)。杂环烷基烷基可以是被取代的或未被取代的。实例包括但不限于吡咯烷基甲基(C₄H₈NCH₂–)。

“药学上可接受的”指的是当被施用至人类时生理学上可耐受的材料，其通常不产生过敏性反应或其他不适宜反应，例如胃不适、头晕及类似反应。

“药物组合物”指的是可以被用于治疗人类中的疾病、状况、或紊乱的组合物。

“拟卤素”指的是–OCN、–SCN、–CF₃、以及–CN。

“稳定的”或“化学上稳定的”指的是充分坚固以从反应混合物中分离至有用的纯度程度的化合物。本申请仅仅涉及稳定的化合物的制备。当可选择的取代基的清单包括由于化合价要求、化学稳定性、或其他原因不可以被用于取代特定基团的成员时，该清单意图在上下文中被理解为包括清单中的适合于取代该特定基团的那些成员。例如，R¹可以是任选地被1-13个R¹⁹取代的C_1-6烷基；当R¹是甲基时，甲基任选地被1-3个R¹⁹取代。

“治疗有效量”指的是足以抑制、停止特定受试者或受试者群体中被治疗的紊乱或状况或足以引起特定受试者或受试者群体中被治疗的紊乱或状况的改进的化合物的量。例如，在人类或其他哺乳动物中，治疗有效量可以在实验室或临床环境中实验地确定，或可以是用于被治疗的特定疾病和受试者的由美国食品药物管理局或对应的外国机构的指南所要求的量。应当理解，合适的剂型、剂量、以及施用途径的确定是在药学和医学领域的普通技术水平内。

“治疗”指的是与被治疗的紊乱有关的或由被治疗的紊乱引起的至少一种症状或特性的急性的或预防性的减小或缓解。例如，治疗可以包括紊乱的若干症状的减小或紊乱的完全根除。

II.化合物

本申请的化合物通过但不限于以下编号的实施方案来描述。当较高编号的实施方案重新提及在可选物中的多个先前较低编号的实施方案并且包含在较低编号的实施方案中不存在的新的限制时，较高编号的实施方案意图是该可选物的每个以及所有的明确描述。例如，如果实施方案2重新提及实施方案1并且包含在实施方案1中不存在的限制，并且实施方案3重新提及实施方案1或实施方案2并且包含在实施方案1或实施方案2中不存在的限制，并且实施方案4重新提及实施方案1-3中任一项并且包含在实施方案1、实施方案2、或实施方案3中不存在的限制，那么实施方案4意图是具有实施方案1和实施方案4的限制的种类物的明确的描述，具有实施方案2和实施方案4(即实施方案1、实施方案2、和实施方案4)的限制的种类物的明确的描述，以及具有实施方案3和实施方案4(即实施方案1、实施方案3、和实施方案4，以及实施方案1、实施方案2、实施方案3和实施方案4)的限制的种类物的明确的描述。通过实例的方式，如果实施方案1是具有独立地作为烷基或芳基的R²、R³以及R⁴的式(I)的化合物，并且实施方案2是将R²定义为烷基的实施方案1的化合物，并且实施方案3是将R³定义为烷基的实施方案1或实施方案2的化合物，并且实施方案4是将R⁴定义为烷基的实施方案1-3中任一项的化合物，那么实施方案4是具有实施方案1和实施方案4的限制的种类物的明确的描述(即其中R²和R³是烷基或芳基并且R⁴是烷基的式(I)的化合物)，具有实施方案2和实施方案4的限制的种类物的明确的描述(即其中R³是烷基或芳基并且R²和R⁴是烷基的式(I)的化合物)，具有实施方案3和实施方案4的限制的种类物的明确的描述(即其中R²是烷基或芳基并且R³和R⁴是烷基的式(I)的化合物；以及其中R²、R³和R⁴全部是烷基的(I)的化合物)。

在这一点上，应当注意，当较高编号的实施方案提到较低编号的实施方案并且包含在较低编号的实施方案中不存在的关于基团的限制时，较高编号的实施方案应当在上下文中被解释成忽略遗漏的基团。例如，如果实施方案1叙述其中X是H、C_1-10烷基、或–C(＝O)R²⁸的式(I)的化合物，实施方案2叙述其中X是H或C_1-10烷基的实施方案1的化合物，并且实施方案3叙述其中R²⁸是烷基的实施方案1或实施方案2的化合物，那么实施方案3定义具有实施方案1和实施方案3的限制的种类物以及具有实施方案2和实施方案3(即实施方案1、实施方案2、和实施方案3)的限制的种类物。在通过实施方案2和实施方案3的限制所定义的种类物中，X不可能是–C(＝O)R²⁸；因此，此种类物应当被解释为忽略实施方案3R²⁸＝烷基的定义(即实施方案2和实施方案3的种类物具有与实施方案2的种类物相同的范围)。

本文使用结构式来定义本申请的化合物，该结构式不具体地叙述构成原子的质量数或同位素比。意图的是，本申请包括其中构成原子以同位素形式的任何比率存在的化合物。例如，碳原子可以以¹²C、¹³C、以及¹⁴C的任何比率存在；氢原子可以以¹H、²H、以及³H的任何比率存在；等等。优选地，在本申请的化合物中的构成原子以其同位素形式的天然存在的比率存在。

实施方案1

一种式(I)(I)的化合物及其盐，

其中：

G选自由以下组成的组：

X选自由以下组成的组：卤素、–CN、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)OR²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–C(＝O)C(＝O)R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴NR²⁴R²⁸、–N＝NR²⁸、–NR²⁴OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁸、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂NR²⁴R²⁸、–OR²⁸、–OC(＝O)R²⁸、–OC(＝O)NR²⁴R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、–OS(＝O)₂OR²⁸、–OS(＝O)₂NR²⁴R²⁸、–S(＝O)_nR²⁸、–S(＝O)₂NR²⁴R²⁸、以及–S(＝O)NR²⁴R²⁸；

或X选自由以下组成的组：C_1-10烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述中的每个任选地被1-10个R¹⁹取代，

R¹选自由以下组成的组：任选地被1-10个R¹⁹取代的C_3-11环烷基、C_1-6-卤代烷基、以及–OC_1-6烷基；

R²、R³、R⁴、R⁵各自独立地选自由以下组成的组：H、卤素、–CN、–C(＝O)R²⁰、–C(＝O)OR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、–C(＝O)C(＝O)R²⁰、–C(＝NR²⁵)R²⁰、–C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–C(＝NOH)NR²²R²³、–C(＝NOR²⁶)R²⁰、–C(＝NNR²²R²³)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)R²¹)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)OR²¹)R²⁰、–C(＝S)NR²²R²³、–NC、–NO₂、–NR²²R²³、–NR²⁴NR²²R²³、–N＝NR²⁴、–NR²⁴OR²⁶、–NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁰、–NR²⁴C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝S)R²⁰、–NR²⁴C(＝S)OR²⁰、–NR²⁴C(＝S)NR²²R²³、–NR²⁴S(＝O)₂R²¹、–NR²⁴S(＝O)₂NR²²R²³、–NR²⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR²⁴P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–NR²⁴P(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–NR²⁴P(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–OR²⁰、–OCN、–OC(＝O)R²⁰、–OC(＝O)NR²²R²³、–OC(＝O)OR²⁰、–OC(＝NR²⁵)NR²²R²³、–OS(＝O)R²⁰、–OS(＝O)₂R²⁰、–OS(＝O)₂OR²⁰、–OS(＝O)₂NR²²R²³、–OP(＝O)R³⁸R³⁸、–OP(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–OP(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–OP(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–Si(R²⁴)₃、–SCN、–S(＝O)_nR²⁰、–S(＝O)₂OR²⁰、–SO₃R²⁷、–S(＝O)₂NR²²R²³、–S(＝O)NR²²R²³、–SP(＝O)R³⁸R³⁸、–SP(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–SP(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、–SP(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)、–P(＝O)R³⁸R³⁸、–P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–P(＝O)(OR²⁰)(OR²⁰)、以及–P(＝O)(SR²⁰)(SR²⁰)；

或R²、R³、R⁴、R⁵各自独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

或R²和R³或R⁴和R⁵中的任一个可以与它们被附接至的原子一起形成C_6-11芳基、C_3-11环烷基、3-15元杂环烷基或5-15元杂芳基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

R¹⁹在每次出现时独立地选自由以下组成的组：任选地被1-13个R³⁹取代的C_1-6烷基、任选地被1-11个R³⁹取代的C_2-6烯基、任选地被1-9个R³⁹取代的C_2-6炔基、任选地被1-11个R³⁹取代的C_6-11芳基、任选地被1-19个R³⁹取代的C_7-16芳基烷基、任选地被1-21个R³⁹取代的C_3-11环烷基、任选地被1-32个R³⁹取代的C_4-17环烷基烷基、任选地被1-28个R³⁹取代的3-15元杂环烷基、任选地被1-40个R³⁹取代的4-21元杂环烷基烷基、任选地被1-15个R³⁹取代的5-15元杂芳基、任选地被1-27个R³⁹取代的6-21元杂芳基烷基、卤素、–CN、–C(＝O)R³⁰、–C(＝O)OR³⁰、–C(＝O)NR³²R³³、–C(＝O)C(＝O)R³⁰、–C(＝NR³⁵)R³⁰、–C(＝NR³⁵)NR³²R³³、–C(＝NOH)NR³²R³³、–C(＝NOR³⁶)R³⁰、–C(＝NNR³²R³³)R³⁰、–C(＝NNR³⁴C(＝O)R³¹)R³⁰、–C(＝NNR³⁴C(＝O)OR³¹)R³⁰、–C(＝S)NR³²R³³、–NC、–NO₂、–NR³²R³³、–NR³⁴NR³²R³³、–N＝NR³⁴、＝NR³⁰、＝NOR³⁰、–NR³⁴OR³⁶、–NR³⁴C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)OR³¹、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)OR³¹、–NR³⁴C(＝O)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝O)NR³⁴C(＝O)R³⁰、–NR³⁴C(＝O)NR³⁴C(＝O)OR³⁰、–NR³⁴C(＝NR³⁵)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝O)C(＝O)NR³²R³³、–NR³⁴C(＝S)R³⁰、–NR³⁴C(＝S)OR³⁰、–NR³⁴C(＝S)NR³²R³³、–NR³⁴S(＝O)₂R³¹、–NR³⁴S(＝O)₂NR³²R³³、–NR³⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR³⁴P(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–NR³⁴P(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–NR³⁴P(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–OR³⁰、＝O、–OCN、–OC(＝O)R³⁰、–OC(＝O)NR³²R³³、–OC(＝O)OR³⁰、–OC(＝NR³⁵)NR³²R³³、–OS(＝O)R³⁰、–OS(＝O)₂R³⁰、–OS(＝O)₂OR³⁰、–OS(＝O)₂NR³²R³³、–OP(＝O)R³⁸R³⁸、–OP(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–OP(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–OP(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–Si(R³⁴)₃、–SCN、＝S、–S(＝O)_nR³⁰、–S(＝O)₂OR³⁰、–SO₃R³⁷、–S(＝O)₂NR³²R³³、–S(＝O)NR³²R³³、–SP(＝O)R³⁸R³⁸、–SP(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–SP(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、–SP(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)、–P(＝O)R³⁸R³⁸、–P(＝O)(NR³²R³³)(NR³²R³³)、–P(＝O)(OR³⁰)(OR³⁰)、以及–P(＝O)(SR³⁰)(SR³⁰)；

R²⁰、R²¹、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R³⁰、R³¹、R³⁴、R³⁵、R³⁶以及R³⁷在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个(除了氢)可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

R²⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

R²²、R²³、R³²和R³³在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个(除了氢)可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

或任一R²²和R²³和/或R³²和R³³可以与它们被附接至的氮原子一起形成任选地被1-10个R¹⁹取代的3-15元杂环烷基或任选地被1-10个R¹⁹取代的5-15元杂芳基；

R³⁸在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代；

或附接至相同磷原子的任何两个R³⁸可以与连接它们的磷原子一起形成任选地被1-6个R¹⁹取代的3-10元杂环烷基；

R³⁹在每次出现时独立地选自由以下组成的组：任选地被1-13个卤素取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、6-21元杂芳基烷基、卤素、–CN、–C(＝O)R⁴⁰、–C(＝O)OR⁴⁰、–C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝O)C(＝O)R⁴⁰、–C(＝NR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝NOH)NR⁴⁰R⁴⁰、–C(＝NOR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰R⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝NNR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰)R⁴⁰、–C(＝S)NR⁴⁰R⁴⁰、–NC、–NO₂、–NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰NR⁴⁰R⁴⁰、–N＝NR⁴⁰、＝NR⁴⁰、＝NOR⁴⁰、–NR⁴⁰OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰C(＝O)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)NR⁴⁰C(＝O)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝O)C(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)R⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)OR⁴⁰、–NR⁴⁰C(＝S)NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰S(＝O)₂R⁴⁰、–NR⁴⁰S(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–NR⁴⁰P(＝O)R⁴¹R⁴¹、–NR⁴⁰P(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–NR⁴⁰P(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–NR⁴⁰P(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–OR⁴⁰、＝O、–OCN、–OC(＝O)R⁴⁰、–OC(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–OC(＝O)OR⁴⁰、–OC(＝NR⁴⁰)NR⁴⁰R⁴⁰、–OS(＝O)R⁴⁰、–OS(＝O)₂R⁴⁰、–OS(＝O)₂OR⁴⁰、–OS(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–OP(＝O)R⁴¹R⁴¹、–OP(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–OP(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–OP(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–Si(R⁴⁰)₃、–SCN、＝S、–S(＝O)_nR⁴⁰、–S(＝O)₂OR⁴⁰、–SO₃R⁴⁰、–S(＝O)₂NR⁴⁰R⁴⁰、–S(＝O)NR⁴⁰R⁴⁰、–SP(＝O)R⁴¹R⁴¹、–SP(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–SP(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、–SP(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)、–P(＝O)R⁴¹R⁴¹、–P(＝O)(NR⁴⁰R⁴⁰)(NR⁴⁰R⁴⁰)、–P(＝O)(OR⁴⁰)(OR⁴⁰)、以及–P(＝O)(SR⁴⁰)(SR⁴⁰)；

R⁴⁰在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、C_1-6烷基以及C_1-6卤代烷基；

R⁴¹在每次出现时独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基以及C_1-6卤代烷基；并且

n在每次出现时独立地选自由以下组成的组：0、1、以及2。

实施方案2.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丙基。

实施方案3.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丁基。

实施方案4A.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-卤代烷基。

实施方案4B.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是–OC_1-6烷基。

实施方案5.根据实施方案1至4中任一项所述的化合物，其中G是

实施方案6.根据实施方案1至4中任一项所述的化合物，其中G是

实施方案7.根据实施方案1至4中任一项所述的化合物，其中G是

实施方案8.根据实施方案1至7中任一项所述的化合物，其中X选自由以下组成的组：任选地被1-6个R¹⁹取代的3-10元杂环烷基、任选地被1-6个R¹⁹取代的5-10元杂芳基、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、以及–OR²⁸。

实施方案9.根据实施方案8所述的化合物，其中X选自由以下组成的组：任选地被1-6个R¹⁹取代的3-10元杂环烷基、任选地被1-6个R¹⁹取代的5-10元杂芳基、以及–OR²⁸。

实施方案10.根据实施方案1至9中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：H、卤素、–CN、–C(＝O)R²⁰、–C(＝O)OR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、–C(＝O)C(＝O)R²⁰、–C(＝NR²⁵)R²⁰、–C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–C(＝NOH)NR²²R²³、–C(＝NOR²⁶)R²⁰、–C(＝NNR²²R²³)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)R²¹)R²⁰、–C(＝NNR²⁴C(＝O)OR²¹)R²⁰、–C(＝S)NR²²R²³、–NC、–NO₂、–NR²²R²³、–NR²⁴NR²²R²³、–N＝NR²⁴、–NR²⁴OR²⁶、–NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)OR²¹、–NR²⁴C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)R²⁰、–NR²⁴C(＝O)NR²⁴C(＝O)OR²⁰、–NR²⁴C(＝NR²⁵)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝O)C(＝O)NR²²R²³、–NR²⁴C(＝S)R²⁰、–NR²⁴C(＝S)OR²⁰、–NR²⁴C(＝S)NR²²R²³、–NR²⁴S(＝O)₂R²¹、–NR²⁴S(＝O)₂NR²²R²³、–NR²⁴P(＝O)R³⁸R³⁸、–NR²⁴P(＝O)(NR²²R²³)(NR²²R²³)、–OR²⁰、–OCN、–OC(＝O)R²⁰、–OC(＝O)NR²²R²³、–OC(＝O)OR²⁰、–OC(＝NR²⁵)NR²²R²³、–OS(＝O)R²⁰、–OS(＝O)₂R²⁰、–OS(＝O)₂OR²⁰、–OS(＝O)₂NR²²R²³、–S(＝O)_nR²⁰、–S(＝O)₂OR²⁰、–SO₃R²⁷、–S(＝O)₂NR²²R²³、以及–S(＝O)NR²²R²³；或R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代。

实施方案11.根据实施方案10所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：H、卤素、–S(＝O)_nR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、NR²⁴S(＝O)₂R²¹、以及–NR²²R²³；或R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代。

实施方案12.根据实施方案1至9中任一项所述的化合物，其中R²和R³与它们被附接至的原子合在一起，以形成C_6-11芳基、C_3-11环烷基、3-15元杂环烷基或5-15元杂芳基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代。

实施方案13.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丙基并且G是

实施方案14.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丁基并且G是

实施方案15.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丙基并且G是

实施方案16.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丁基并且G是

实施方案17.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丙基并且G是

实施方案18.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是任选地被取代的环丁基并且G是

实施方案19.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-卤代烷基并且G是

实施方案20.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-卤代烷基并且G是

实施方案21.根据实施方案1所述的化合物，其中R¹是C_1-6-卤代烷基并且G是

实施方案22.根据实施方案19至21中任一项所述的化合物，其中R¹是三氟甲基。

实施方案23.根据实施方案13至22中任一项所述的化合物，其中X选自由以下组成的组：任选地被1-6个R¹⁹取代的3-10元杂环烷基、任选地被1-6个R¹⁹取代的5-10元杂芳基、–C(＝O)R²⁸、–C(＝O)NR²⁴R²⁸、–NR²⁴R²⁸、–NR²⁴C(＝O)R²⁸、–NR²⁴S(＝O)₂R²⁸、–OC(＝O)OR²⁸、–OS(＝O)R²⁸、–OS(＝O)₂R²⁸、以及–OR²⁸。

实施方案24.根据实施方案1、17、18和21中任一项所述的化合物，其中R²、R³、R⁴以及R⁵全部是H。

实施方案25.根据实施方案1至23中任一项所述的化合物，其中R⁴和R⁵是H。

实施方案26.根据实施方案13至23中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：H、卤素、–S(＝O)_nR²⁰、–C(＝O)NR²²R²³、NR²⁴S(＝O)₂R²¹、以及–NR²²R²³；或R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_6-11芳基、C_7-16芳基烷基、C_3-11环烷基、C_4-17环烷基烷基、3-15元杂环烷基、4-21元杂环烷基烷基、5-15元杂芳基、以及6-21元杂芳基烷基，其中前述基团中的每个可以任选地被1-10个R¹⁹取代。

实施方案27.根据实施方案26所述的化合物，其中R⁴和R⁵是H。

实施方案28.根据前述实施方案1-27中任一项所述的化合物，其中X选自由以下组成的组：

以及

实施方案29.根据前述实施方案1-28中任一项所述的化合物，其中R²和R³各自独立地选自由以下组成的组：

-H、-CF₃、

-烷基、-SO₂烷基、-卤素、-S(烷基)、以及

实施方案30.根据前述实施方案1-29中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由在表A中列出的那些化合物组成的组。

上文实施方案包括式(I)的酸性化合物和碱性化合物的盐。优选地，盐是药学上可接受的。式(I)的碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐包括但不限于衍生自无机酸的盐以及衍生自有机酸的盐，所述无机酸是例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、和亚磷酸，所述有机酸是例如脂肪族一元羧酸和二元羧酸、被苯基取代的烷酸、羟基烷酸、烷二酸、芳香族酸、以及脂肪族和芳香族磺酸。因此，此类盐包括但不限于硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、一氢磷酸盐、二氢磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、以及甲磺酸盐。见例如Berge等人,"Pharmaceutical Salts,"J.of Pharmaceutical Science,1977；66:1-19。

酸加成盐可以通过使式(I)的化合物与充分量的期望的酸接触以按常规的方式产生盐来制备。式(I)的化合物的游离碱形式可以通过使盐形式与碱接触并且以常规的方式分离游离碱来再生。

式(I)的酸性化合物的药学上可接受的碱盐用金属或胺例如碱金属氢氧化物和碱土金属氢氧化物或有机胺来形成。用作阳离子的金属的实例包括但不限于钠、钾、镁、以及钙。合适的胺的实例包括但不限于N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺(乙烷-1,2-二胺)、N-甲基葡糖胺、以及普鲁卡因。见例如Berge等人,"Pharmaceutical Salts,"J.of Pharmaceutical Science,1977；66:1-19。

碱盐可以通过使式(I)的化合物与充分量的期望的碱接触以按常规的方式产生盐来制备。式(I)的化合物的酸形式可以通过使盐形式与酸接触并且以常规的方式分离酸来再生。

本申请的某些化合物可以作为立体异构体(包括对映异构体、非对映异构体、以及几何异构体)存在。几何异构体包括具有烯基的本申请的化合物，所述化合物可以作为E式(entgegen)构象或Z式(zusammen)构象存在，在该情况下，其所有几何形式，E式和Z式、顺式(cis)和反式(trans)两者、以及其混合物是在本申请的范围内。本申请的某些化合物具有环烷基，环烷基可以在多于一个碳原子处被取代，在该情况下，其所有几何形式，顺式和反式两者以及其混合物是在本申请的范围内。所有这些形式，包括(R)、(S)、差向异构体、非对映异构体、顺式、反式、同(syn)、反(anti)、(E)、(Z)、互变异构体及其混合物被包括在本申请的化合物中。

III.药物组合物

本申请还提供组合物，所述组合物包含上文实施方案中任一项的化合物(例如式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐)连同药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，此类组合物适合于药物用途。此类组合物可以被称为药物组合物。在从本申请的化合物制备药物组合物中，药学上可接受的赋形剂可以是固体或液体。赋形剂可以是可以充当例如载体、稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或包封材料的一种或更多种物质。应当理解，当在本申请中使用术语“赋形剂”时，该术语可以表示载体、稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或包封材料中的任一种。当术语赋形剂结合措辞“至少一种”使用时，应当理解，一种或更多种赋形剂可以在组合物中存在并且如果存在多于一种赋形剂，则赋形剂可以具有相同的一般类型(即两种或更多种粘合剂)或不同类型(即稀释剂和防腐剂)。药物组合物可以包含本申请的两种或更多种化合物(例如式(I)的化合物的两种不同的盐形式，其可以在相同的药物组合物中一起使用或单个组合物可以包含相同化合物的非盐形式和盐形式的混合物)。优选地，药物组合物包含治疗有效量的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，组合物包含对治疗非典型蛋白激酶C(aPKC)依赖性紊乱或状况是有效的量的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。优选地，本申请的化合物将引起与aPKC依赖性紊乱相关联的症状或疾病征候的如定量地或定性地测量的减少。组合物除了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂之外还可以包含另一种治疗化合物，例如在癌症的治疗中有用的化合物。

本申请的化合物可以被配制为以任何递送形式的药物组合物，例如糖浆、酏剂、悬浮液、粉剂、粒剂、片剂、胶囊、锭剂、糖锭、水溶液、乳膏、软膏、洗剂、凝胶、乳液等等。固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂、以及可分散的粒剂。优选地，药物组合物是片剂或胶囊。在一个实施方案中，药物组合物是片剂。在另一个实施方案中，药物组合物是胶囊。

在粉剂中，赋形剂可以是具有细分的活性组分(即本申请的化合物)的混合物中的细分的固体。在片剂中，活性组分可以以合适的比例与具有必需的粘合性质的赋形剂混合并且以期望的形状和尺寸压实。合适的赋形剂包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可油及类似物。

药物组合物优选地包含从1％(w/w)至95％(w/w)的活性化合物(即本申请的化合物)。更优选地，药物组合物包含从5％(w/w)至70％(w/w)的活性化合物。

为了制备栓剂，低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯的混合物或可可油可以被熔化并且活性化合物如通过搅拌均匀地分散在其中。然后，熔化的均匀的混合物可以被倾倒至合适大小的模具中，允许冷却，并且从而固化。

液体形式制剂包括溶液、悬浮液、以及乳液。适合于肠胃外施用例如比如通过静脉内途径、肌肉内途径、皮内途径以及皮下途径的制剂，包括含水和不含水的等渗无菌注射溶液以及含水和不含水的无菌悬浮液，所述含水和不含水的等渗无菌注射溶液可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及致使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，所述含水和不含水的无菌悬浮液可以包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、以及防腐剂。在本申请的主题的实践中，组合物可以例如通过静脉输注、口服地、局部地、腹膜内地、膀胱内地或鞘内地来施用。化合物的制剂可以呈递在单位剂量或多剂量密封的容器例如安瓿和小瓶中。注射溶液和注射悬浮液可以从先前描述的种类的无菌的粉剂、粒剂、以及片剂来制备。

本申请的化合物，单独地或与其他合适的组分组合，可以被制成气雾剂制剂(例如其可以“成雾状”)以经由吸入来施用。气雾剂制剂可以被放置到加压的可接受的推进剂例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气及类似物中。

药学上可接受的赋形剂部分地通过被施用的特定组合物，以及通过用于施用组合物的特定方法来确定。因此，存在多种多样的本申请的药物组合物的合适的制剂(见，例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro等人编辑,Lippincott Williams and Wilkins,2000)。

根据特定应用和剂型的期望大小，在药物组合物中的活性组分的数量可以从例如1mg至1,000mg、从5mg至500mg、从10mg至300mg、或从25mg至250mg变化或调整。

施用至受试者的剂量优选地足以诱发受试者随时间的有益的治疗应答。有益的剂量可以从受试者至受试者变化，这取决于例如受试者的状况、体重、表面积、以及副作用敏感性。施用可以经由单剂量或分剂量来完成。

IV.治疗方法

在另一方面中，本申请提供治疗受试者中的aPKC依赖性紊乱或状况的方法，所述方法包括：向受试者施用如在上文实施方案中任一项所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。在另一方面中，本申请提供如上文实施方案中任一项所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，以用于治疗受试者中的aPKC依赖性紊乱或状况。在另一方面中，本申请提供如上文实施方案中任一项所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，以用于制备用于治疗受试者中的aPKC依赖性紊乱或状况的药剂。优选地，化合物作为包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物被施用至受试者。优选地，化合物以药学上可接受的量被施用至受试者。在一个实施方案中，aPKC依赖性状况或紊乱是癌症。在另一个实施方案中，aPKC依赖性状况选自：非小细胞肺癌(NSCLC)、鳞状细胞癌(例如食管鳞状细胞癌)、白血病、前列腺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)(例如滤泡性淋巴瘤)、子宫内膜癌、肺癌以及乳腺癌。

aPKC依赖性紊乱或状况可以使用本申请的化合物预防性地、急性地、或慢性地治疗，取决于紊乱或状况的性质。典型地，这些方法中的每种方法中的受试者是人类，尽管其他哺乳动物也可以受益于本申请的化合物的施用。应当理解，待通过本文描述的任何方法被治疗的受试者认可需要这样的治疗。

在另一个实施方案中，本申请提供治疗受试者中的增殖性紊乱的方法，所述方法包括向受试者施用如上文实施方案中任一项中所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。在另一方面中，本申请提供如上文实施方案中任一项中所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，以用于治疗受试者中的增殖性紊乱。在另一方面中，本申请提供如上文实施方案中任一项中所定义的式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，以用于制备用于治疗受试者中的增殖性紊乱的药剂。优选地，化合物和/或其盐以包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物施用至受试者。优选地，化合物和/或其盐以药学上可接受的量施用至受试者。在某些实施方案中，增殖性紊乱是aPKC依赖性的。在某些实施方案中，增殖性紊乱是癌症。在某些实施方案中，增殖性紊乱选自：非小细胞肺癌(NSCLC)、鳞状细胞癌(例如食管鳞状细胞癌)、白血病、前列腺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(例如滤泡性淋巴瘤)、子宫内膜癌、肺癌以及乳腺癌。

增殖性紊乱可以使用本申请的化合物预防性地、急性地、或慢性地来治疗，取决于紊乱或状况的性质。典型地，这些方法中的每种方法中的受试者是人类，尽管其他哺乳动物也可以受益于本申请的化合物的施用。

在治疗应用中，本申请的化合物可以以多种多样的口服剂型和肠胃外剂型来制备和施用。因此，本申请的化合物可以通过注射即静脉内地、肌肉内地、皮内地、皮下地、十二指肠内地、或腹膜内地来施用。此外，本文描述的化合物可以通过吸入例如经鼻内地施用。另外，本申请的化合物可以透皮地施用。在另一个实施方案中，本申请的化合物口服地递送。化合物还可以直肠地、口腔地或通过吹入法递送。

用于特定情形的合适的剂量的确定是在实践者的技术内。通常，治疗以小于化合物的最优剂量的较小剂量开始。其后，将剂量以小增量增加，直到达到在该情况下的最优效果。为了便利，如果需要，总的日剂量可以被划分并且在这一天期间按份施用。典型的剂量是约1mg每天至约1,000mg每天，例如约5mg每天至约500mg每天。在某些实施方案中，剂量是约10mg每天至约300mg每天，例如约25mg每天至约250mg每天。

V.化学

缩写

为了便利，本文使用以下常用缩写：

LCMS 用于液相色谱-质谱法。

HPLC 用于高压液相色谱法。

NMR 用于核磁共振。

RT 用于保留时间。

MI 用于分子离子

h 用于小时

min 用于分钟

AlCl₃ 用于氯化铝

BBr₃ 用于三溴化硼

Boc 用于叔丁氧羰基

cataCXium C 用于反式-双(乙酸)双[邻-(二-邻-甲苯基膦)苄基]二钯(II)

Cs₂CO₃ 用于碳酸铯

CuI 用于碘化亚铜(I)

DAST 用于二乙基氨基三氟化硫

DBU 用于1,8-二氮杂双环(5.4.0)十一-7-烯

DMAP 用于4-(二甲基氨基)吡啶

DCE 用于1,1-二氯乙烷(1,1-dichloroethane)或亚乙基二氯(ethylidene chloride)

DCM 用于二氯甲烷或亚甲基氯

DEA 用于二乙醇胺

DIPEA 用于N,N-二异丙基乙胺，Hunig’s碱

DMA 用于N,N-二甲基乙酰胺

DMF 用于N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 用于二甲基亚砜

Et₃N 用于三乙胺

EtOH 用于乙醇(ethyl alcohol)、乙醇(ethanol)

Ex 用于实施例

HCl 用于盐酸

H₂SO₄ 用于硫酸

Int 用于中间体

KOH 用于氢氧化钾

MW 用于微波

mCPBA 用于间氯过氧苯甲酸

MeOH 用于甲醇(methyl alcohol)、甲醇(methanol)

Mo(CO)₆ 用于六羰基钼

MP-BH₄ 用于大孔甲基聚苯乙烯硼氢化三乙基铵

NaOH 用于氢氧化钠

Na₂CO₃ 用于碳酸钠

Na₂SO₄ 用于硫酸钠

NaOAc 用于乙酸钠

NaOtBu 用于叔丁醇钠

NMP 用于1-甲基-2吡咯烷酮

NMM 用于N-甲基吗啉

Pd(dba)₂ 用于双(二亚苄基丙酮)钯

Pd(OAc)₂ 用于二乙酸钯

Pd(Ph₃)₄ 用于四(三苯基膦)钯

Pd(Ph₃)Cl₂ 用于双(三苯基膦)二氯化钯(II)

POCl₃ 用于氧氯化磷

PPh₃ 用于三苯基膦

PS-TsCl 用于聚苯乙烯磺酰氯

PS-PPh₃-Pd 用于聚苯乙烯三苯基膦-Pd(0)

SCX-2 用于具有化学键合的丙磺酸官能团的基于二氧化硅的吸附剂

TBAF 用于四正丁基氟化铵

TBDMS 用于叔丁基二甲基甲硅烷基

TCA 用于三氯乙酸

TFA 用于三氟乙酸

THF 用于四氢呋喃

TMS 叠氮化物用于三甲基甲硅烷基叠氮化物

Xantphos 用于4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽

XPhos 用于2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基联苯

LCMS方法

通过高效液相色谱-质谱法分析的样品采用以下条件。除非另外注明，否则利用方法X。

方法1

方法1采用Gilson 306泵、Gilson 811混合器、Gilson 806测压模块以及在254nm波长处的Gilson UV/VIS 152检测器。质谱仪是Finnigan AQA并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔径、尺寸50x 4.60mm的C18。注射体积是10μl。流动相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物组成。洗脱剂流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，经过5.5分钟线性改变至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持续2分钟。

方法2

方法2采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2996二极管阵列检测器。检测在210nm和650nm之间进行。质谱仪是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔径、尺寸50x 4.60mm的C18。注射体积是10μl。流动相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物组成。洗脱剂流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，经过5.5分钟线性改变至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持续2分钟。

方法3

方法3采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV检测器(单波长254nm)。质谱仪是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔径、尺寸50x 4.60mm的C18。注射体积是10μl。流动相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物组成。洗脱剂流速是1.5mL/min，使用95％水:5％乙腈，经过5.5分钟线性改变至5％水:95％乙腈并且然后保持在此混合物下持续2分钟。

方法4

方法4采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2545混合器以及Waters 2996二极管阵列检测器。检测在210nm和650nm之间进行。使用的质谱仪是Waters 3100，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是XBridge、5微米孔径、50x4.60mm的C18。注射体积是10μl的溶液(约1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流动相由水pH 100.03％氢氧化铵(3ml/10 l)和乙腈0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)组成。洗脱以95％水:5％乙腈开始，经过5.50分钟增加至5％水:95％乙腈。将洗脱水平经过6秒钟返回至95％水:5％乙腈的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法5

方法5采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV检测器。检测在254nm处进行。使用的质谱仪是Waters micromass ZQ，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是SunFire、5微米孔径，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射体积是10μL的溶液(约1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流动相包含0.1％甲酸。洗脱以85％水:15％甲醇开始，经过4.5分钟增加至15％水:85％甲醇，将这些条件保持持续1分钟，之后将洗脱水平经过6秒钟返回至85％水:15％甲醇的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法6

方法6采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2545混合器以及Waters 2996二极管阵列检测器。检测在210nm和650nm之间进行。使用的质谱仪是Waters 3100，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是XBridge、5微米孔径、50x4.60mm的C18。注射体积是10μL的溶液(约1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流动相由水pH 100.03％氢氧化铵(3ml/10 l)和甲醇0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)组成。洗脱以85％水:15％甲醇开始，经过4.5分钟增加至15％水:85％甲醇。将这些条件保持持续1分钟，之后将洗脱剂水平经过6秒钟返回至85％水:15％甲醇的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法7

方法7采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2545混合器以及Waters 2487 UV检测器。检测在254nm处进行。使用的质谱仪是Waters micromass ZQ，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是SunFire、5微米孔径，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射体积是10μL的溶液(约1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流动相包含0.1％甲酸。洗脱以85％水:15％甲醇开始，经过4.5分钟增加至15％水:85％甲醇，将这些条件保持持续1分钟，之后将洗脱剂水平经过6秒钟返回至85％水:15％甲醇的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法8

方法8采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV检测器。检测在254nm处进行。使用的质谱仪是Waters micromass ZQ，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是SunFire、5微米孔径，使用尺寸50x4.60mm的C18柱。注射体积是10μL的溶液(约1mg/mL)。流速是1.5mL/min并且水和甲醇的流动相包含0.1％甲酸。洗脱以85％水:15％甲醇开始，经过3分钟增加至15％水:85％甲醇。将这些条件保持持续2.5分钟，之后将洗脱剂水平经过6秒钟返回至85％水:15％甲醇的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法9

方法9采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2545混合器以及Waters 2487 UV检测器。检测在254nm处进行。使用的质谱仪是Waters micromass ZQ，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是XBridge、5微米孔径、50x4.60mm的C18。注射体积是10μL的溶液(约1mg/ml)。流速是1.5mL/min并且流动相由水pH 10 0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)和甲醇0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)组成。洗脱以85％水:15％甲醇开始，经过4.5分钟增加至15％水:85％甲醇。将这些条件保持持续1分钟，之后将洗脱剂水平经过6秒钟返回至85％水:15％甲醇的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

方法10

在两种仪器中的任一个上获得LCMS结果。在具有2.1mm x 50mm Waters Aquity UPLC BEH C18 1.7μm柱的Waters Aquity Ultra Performance LC上进行LCMS分析。目标柱温是45℃，具有两(2)分钟的运行时间，0.600mL/min的流速以及5％(0.1％甲酸/水):95％(乙腈/0.1％甲酸)的溶剂混合物。在Micromass LC-ZQ 2000四级质谱仪上获取质谱数据。可选择地，LCMS分析在Bruker Esquire 200离子阱上进行。

制备型HPLC方法

通过质谱引导的高效液相色谱法纯化的样品采用以下条件。

方法A

方法A采用Waters 515泵、Waters 2525混合器以及Waters 2487 UV检测器(单波长254nm)。质谱仪是Waters micromass ZQ并且使用的柱是Waters SunFire、5μm孔径、尺寸50x 19mm的C18。注射体积是在50mg/mL的最大浓度下的多达500μL的溶液。流动相由包含0.1％甲酸的水和乙腈的混合物组成。洗脱剂流速是25mL/min，使用95％水、5％乙腈，经过5.3分钟线性改变至95％乙腈、5％水，并且保持持续0.5分钟。

方法B

方法B采用Waters 515泵、具有导向不同柱的阀的Waters 2545混合器以及Waters 2996二极管阵列检测器。检测在210nm和650nm之间进行。使用的质谱仪是Waters 3100，其检测在100g/mol和700g/mol之间的质量。使用的柱是XBridge、5微米孔径、50x19mm的C18。注射体积由使用者来选择并且可以是多达500μL的溶液(最大50mg/ml)。流速是25mL/min并且流动相为水pH 10 0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)和乙腈0.03％氢氧化铵(3ml/10 l)。洗脱以95％水:5％乙腈开始，经过5.30分钟增加至5％水:95％乙腈。将洗脱剂水平经过0.6分钟返回至95％水:5％乙腈的开始条件。将这些条件保持持续1.4分钟以允许在注射下一个样品之前使柱平衡。运行持续总计7分钟。

分析型HPLC方法

方法X

方法X在Agilent 1100系列HPLC上以2.5ml/min在4.6X 75mm(2.5微米)Zorbax XDB-C8柱上采用乙腈(包含0.1％三氟乙酸):水(包含0.1％三氟乙酸)经过五分钟的梯度洗脱(0％至100％)。

合成

本文描述用于本申请的4-取代的-2-(吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉化合物(为了便利，在本文统称为“4PAZ化合物”)的化学合成的若干方法。这些方法和/或其他熟知的方法可以以已知的方式被修改和/或调整以便有利于在本申请的范围内的另外的化合物的合成。制造本公开内容的化合物的方法还可以在WO 2014/052699中找到，其公开内容通过引用并入本文。

在一种方法中，通式[F-001]的4PAZ化合物(其中A＝NH或N烷基)通过使式[F-002]的化合物(其中X是卤素例如氯或磺酸酯)与式[F-003]的化合物(其中A是NH或NH2并且在末端氮上的Z是H、烷基或合适的氮保护基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc)在合适的溶剂例如DMF中在合适的碱例如三乙胺的存在下反应来制备。反应在升高的温度例如40℃下合适地进行。在Z是合适的氮保护基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc的情况下，式[F-001]的化合物通过合适的脱保护反应来制备。例如：在Z是Boc保护基时，与酸例如TFA在合适的溶剂例如DCM中反应。反应在环境温度下合适地进行。在一种方法中，式[F-001]的化合物(其中A＝O)通过使式[F-002]的化合物(其中X是卤素例如氯或磺酸酯)与式[F-003]的化合物(其中A是OH并且在末端氮上的Z是H、烷基或合适的氮保护基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc)在合适的溶剂例如DMA中在合适的碱例如氢化钠的存在下反应来制备。反应在环境温度下合适地进行。在Z是合适的氮保护基例如Boc、Alloc、Cbz或Fmoc的情况下，式[F-001]的化合物通过合适的脱保护反应来制备。例如：在Z是Boc保护基时，与酸例如TFA在合适的溶剂例如DCM中反应。

反应在环境温度下合适地进行。

在一种方法中，式[F-002]的化合物(其中X是卤素例如氯)通过使式[F-004]的化合物与合适的卤化剂例如氧氯化磷反应来制备。反应在升高的温度例如125℃下合适地进行。式[F-002]的化合物(其中X是磺酸酯)通过使[F-004]的化合物与被合适地取代的磺酰氯在合适的溶剂例如DMA中在合适的碱例如三乙胺和催化量的DMAP的存在下反应来制备。反应在环境温度下合适地进行。

在一种方法中，式[F-004]的化合物通过使式[F-005]的化合物(其中Rx是烷基例如甲基或乙基)与式[F-006]的化合物在合适的溶剂中在干燥的非质子溶剂例如二氧六环或THF中在有位阻的醇盐碱例如1.7M在甲苯中的叔戊醇钾或叔丁醇钾的存在下反应来制备。反应在环境温度下合适地进行。

在一种方法中，式[F-004]的化合物通过使式[F-007]的化合物与式[F-006]的化合物在合适的溶剂中在质子溶剂例如甲醇中在碱例如甲醇钠的存在下反应来制备。反应首先在环境温度下然后在回流下过夜来合适地进行。

如上文描述的方法的实施例在以下方案中被图示。

通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A1

通式[F-001]的被取代的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通过通式[F-005]的2-氨基-吡啶基衍生物与通式[F-006]的4-氰基吡啶基衍生物在碱例如甲醇钠的存在下在极性质子溶剂例如甲醇中的反应来制备。反应在升高的温度下合适地进行以产生通式[F-004]的环化的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇产物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过使通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与氯化剂例如氧氯化磷反应以产生通式[F-008]的4-氯-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物、后者与通式[F-003]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et3N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应来制备[方法A]。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放(acidic ion exchange catch-release)的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制的反应产物通过正相硅胶色谱法或反相制备型HPLC纯化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备[方法B]。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯与通式[F-003]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制的反应产物通过反相制备型HPLC纯化。

方案A1

方法A

方法B

4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1]的合成 方法A

2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A001]的合成

将4-氰基吡啶(8.25g,79.2mmol)、甲醇钠(891mg,16.5mmol)和甲醇(400mL)的混合物在室温下搅拌持续60分钟。添加3-氨基异烟酸(9.12g,66.0mmol)并且将混合物加热至回流持续3天。在冷却至室温之后，固体沉淀通过过滤来收集，然后在真空烘箱中干燥以产生作为灰白色固体的标题化合物(6.02g)：(1H,300MHz,d6-dmso)13.10(1H,br s),9.16(1H,s),8.80(2H,dd),8.70(1H,d),8.10(2H,dd),8.00(1H,dd)

4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A002]的合成

将在POCl₃(50mL,538mmol)中的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A001](4g,17.8mmol)加热至110℃持续3小时。将反应混合物在真空下浓缩，用饱和的NaHCO₃溶液猝灭，萃取到DCM中，用水然后盐水洗涤，通过相分离器筒并且蒸发以产生作为黄色/棕色固体的标题化合物[A002](2.6g)，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用：LCMS方法1：RT:4.09min，MI 243[M+H]。

1-[2-(吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪[1]的合成

将4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A002](100mg,0.43mmol)、哌嗪(172mg,2mmol)在无水DMA(5mL)中的溶液在室温下搅拌持续3天。使反应混合物在NaOH(2M水溶液)和乙酸乙酯之间分配。将有机层用水然后盐水进一步洗涤，干燥(MgSO₄)，通过相分离器筒并且蒸发以产生粗制材料，所述粗制材料通过制备型HPLC(方法A)纯化以产生标题化合物(1.87mg)。LCMS方法1：RT:3.49min，MI 293[M+H]；1H-NMR(300MHz；DMSO-d6)：9.26(1H,s),8.76(2H,d),8.58(1H,d),8.32(2H,d),8.24(1H,s),7.92(1H,d),3.96(4H,br tr),2.99(4H,br tr)

(5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-(R)-吡咯烷-3-基-胺[2]的合成 方法B

5-甲氧基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A003]的合成

向2-氯-4-吡啶甲腈(1g,9.6mmol)在MeOH(20mL)中的搅拌的溶液添加0.5M NaOMe(2mmol,4mL)，随后添加3-氨基-5-甲氧基异烟酸(1.35g,8mmol)。将RM在75℃下加热过夜。使RM静置冷却并且形成固体沉淀(solid ppt)，所述固体沉淀通过过滤来收集，用冷的MeOH洗涤并且在真空烘箱中干燥以给出作为浅棕色固体的标题化合物(610mg，30％收率)。LCMS方法1：RT:3.82min，MI 255.09[M+H]。

(5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-(R)-吡咯烷-3-基-胺[2]的合成

将5-甲氧基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[A003](0.157mmol,0.04g)、2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.173mmol,0.052g)溶解在无水DMA(2mL)中，并且相继添加Et₃N(0.314mmol,0.045mL)和DMAP(5mg)。将混合物在室温下搅拌持续1小时并且添加(R)-3-氨基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.236mmol,0.044g)。将混合物在室温下搅拌过夜。然后，将溶剂在减压下除去并且将残余物在三氟乙酸(1mL)中在室温下搅拌持续3h。将溶液倾倒至SCX-2筒(5g)上，用甲醇(10mL)洗涤并且然后用氨(2N，在甲醇中，20mL)洗涤。将氨洗涤物在真空中浓缩成棕色残余物，所述棕色残余物通过制备型HPLC(方法A)纯化以产生标题化合物(0.016g)。LCMS方法1：RT:1.47min,MI 323[M+H]；1H-NMR 300MHz(1H d6-dmso)8.81(1H,s),8.76(2H,dd),8.35(1H,s),8.32(2H,dd),8.23(1H,d),6.42(1H,s),4.98(1H,m),4.14(3H,s),3.19-3.07(2H,m),2.41-2.29(2H,m),2.07-1.95(2H,m)。

通式[F-001]的5-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A7

通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通过通式[F-016]的邻位-卤代-异烟酸衍生物与通式[F-018]的合适地被取代的4-甲脒酰基-吡啶在合适的偶联剂例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在极性非质子溶剂例如DMA或DMF中的偶联来制备。然后将通式[F-017]的异烟酰基脒衍生物环化以替代有关的卤素基团以产生期望的通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与氯化剂例如氧氯化磷的反应来制备，并且然后使中间体4-氯代衍生物与通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应[方法A]。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过正相硅胶色谱法或反相制备型HPLC纯化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备[方法B]。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯与通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过反相制备型HPLC纯化。

方案A7

5-氯-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[132]的合成

3,5-二氯-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A060]的合成

将3,5-二氯-异烟酸(10.4mmol,1.997g)在室温下溶解在无水DMF(50mL)中并且一次性添加HATU(10.4mmol,3.95g)，并且将混合物搅拌持续5min。然后一次性添加DIPEA(28.6mmol,5.0mL)并且将反应搅拌持续40分钟。一次性添加吡啶-4-甲脒盐酸盐(9.52mmol,1.5g)并且将反应在室温下搅拌持续18小时。

然后，将反应混合物倾倒至在锥形烧瓶中的水(总计～250mL，包括反应容器的冲洗)中。将产生的混合物在室温下搅拌持续90分钟并且将形成的沉淀过滤，用水(x2)和醚(x2)洗涤。然后将固体在真空烘箱中干燥持续4小时以产生作为浅棕色粉末的标题化合物[A060](2.359g)。LCMS方法1：RT:3.31min，MI 295[M+H]。

5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A061]的合成

在25mL Biotage微波容器中，在氮气下添加3,5-二氯-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A060](1.5mmol,0.443g)、碳酸铯(3.0mmol,0.978g)以及N,N'-二苄基乙二胺(0.3mmol,0.071mL)。将混合物在无水DMA(10mL)中剧烈地搅拌并且一次性添加氯化铁(III)(0.15mmol,0.024g)。然后，将混合物在微波中在120℃下加热持续90min。允许反应冷却至室温并且在约5分钟内逐滴地添加乙酸(12.0mmol,0.69mL)并且产生的混合物用MeOH(10mL)稀释，并且在室温下搅拌持续30min。将混合物添加至10g SCX-2筒并且用甲醇(～25-30mL)洗涤。然后，将筒用氨(2N，在MeOH中,40mL)洗涤并且氨洗涤物在真空中浓缩以产生5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(130mg)。将SCX-2筒的非碱性甲醇洗涤物留下静置过夜，形成沉淀。将此过滤，用甲醇(x1)洗涤，并且在真空烘箱中干燥过夜以产生作为灰白色固体的标题化合物[A061](13mg)。LCMS方法1：RT:2.12min，MI259[M+H]。

4-(5-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A062]的合成

将5-氯-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A061](0.553mmol,0.143g)在室温下在氮气下悬浮在无水DCM(14mL)中，并且相继添加三乙胺(1.38mmol,0.193mL)、DMAP(约0.005g)以及2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.663mmol,0.201g)。将反应在室温下作为灰白色悬浮液搅拌持续2小时。混合物缓慢地变成浅绿色悬浮液，使其搅拌过夜。然后，添加吡啶(4mL)并且将反应容器进行声处理持续5分钟以尝试改进溶解，引起反应颜色从绿色悬浮液改变为棕色悬浮液。将产生的混合物在室温下搅拌持续1小时。一次性添加Boc-哌嗪(0.608mmol,0.113g)并且使混合物搅拌持续18小时。

反应用水稀释并且用DCM(x3)萃取。合并的有机物用盐水洗涤(x1)，干燥(MgSO₄)，过滤并且在真空中浓缩。以产生标题化合物[A062]，所述标题化合物在下一个反应中在不进一步纯化的情况下被使用：LCMS方法1：RT:5.69min，MI 427[M+H]。

5-氯-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[132]的合成

在室温下向4-(5-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A062](0.47mmol,0.201g)在无水DCM(8mL)中的溶液添加HCl(4.0N，在二氧六环中，2mL)以产生橙色悬浮液，将所述橙色悬浮液在室温下搅拌持续3小时。然后，将混合物在真空中浓缩，重新溶解在DCM/MeOH(1:1，总计6mL)中并且添加至SCX-2 10g筒。将筒用DCM和MeOH(总计～35mL，分别地～2:3比率)洗涤。然后，将筒用在甲醇中的氨(2N,40mL)洗涤并且将氨洗涤物在真空中浓缩以产生92mg棕色油。将粗制材料通过柱色谱法(具有0-20％MeOH/DCM 15体积的SP1 4g VWR柱)纯化以产生作为橙黄色泡沫的标题化合物[138](0.044g)。LCMS方法1：RT:1.60min，MI 327[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.15(1H,s),8.77(2H,d),8.61(1H,s),8.29(2H,d),3.69(4H,br s),2.85(4H,br s)。

3-溴-5-氟-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A065]的合成

2-溴-5-氟-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A066]通过3-溴-4-羧基-5-氟-吡啶、氯化物、吡啶-4-甲脒盐酸盐、HATU、DIPEA和DMF在室温下的反应来制备以给出标题化合物。LCMS方法1：RT:3.20min，MI 325[M+H]。

将2-溴-5-氟-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A066](0.05g,0.155mmol)、DMA(0.5mL)、K₂CO₃(0.022g,0.16mmol)、DIPEA(0.28mL,0.16mmol)以及DBA(0.024mL,0.16mmol)在150℃下在微波中加热持续45min。将粗制反应混合物在减压下蒸发并且将粗制材料通过柱色谱法(在0.5％Et3N/DCM/0-20％MeOH中的SP1 4g VWR柱)纯化以产生作为橙黄色泡沫的标题化合物[A065](0.044g,80％收率)。LCMS方法1：RT:11.57min，MI 304[M+H]。

通式[F-001]的5-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物的一般合成 方案A8

通式[F-020]的邻位-卤代-异烟酸衍生物通过通式[F-019]的二卤代异烟酸衍生物与通式[F-021]的格氏试剂在极性非质子溶剂例如THF或Et₂O中的反应来制备。通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物通过通式[F-020]的邻位-卤代-异烟酸衍生物与通式[F-018]的合适地被取代的4-甲脒酰基-吡啶在合适的偶联剂例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在极性非质子溶剂例如DMA或DMF中的偶联来制备。将通式[F-022]的异烟酰基脒衍生物环化以替代有关的卤素基团以产生期望的通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与氯化剂例如氧氯化磷的反应来制备，并且然后使中间体4-氯代衍生物与通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应[方法A]。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过正相硅胶色谱法或反相制备型HPLC纯化。通式[F-001]的4-取代的-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物通过通式[F-004]的2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备[方法B]。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-吡啶-4-基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基酯与通式[F-015]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过反相制备型HPLC纯化。

方案A8

5-丁基-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[135]的合成

3-丁基-5-氟-异烟酸[A067]的合成

将3,5-二氟异烟酸(0.557g,3.5mmol)在0℃下在氮气的气氛下悬浮在无水THF(8mL)中。向此在10分钟内逐滴地添加丁基氯化镁(2.0M，在二乙醚中，5.25mL，10.5mmol)。在缓慢添加期间，悬浮液缓慢地改变形式，其中固体的初步团聚，然后固体开始缓慢地溶解，大致在试剂的添加完成时实现充分的溶液。允许反应混合物加温至室温并且搅拌超过72小时以形成粘稠的黄色悬浮液。用水稀释并且转移到单颈烧瓶中并且在真空中浓缩。将黄色固体用水(10mL)和EtOAc(10mL)稀释。通过逐滴添加HCl(浓)将pH调整为pH～2，并且用EtOAc(x3-黄色的某些进入有机物中)萃取。将合并的有机物用盐水(x1)洗涤，干燥(MgSO₄)并且在真空中浓缩以产生作为缓慢地固化的橙色胶状物/固体的标题化合物[A067](0.402g)：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；8.52(1H,s),8.42(1H,s),2.67(2H,t),1.58-1.48(2H,m),1.35-1.22(2H,m),0.87(3H,t)；LCMS方法1：RT:1.22min，MI 198[M+H]。

3-丁基-5-氟-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A068]的合成

将3-丁基-5-氟-异烟酸[A067](2.05mmol,0.402g)溶解在无水DMF(8mL)中并且添加二异丙基乙胺(DIPEA)(5.95mmol,1.04mL)并且将混合物在室温下搅拌持续5分钟。然后，一次性添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(2.0 5mmol,0.78g)并且将产生的混合物搅拌持续1小时。然后，将吡啶-4-甲脒盐酸盐(1.95mmol，0.307g)经过5分钟分批地添加至反应。将产生的溶液在室温下搅拌持续18小时。将反应混合物倾倒至水(85mL)中并且搅拌持续30分钟并且然后用EtOAc(x3)萃取。合并的有机物用水(x4)、盐水(x1)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且在真空中浓缩以产生作为棕色固体的标题化合物[A068](480mg)。材料在下一个反应中作为粗品使用：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；10.28(1H,brs),9.93(1H,br s),8.74(2H,d),8.45(1H,s),8.37(1H,s),7.90(2H,d),2.72-2.66(2H,m),1.58-1.48(2H,m),1.28-1.15(2H,m),0.79(3H,t)；LCMS方法1：RT:3.90min，MI 301[M+H]。

5-丁基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A069]的合成

将3-丁基-5-氟-N-(亚氨基-吡啶-4-基-甲基)-异烟酰胺[A068]放置到在无水DMA(5mL)中的溶液中的25mL Biotage微波容器中并且在150℃下在微波中加热持续45min。将反应混合物过滤，材料通过SCX-2 25g筒。将筒用甲醇(50mL)洗涤。然后，将筒用氨(2N,40mL)洗涤并且将氨洗涤物在真空中浓缩以产生作为浅棕色固体的标题化合物[A069](390mg)：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.79(2H,dd),8.46(1H,s),8.10(2H,dd),3.21(2H,t),1.63-1.50(2H,m),1.43-1.27(2H,m),0.91(3H,t)–还示出一个当量的DMA；LCMS方法1：RT:3.29min，MI 281[M+H]。

5-丁基-4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A070]的合成

将5-丁基-2-吡啶-4-基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[A069](1.35mmol,0.378g)悬浮在无水1,2-二氯乙烷(DCE)(10mL)中并且在2-3分钟内逐滴地添加氧氯化磷(POCl₃)(1.4mmol,0.131mL)。最后，添加DIPEA(2.0mmol,0.348mL)并且将混合物在室温下在氮气下搅拌过夜。在POCl₃添加之后，棕色固体缓慢地改变外观，然后在添加DIPEA之后进一步变深成深棕色外观的溶液。将反应留在室温下在氮气下搅拌过夜。在20小时之后，添加POCl₃(65μL)并且在室温下搅拌过夜。将粗制混合物在真空中浓缩，然后与甲苯(x2)共沸至干燥。将残余物用碳酸钠(水溶液，2N,20mL)稀释并且用DCM(x2)、EtOAc(x1)萃取。合并的有机物用盐水(x1)洗涤，干燥(MgSO₄)，通过二氧化硅垫过滤并且在真空中浓缩以产生作为浅棕色固体的标题化合物[A070](180mg)，所述标题化合物在下一个反应中在不进一步纯化的情况下使用：LCMS方法1：RT:5.66min，MI 299[M+H]。

4-(5-丁基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A071]的合成

将5-丁基-4-氯-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[A070](0.615mmol,0.180g)在氮气下在室温下溶解在无水DCM(5mL)中，并且用三乙胺(0.868mmol,0.121mL)和N-Boc-哌嗪(0.682mmol,0.127g)一次性处理。将产生的混合物在室温下搅拌持续2小时。然后，添加碳酸钠(1N水溶液,20mL)并且用DCM(x2)和EtOAc(x1)萃取。合并的有机物用盐水(x1)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且在真空中浓缩成深棕色固体，所述深棕色固体通过柱色谱法(在0-10％MeOH/DCM中的25g VWR筒上的SP1，15个柱体积)纯化以产生作为棕色胶状物的标题化合物[A071](0.092g)，所述标题化合物在下一个反应中在不进一步纯化的情况下使用：NMR:(1H,300MHz,d6-dmso)；9.24(1H,s),8.79(2H,d),8.49(1H,s),8.36(2H,d),3.77-3.48(8H,m),3.19-3.07(2H,m),1.64-1.23(4H,m),1.48(9H,s),0.96-0.87(3H,t)。

5-丁基-4-哌嗪-1-基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[135]的合成

将4-(5-丁基-2-吡啶-4-基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[A071](0.20mmol,0.09g)溶解在无水DCM(4mL)中并且用氯化氢(4N，在二氧六环中，4mL)在室温下处理并且搅拌持续2小时。将反应用甲醇稀释并且倾倒至SCX-2筒(5g)上，用MeOH/DCM(20mL)洗涤。然后，将筒用氨(2N,20mL)洗涤并且将氨洗涤物在真空中浓缩以产生棕色胶状物(0.059g)。将残余物通过柱色谱法(SP1 4g柱，以梯度5-20％MeOH/DCM，15个柱体积)纯化以产生作为橙棕色胶状物的标题化合物[133](0.020g)；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.09(1H,s),8.76(2H,d),8.51(1H,s),8.31(2H,d),3.73-3.58(2H,br s),3.50-3.37(2H,br s),3.07(2H,t),2.90-2.79(4H,br s),1.51-1.38(2H,m),1.28-1.15pm(2H,m),0.84(3H,t)；LCMS方法1：RT:2.58min，MI 349[M+H]。

通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B1

通式[G-002]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过通式[G-001]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯与通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。使通式[G-002]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物参与Buchwald型反应(Buchwald type reaction)，利用通式[G-005]的合适的胺、钯催化剂例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配体例如Xantphos和碱例如NaOtBu或Cs₂CO₃在极性溶剂例如二氧六环或二氧六环和DMA的组合中在高温下通过热地加热或使用微波反应器，以产生通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化并且将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、HCl在溶剂例如DCM、DCE或1,4-二氧六环中或通过捕放磺酸树脂例如聚合物负载的甲苯磺酸脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案B1

[4-(5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[200]的合成

2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B001]

向2-氯-4-吡啶甲腈(0.97g,7.03mmol)在MeOH(35mL)中的溶液在室温下在氮气下添加NaOMe(0.08g,1.46mmol)并且留下搅拌持续60min。然后，将3-氨基-5-甲氧基异烟酸(1g,5.86mmol)在MeOH(15mL)中的溶液经过5-10min逐滴地添加至(经由注射器)深棕色混合物。将溶液在室温下搅拌持续2h并且然后在85℃下过夜。在冷却下来之后，将固体过滤，并且用甲醇洗涤并且在不进一步纯化的情况下使用，以产生标题化合物[B001](0.97g 57％收率：LCMS方法5：RT:6.32min，MI 287.34[M+H]。

4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B002]

将2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B001](0.58g,2mmol)、无水DMA(5mL)、三乙胺(0.58mL,4mmol)和DMAP(20mg,0.16mmol)的混合物进行声处理持续10min，然后在室温下搅拌持续10min。添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.67g,2.2mmol)并且将混合物进行声处理持续5min，然后留在室温下搅拌持续2小时。在此时间期间，材料进入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加Boc哌嗪(0.56g,3mmol)在无水DMA(1mL)中的溶液并且将反应混合物留在室温下搅拌过夜。添加水(20mL)并且将反应混合物用DCM(2x 30mL)萃取，将萃取物合并并且用水(20mL)、饱和的碳酸氢盐溶液(2x 20mL)和水(20mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且在减压下蒸发以给出浅黄色油，所述浅黄色油通过快速柱色谱法(SP1,50g SiO₂筒100％EtOAc直到95％EtOAc:5％MeOH梯度)纯化，以给出作为无色固体的标题化合物[B002](0.22g 24％收率)。LCMS方法5：RT:10.86min，MI 457[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)；9.0(1H,s),8.53(1H,d),8.35(1H,s),8.28(1H,1H,d),8.23(1H,s),3.70(4H,br s),3.64(4H,br s),1.50(9H,s)。

4-[5-甲氧基-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B003]

将4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B002](0.100g,0.22mmol)、Pd(dba)₂(10mg,0.013mmol)、Xantphos(17.5mg,0.025mmol)、NaOtBu(43mg,0.440mmol)以及无水二氧六环(4ml)的混合物添加至微波小瓶。然后，添加苯胺，将小瓶密封并且在150℃下加热持续20min。添加水(10mL)并且将反应混合物用DCM(2x 10mL)萃取，将萃取物合并并且用水(10mL)、饱和的碳酸氢盐(2x 10mL)和水(10mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并且蒸发以给出浅黄色油，所述浅黄色油通过快速柱色谱法(SP1,25g SiO2筒100％EtOAc直到95％EtOAc:5％MeOH梯度)纯化以给出作为无色固体的标题化合物[B003](0.04g 36％收率)。LCMS方法5：RT:7.80min，MI 514[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)；8.93(1H,s),8.65(1H,d),8.41(1H,s),7.39(1H,d),7.58(5H,m),6.55(1H,br s),3.63(4H,m),3.57(4H,m),1.49(9H,s)。

通式[G-008]的5-氯取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B2

通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过通式[G-006]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯与通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。使通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物参与Buchwald型反应，这利用通式[G-005]的合适的胺、钯催化剂例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配体例如Xantphos和碱例如NaOtBu或Cs₂CO₃在极性溶剂例如二氧六环或二氧六环和DMA的组合中在高温下通过热地加热或使用微波反应器。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化并且将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、HCl在溶剂例如DCM、DCE或1,4-二氧六环中或通过捕放磺酸树脂例如聚合物负载的甲苯磺酸脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案B2

[4-(5-氯-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[246]的合成

3,5-二氯-N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亚氨基-甲基]-异烟酰胺[B007]

将3,5-二氯吡啶-4-羧酸(15g,78.12mmol)、DIPEA(37.5mL,214mmol)在DMF(400mL)中的混合物在室温下搅拌，然后一次性添加HATU(29.7g,78.12mmol)并且将混合物留下搅拌持续45min。添加2-氯-异烟酰胺(14.25g,74.2mmol)并且将混合物留下搅拌持续另外的2小时。然后，将粗制反应混合物倾倒至水(800mL)上并且留下搅拌过夜。将粗制反应混合物过滤并且将固体用水洗涤，然后在真空烘箱中干燥过夜以给出作为灰白色固体的标题化合物(22g,85％收率)：LCMS方法1：RT:4.89min，MI 330[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；10.25(1H,br s),10.10(1H,br s),8.70(2H,s),8.57(1H,s),7.99(1H,s),7.88(1H,s)。

5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B008]

将3,5-二氯-N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亚氨基-甲基]-异烟酰胺[B007](10g,30.34mmol)、碳酸铯(19.8g,60.69mmol)和DMA(180mL)在室温下搅拌。将混合物用氮气冲洗，然后添加氯化铁(III)(0.98g,6.07mmol)并且将混合物在140℃下在氮气的气氛下加热过夜。将粗制反应混合物冷却，然后倾倒至冰水的混合物上，然后将混合物通过添加冰乙酸酸化，并且然后将混合物留在室温下搅拌持续2小时。将固体沉淀通过过滤收集，用水洗涤，然后在真空烘箱中干燥过夜以给出作为浅棕色固体的标题化合物(5.26g,59％收率)：LCMS方法1：RT:4.83min,MI 293[M+H]；

4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009]

将5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B008](1.05g,3.58mmol)、无水DMF(40mL)、三乙胺(1.5mL,10.7mmol)和DMAP(440mg,3.58mmol)的混合物进行声处理持续45min。添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(1.3g,4.3mmol)并且将反应混合物留在室温下搅拌持续2小时。在此时间期间，材料进入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加1-Boc-哌嗪(0.800g,4.3mmol)并且将反应混合物留在室温下搅拌过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物在DCM中研磨以给出棕色固体，所述棕色固体通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)纯化，以给出作为米黄色固体的标题化合物[B009](1.1g,67％收率)。LCMS方法1：RT:5.50min,MI 461[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.20(1H,s),8.67(1H,s),8.62(1H,d),8.33(1H,d),8.32(1H,s),7.94(1H,s),3.72(4H,m,br),3.53(4H,m,br),1.41(9H,s)。

4-[5-氯-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010]

将4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009](0.150g,0.325mmol)、苯胺(61μL,0.650mml)、Pd(OAc)₂(4mg,0.017mmol)、Xantphos(19mg,0.033mmol)、碳酸铯(212mg,0.650mmol)以及无水二氧六环(1ml)的混合物在90℃下加热过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到97％DCM:3％MeOH梯度)纯化以给出作为米黄色固体的标题化合物[B010](65mg,39％收率)。LCMS方法1：RT:4.34min,MI:518.31[M+H]。

[4-(5-氯-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-苯胺[246]

将4-[5-氯-2-(2-苯基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010](60mg,0.125mmol)在二氧六环(1mL)中的4N HCl中的混合物在室温下搅拌持续2小时。在完成之后，将溶剂在真空中蒸发并且残余物用MeOH(5mL)稀释并且倾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗涤，之后用2N NH3/MeOH洗脱，将NH3/MeOH在减压下蒸发。残余物通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到90％DCM:10％MeOH梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[246](23mg,44％收率)。LCMS方法1：RT:5.48min,MI:418.29[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；9.33(1H,s),9.12(1H,s),8.60(1H,s),8.32(1H,d),7.89(1H,s),7.74(2H,d),7.65(1H,dd),7.27(2H,t),6.89(1H,t),3.68(4H,m),3.15(1H,d),2.86(4H,m)。

通式[G-003]的被取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案B3

通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过通式[G-006]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯与通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。使通式[G-007]的5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物参与Buchwald型反应，这利用通式[G-005]的合适的胺、钯催化剂例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配体例如Xantphos和碱例如NaOtBu或Cs₂CO₃在极性溶剂例如二氧六环或二氧六环和DMA的组合中在高温下通过热地加热或使用微波反应器。使通式[G-008]的5-氯-2-氨基-吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Suzuki型反应中反应，这利用通式[G-009]的合适的硼酸或硼酸酯、钯催化剂例如Pd(PPh₃)₄或Pd(PPh₃)₂Cl₂、碱例如Et₃N、KOH、Na₂CO₃或NaOH在极性溶剂例如EtOH、THF、DMA或二氧六环中在高温下通过热地加热或使用微波反应器。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化并且将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、HCl在溶剂例如DCM、DCE或1,4-二氧六环中或通过捕放磺酸树脂例如聚合物负载的甲苯磺酸脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案B3

[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺[263]的合成

4-{5-氯-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010]

将4-[5-氯-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B009](3g,6.48mmol)、2-氟苯胺(654μL,6.48mml)、Pd(OAc)₂(79mg,0.324mmol)、Xantphos(375mg,0.648mmol)、碳酸铯(4.11g,12.6mmol)以及无水二氧六环(20ml)的混合物在90℃下加热过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(ISCO,120g SiO₂筒100％环己烷直到70％环己烷:30％乙酸乙酯梯度)纯化，以给出作为黄色固体的标题化合物[B010](1.2g,52％收率)。LCMS方法5：RT:4.19min，MI 516.57[M+H]。

4-{5-环丙基-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B011]

将4-{5-氯-2-[2-(2-氟苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B010](1.8g,3.36mmol)、Pd(dppf)Cl₂.CH₂Cl₂(137mg,0.168mmol)、K₃PO₄(2.14g,10.075mmol)、环丙基硼酸(578mg,6.72mmol)以及无水二氧六环(30ml)加上几滴的DMA的混合物添加至微波小瓶。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(ISCO,40g SiO₂筒100％环己烷直到70％环己烷:30％乙酸乙酯梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[B011](950mg,52％收率)。LCMS方法5：RT:4.72min，MI 542[M+H]。

[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(2-氟-苯基)-胺[263]

将4-{5-环丙基-2-[2-(2-氟-苯基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B011](300mg,0.554mmol)在二氧六环(1.5mL)中的4N HCl中的混合物在室温下搅拌持续2小时。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过反相快速柱色谱法(ISCO,24g SiO₂筒，100％H₂O:0.1％甲酸直到20％H₂O:0.1％甲酸:80％MeOH:0.1％甲酸梯度)纯化。将残余物用MeOH(5mL)稀释并且倾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗涤，之后用2N NH3/MeOH洗脱，将NH3/MeOH在减压下蒸发以给出作为黄色固体的标题化合物[263](110mg,45％收率)：LCMS方法1：RT:4.03min，MI 442[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.27(1H,d),8.21(1H,m),8.08(1H,s),8.03(1H.s),7.70-7.69(1H,dd),7.23(1H,m),7.14(1H,m),6.99(1H,m),3.78-3.62(4H,m),2.84(4H,s),2.61(1H,m),1.25-1.24(2H,m),1.02-1.01(2H,m)。

通式[G-012]的5-环丙基取代的2-氨基吡啶基取代的2-(2-氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成

方案B4

通式[G-011]的5-环丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过通式[G-010]的5-环丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯与通式[G-004]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。使通式[G-011]的5-环丙基-2-(2-氯-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物参与Buchwald型反应，这利用通式[G-005]的合适的胺、钯催化剂例如Pd(dba)₂或Pd(OAc)₂、配体例如Xantphos和碱例如NaOtBu或Cs₂CO₃在极性溶剂例如二氧六环或二氧六环和DMA的组合中在高温下通过热地加热或使用微波反应器。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化并且将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、HCl在溶剂例如DCM、DCE或1,4-二氧六环中或通过捕放磺酸树脂例如聚合物负载的甲苯磺酸脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(4,5-二甲基-噁唑-2-基)-胺[272]的合成，

3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯[B012]的合成

向冷却至约-70℃的LDA(2M,72mL,144mmol)在THF(100mL)中的溶液经由套管逐滴地添加预冷却至-70℃的3-溴-5-氟吡啶(21.12g,120mmol)在无水THF(50mL)中的溶液。控制添加速率，使得内部温度不升高高于-65℃。将深红棕色溶液搅拌持续1小时。将在THF(50mL)中的二碳酸二叔丁酯(52.4g,240mmol)在甲醇/冰浴中冷却至-10℃，然后经由套管逐滴地添加至深红棕色溶液。将混合物搅拌持续2小时，然后允许加温至室温并且搅拌持续另一个1小时。缓慢地添加饱和的氯化铵水溶液(100mL)，并且然后添加水(200mL)和EtOAc(200mL)并且将混合物剧烈地搅拌持续45分钟。将混合物转移至分液漏斗并且将层分离。将水层用EtOAc(200mL)萃取。将THF层和EtOAc层合并，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发。将回收的深红棕色油通过柱色谱法(环己烷/AcOEt:1/0至97/3)纯化。将包含期望的材料的级分在真空中浓缩以产生作为浅黄色油的标题化合物[B012](14g,85％)。LCMS方法1：RT:5.44min,MI:277[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；8.56(s,1H),8.43(s,1H),1.62(s,9H)。

3-环丙基-5-氟-异烟酸叔丁酯[B013]的合成

使在无水二氧六环(100mL)中包含3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯[B012](5.52g,20mmol)、磷酸三钾(12.74g,60mmol)和环丙基硼酸(2.58g,30mmol)的溶液经受真空/氩气球(三次)。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.408g,0.5mmol)，并且反应在96℃下在氮气的正压下加热过夜。将混合物冷却至室温并且通过200g二氧化硅的垫过滤并且用EtOAc(1L)洗涤。将滤液在真空中浓缩并且将粗品通过柱色谱法(环己烷/AcOEt:98:2至96:4)纯化。将合并的级分在减压下浓缩以产生作为无色油的标题化合物[B013](3.42g,72％)。LCMS方法1：RT:5.36min,MI:238[M+H]。

3-环丙基-5-氟-异烟酸[B014]的合成

在微波小瓶中，将3-环丙基-5-氟-异烟酸叔丁酯[B013](1.186g,5mmol)溶解在无水甲醇中并且然后在微波中在140℃下加热持续1小时。将反应在真空中浓缩以给出作为白色结晶固体的标题化合物[B014]0.84g(92％)。LCMS方法1：RT:1.51min,MI:182[M+H]。

2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B015]的合成

搅拌3-环丙基-5-氟-异烟酸[B014](5g,27.6mmol)和HATU(10.5g,82.86mmol)在DMF(35mL)中的混合物，并且添加DIPEA(14.5mL,82.86mmol)。将混合物留在室温下搅拌持续1小时，然后一次性添加2-氯-异烟脒盐酸盐(2-Chloro-isonicotinamidine hydrochloride)(5.3g,27.52mmol)并且将混合物留在室温下搅拌持续18小时。将粗制反应混合物倾倒至水(180mL)上并且留下搅拌持续2小时，并且然后米黄色固体通过过滤收集、用水洗涤并且在真空烘箱中干燥以给出N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亚氨基-甲基]-3-环丙基-5-氟-异烟酰胺(6.60g,75％收率)，该化合物在下一个步骤中在不进一步纯化的情况下使用：LCMS方法1：RT:3.45min,MI：319[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；10.25(s,br,1H),9.92(s,br,1H),8.59(d,1H),8.42(s,1H),8.11(s,1H),8.00(s,1H),7.92(dd,1H),2.01(m,1H),0.98(m,2H),0.85(m,2H)。

将N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亚氨基-甲基]-3-环丙基-5-氟-异烟酰胺(6.60g,20.70mmol)和Cs2CO3(6.7g,20.7mmol)以及DMA(90mL)的混合物在90℃下加热过夜。将反应混合物倾倒到冰/水(100ml)中，然后通过逐滴添加冰乙酸酸化并且将混合物留在0℃下搅拌持续1小时。将米黄色沉淀通过过滤收集并且用水洗涤，然后在真空烘箱中干燥以给出标题化合物[B015](4.8g,78％收率)。LCMS方法1：RT:3.90min,MI：299[M+H]；NMR：(1H,300MHz,d6-dmso)；12.92(s,1H),8.88(s,1H),8.66(d,1H),8.25(dd,2H),8.16(dd,1H),3.39(m,1H),1.11(m,2H),0.94(m,2H)。

4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016]

将2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[B015](280mg,0.937mmol)、无水DMF(9mL)、三乙胺(0.390mL,2.81mmol)和DMAP(115mg,0.937mmol)的混合物进行声处理持续10min，然后在室温下搅拌持续10min。添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(340mg,1.12mmol)并且将混合物进行声处理持续5min，然后留在室温下搅拌持续2小时。在此时间期间，材料进入到溶液中以形成粘稠的溶液。添加1-Boc-哌嗪(190mg,1.03mmol)并且将反应混合物留在室温下搅拌过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[B016](276mg,63％收率)。LCMS方法5：RT:5.16min,MI：467[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；9.02(1H,s),8.61(1H,dd),8.34(2H,m),8.15(1H,s),3.68-3.83(4H,非常宽的单峰),3.51(4H,br s),2.59(1H,m),1.24(2H,m),1.16(2H,m)。

4-{5-环丙基-2-[2-(4,5-二甲基-噁唑-2-基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B017]

将4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016](280mg,0.591mmol)、4,5-二甲基-噁唑-2-基胺(132mg,1.18mml)、Pd(OAc)₂(7mg,0.030mmol)、Xantphos(35mg,0.060mmol)、碳酸铯(384mg,1.18mmol)以及无水二氧六环(1.5ml)的混合物在90℃下加热过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到96％DCM:4％MeOH梯度)纯化以给出作为米黄色固体的标题化合物[B017](61mg,19％收率)。LCMS方法5：RT:4.07min,MI：543[M+H]。

[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-(4,5-二甲基-噁唑-2-基)-胺[272]

将4-{5-环丙基-2-[2-(4,5-二甲基-噁唑-2-基氨基)-吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B017](60mg,0.112mmol)在二氧六环(1mL)中的4N HCl中的混合物在室温下搅拌持续2小时。在完成之后，将溶剂在减压下蒸发并且残余物用MeOH(5mL)稀释并且倾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗涤，之后用2N NH3/MeOH洗脱，将NH3/MeOH在减压下蒸发。然后，将残余物通过快速柱色谱法(SP1,10g SiO₂筒100％DCM直到90％DCM:10％MeOH梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[272](22mg,44％收率)。LCMS方法5：RT:2.70min,MI：443[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；10.61(1H,s),9.17(1H,s),9.05(1H,s),8.38(1H,d),8.16(1H,s),7.87(1H,d),3.94(1H,s,br),3.26(4H,m,br),2.69(2H,m),2.19(3H,s),2.04(3H,s),1.25-1.22(3H,m),1.06-1.05(2H,m)。

环戊基-[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-胺[281]的合成

4-[2-(2-环戊基氨基-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B018]

将4-[2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016][根据在方案B4中示出的一般合成制备的](170mg,0.364mmol)、环戊胺(73μL,0.728mmol)、Pd(t-Bu₃P)₂(38mg,0.073mmol)、叔丁醇钠(54mg,0.546mmol)和无水二氧六环(2ml)的混合物在110℃下加热过夜。将溶剂在减压下蒸发并且残余物通过快速柱色谱法(SP1,20g SiO₂筒100％DCM直到96％DCM:4％MeOH梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[B018](92mg,48％收率)。LCMS方法5：RT:4.19min,MI:516.57[M+H]。

环戊基-[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]-胺[281]

将4-[2-(2-环戊基氨基-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B018](90mg,0.178mmol)在二氧六环(2mL)中的4N HCl中的混合物在室温下搅拌持续2小时。将溶剂在减压下蒸发并且残余物用MeOH(5mL)稀释并且倾倒至1g SCX-2筒上并且用DCM和MeOH洗涤，之后用2N NH3/MeOH洗脱，将NH3/MeOH在减压下蒸发。然后，将残余物通过快速柱色谱法(SP1,10g SiO₂筒100％DCM直到95％DCM:5％MeOH梯度)纯化以给出作为黄色固体的标题化合物[281](26mg,37％收率)。LCMS方法5：RT:2.22min，MI 416.25[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)；8.95(1H,s),8.10(2H,d),8.08(1H,s),7.51(1H,s),7.38(1H,dd),6.75(1H,d),4.17(1H,m),3.84-3.65(4H,m),3.11(4H,m),2.91(1H,m),2.62(2H,m),1.98-1.92(2H,m),1.69(2H,m),1.55(2H,m),1.46(2H,m),1.24-1.22(2H,m),1.03(2H,m)。

4PPAZ化合物

本文描述用于本申请的通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉化合物(为了便利，本文统称为“4PPAZ化合物”)的化学合成的若干方法。这些方法和/或其他熟知的方法可以以已知的方式被修改和/或调整以便有助于在本申请的范围内的另外的化合物的合成。

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物的一般合成 方案D1

通式[I-003]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物通过使在方案C2中制备的通式[I-002]的2-氯-吡啶并[3,4-d]嘧啶衍生物在Suzuki型钯催化的交叉偶联反应中与通式[I-004]的硼酸或硼酸酯衍生物、钯催化剂例如Pd(PPh₃)₄、碱例如K₂PO₄在极性非质子溶剂例如DMA或DMF中在升高的温度下通过热地加热或使用微波反应器反应来制备，以产生通式[I-003]的4PPAZ衍生物。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，使中间体通式[I-003]的芳基磺酸酯保护的衍生物在碱例如氢氧化钠的存在下在极性质子溶剂例如乙醇中经受脱保护反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将中间体通过柱色谱法纯化并且将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、HCl在溶剂例如DCM、DCE或1,4-二氧六环中或通过捕放磺酸树脂例如聚合物负载的甲苯磺酸脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案D1

5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1200]的合成

4-{5-甲氧基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D001]

制备4-(2-氯-5-甲氧基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[在方案C2中制备的C011](250mg,0.671mmol)在DMA(7.5mL)中的溶液。添加4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002](374mg,0.940mmol)、Pd(PPh₃)₄(77mg,0.067mmol)以及K₃PO₄(2.68mL的在水中的0.5M溶液)。将反应混合物在微波中加热至150℃持续10min。将反应混合物通过旋转蒸发仪浓缩并且通过二氧化硅柱色谱法(用包含0-100％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为黄色固体的标题化合物[D001](115mg,28％)。LCMS方法5：RT 5.13min，MI 616[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.92(s,1H),8.53(d,1H),8.37(s,1H),8.26(d,1H),8.05(d,1H),8.02(d,1H),7.77(d,1H),7.64–7.60(m,1H),7.57–7.53(m,1H),7.43(d,2H),4.09(s,3H),3.67(br.m,4H),3.56(br.m,4H),1.43(s,9H)。

5-甲氧基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1200]

制备4-{5-甲氧基-2-[1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D001](100mg,0.162mmol)在乙醇(4mL)中的溶液并且添加NaOH(1mL的5M溶液)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过旋转蒸发浓缩并且残余物溶解在DCM(10mL)和水(10mL)中。将pH通过添加氯化铵调整至约7并且混合物用DCM(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(相分离器)并且通过旋转蒸发浓缩。将残余物通过二氧化硅柱色谱法(用包含75-100％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出中间体4-[5-甲氧基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯，将该中间体在二氧六环(2mL)中的4M HCl中在室温下搅拌持续1小时。将反应混合物通过旋转蒸发浓缩，加载至SCX-2筒上，用甲醇洗涤并且用在甲醇中的7N氨洗脱。将氨级分通过旋转蒸发浓缩以给出作为黄色固体的标题化合物[1200](29mg,49％)。LCMS方法5：RT 2.23min，MI 362[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)11.81(1H,s),8.89(1H,s),8.37(1H,d,J＝5.0Hz),8.31(1H,s),8.09(1H,d,J＝5.0Hz),7.63-7.62(1H,m),7.43(1H,dd,J＝3.3,1.8Hz),4.07(3H,s),3.66-3.64(4H,m),2.91-2.89(4H,m)。

通式[I-004]的被取代的硼酸衍生物或硼酸酯衍生物的一般合成 方案D2

通式[I-004]的被取代的硼酸衍生物或硼酸酯衍生物通过通式[I-005]的4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物与通式[I-008]的芳基磺酰氯衍生物在碱例如NaH下在极性非质子溶剂例如THF中在低温下的反应来制备。然后，使通式[I-006]的1-芳基磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在强碱例如LDA下在极性非质子溶剂例如THF中在低温下和通式[I-009]的烷基卤化物衍生物反应。然后，使通式[I-007]的C2取代的4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在钯催化的交叉偶联反应中与钯催化剂例如PdCl₂dppf、硼剂例如双频哪醇合二硼、乙酸钾在极性非质子溶剂例如二氧六环中在升高的温度下通过热地加热或使用微波反应器来反应，以产生通式[I-004]的被取代的硼酸酯衍生物，该被取代的硼酸酯衍生物在典型地通过液液萃取的反应后处理之后通过柱色谱法纯化。

方案D2

4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002]的合成

4-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D003]

将4-溴-7-氮杂吲哚(3g,15.22mmol)称重到圆底烧瓶中并且在氮气下溶解在THF(50mL)中。将反应混合物冷却至0℃并且用氢化钠(60％在矿物油中，0.67g，16.75mmol)分批处理，添加伴随着冒气泡。在添加之后，允许反应混合物在室温下搅拌持续30分钟并且然后用苯磺酰氯(2.14mL,16.75mmol)处理。允许反应混合物加温至室温并且搅拌持续2小时。将反应混合物在减压下蒸发并且溶解在DCM 30mL中，将有机物用2x30mL份的2M碳酸钠洗涤、用MgSO4干燥、过滤并且蒸发成橙色油。通过快速柱色谱法(用1:9乙酸乙酯:环己烷洗脱)纯化以提供作为灰白色固体的标题化合物(92％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 337[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.22(d,1H),8.18(d,2H),7.78(d,1H),7.58(t,1H),7.48(t,2H),7.35(d,1H),6.63(d,1H)。

4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D002]

将4-溴-1-(甲苯-4-磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.57g,4.47mmol)、双(频哪醇合)二硼[D003](2.71g,10.72mmol)、PdCl2.dppf CH2Cl2加合物(0.365g,0.45mmol)和乙酸钾(0.876g,8.94mmol)称重到微波小瓶中。添加二氧六环(30mL)并且将反应混合物加盖并且在130℃下在微波反应器中加热持续30分钟。将溶剂在减压下除去并且将残余物在氯化铵20mL和乙酸乙酯20mL之间分配。将有机物用MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发成棕色油。将此通过二氧化硅的短柱，用1:4乙酸乙酯:环己烷洗脱。将级分集中并且蒸发以产生作为浅黄色固体的标题化合物[D002]。LCMS方法5：RT:4.77min，MI 317[对于硼酸中间体的M+H]

苯磺酰基-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D004]的合成

1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D005]

将4-溴-7-氮杂吲哚(3g,15.22mmol)称重到圆底烧瓶中并且在氮气下溶解在THF(50mL)中。将反应混合物冷却至0℃并且用氢化钠(60％在矿物油中，0.67g，16.75mmol)分批处理，添加伴随着冒气泡。在添加之后，允许反应混合物在室温下搅拌持续30分钟并且然后用苯磺酰氯(2.14mL,16.75mmol)处理。允许反应混合物加温至室温并且搅拌持续2小时。将反应混合物在减压下蒸发并且溶解在DCM 30mL中，将有机物用2x30mL份的2M碳酸钠洗涤，用MgSO4干燥，过滤并且蒸发成橙色油。通过快速柱色谱法(用1:9乙酸乙酯:环己烷洗脱)纯化以提供作为灰白色固体的标题化合物[D005](92％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 337[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.22(d,1H),8.18(d,2H),7.78(d,1H),7.58(t,1H),7.48(t,2H),7.35(d,1H),6.63(d,1H)。

1-苯磺酰基-4-溴-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D006]

向1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D005](2g,5.93mmol)在THF(50mL)中的溶液在-78℃下逐滴地添加LDA(2M,5.9mL,11.86mmol)。将溶液搅拌30min。允许温度加温至0℃并且然后逐滴地添加甲基碘(3.67mL,59mmol)并且将溶液在0℃下搅拌3h并且允许搅拌至室温过夜。将反应用氯化铵水溶液猝灭并且用DCM萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗品通过SP1(洗脱剂，梯度：环己烷/AcOEt:1/0至8/2)纯化。将级分收集并且在减压下浓缩以产生作为白色固体的标题化合物[D006](87％)。LCMS方法5：RT 5.80min，MI 351[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.12-8.15(m,3H),7.56(t,1H),7.47(t,2H),7.29(d,1H),6.34(s,1H),2.74(s,3H)。

苯磺酰基-2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D004]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺酰基-4-溴-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶给出作为浅黄色固体的标题化合物[D004](72％)。LCMS方法5：RT 6.19min，MI 399[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl₃)8.34(d,1H),8.07(d,2H),7.50(t,1H),7.46(d,1H),7.41(t,2H),6.70(s,1H),2.73(s,3H),1.33(s,12H)。

根据方案D2制备以下化合物：

1-苯磺酰基-2-苄基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D007]

1-苯磺酰基-2-苄基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D008]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶与苄基溴反应以给出标题化合物[D008]，所述标题化合物在下一步中作为粗品使用。LCMS方法5：RT 6.62min,MI 427[M+H]。

1-苯磺酰基-2-苄基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D007]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺酰基-2-苄基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶给出作为浅黄色固体的标题化合物[D007]：LCMS方法5：RT 5.59min,MI 392[M+H，硼酸酯在LCMS条件中水解成对应的硼酸]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.38(d,1H),7.70(dd,1H),7.49(d,1H),7.42(t,1H),7.23-7.30(m,7H),6.75(s,1H),4.54(d,2H),1.34(s,12H)。

1-苯磺酰基-2-(2-氟苄基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D009]的合成

步骤1：1-苯磺酰基-4-溴-2-(2-氟苄基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D010]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶与2-氟苄溴反应以给出标题化合物[D010](75％)：LCMS方法5：RT6.45min,MI 445[M+H]。

步骤2：1-苯磺酰基-2-(2-氟苄基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D009]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺酰基-4-溴-2-(2-氟苄基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶给出作为白色固体的标题化合物[D009]。LCMS方法5：RT 5.50min,MI 411[M+1,硼酸酯水解成其对应的硼酸]。

1-苯磺酰基-2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D011]的合成

1-苯磺酰基-4-溴-2-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D012]

遵循在方案D2中描述的程序，使1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶与碘乙烷反应以给出作为白色固体的标题化合物[D012]：LCMS方法5：RT 6.01min，MI 351[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.11-8.15(m,3H),7.56(d,1H),7.45-7.48(m,2H),7.30(d,1H),6.39(s,1H),3.19(q,2H),1.42(t,3H)。

1-苯磺酰基-2-乙基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D011]

遵循在方案D2中描述的程序，用1-苯磺酰基-4-溴-2-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶给出作为浅黄色固体的标题化合物[D011]：LCMS方法5：RT 6.42min,MI 413[M+H]；LCMS方法1：LCMS5,6.42min,MI:413[M+1]。

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物的一般合成 方案D3

通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物通过通式[I-010]的卤化吡啶衍生物与强碱例如LDA在极性非质子溶剂例如THF、对称的酸酐例如二碳酸二叔丁酯中在低温下的反应来制备，以产生通式[I-011]的卤素取代的异烟酸叔丁酯衍生物。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，使通式[I-011]的卤素取代的异烟酸叔丁酯衍生物经受与通式[I-018]的硼酸或硼酸酯衍生物、钯催化剂例如Pd(PPh₃)₄、碱例如K₂PO₄在极性非质子溶剂例如DMA或DMF中在升高的温度下通过热地加热或使用微波反应器的Suzuki型钯催化的交叉偶联反应，以产生通式[I-012]的取代的异烟酸叔丁酯衍生物。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，使叔丁酯中间体[I-012]在碱例如氢氧化钠的存在下在极性质子溶剂例如乙醇中经受脱保护反应，以产生通式[I-013]的被取代的异烟酸衍生物，然后使通式[I-013]的被取代的异烟酸衍生物在合适的偶联剂例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)下在极性非质子溶剂例如DMA或DMF中经受与通式[I-014]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物的偶联反应。然后，通式[I-015]的异烟酰基脒衍生物可以被环化以替代有关的卤素基团以产生期望的通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物。通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物通过通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与氯化剂例如氧氯化磷的反应来制备，以给出通式的化合物并且然后使中间体4-氯代衍生物进一步与通式[I-017]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应[方法A]。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过正相硅胶色谱法或反相制备型HPLC纯化。通式[I-001]的4-取代的-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-氮杂喹唑啉衍生物通过通式[I-016]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备[方法B]。然后，将中间体6,7-取代的-(2,4,6-三异丙基苯磺酸)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯与通式[G-117]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过反相制备型HPLC纯化。

方案D3

5-环丙基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1209]的合成

3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯[D013]

向LDA(2M,72mL,144mmol)在THF(100mL)中的溶液在-78℃下经由套管逐滴地添加在-78℃下预冷却的3-溴-5-氟吡啶(21.12g,120mmol)在THF(50mL)中的溶液。在添加期间，内部温度不升高高于-65℃。将深红棕色溶液搅拌持续1小时。将在THF(50mL)中的二碳酸二叔丁酯(52.4g,240mmol)在甲醇/冰浴中冷却至-10℃，然后经由套管逐滴地添加至深红棕色溶液。将混合物搅拌持续2小时，然后允许加温至室温并且搅拌持续1小时。缓慢地添加饱和的含水氯化铵(100mL)，并且然后添加水(200mL)和EtOAc(200mL)，并且将混合物剧烈地搅拌持续45分钟。将混合物转移至分液漏斗并且将层分离。将水层用EtOAc(200mL)萃取。将THF层和EtOAc层合并，经硫酸镁干燥，过滤并且蒸发。将回收的深红棕色油通过柱色谱法(环己烷/AcOEt:1/0至97/3)纯化。将包含期望的材料的级分在真空中浓缩(14g,85％)。LCMS方法5：RT 5.44min，MI 277[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl3)8.56(s,1H),8.43(s,1H),1.62(s,9H)。

3-环丙基-5-氟-异烟酸叔丁酯[D014]

使在二氧六环(100mL)中包含3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯[D013](5.52g,20mmol)、磷酸三钾(12.74g,60mmol)和环丙基硼酸(2.58g,30mmol)的溶液经受真空/氩气球(三次)。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.408g,0.5mmol)并且反应在96℃下在氮气的正压下加热过夜。将混合物冷却至室温并且通过200g二氧化硅的垫过滤并且用EtOAc(1L)洗涤。将滤液在真空中浓缩并且将粗品通过柱色谱法(环己烷/AcOEt：98:2至96:4)纯化。将合并的级分在减压下浓缩以给出作为无色油的标题化合物[D014](3.42g,72％)。LCMS方法5：RT 5.36min，MI 238[M+H]；NMR：(1H,500MHz,CDCl3)8.33(s,1H),8.15(s,1H),2.05-2.00(m,1H),1.62(s,9H),1.04-1.00 9m,2H),0.82-0.78(m,2H)。

3-环丙基-5-氟-异烟酸[D015]

在微波小瓶中，将3-环丙基-5-氟-异烟酸叔丁酯[D014](1.186g,5mmol)溶解在甲醇中并且然后在微波中在140℃下加热持续1小时。将反应在真空中浓缩以产生白色结晶固体的标题化合物[D015]0.84g(92％)。LC-MS:1NJM406_1_28Jul2011；1.51min,87％；182+；1LCMS5。

3-环丙基-5-氟-N-[亚氨基-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-甲基]-异烟酰胺[D016]

将3-环丙基-5-氟-异烟酸[D015](0.681g,3.76mmol)、HATU(1.43g,3.76mmol)和二异丙基乙胺(2.29mL,13.16mmol)在DMF(5mL)中搅拌。在1小时之后，添加1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐(0.92g,3.76mmol)。已经搅拌持续18小时，将混合物倾倒到水(180ml)中，搅拌持续2小时并且然后白色固体通过过滤收集并且用H2O洗涤以产生作为白色固体的标题化合物[D016](1.17g)，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS方法5：RT 3.22min,MI 324[M+H]。

5-环丙基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017]

将N-[(2-氯-吡啶-4-基)-亚氨基-甲基]-3-环丙基-5-氟-异烟酰胺[D016](1.164g,3.6mmol)和Cs2CO3(1.18g,3.60mmol)在DMA(12mL)中的混合物在90℃下热地加热过夜。将反应混合物倾倒到H2O(20ml)中并且在于0℃下逐滴地添加乙酸下酸化。将米黄色沉淀(0.474,43％)通过过滤收集并且用H2O洗涤以产生标题化合物[D017]，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS方法5：RT 4.58min，MI 304[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)12.12(brs,1H),9.09(s,1H),8.54(d,1H),8.37(s,1H),7.90(d,1H),7.83(s,1H),7.36(s,1H),3.56-3.64(m,1H),1.24-1.30(m,2H),1.08-1.14(m,2H)。

4-[5-环丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D018]

向5-环丙基-2-吡啶-4-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017](0.47g,1.55mmol)在DMF(25mL)中的溶液添加DIPEA(0.809mL,4.65mmol)和DMAP(5mg)。然后，添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.563g,1.86mmol)并且将混合物搅拌2小时。然后，添加N-Boc-哌嗪(0.318g,1.705mmol)并且将混合物搅拌过夜。添加水(60-70mL)并且将溶液在室温下搅拌持续15min。将产生的固体收集并且用水洗涤两次。将固体溶解在DCM中并且通过柱色谱法(洗脱剂：DCM/MeOH，梯度0％至10％MeOH)纯化，以产生作为深棕色胶状物的标题化合物[D018](0.6g,82％)，所述标题化合物在下一步中在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS方法5：RT 5.85min,MI 472[M+H]。

5-环丙基-4-哌嗪-1-基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶[1209]

向4-[5-环丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D018](0.6g,1.27mmol)在DCM(15mL)中的溶液添加HCl(4N，二氧六环，2mL)并且将产生的亮黄色悬浮液在室温下搅拌持续90min。将溶液在减压下浓缩并且溶解在MeOH中并且添加至SCX-2筒(10g)，用MeOH/DCM(1:1,40mL)和MeOH(20mL)洗涤。然后，将SCX-2筒用氨(7N在MeOH中,30mL)洗涤。将氨洗涤物在真空中浓缩并且将材料以柱色谱法(洗脱剂DCM/MeOH，梯度0-20％MeOH/DCM)纯化。将级分合并并且在减压下浓缩以产生标题化合物[1009]：LCMS方法5：RT 2.65min，MI 372[M+H]；NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)11.82(brs,1H),9.13(s,1H),8.36(d,1H),8.10(d,1H),7.62(t,1H),7.45(dd,1H),3.50-3.90(m,4H),2.88-2.91(m,4H),2.66-2.69(m,1H),1.22-1.27(m,2H),1.02-1.06

通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物的一般合成 方案D4

通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物通过使通式[I-019]的2-甲基吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯衍生物在强碱例如nBuLi下在极性非质子溶剂例如THF中与通式[I-025]的被取代的Weinreb酰胺衍生物在低温下反应、随后与矿物酸例如盐酸在升高的温度下反应以产生通式[I-020]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物来制备，在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，使通式[I-020]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物经受与氧化剂例如mCPBA在溶剂例如DCM中的吡啶N-氧化反应。然后，使中间体通式[I-021]的1-H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物衍生物与氯化剂例如甲磺酰氯在极性非质子溶剂例如DMF中在升高的温度下反应，在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，将中间体通式[I-022]的4-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物经受与氰化物物质例如氰化锌、钯催化剂例如[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物、锌粉在极性非质子溶剂例如DMF中在升高的温度下的钯催化的交叉偶联反应，在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。然后，使中间体通式[I-023]的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物与羟胺(50％wt/wt在水中)和极性质子溶剂例如EtOH在升高的温度下反应。然后，使中间体通式[I-024]的N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲酰胺经受与乙酸酐在极性质子溶剂例如甲醇中、在钯催化剂例如活性炭载钯(palladium on activated charcoal)下在氢气的气氛下的氢解反应，以产生通式[I-012]的被取代的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒衍生物，方案D4。

方案D4

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D036]的合成

步骤1：2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D031]

向(3-甲基-吡啶-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(5g,24mmol)在THF(50mL)中的溶液在-30℃下添加BuLi(2.5M,28.5mL,72mmol)，并且将反应混合物加温至0℃并且搅拌持续90min。缓慢地添加2,2,2-三氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(2.9mL,24mmol)在THF(10mL)中的溶液，并且将反应在0℃下搅拌持续3h。将反应混合物用HCl(30mL,6M)缓慢地处理，随后在60℃下加热持续18h。将反应混合物冷却，将层分离并且水层用NaOH(5M)制成碱性并且用AcOEt萃取两次。使合并的有机层(加上来自第一次萃取的有机层)经MgSO4干燥，浓缩并且将残余物通过柱色谱法(洗脱剂环己烷/AcOEt 1/0至8/2)纯化，以提供作为黄色固体的标题化合物[D031](1.2g,27％)：LCMS方法5：RT 4.44min，MI 187[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)14.33(brs,1H),8.49(d,1H),8.09(d,1H),7.27(dd,1H),6.90(s,1H)。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D032]

向2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D031](1.2g,6.45mmol)在DCM(10mL)中的溶液添加3-氯过氧苯甲酸(1.22g,7.09mmol)并且将混合物搅拌过夜。添加NaHCO3的饱和溶液并且将层分离。使有机物经MgSO4干燥并且在减压下浓缩，以产生作为黄色固体的标题化合物[D032](0.82g,63％)，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用：LCMS方法5：RT 3.43min，MI 203[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.34(d,1H),7.76(d,1H),7.19(d,1H),7.18(s,1H)。

4-氯-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D033]

向2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D032](0.82g,4.05mmol)在DMF(10mL)中的溶液在50℃下逐滴地添加甲磺酰氯(1.57mL,20.28mmol)。将溶液在50℃下搅拌3h。然后将反应冷却至室温并且添加水(5mL)。添加5M NaOH的溶液并且将固体收集，使用具有甲苯的共沸物干燥以产生标题化合物[D032]，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS：1LCMS5 5.77min,221-223[M+1,Cl模式]。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D034]

可密封的小瓶装载有4-氯-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D033](0.6g,2.72mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.222g,0.27mmol)、氰化锌(0.958g,8.16mmol)、锌(粉，0.036g,0.54mmol)以及DMF(15mL)。将小瓶加盖并且在90℃下加热过夜。将反应倾入水中并且用AcOEt萃取。将水层再次用AcOEt萃取并且将有机物合并，用水和盐水洗涤并且经MgSO4干燥以产生标题化合物[D043]，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS方法5：RT 4.98min,MI 212[M+H]。

N-羟基-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D035]

将2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D034](0.68g,3.22mmol)和羟胺(50％wt/wt在水中,0.205mL,6.44mmol)和EtOH(5mL)的混合物在80℃下加热过夜。然后，将溶剂蒸发并且将混合物用甲苯在真空下共沸两次。以产生作为黄色固体的标题化合物[D035](0.78g,99％)，所述标题化合物在下一步中在不进一步纯化的情况下被使用：LCMS方法5：RT 2.22min，MI 245[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso):13.14(brs,1H),10.40(s,1H),8.70(s,1H),7.70(s,1H),7.56(d,1H),6.27(s,2H)。

2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒；与乙酸的化合物[D036]

向N-羟基-2-三氟甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D035](0.43g,1.76mmol)在MeOH(10mL)中的悬浮液在室温下逐滴地添加乙酸酐(0.175mL,1.85mmol)。将悬浮液搅拌15min并且添加炭载钯(5％wt/wt,0.1g)。将容器密封并且氢气(气球)在混合物中鼓泡持续10min并且留在氢气气氛下在室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并且在真空中浓缩以产生作为黄色固体的标题化合物[D036](0.51g,100％)，所述标题化合物在不进一步纯化的情况下被使用。LCMS方法5：RT 4.45min，MI 229[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)1.79(s,3H,CH₃CO₂H),8.50(s,1H),7.35(s,1H),7.03(s,1H)。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D042]的合成

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D037]

遵循在方案D4，步骤1中描述的程序，通过(3-甲基-吡啶-2-基)-氨基甲酸叔丁酯、噻吩-2-羧酸甲氧基-甲基-酰胺、BuLi和THF的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 4.79min,MI 201[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D038]

遵循在方案D4、步骤2中描述的程序，通过2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D037]、m-CPBA和DCM的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 3.38min,MI 217[M+H]。

4-氯-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D039]

遵循在方案D4、步骤3中描述的程序，通过2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-7-氧化物[D038]、甲磺酰氯和DMF的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 6.05min,MI 235[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D040]

遵循在方案D4、步骤4中描述的程序，通过4-氯-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D039]、PdCl2dppf：CH2Cl2、氰化锌、锌粉和DMA的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 5.28min,MI 226[M+H]。

N-羟基-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D041]

遵循在方案D4、步骤5中描述的程序，通过2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D040]、羟胺和EtOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 2.38min,MI 259[M+H]。

2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D042]

遵循在方案D4、步骤6中描述的程序，通过N-羟基-2-噻吩-2-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D041]、乙酸酐、Pd/C、氢气和MeOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 4.45min,MI243[M+H]。

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D045]的合成

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D043]

遵循在方案D4、步骤4中描述的程序，通过4-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶、PdCl2dppf：CH2Cl2、氰化锌、锌粉和DMA的反应来制备，以给出作为白色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 4.17min,MI 158[M+H]。

N-羟基-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D044]

遵循在方案D4、步骤5中描述的程序，通过2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D043]、羟胺和EtOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 1.92min,MI 191[M+H]。

2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D045]

遵循在方案D4、步骤6中描述的程序，通过N-羟基-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D044]、乙酸酐、Pd/C、氢气和MeOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 2.44min,MI 175[M+H]。

例如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D047]的合成

N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D047]

遵循在方案D4、步骤5中描述的程序，通过1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈、羟胺和EtOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 1.24min,MI 162[M+H]。

2-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒乙酸盐[D047]

遵循在方案D4、步骤6中描述的程序，通过N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D047]、乙酸酐、Pd/C、氢气和MeOH的反应来制备，以给出作为黄色固体的标题化合物。LCMS方法5：RT 1.23min，MI 161[M+H]，NMR：(1H,500MHz,d6-dmso)8.38(1H,d),7.71(1H,d),7.30(1H,d),6.58(1H,d),1.80(8H,s)。

通式[I-034]的2-取代的-氮杂吲哚衍生物的一般合成 方案D5

通式[I-034]的2-取代的氮杂吲哚衍生物通过通式[I-030]的1-苯磺酰基-4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶衍生物在钯催化的交叉偶联反应中与钯催化剂例如PdCl₂dppf：CH₂Cl₂、氰化物试剂例如Zn(CN)₂、锌粉在极性非质子溶剂例如DMF中在高温下通过热地加热或使用微波反应器的反应来制备。将粗产物通过柱色谱法纯化。然后，使通式[I-031]的1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物在强碱例如LDA下在极性非质子溶剂例如THF中在低反应温度例如-78℃下与通式[I-035]的亲电体例如酮、二硫化物或卤化剂例如NIS或NCS反应，以产生通式[I-032]的2-取代的1-苯磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物，之后是典型地通过液液萃取的反应后处理和通过柱色谱法的纯化。将通式[I-032]的中间体通过与氟化物试剂例如TBAF在极性非质子溶剂例如THF中反应来脱保护，以产生通式[I-033]的反应中间体。然后，使通式[I-033]的反应中间体与羟胺(50％wt/wt在水中)和极性质子溶剂例如EtOH在升高的温度下反应。然后，使中间体N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒经受与乙酸酐在极性质子溶剂例如甲醇中、在钯催化剂例如活性炭载钯下在氢气的气氛下的氢解反应，以产生通式[I-034]的2-取代的-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物。

方案D5

2-(1-羟基-环丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D054]的合成

1-(苯磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051]

制备1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶[D050](15.24g,45.2mmol)、氰化锌(7.96g,67.8mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(1.85g,2.26mmol)以及活化的锌粉(0.59g,9.04mmol)在DMF(90mL)中的悬浮液，其被均分在6个微波小瓶之间，被密封并且加热(热地)至85℃过夜。将反应混合物用水稀释并且将产生的沉淀过滤，用水洗涤并且在烧结物中干燥。然后，将沉淀用CH₂Cl₂洗涤并且使滤液经MgSO₄干燥，过滤并且通过旋转蒸发浓缩。将产生的橙色残余物通过硅胶柱色谱法(用包含5-50％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为灰白色固体的1-(苯磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051](9.159g,72％)。LCMS方法6：RT＝3.62min,MI+1＝284。

1-(苯磺酰基)-2-(1-羟基环丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052]

在氮气下制备二异丙胺(0.62mL,4.41mmol)在THF(20mL)中的搅拌的溶液并且冷却至-78℃。添加nBuLi(1.6M)(2.65mL,4.24mmol)并且将反应混合物加温至0℃并且在此温度下搅拌持续10min，然后冷却回至-78℃。将该溶液逐滴地添加至1-(苯磺酰基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D051](1.0g,3.53mmol)在THF(20mL)中的-78℃溶液并且将反应混合物在-78℃下搅拌持续45min。将环丁酮(0.4mL,5.29mmol)作为在THF(5mL)中的溶液逐滴地添加。允许反应混合物在2h内缓慢地加温(不除去干冰/丙酮浴)。将反应混合物用NH₄Cl(含水的)(20mL)猝灭，允许加温至室温并且用EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物合并，经MgSO₄干燥，过滤并且通过旋转蒸发浓缩。将粗制残余物通过硅胶柱色谱法(用包含5-40％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为米黄色固体的1-(苯磺酰基)-2-(1-羟基环丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](0.835g,67％)。LCMS方法6：RT＝3.81min,MI+1＝354。

2-(1-羟基环丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D053]

制备1-(苯磺酰基)-2-(1-羟基环丁基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](1.92g,5.44mmol)在THF(30mL)中的溶液并且逐滴地添加TBAF(8.15mL的在THF中的1M溶液,8.15mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倾倒到饱和的NH₄Cl(含水的)(50mL)中并且用EtOAc(3×20mL)萃取。使有机相经MgSO₄干燥、过滤并且通过旋转蒸发浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(用包含10-100％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为米黄色固体的2-(1-羟基环丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D052](0.799g,69％)。LCMS方法6：RT3.32min,MI+1＝214。

2-(1-羟基-环丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D054]

经由羟胺/氢化路线制备脒(方案D4)：LCMS方法5：RT＝0.67,MI+1＝231。

通式[I-041]的3-取代的-氮杂吲哚衍生物的一般合成 方案D6

通式[I-041]的3-取代的氮杂吲哚衍生物通过使通式[I-036]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与卤化剂例如NCS或NBS在极性非质子溶剂例如DMF中反应以产生通式[I-037]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物来制备，在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。通式[I-038]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过通式[I-037]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇衍生物与2,4,6-三异丙基苯磺酰氯在具有烷基叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM和催化量的DMAP的极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中的反应来制备。然后，使中间体与通式[I-017]的伯胺衍生物或仲胺衍生物在极性非质子溶剂例如DMA、DMF、NMP中在叔胺碱例如Et₃N、DIPEA或NMM的存在下在环境温度下反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将通式[I-038]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过柱色谱法纯化。通式[I-039]的2-(1-苯磺酰基-3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过使通式[I-038]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在强碱例如NaH下在极性非质子溶剂例如THF中与苯磺酰氯在低反应温度例如0℃下反应来制备，随后是典型地通过液液萃取的反应后处理和通过柱色谱法的纯化。使通式[I-039]的2-(1-苯磺酰基-3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Suzuki型反应中反应，这利用通式[I-042]的合适的硼酸或硼酸酯、钯催化剂例如Pd(PPh₃)₄或PdCl₂dppf:CH₂Cl₂、碱例如Et₃N、KOH、Na₂CO₃或NaOH，在极性溶剂例如EtOH、THF、DMA或二氧六环中在高温下通过热地加热或使用微波反应器。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，将通式[I-040]的中间体衍生物在两步程序中脱保护，首先通过与氟化物试剂例如TBAF在极性非质子溶剂例如THF中反应，然后将N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案D6

5-环丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶的合成

步骤1：2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D055]的合成

将5-环丙基-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇[D017](50mg,0.160mmol)和1-溴吡咯烷-2,5-二酮(44.01mg,0.250mmol)在DMF(11mL)中合并并且允许混合物在室温下在氮气下搅拌持续5h。将水(15mL)添加至混合物并且将产生的亮棕色沉淀通过过滤收集。将固体用水洗涤并且在真空下在40℃下干燥以提供标题化合物(30mg，48％)。LCMS方法5：RT:4.55min,MI：384(MH)⁺。

步骤2：4-[2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D056]的合成

向2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[D055](0.9g,2.35mmol)在DMA(20mL)中的悬浮液添加DIPEA(1.23mL,7.06mmol)，随后是2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.73g,2.4mmol)和DMAP(14.38mg,0.120mmol)。将反应混合物在室温下搅拌持续2h，然后添加哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.53g,2.83mmol)并且继续搅拌过夜。将混合物用水稀释并且将产生的固体通过过滤收集并且用水然后二乙醚洗涤。将固体通过用在环己烷中的10-100％EtOAc洗脱的硅胶柱色谱法纯化，以提供作为深棕色固体的标题化合物(200mg，15％)。LCMS方法5：RT:5.53min,MI：552.35(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.29(1H,s),8.99(1H,s),8.39(1H,d),8.16(1H,s),7.75(1H,d),7.46(1H,d),3.93-3.64(4H,br m),3.49(4H,br s),2.73-2.66(1H,m),1.39(9H,s),1.31-1.24(2H,m),1.07-1.01(2H,m)。

步骤3：4-[2-[1-(苯磺酰基)-3-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D057]的合成

将4-[2-(3-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D056](200mg,0.360mmol)在无水THF(5mL)中的溶液冷却至0℃并且添加NaH(在矿物油中的60％分散体,0.02mL,0.400mmol)。允许混合物在0℃下搅拌持续30min，之后添加苯磺酰氯(0.05mL,0.400mmol)。允许混合物加温至室温并且搅拌持续5h。将反应用水猝灭并且用乙酸乙酯(x3)萃取。将有机物用盐水洗涤、经硫酸镁干燥并且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用5％-90％乙酸乙酯/环己烷洗脱)纯化以提供作为深橙色固体的标题化合物(128mg，51％)。LCMS方法5：RT:6.26min,MI：692.53(MH)⁺。

步骤4：4-[2-[1-(苯磺酰基)-3-苯基-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D058]的合成

将4-[2-[1-(苯磺酰基)-3-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D057](120mg,0.170mmol)、苯硼酸(31.59mg,0.260mmol)、新鲜研磨的磷酸三钾(73.8mg,0.350mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(7.09mg,0.010mmol)在小瓶中合并并且用氮气(x3)吹扫。添加无水1,4-二氧六环(0.55mL)并且将混合物加热至90℃过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并且用水随后是盐水洗涤。使有机物经硫酸镁干燥并且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用0-50％EtOAc/环己烷洗脱)纯化以提供作为黄色固体的标题化合物(48mg，40％)。LCMS方法5：RT:6.32min,MI：688.58(MH)⁺。

步骤5：5-环丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2483]的合成

向4-[2-[1-(苯磺酰基)-3-苯基-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基]-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D058](45mg,0.070mmol)在THF(1mL)中的溶液逐滴地添加TBAF(在THF中的1M溶液,0.1mL,0.100mmol)。将反应混合物在室温下搅拌持续6h。将反应混合物用NH₄Cl的饱和的水溶液猝灭，用EtOAc稀释并且分离有机相。将水相用EtOAc萃取。将合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤并且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱法(用20％EtOAc/DCM-100％EtOAc洗脱)纯化以提供4-[5-环丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23mg,64％)。LCMS方法5：RT:5.64min,MI：548.52(MH)⁺。

向4-[5-环丙基-2-(3-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15mg,0.030mmol)在二乙醚(2mL)中的溶液添加在二氧六环中的4M HCl(0.14mL,0.550mmol)，并且允许混合物在室温下搅拌持续4h，之后在真空中浓缩。将残余物溶解在水中并且用乙酸乙酯、随后的环己烷洗涤。然后，将碳酸钠的饱和的溶液添加至水层直到碱性并且产物用乙酸乙酯(x3)萃取。使有机物经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩以提供作为浅黄色固体的标题化合物(11mg,91％)。LCMS方法5：RT:2.97min,MI：448.4(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.04(1H,s),8.69(1H,s),8.39(1H,d),8.01(1H,s),7.61(1H,d),7.52(1H,d),7.00-6.92(1H,m),6.84-6.77(4H,m),3.19-2.89(4H,m),2.71-2.59(4H,m),2.45-2.38(1H,m),1.32-1.23(2H,m),1.05-1.00(2H,m)。

通式[I-045]的3-取代的-氮杂吲哚衍生物的一般合成 方案D7

通式[I-045]的3-取代的氮杂吲哚衍生物通过使通式[I-043]的2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物与卤化试剂例如NCS或NBS在极性非质子溶剂例如DMF中反应以产生通式[I-044]的2-(3-卤代-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物来制备，在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将中间体通过柱色谱法纯化。将通式[I-044]的中间体衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且将粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案D7

2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2209]的合成

步骤1：4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D060]的合成

向4-[5-环丙基-2-(2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D059，根据方案D4制备的](317mg,0.650mmol)在DMF(4.53mL)中的溶液添加1-氯吡咯烷-2,5-二酮(87.17mg,0.650mmol)并且允许混合物在室温下在氮气下搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯稀释并且用水(x4)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥，过滤并且滤液在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(用10％-100％EtOAc/环己烷洗脱)纯化以提供作为橙色固体的4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(201mg,59％)。LCMS方法5：RT:5.75min,MI：520.25(MH)⁺。

步骤2：2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶[2209]的合成

将4-[2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[D060](188mg,0.360mmol)和在二氧六环溶液中的4M HCl(1.81mL,7.23mmol)在氮气下合并并且允许混合物在室温下搅拌持续2h。将混合物在真空中浓缩以产生橙色固体。将固体溶解在甲醇中并且通过SCX柱，用甲醇并且然后在甲醇溶液中的7N氨洗脱。将溶液在真空中浓缩并且残余物通过硅胶色谱法(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，以产生黄色固体。将固体用醚研磨，过滤并且在真空下干燥以提供2-(3-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶(67mg,44％)。LCMS方法5：RT:3.00min,MI：420.14(MH)⁺。1H NMR(500MHz,d6-DMSO)12.12(1H,s),8.96(1H,s),8.29(1H,d),8.11(1H,s),7.45(1H,d),3.88-3.41(4h,m),2.90(4H,s),2.71-2.64(1H,m),2.38(3H,s),1.31-1.23(2H,m),1.07-1.01(2H,m)。

2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D067]的合成 方案D8

方案D8

步骤1：1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛[D062]的合成

N,N-二异丙胺(0.36g,3.56mmol)在无水THF(10mL)中的搅拌的溶液在氮气下被制备并且被冷却至-78℃。添加n-BuLi(1.6M在己烷中)(2.22mL,3.56mmol)并且将反应混合物在-78℃下搅拌持续2-3min，然后0℃持续10min，然后重新冷却至-78℃。1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶[D061](1.0g,2.97mmol)作为在无水THF(3mL)中的溶液被逐滴地添加并且将反应混合物在-78℃下搅拌持续2h。逐滴地添加N,N-二甲基甲酰胺(0.92mL,11.86mmol)并且将反应混合物在-78℃下搅拌持续另外2小时，然后用饱和的NH₄Cl(含水的)(20mL)猝灭。将混合物用EtOAc(10mL)稀释并且分离有机相。将水相用EtOAc(2x 10mL)萃取并且合并的有机部分经MgSO₄干燥，过滤并且通过旋转蒸发浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(用包含50-100％二氯甲烷的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为无色固体的1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛(798mg,74％)。LCMS方法5：RT＝3.77min,MI+1＝365/367；1H NMR(500MHz,d6-DMSO)10.45(1H,s),8.45(1H,d,J＝5.2Hz),8.24-8.22(2H,m),7.79-7.76(1H,m),7.75(1H,d,J＝5.2Hz),7.68-7.64(2H,m),7.45(1H,s)。

步骤2：1-(苯磺酰基)-4-溴-2-(二氟甲基)-吡咯并[2,3-b]吡啶[D063]的合成

制备1-(苯磺酰基)-4-溴-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲醛[D062](3.82g,10.47mmol)在CH₂Cl₂(50mL)中的溶液并且逐滴地添加脱氧氟(deoxyfluor)(R)(13.62mL,31.41mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物小心地倾倒到饱和的NaHCO₃(含水的)中并且将有机相分离并且用1M HCl洗涤。使有机相通过相分离器干燥并且通过旋转蒸发浓缩。将粗制的残余物与第二批次的粗制残余物(遵循相同的程序以0.5g规模制备的)合并并且通过二氧化硅色谱法(用包含10-50％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为灰白色固体的1-(苯磺酰基)-4-溴-2-(二氟甲基)吡咯并[2,3-b]吡啶(2.625g,65％)。LCMS方法5：RT＝4.63min,MI+1＝387/389。

步骤3：4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D064]的合成

制备1-(苯磺酰基)-4-溴-2-(二氟甲基)吡咯并[2,3-b]吡啶[D063](2.59g,6.7mmol)在THF(50mL)中的溶液并且逐滴地添加TBAF(10.05mL的在THF中的1M溶液,10.05mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过旋转蒸发浓缩并且残余物通过二氧化硅色谱法(用包含10-70％EtOAc的环己烷洗脱)纯化。将合适的级分合并并且浓缩以给出作为灰白色固体的4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.466g,89％)。LCMS方法5(RT＝5.14min,MI+1＝247/249)。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)12.82(1H,s),8.21(1H,d,J＝5.0Hz),7.44(1H,d,J＝5.0Hz),7.24(1H,t,J＝54.0Hz),6.77(1H,s)。

步骤4：2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D065]的合成

制备4-溴-2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[D064](1.46g,5.91mmol)、氰化锌(1.04g,8.87mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(0.24g,0.300mmol)在DMF(20mL)中的溶液。添加活化的锌粉(0.08g,1.18mmol)并且将微波小瓶密封并且加热至85℃过夜。LCMS示出完全转化成期望的产物。将反应混合物冷却至室温并且倾倒到水中。将产生的沉淀过滤并且用CH₂Cl₂和MeOH洗涤。使滤液通过相分离器干燥并且通过旋转蒸发浓缩。粗质量回收是低的(约60％)，因此，将沉淀在EtOAc、CH₂Cl₂和MeOH的混合物中搅拌持续1小时然后过滤。将合并的滤液通过旋转蒸发浓缩以给出1.04g(91％)的粗质量返回。将粗制残余物通过二氧化硅色谱法纯化，用在环己烷中的10-100％EtOAc洗脱。将合适的级分合并并且上柱以给出作为米黄色固体的2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(0.774g,68％)。LCMS方法5(RT＝3.21min,MI+1＝194)。

步骤5：2-(二氟甲基)-N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D066]的合成

在微波小瓶中制备2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D065](0.77g,4.01mmol)在乙醇(20mL)中的悬浮液。添加在水中的羟胺50％w/w(0.49mL,8.01mmol)并且将小瓶密封并且加热(热地)至85℃持续3h。将反应混合物通过旋转蒸发浓缩以给出假定包含2-(二氟甲基)-N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒的粗制固体残余物(0.906g,99.96％)，所述粗制固体残余物在下一步中在不纯化的情况下被使用。

步骤6：2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D067]的合成

制备2-(二氟甲基)-N-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒[D066](0.91g,4.01mmol)在甲醇(20mL)中的悬浮液。添加乙酸酐(0.45mL,4.81mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌持续1.5h。添加10％Pd/C(50mg)并且将反应混合物在氢气的气氛(气球)下搅拌持续3h。将反应混合物通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤并且滤液通过旋转蒸发浓缩。将残余物在二氧六环中的4M HCl中搅拌并且将产生的固体过滤并且在真空下干燥以给出2-(二氟甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐(1.022g,90％)。LCMS方法5(RT＝0.55min,MI+1＝211)。

通式[I-053]的[4-(4-氨基-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]脲衍生物的一般合成 方案D11

通式[I-053]的[4-(4-氨基-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-吡啶-2-基]脲衍生物通过使在方案B4中制备的通式[I-052]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物在Buchwald型反应中在异氰酸钠、钯催化剂例如Pd₂(dba)₃、配体例如t-BuBrettPhos、碱例如Et₃N下在极性溶剂例如EtOH、THF、DMA或二氧六环中在高温下通过热地加热或使用微波反应器与通式[I-054]的合适的胺反应来制备。在典型地通过液液萃取的反应后处理或通过酸性离子交换捕放的纯化之后，N-Boc衍生物在酸性条件下用强酸例如TFA、TCA、甲磺酸、HCl或H₂SO₄在溶剂例如DCM、DCE、THF、EtOH或MeOH中脱保护，并且粗制反应产物通过正相色谱法或反相制备型HPLC纯化。

方案D11

1-[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基脲[2420]的合成

步骤1：1-[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基-脲[2420]的合成

将装配有磁力搅拌棒并且装有螺旋盖隔膜的烘箱干燥的微波小瓶装载有三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(24.5mg,0.030mmol)和t-BuBrettPhos(25.93mg,0.050mmol)。将小瓶排空并且用氮气回填并且随后经由注射器添加1,4-二氧六环(2.5mL)。将产生的紫色浆料在120℃下加热持续3min，此时产生的混合物的颜色变成深橙棕色。将装配有磁力搅拌棒并且装有螺旋盖隔膜的第二烘箱干燥的微波小瓶装载有异氰酸钠(69.56mg,1.07mmol)、苯酚(0.09mL,1.07mmol)和4-[2-(2-氯-4-吡啶基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯[B016，根据方案B4制备的](0.25g,0.540mmol)并且用氮气回填并且经由注射器添加三乙胺(0.02mL,0.130mmol)。然后，将预混合的催化剂溶液经由套管在氮气下转移至小瓶。将螺旋盖隔膜在连续的氮气流下用未刺穿的隔膜替代并且将溶液加热至120℃持续16h。然后，将反应混合物冷却至室温，在此之后，将苯胺(0.06mL,0.640mmol)和1,4-二氧六环在连续的氮气流下添加到小瓶中，并且将产生的混合物在80℃下搅拌持续15h。然后，将反应混合物冷却至室温并且通过硅藻土的垫过滤。将溶剂在减压下除去并且将粗产物通过用5-10％二氯甲烷/甲醇洗脱的快速色谱法纯化以提供N-boc保护的期望的产物，将该产物在50％TFA/DCM中在室温下搅拌持续1小时以裂解掉Boc基团。将化合物通过SCX-2筒洗涤并且通过制备型HPLC纯化以提供1-[4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-吡啶基]-3-苯基-脲(15mg,6％)。LCMS方法6：RT:2.95min,MI：467(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)9.65(1H,s),9.00(1H,s),8.56(1H,s),8.46(1H,dd),8.12(1H,s),7.95(1H,dd),7.56(2H,d),7.33(2H,t),7.04(1H,t),3.78(4H,m),2.92(4H,s),2.63(1H,m),1.23(2H,m),1.03(2H,m)。

通式[I-059]的2-芳基磺酰基氨基-异烟脒衍生物的一般合成 方案D12

通式[I-059]的2-芳基磺酰基氨基-异烟脒衍生物通过通式[I-055]的2-氨基-异烟腈衍生物与通式[I-056]的被取代的苯磺酰氯衍生物在碱性溶剂例如吡啶中在升高的温度下的反应来制备。然后，使通式[I-057]的粗制反应中间体与羟胺(50％wt/wt在水中)和极性质子溶剂例如EtOH在升高的温度下反应。然后，使中间体通式[I-058]的2-芳基磺酰基氨基-异烟脒酸(2-arylsulfonylamino-isonicotinimidic acid)经受与乙酸酐在极性质子溶剂例如甲醇中、在钯催化剂例如活性炭载钯下在氢气的气氛下的氢解反应，以产生通式[I-059]的2-芳基磺酰基氨基-异烟脒衍生物。

方案D12

2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D081]的合成

步骤1：N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺[D079]的合成

将装载有磁力搅拌棒、2-氨基吡啶-4-甲腈(2g,16.79mmol)、苯磺酰氯(2.15mL,16.79mmol)和吡啶(20mL)的圆底烧瓶搅拌并且在回流条件下在140℃下加热持续48小时。在反应完成之后，允许溶液冷却下来至室温并且用水洗涤并且用乙酸乙酯萃取。使分离的有机层经无水硫酸镁干燥并且将溶剂在减压下除去。将二氯甲烷添加至所获得的油并且形成白色固体沉淀，将该白色固体沉淀用充分量的二氯甲烷、甲醇、和二乙醚洗涤。将固体在抽吸下干燥以提供作为松软的白色固体的N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺(2.21g,51％)。LCMS方法6：RT:2.87min,MI：260(MH)⁺。

步骤2：2-(苯磺酰氨基)-N-羟基-吡啶-4-甲脒[D080]的合成

向N-(4-氰基-2-吡啶基)苯磺酰胺[D079](2g,7.71mmol)在乙醇(40mL)中的溶液逐滴地添加羟胺(50％w/w在水中,0.94mL,15.43mmol)。然后，将混合物在80℃下搅拌过夜。允许反应混合物冷却下来至室温并且在减压下将溶液蒸发至完全干燥以提供2-(苯磺酰氨基)-N-羟基-吡啶-4-甲脒(2.25g,100％)。LCMS方法5：RT:1.79min,MI：293(MH)⁺。

步骤3：2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D081]的合成

将乙酸酐(0.47mL,4.96mmol)添加至2-(苯磺酰氨基)-N-羟基-吡啶-4-甲脒[D080](1.45g,4.96mmol)在甲醇(40mL)中的搅拌的溶液。将反应混合物在室温下搅拌持续2小时。将钯(5％碳载,263.9mg,2.48mmol)添加至混合物并且将烧瓶排空并且用氢气回填。将反应混合物在室温下在氢气的气氛(氢气气球)下搅拌持续18小时。使混合物经硅藻土塞过滤并且在减压下蒸发溶剂。将获得的粗油与甲苯共沸若干次。将获得的粗制材料溶解在1,4-二氧六环溶液中的4M HCl(10mL)中并且将溶剂蒸发至干燥以提供2-(苯磺酰氨基)吡啶-4-甲脒二盐酸盐(1.06g,61％)。通过LC-MS在一段时间内(典型的24小时)的分析示出该化合物的缓慢的降解。LCMS方法5：RT:1.11min,MI：277(MH)⁺。

通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物的一般合成 方案D13

通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物通过使通式[I-060]的4-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶衍生物在钯催化的交叉偶联反应中与钯催化剂例如Pd₂(dba)₃、配体例如dppf、氰化物试剂例如Zn(CN)₂、锌粉，在极性非质子溶剂例如DMF中在高温下通过热地加热或使用微波反应器反应来制备。将粗产物通过柱色谱法纯化。然后，使通式[I-061]的反应中间体与羟胺(50％wt/wt在水中)和极性质子溶剂例如EtOH在升高的温度下反应。然后，使中间体通式[I-062]的N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒经受与乙酸酐在极性质子溶剂例如甲醇中、在钯催化剂例如活性炭载钯下在氢气的气氛下的氢解反应，以产生通式[I-063]的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒衍生物。

方案D13

1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D084]的合成

步骤1：1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈[D081]的合成

将微波小瓶装载有4-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(1g,5.05mmol)、Zn(CN)₂(0.71g,6.06mmol)、Zn粉(0.07g,1.01mmol)、Pd₂(dba)₃(0.46g,0.510mmol)、dppf(0.28g,0.510mmol)和DMF(10mL)。将小瓶密封并且在90℃下加热过夜。将混合物冷却并且通过硅藻土垫过滤，然后将硅藻土垫用AcOEt洗涤。将滤液在减压下浓缩。将粗制残余物溶解在DCM中并且添加二乙醚。将产生的固体收集并且在不进一步纯化的情况下使用。将滤液通过柱色谱法(用环己烷/AcOEt 0％至100％洗脱)纯化以提供作为白色固体的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈(0.500g,69％)。LCMS方法5：RT:2.90min,MI：145(MH)⁺。

步骤2：N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒[D083]的合成

将1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲腈[D082](1.64g,11.38mmol)、羟胺(50％wt/wt在水中,1.11mL)和EtOH(20mL)的混合物在60℃下搅拌过夜。然后，将溶剂蒸发并且将混合物用甲苯(x2)在真空下共沸，以提供N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒(2.00g,99％)。LCMS方法5：RT:0.91min,MI：178(MH)⁺。

步骤3：1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐[D084]的合成

将N-羟基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒[D083](2.0g,11.40mmol)在室温下在甲醇(30mL)中搅拌并且然后逐滴地添加乙酸酐(1.7mL,17.10mmol)。将混合物在室温下搅拌持续30分钟，并且然后添加5％炭载钯(0.20mg)。用针出口将氢气鼓泡通过混合物持续5min并且然后将混合物在室温下在氢气气氛下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土过滤并且在真空中浓缩以提供浅米黄色固体。添加在1,4-二氧六环(5mL)中的4N HCl并且将固体研磨。将溶剂在减压下除去并且添加另外的在1,4-二氧六环(5mL)中的4N HCl，将固体研磨并且将溶剂在减压下除去以提供作为棕色固体的1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-甲脒二盐酸盐(2.60g,97％)。LCMS方法5：RT:0.52min,MI：162(MH)⁺。

通式[I-065]的2-取代的-磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物的一般合成 方案D14

通式[I-065]的2-取代的-磺酰基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物通过在方案D5中制备的通式[I-064]的2-取代的巯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈衍生物与氧化剂例如m-CPBA在卤化溶剂例如DCM中的反应来制备。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将粗制反应混合物通过柱色谱法纯化。

方案D14

2-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D086]的合成

制备2-苯基巯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈[D086，根据方案D5制备的](0.5g,1.99mmol)在CH₂Cl₂(20mL)中的溶液并且冷却至0℃。添加mCPBA(0.46g,1.99mmol)并且将反应混合物在0℃下搅拌持续2h。添加另外的部分的mCPBA(0.46g,1.99mmol)并且继续搅拌持续另外的3h。添加另外的5mol％mCPBA并且将反应混合物在室温下搅拌过夜，随后添加另外的5mol％mCPBA。将反应混合物在室温下搅拌持续2h，然后过滤并且将沉淀用CH₂Cl₂洗涤并且在真空下干燥。将沉淀在二乙醚中研磨以给出作为灰白色固体的2-(苯磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(0.445g,75％)。LCMS方法6(RT＝3.67min,MI+1＝284)：¹H NMR(500MHz,d6-DMSO)13.81(1H,s),8.66(1H,d,J＝4.8Hz),8.12-8.10(2H,m),7.76-7.74(2H,m),7.69-7.66(2H,m),7.37(1H,s)。

通式[I068]的5-环丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物的一般合成 方案D15

通式[I-068]的5-环丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物通过使在方案B4中制备的通式[I-066]的2-(2-氯-吡啶-4-基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物与异氰酸钠、钯催化剂例如Pd₂(dba)₃、配体例如t-BuBrettPhos、碱例如Et₃N在极性质子溶剂例如t-BuOH中在高温下通过热地加热或使用微波反应器在Buchwald型反应中反应来制备。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将粗制反应混合物通过柱色谱法纯化，并且使中间体与强酸例如TFA在溶剂例如DCM中反应以产生通式[I-067]的中间体，使该通式[I-067]的中间体在钯催化剂例如Pd(OAc)₂、配体例如Xantphos、碱例如Cs₂CO₃下在极性溶剂例如1,4-二氧六环中与通式[I-069]的卤代芳香族衍生物在高温下通过热地加热或使用微波反应器在Buchwald型反应中反应。在典型地通过液液萃取的反应后处理之后，将粗制反应混合物通过柱色谱法纯化并且使反应产物经受在极性质子溶剂例如甲醇中与钯催化剂例如活性炭载钯在氢气的气氛下的氢解反应，以产生通式[I-068]的5-环丙基-2-(2-芳基氨基-吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基胺衍生物。

方案D15

4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧杂环丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺[2454]的合成

步骤1：4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯[D088]的合成

将装配有磁力搅拌棒并且装有可重新密封的螺旋盖隔膜的烘箱干燥的微波小瓶装载有异氰酸钠(0.26g,3.99mmol)、4-[2-(2-氯-4-吡啶基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯[D087，根据方案？？制备的](1g,2mmol)、Pd₂(dba)₃(91.4mg,0.10mmol)、以及tBu Brett-phos(96.7mg,0.20mmol)。将管排空并且用氮气回填三次并且经由注射器添加叔丁醇(5mL)。将可重新密封的螺旋盖隔膜在连续的氮气流下用未刺穿的隔膜替代并且将溶液加热至100℃持续18小时。允许反应混合物冷却至室温，并且然后通过硅藻土垫过滤，用过量的EtOAc洗涤。将粗产物通过快速色谱法纯化以提供Boc保护的氨基衍生物，将该Boc保护的氨基衍生物在室温下在50％TFA/DCM溶液中搅拌持续2小时。将游离的胺通过SCX-2离子交换纯化以提供作为浅黄色固体的4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(0.821g,85％)。LCMS方法6：RT:2.74min,MI：482(MH)⁺。

步骤2：4-[5-环丙基-2-[2-[4-(氧杂环丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯[D089]的合成

将4-[2-(2-氨基-4-吡啶基)-5-环丙基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯[D088](0.25g,0.520mmol)、3-(4-溴苯基)氧杂环丁烷(0.22g,1.04mmol)、Pd(OAc)₂(5.83mg,0.030mmol)、xantphos(30.04mg,0.050mmol)和碳酸铯(0.34g,1.04mmol)全部合并到2.5mL biotage微波小瓶中，将该biotage微波小瓶用氮气冲洗并且用螺旋盖隔膜紧密地盖上。添加1,4-二氧六环(1.25mL)并且将混合物在95℃下搅拌持续18小时。将反应混合物摄取在二氯甲烷中并且用盐水洗涤。分离层并且有机层经无水硫酸镁干燥，过滤并且在减压下浓缩。将获得的粗油通过用5-10％二氯甲烷/甲醇洗脱的色谱法纯化，以提供4-[5-环丙基-2-[2-[4-(氧杂环丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(0.221g,69％)。LCMS方法6：RT:4.31min,MI：614(MH)⁺。

步骤3：4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧杂环丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺[2454]的合成

使4-[5-环丙基-2-[2-[4-(氧杂环丁-3-基)苯胺基]-4-吡啶基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯[D089](0.22g,0.360mmol)溶解在甲醇(20mL)中的溶液在50℃、80巴下通过H-Cube氢化反应器持续2小时(连续的流)。将溶剂通过减压除去并且将获得的油通过色谱法纯化以提供4-(5-环丙基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-N-[4-(氧杂环丁-3-基)苯基]吡啶-2-胺(0.051g,29.7％)。LCMS方法6：RT:2.02min,MI：480(MH)⁺。¹H NMR(500MHz,DMSO)9.34(1H,s),8.96(1H,s),8.31(1H,d),8.09(1H,s),7.91(1H,s),7.76(2H,d),7.67(1H,dd),7.33(2H,m),4.92(2H,m),4.61(2H,m),4.19(1H,m),3.17(4H,m),2.86(4H,s),2.62(1H,m),1.26(2H,m),1.03(2H,m)。

包含2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚部分的类似物的合成可以在方案D17中找到。式[J001]的化合物可以被苄基化并且还原以给出式[J003]的化合物。与溴化氰的环化产生式[J004]的化合物。与溴丙酮的另一种环化提供式[J005]的化合物。与在方案D4中描述的顺序类似的顺序提供腈[J006]和脒[J007]。并且与在方案D3中描述的顺序类似的顺序提供可以被脱保护以给出实施例3的[J010]。实施例3的合成在下文详细地被描述。

方案[D17]

4-氯-3-硝基-吡啶-2-基)-(2,4-二甲氧基-苄胺[J002]：

向在200mL的甲醇中的2,4-二氯-3-硝基吡啶(8.2g,42mmol)添加碳酸钠(9.01g,85.0mmol)，随后是2,4-二甲氧基苄胺(7.81g,46.7mmol)并且在室温下搅拌持续18h。将反应混合物浓缩并且将粗品用EtOAc萃取。将乙酸乙酯层用水、盐水洗涤，并且经无水硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。将粗品在330g ISCO硅胶柱上使用己烷:EtOAc(0-30％)的梯度进行色谱分析以给出9.9g的化合物[J002](72％收率)。

4-氯-N(2)-(2,4-二甲氧基-苄基)-吡啶-2,3-二胺[J003]

向在100mL的甲醇中的[J002](4-氯-3-硝基-吡啶-2-基)-(2,4-二甲氧基-苄基)-胺(9.9g,30.6mmol)添加氯化亚锡二水合物(14.0g,61mmol)并且在80℃下加热持续5h。将甲醇在减压下除去并且将残余物悬浮在乙酸乙酯中。将反应用饱和的碳酸氢盐猝灭，并且分离有机层。将EtOAc层用水、盐水洗涤，并且经无水Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。将粗品在Isco 220g柱上使用10:1DCM:MeOH梯度进行色谱分析，以给出41％收率的3.7g的纯的材料[J003]。

7-氯-3-(2,4-二甲氧基-苄基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺[J004]

向在200mL的乙醇中的[J003]4-氯-N(2)-(2,4-二甲氧基-苄基)-吡啶-2,3-二胺(3.2g,5.8mmol)添加碳酸氢钠(3.29g,19.8mmol)并且冷却至0℃。向此添加溴化氰(2.08g,19.8mmol)在5.0mL的无水DCM中的溶液，并且将反应在室温下搅拌持续8h并且然后在80℃下加热持续8h。在8h加热之后，将反应混合物冷却至室温并且添加在5mL的DCM中的另一等份的碳酸氢钠(19.8mmol)和溴化氰(19.8mmol)。将反应在80℃下加热持续另外的14h。将反应混合物浓缩并且粗品用DCM萃取，用水、盐水洗涤并且经无水硫酸钠干燥。将有机层过滤，浓缩并且将粗品用DCM研磨，以给出41％收率的1.42g的固体[J004]。¹H NMR(CDCl₃):δ8.01(d,J＝5.36Hz,1H),7.17-7.12(m,2H),6.49-6.21(m,2H),5.02(s,2H),3.862(s,3H),3.79(s,3H)。

4-氯-8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚[J005]

向在80mL的丙酮中的[J004]7-氯-3-(2,4-二甲氧基-苄基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基胺(0.80g,2.0mmol)添加溴丙酮(2.4g,18mmol)并且将溶液在65℃下加热持续16h。将反应混合物浓缩并且将粗品在40g ISCO硅胶柱上使用10:1DCM:MeOH进行色谱分析以给出0.39g的产物[J005]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 8.12(1H,d,J＝5.5Hz)7.38(1H,d,J＝1.3Hz)7.29(1H,d,J＝8.3Hz)7.18(1H,d,J＝5.5Hz)6.44(2H,d,J＝1.8Hz)3.73-3.81(4H,m)3.80(9H,d,J＝18.1Hz)2.41(3H,d,J＝1.0Hz)。

8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-甲腈[J006]

向[J005]4-氯-8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚(0.25g,0.70mmol)、氰化锌(0.14g,1.2mmol)、锌(0.018g,0.28mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.019g,0.021mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(0.012g,0.021mmol)添加10mL的无水DMF。将反应混合物用氩气喷洒并且在110℃下加热持续3h。将反应混合物冷却至室温，用100mL的EtOAc稀释，并且用水、盐水洗涤并且干燥。将粗品在40g硅胶Isco柱上使用10:1DCM:MeOH进行色谱分析以给出110mg的纯的产物[J006]。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝5.52Hz,1H),7.46(d,J＝1.12Hz,1H),7.40(d,J＝5.52Hz,1H),7.35(d,J＝8.96Hz,1H),6.46-6.44(m,2H),5.32(s,2H),3.81(s,3H),3.78(s,3H),2.42(d,J＝1.04Hz,3H)。

8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-甲脒[J007]

向在10mL的无水THF中的[J006]8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-甲腈(0.13g,0.37mmol)添加六甲基硅氮烷锂盐在THF(1.5mL,1.5mmol)中的1.0M溶液。将反应在50℃下加热持续8h，并且然后冷却至室温并且搅拌过夜。将反应用水猝灭，用EtOAc萃取，干燥，过滤并且在不进一步纯化的情况下使用。

3-环丁基-N-{[8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-基]-亚氨基-甲基}-5-氟-异烟酰胺[J008]

向3-环丁基-5-氟-异烟酸(0.07g,0.36mmol)在6mL的无水DMF中的混合物添加DIEA(0.14g,1.1mmol)，随后是HATU(0.14g,0.36mmol)并且在室温下搅拌持续1小时。向反应混合物添加[J007]8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-甲脒(0.13g,0.36mmol)并且搅拌持续18小时。将反应混合物用水(10mL)稀释，并且然后用DCM萃取，将有机层分离，用水、盐水洗涤并且经无水硫酸钠干燥。将DCM层过滤，浓缩并且将粗品在硅胶上使用10:1DCM:MeOH进行色谱分析，以给出62％收率的0.12g的纯的酰胺[J008]。1H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 10.46(1H,br.s.)9.07(1H,br.s.)8.48(3H,d,J＝19.3Hz)8.37(1H,d,J＝5.3Hz)7.58(1H,d,J＝1.3Hz)7.35-7.36(1H,m)7.43(2H,d,J＝5.3Hz)6.31-6.48(3H,m)5.26-5.29(1H,m)5.35(3H,s)3.70-3.89(10H,m)2.19-2.35(6H,m)2.07(4H,d,J＝1.3Hz)1.15-1.36(3H,m)。

5-环丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-基]-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮[J009]

向[J008]3-环丁基-N-{[8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-基]-亚氨基-甲基}-5-氟-异烟酰胺(0.12g,0.22mmol)在4mL的DMF中的溶液添加碳酸铯(0.076g,0.23mmol)并且将混合物在90℃下加热持续6h。将混合物冷却至室温并且添加饱和的含水氯化铵10mL。将反应混合物用DCM萃取，用水、盐水洗涤并且经无水硫酸钠干燥。将DCM层过滤，浓缩并且将粗品在12g Isco柱上使用10:1DCM:MeOH进行色谱分析，以给出70％收率的80mg的产物[J009]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 11.15(1H,br.s.)9.24(1H,s)8.72(1H,s)8.48(1H,d,J＝1.0Hz)8.40(2H,d,J＝5.3Hz)7.44(1H,d,J＝5.5Hz)7.30(4H,d,J＝8.5Hz)6.34-6.50(3H,m)3.72-3.89(10H,m)1.77-2.65(15H,m)1.17-1.35(4H,m)。

4-(5-环丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚[J010]

向在2.0mL的DMF中的[J009]5-环丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-基]-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(0.05g,0.1mmol)添加DMAP(1mg,0.009mmol)、TEA(0.036mL,0.26mmol)和2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(0.029g,0.0961mmol)并且在室温下搅拌持续1h。向反应混合物添加1-N-Boc哌嗪[A](0.018g,0.096mmol)并且在室温下搅拌持续3h。LC/MS示出产物的形成，允许反应在室温下搅拌持续18h。将反应混合物用30mL的DCM稀释，用水、盐水洗涤并且经无水硫酸钠干燥。将DCM层过滤，浓缩并且将粗品在硅胶上使用10:1DCM:MeOH进行色谱分析以给出0.02g的产物[J010]。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm 9.32(s,1H)8.74(s,1H)8.53(d,J＝5.52Hz,1H)7.58(d,J＝1.00Hz,1H)7.34(d,J＝5.52Hz,1H)7.22-7.30(m,3H)6.37-6.50(m,2H)5.38(s,2H)3.86(s,3H)3.78(bs,5H)3.58(br.s,5H)2.46-2.60(m,2H)2.40(s,3H)1.94-2.34(m,5H)1.82-1.59(m,3H)1.49(s,9H)1.19-1.33(m,3H)。

4-(5-环丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚[实施例3]

在0℃下向在2mL的DCM和1mL的二甲基硫醚中的[J010]4-{5-环丁基-2-[8-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-甲基-8H-1,3a,7,8-四氮杂-环戊二烯并[a]茚-4-基]-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.02g,0.03mmol)逐滴地添加三氟化硼醚合物(0.02mL)并且搅拌持续18h。将反应混合物在真空下浓缩并且将粗品在C-18反相HPLC柱上使用在水中的10-50％乙腈以50mL/min进行色谱分析以给出5mg的标题化合物。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δppm 9.50(1H,s)8.90(1H,s)8.78(1H,d,J＝1.3Hz)8.56(1H,d,J＝6.8Hz)8.03(1H,d,J＝6.8Hz)4.36(3H,t,J＝8.3Hz)4.01-4.18(2H,m)3.45-3.59(3H,m)2.53-2.72(5H,m)2.21-2.41(3H,m)2.07(1H,t,J＝7.5Hz)。

包含9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯部分的类似物的合成可以在方案D18中被找到。式[J012]的化合物可以从式[J011]的化合物和氨基吡啶经由Pd催化的胺化/环化来合成。与在方案D4中描述的顺序类似的顺序提供[J016]，使用与在方案[D3]中描述的顺序类似的顺序可以将[J016]用于给出实施例145(及其他)。实施例145的合成在下文详细地被描述。

方案[D18]

实施例145.5-(5-环丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯。

145a)向2,3-二氯吡啶(0.5g,3.38mmol)和2-氨基-5-氟吡啶(0.45g,4.0mmol)在二甲苯中的溶液添加NaOtBu(0.38g,4.0mmol)、PPh3(0.088g,0.3mmol)并且将混合物用氩气脱气。将乙酸钯(0.037g,0.16mmol)添加至反应混合物，然后将反应混合物在120℃下加热持续4h。将反应混合物冷却至室温并且将DMF添加至反应混合物，随后是DBU(1.0g,6.7mmol)和Cy3P.HBF4(0.12g,0.3mmol)并且将混合物用氩气脱气。将乙酸钯(0.037g,0.16mmol)添加至反应混合物，将反应混合物在150℃下加热持续15h。将反应用水猝灭并且用乙酸乙酯萃取。将有机层用水并且然后盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并且浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化以提供3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.2g)。

145b)在0℃下向3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.1g,0.53mmol)在EtOAc(100mL)中的搅拌的溶液添加mCPBA(0.135g,0.79mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌持续6h。将反应混合物蒸发并且将残余物用醚并且然后用戊烷研磨以提供3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯8-氧化物(60mg)。

145c)将3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯8-氧化物(60mg,0.29mmol)、甲磺酰氯(0.1mL,1.4mmol)在DMF(1mL)中的混合物在60℃下加热持续4h。在起始材料完全消耗之后，将反应冷却并且用冰水猝灭。将形成的沉淀过滤，干燥，并且用二乙醚研磨以提供作为白色固体的5-氯-3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(25mg)。

145d)向5-氯-3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.2g,0.9mmol)在无水DMA(5mL)中的溶液添加氰化锌(63mg,0.54mmol)、活化的锌粉(5.8mg,0.09mmol)并且将反应混合物通过氩气脱气持续20min。将[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(19mg,0.02mmol)和Pd2(dba)3(16mg,0.018mmol)添加至反应混合物，然后将反应混合物加热至120℃持续2h。将混合物冷却至rt，添加水并且将形成的沉淀过滤并且干燥。将粗制固体溶解在乙酸乙酯中。将溶剂蒸发并且将残余物用二乙醚研磨以提供6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲腈(110mg)。

145e)将6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲腈(0.9092g,4.285mmol)在四氢呋喃中的1.0M的六甲基二硅氮烷钠(18.0mL,18.0mmol)中的搅拌的悬浮液在氮气的气氛下在50℃下加热。将反应混合物加热经过周末，然后冷却至室温。将挥发物蒸发并且将残余物悬浮在水(50mL)中并且搅拌。将固体过滤并且用水洗涤。将含水滤液在减压下蒸发至干燥。将6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯-4-甲脒分离为橙棕色泡沫(0.98g)并且在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):8.43(s,1H),8.29(d,J＝4.8Hz,1H),8.24-8.18(m,2H),8.10(dd,J＝10.0,3.0Hz,1H),6.69(d,J＝4.8Hz,1H),6.43(br s,2H)。LC/MS＝229.95(MH)+。

145f)中间体3-环丁基-5-氟-N-[(6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-亚氨基-甲基]-异烟酰胺从3-环丁基-5-氟-异烟酸(0.58g,3.0mmol)和6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-甲脒(0.98g,4.3mmol)以先前描述的类似的方式来制备。将产物分离为淡灰色固体(0.809g)，该淡灰色固体在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):10.23(br s,1H),8.65(d,J＝5.0Hz,1H),8.53-8.46(m,3H),8.36-8.31(m,1H),7.52-7.48(m,1H),3.73-3.63(m,1H),2.27-2.13(m,3H),1.99-1.72(m,2H)。LC/MS＝407.04(MH)+。

5-环丁基-2-(6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮从3-环丁基-5-氟-N-[(6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-亚氨基-甲基]异烟酰胺和碳酸铯(2.0g,6.0mmol)以先前描述的类似的方式来制备。将产物分离为棕色固体(1.2g)并且在不进一步纯化的情况下使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.84(br s,1H),8.98(s,1H),8.74-8.67(m,2H),8.57(s,1H),8.52-8.45(m,1H),7.67-7.20(m,2H),4.70-4.60(m,1H),2.52-2.42(m,2H),2.36-2.20(m,2H),2.10-2.00(m,1H),1.90-1.80(m,1H)。LC/MS＝387.04(MH)+。

145g)5-(5-环丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯从5-环丁基-2-(6-氟-9H-联吡啶并[2,3-b:3',2'-d]吡咯-4-基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(100.0mg,0.2588mmol)、2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(71.0mg,0.234mmol)和1-哌嗪羧酸叔丁酯(48.0mg,0.258mmol)、然后三氟乙酸(1mL,10mmol)以先前描述的类似的方式来制备。5-(5-环丁基-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-3-氟-9H-联吡啶并[2,3-b；3',2'-d]吡咯(0.0129g,8％)作为三氟乙酸盐被分离为黄色冻干物(lyophilate)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.81(s,1H),9.27(s,1H),9.23(dd,J＝10.3,2.8Hz,1H),8.95-8.80(m,2H),8.72(d,J＝5.1Hz,1H),8.58(dd,J＝2.8,1.1Hz,1H),8.12(d,J＝5.1Hz,1H),4.35-4.25(m,1H),3.95-3.77(m,4H),3.40-3.20(m,4H),2.55-2.45(m,2H),2.33-2.22(m,2H),2.20-2.07(m,1H),2.00-1.90(m,1H)。LC/MS＝455.15(MH)+。

包含(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基结构的类似物的合成可以在方案D19中被找到。式[J017]的化合物经由3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯的Suzuki偶联形成。还原给出式[J018]的化合物并且酸解给出式[J019]的化合物，使用与在方案[D3]中描述的顺序类似的顺序可以将式[J019]的化合物用于给出实施例146(及其他)。实施例146的合成在下文详细地被描述。

方案[D19]

实施例146.4-[4-哌嗪-1-基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚。

146a)向3-溴-5-氟-异烟酸叔丁酯(0.5g,1.8mmol)和4,4,6-三甲基-2-(1-三氟甲基-乙烯基)-[1,3,2]二氧杂硼杂环己烷(0.486g,2.1mmol)在1,2-二甲氧基乙烷:水(2:1)中的溶液添加碳酸钾(1g,7.2mmol)。将混合物用氩气脱气持续10min，随后添加Pd(PPh3)4(0.104g,0.09mmol)，然后将反应混合物在80℃下加热持续8h。将反应混合物冷却至rt并且通过硅藻土过滤。将水添加至滤液并且将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水洗涤，并且经硫酸钠干燥并且浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化以提供3-氟-5-(1-三氟甲基-乙烯基)-异烟酸叔丁酯(50mg)。

146b)向3-氟-5-(1-三氟甲基-乙烯基)-异烟酸叔丁酯(0.1g,0.34mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌的溶液添加Pd/C并且将反应在氢气(1个大气压)下在室温下搅拌持续3h。将混合物通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤，并且将滤液浓缩以提供3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-异烟酸叔丁酯(80mg)。

146c)向3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-异烟酸叔丁酯(0.08g,0.27mmol)在DCM(1mL)中的搅拌的溶液添加TFA(1mL)并且将反应在室温下搅拌持续12h。将反应混合物浓缩并且用DCM共沸以提供固体，该固体用醚和正戊烷研磨以提供3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-异烟酸(45mg)。

146d)将3-氟-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-异烟酸(0.65g,2.7mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.1mL,12mmol)和N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸酯(1.1g,3.0mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在室温下搅拌持续1小时。添加9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-甲脒(0.52g,2.5mmol)并且将混合物搅拌过夜。反应通过LC/MS是完全的。添加水(25mL)。将混合物搅拌持续30分钟并且在冰水浴中冷却。将产生的悬浮液过滤，用水冲洗并且通过抽吸然后在高真空下干燥持续4小时。回收的棕色固体与期望的中间体一致并且在不进一步纯化的情况下使用。LC/MS＝430.02(MH)+。

将在N,N-二甲基乙酰胺(10mL)中的棕色固体和碳酸铯(1.6g,4.9mmol)在90℃下加热过夜。将混合物冷却至室温，然后在冰水浴中。添加水(10mL)和饱和的含水氯化铵(10mL)。将混合物搅拌持续30分钟。将产生的固体过滤，用水冲洗并且通过抽吸干燥。将固体用乙醇(25mL)研磨，然后过滤，用乙醇冲洗。将乙醇滤液蒸发至干燥。将粗制的2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(0.59g)分离为棕色树脂并且在不进一步纯化的情况下被使用。LC/MS＝410.03(MH)+。

146e)向粗制的2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-酮(100.0mg,0.2443mmol)、4-二甲基氨基吡啶(1.0mg,0.0082mmol)和N,N-二异丙基乙胺(135.0μL,0.7750mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL,10mmol)中的搅拌的悬浮液添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(60.0mg,0.198mmol)。将混合物搅拌持续2小时。将反应混合物经由硅胶色谱法(12g,0％→10％甲醇:二氯甲烷)纯化。将期望的级分合并并且蒸发。回收的材料与作为棕色树脂的期望的中间体一致。

将棕色树脂溶解在二氯甲烷(1mL,20mmol)中并且添加三氟乙酸(1mL,10mmol)。将混合物在室温下搅拌持续30分钟。将挥发物蒸发。将残余物经由反相色谱法(以0.1％TFA作为改性剂的5％→50％乙腈:水)纯化。将期望的级分合并，冷冻并且冻干。4-[4-哌嗪-1-基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-乙基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(0.0546g,37％)作为三氟乙酸盐被分离为黄色冻干物。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.12(s,1H),9.48(s,1H),8.94(s,1H),8.93-8.70(m,2H),8.62-8.57(m,2H),7.92(d,J＝5.2Hz,1H),7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.52-7.47(m,1H),7.21-7.16(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.20-3.08(m,8H),1.86(d,J＝7.2Hz,3H)。LC/MS＝478.14(MH)+。

在与方案[D19]类似的方案[D20]中示出的式[J023]的化合物可以被合成并且进行至实施例215.

方案[D20]

包含1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸酰胺结构的类似物的合成可以在方案D21中被找到。式[J024]的化合物可以根据在Adams,Nicholas D.等人；J.Med.Chem.2010,53,3973-4001中发现的程序来合成。氧化、氯化和氰化给出[J027]的化合物；类似的程序已经在其中被描述。碱介导的水解给出式[J028]的化合物并且酰胺形成可以在标准HATU条件下实现以给出式[J029]的化合物，使用与在方案[D4]和[D3]中描述的顺序类似的顺序可以将式[J029]的化合物用于给出实施例162(及其他)。

方案[D21]

包含1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-(杂)芳基结构的类似物的一般合成在方案D22中描述。通式[J030]的2-碘代化合物可以通过与通式[J032]的试剂的Stille偶联被转化成通式[J031]的化合物。[J031]可以使用与在方案[5]和[3]中描述的顺序类似的顺序转化以给出实施例356(以及类似地实施例362、实施例364、实施例365、实施例367、实施例369-372、实施例385、实施例395)。

方案[D22]

实施例356.5-环丙基-4-(八氢-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-2-(2-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶。

将1-苯磺酰基-2-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈(2.002g,4.892mmol)、三丁基(3-吡啶基)锡烷(6.878g,18.69mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(0.647g,0.9218mmol)和无水DMF(80mL)在烘箱干燥的烧瓶中合并。将反应用氩气吹扫并且在130℃下在氮气下加热持续3小时。将热反应通过硅藻土过滤，浓缩并且通过用乙酸乙酯/庚烷洗脱的正相色谱法纯化以产生1.07g(61％)的1-(苯磺酰基)-2-(3-吡啶基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈：LC/MS 361.08[M+H]；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(m,1H),8.72(m,1H),8.61(d,1H,J＝5.0Hz),8.10(m,1H),7.85(m,3H),7.72(m,1H),7.59(m,3H),7.22(s,1H)。遵循在方案[D5]和[D3]中描述的一般程序，将1-(苯磺酰基)-2-(3-吡啶基)吡咯并[2,3-b]吡啶-4-甲腈转化成目标化合物，作为与三氟乙酸的盐:冻干物的5-环丙基-4-(八氢-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-2-(2-吡啶-3-基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶，LC/MS 489.3[M+H],1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.58(s,1H),9.33(d,1H,J＝1.4Hz),9.24(s,1H),8.65(m,3H),8.54(m,1H),8.46(d,1H,J＝5.0Hz),8.22(s,1H),8.11(d,1H,J＝5.0Hz),8.08(d,1H,J＝2.1Hz),7.68-7.64(m,1H),4.64(m,1H),4.44-4.37(m,2H),3.44-3.26(m,3H),2.99(m,2H),2.82-2.73(m,2H),2.24-2.21(m,1H),1.94-1.91(m,1H),1.79-1.76(m,1H),1.48-1.44(m,1H),1.22-1.15(m,1H),1.12-1.06(m,1H),0.96-0.90(m,1H)。

胺构件的合成在下文方案[E1]-[E5]被示出。式[K008]的胺可以从式[K001]的化合物经由保护(BOC₂O)和吡啶苄基化合成以给出式[K003]的化合物。用NaBH₄还原给出式[K004]的化合物，将式[K004]的化合物环丙烷化并且然后操作保护基以给出式[K008]的化合物。这可以利用与在方案[D3]中发现的程序类似的程序来进行以给出实施例198(及其他)。实施例198的合成的详述在下文被示出。

方案[E1]

实施例198.(3-氮杂-双环[4.1.0]庚-6-基)-[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-胺。

198a)在0℃下向(3-氮杂-双环[4.1.0]庚-6-基)-氨基甲酸叔丁酯(0.65g,3.1mmol)[如在Miller,W.H.等人,WO2006/010040中所描述制备的]在THF(5mL)中的溶液添加K₂CO₃(1.28g,9.3mmol)，随后添加Cbz-Cl(0.63g,3.72mmol)并且在室温下搅拌持续12h。将反应混合物浓缩并且将残余物用水稀释并且用DCM萃取。将有机层用含水饱和的碳酸氢钠洗涤，干燥(Na₂SO₄)并且浓缩以提供作为澄清的油的6-叔丁氧羰基氨基-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(0.55g,55％)。化合物通过MS和1H-NMR来表征。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.41–7.27(m,5H),5.05(s,2H),3.61(d,J＝8.3Hz,2H),3.19(d,J＝11.9Hz,2H),1.89(q,J＝5.8Hz,1H),1.98-1.95(m,2H)1.37(s,9H),1.12(s,1H),0.76(dd,J＝9.5,5.4Hz,1H),0.45-0.43(m,1H)。LC/MS＝303(M+H)+。

198b)在0℃下向6-叔丁氧羰基氨基-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(0.55g,1.59mmol)在THF(5mL)中的溶液添加TFA(1mL)并且在室温下搅拌持续5h。将反应混合物浓缩并且将残余物用二乙醚研磨以提供作为澄清的油的6-氨基-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(0.35g,90％)。化合物通过MS和1H-NMR来表征。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):8.23(s,2H),7.37-7.35(m,5H),5.06(d,J＝1.4Hz,2H),3.53–3.33(m,2H),3.12(s,1H),1.97(p,J＝7.2,6.6Hz,2H),1.56–1.46(m,1H),1.12–1.00(m,1H),0.76–0.68(m,2H)。LC/MS＝247(M+H)+。

198c)向2,4,6-三异丙基苯磺酸5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基酯(150.0mg,0.2367mmol)和N,N-二异丙基乙胺(125.0μL,0.7176mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物添加6-叔丁氧羰基氨基-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(140.0mg,0.56mmol)在DMF(0.5mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌经过周末。将反应倾倒到水(20mL)中并且用乙酸乙酯(15mL)萃取。将有机物用水(2x 10mL)和饱和的含水氯化钠(10mL)洗涤。将有机物经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发成与期望的中间体一致的棕色树脂。

将棕色树脂溶解在二氯甲烷(5mL)中并且在室温下搅拌。添加二甲基硫醚(1mL)，随后是三氟化硼醚合物(200.0μL,1.578mmol)并且将黄色悬浮液在室温下搅拌过夜。将挥发物蒸发成黄色固体。添加甲醇(10mL)并且然后蒸发。将残余物经由反相色谱法(以0.1％TFA作为改性剂的5％→50％乙腈:水)纯化。将期望的级分合并，冷冻并且冻干。(±)-(3-氮杂-双环[4.1.0]庚-6-基)-[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-胺(0.0614g,45％)作为三氟乙酸盐作为黄色冻干物被回收。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.06(s,1H),9.12(s,1H),8.58(d,J＝5.0Hz,1H),8.53-8.41(m,3H),8.05(br s,1H),7.81(s,1H),7.76(d,J＝5.1Hz,1H),7.55(d,J＝8.0Hz,1H),7.50-7.45(m,1H),7.18-7.12(m,1H),4.54-4.44(m,1H),3.27-3.13(m,2H),2.90-2.72(m,2H),2.57-2.47(m,2H),2.38-2.04(m,6H),1.90-1.80(m,1H),1.62-1.54(m,1H),1.36-1.30(m,1H),1.13-1.08(m,1H)。LC/MS＝462.16(MH)+。

式[K016]的胺可以从式[K009]的化合物来合成，如在方案[E2]中发现的。保护(TBDMSCl)和吡啶苄基化、随后用NaBH₄还原给出式[K010]的化合物，式[K010]的化合物可以经由苯甲酰化、去甲硅烷基化和叠氮化物形成被转化以给出式[K013]的化合物。这可以被环氧化并且叠氮化物被还原，之后伴随环化以给出式[K016]的化合物。利用与在方案[D3]中发现的程序类似的程序，[K016]可以被用于给出实施例76(及其他)。实施例76的合成的详述在下文被概述。

方案[E2]

实施例76.(±)-(3aS,7aS)-1-[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-八氢-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a-醇

76a)经由添加漏斗向1-苄基-5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-1,2,3,6-四氢-吡啶(4.0g,12mmol)[如在Marazano,C.等人,J.Org.Chem.,2002,67,1890-1897中描述制备的]在甲苯(100mL)中的搅拌的溶液逐滴地添加在甲苯(100mL)中的氯甲酸苄酯(2.1mL,14mmol)。将混合物在室温下搅拌直到添加完成。将反应混合物加温至65℃并且在氮气的气氛下加热过夜。将挥发物蒸发，将残余物用己烷(150mL)研磨，通过硅藻土塞过滤并且将滤液蒸发。将残余物经由硅胶色谱法(40g,0％→25％乙酸乙酯:己烷)纯化。用碘使产物在TLC上可视化。5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(3.66g)作为澄清的油被分离。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.39-7.28(m,5H),5.58(br s,1H),5.15(s,2H),3.91-3.88(m,2H),3.68(t,J＝6.6Hz,2H),3.51(t,J＝5.7Hz,2H),2.23-2.07(m,4H),0.88(s,9H),0.03(s,6H)。LC/MS＝346.06(MH)+和398.09(M+Na)+。

76b)向5-[2-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基氧基)-乙基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(3.16g,8.41mmol)在四氢呋喃(6mL)中的搅拌的溶液添加在四氢呋喃中的1.0M的四正丁基氟化铵(9.5mL,9.5mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应通过TLC(碘染色法，3:2乙酸乙酯:己烷)是完全的。将混合物用水(15mL)稀释并且搅拌持续15分钟。将混合物用醚(2x 50mL)萃取。将合并的醚层用水(2x 15mL)、饱和的含水氯化钠(15mL)洗涤并且然后经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发。将残余物经由硅胶色谱法(12g,25％→75％乙酸乙酯:己烷)纯化。用碘和LC/MS使产物在TLC上可视化。5-(2-羟基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(1.84g)作为澄清的油(1.84g)被回收。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.39-7.28(m,5H),5.66(br s,1H),5.15(s,2H),3.90(br s,2H),3.71(t,J＝6.0Hz,2H),3.54(t,J＝5.8Hz,2H),2.25(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝283.95(M+Na)+。

76c)在-5℃下在盐冰浴中向5-(2-羟基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(1.84g,7.04mmol)和三乙胺(1974μL,14.16mmol)在二氯甲烷(60mL)中的冷却的搅拌的混合物逐滴地添加甲磺酰氯(819.8μL,10.59mmol；供应商＝Aldrich)。将混合物在-5℃下搅拌持续1小时，然后允许加温至室温并且搅拌持续1小时。使混合物在醚(100mL)和水(50mL)之间分配。将层分离。使有机层经硫酸镁干燥、过滤并且将滤液蒸发。将混合物用醚(25mL)研磨，通过硅藻土塞过滤并且将滤液蒸发。中间体5-(2-甲磺酰基氧基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯作为浅黄色油被分离并且在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.38-7.29(m,5H),5.69(br s,1H),5.15(s,2H),4.29(t,J＝6.4Hz,2H),3.90(br s,2H),3.53(t,J＝5.8Hz,2H),3.04-2.90(m,3H),2.42(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝361.95(M+Na)+。

向5-(2-甲磺酰基氧基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯在N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的搅拌的溶液添加叠氮化钠(0.911g,14.0mmol)。将混合物搅拌并且在氮气的气氛下加温至50℃持续6小时，然后冷却并且在室温下搅拌过夜。使混合物在醚(50mL)和水(50mL)之间分配。水层用醚(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水(2x 50mL)、饱和的含水氯化钠(25mL)洗涤，然后经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发，然后在高真空下放置持续30分钟。5-(2-叠氮基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(1.84g)作为浅黄色油被分离。¹HNMR(400MHz,CDCl3,δ):7.38-7.29(m,5H),5.67(br s,1H),5.16(s,2H),3.89(br s,2H),3.53(t,J＝5.7Hz,2H),3.36(t,J＝6.7Hz,2H),2.27(br s,2H),2.15(br s,2H)。LC/MS＝308.95(M+Na)+。

76d)在冰水浴中在5℃下向5-(2-叠氮基-乙基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(1.84g,6.43mmol)在二氯甲烷(50mL)中的冷却的溶液添加m-CPBA 70-75％(70:30,间氯过氧苯甲酸:3-氯苯甲酸,3.0g,12mmol)。将混合物在5℃下搅拌持续30分钟，然后在30分钟内加温至室温并且在室温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(50mL)和水(25mL)稀释，然后添加饱和的含水硫代硫酸钠(15mL)并且搅拌持续15分钟。将层分离。将有机层用饱和的含水碳酸氢钠(50mL)洗涤，然后经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发。(±)-1-(2-叠氮基-乙基)-7-氧杂-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(2.03g)作为浅黄色油被分离并且在不进一步纯化的情况下被使用。

76e)将具有搅拌棒、回流冷凝器和气体入口接头的圆底烧瓶装载有(±)-1-(2-叠氮基-乙基)-7-氧杂-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(2.02g,6.68mmol)、水(4mL,200mmol)和四氢呋喃(75mL)，随后是三苯基膦(1.93g,7.35mmol)。将混合物搅拌并且在60℃下在氮气的气氛下加热持续2小时。观察到气体放出。反应通过LC/MS和TLC(碘染色法，5:95MeOH:DCM)是完全的。将混合物冷却至室温并且将挥发物在减压下蒸发。粗制的1-(2-氨基-乙基)-7-氧杂-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯被分离成浅黄色油并且在215nm处是UV可见的。

将浅黄色油溶解在异丙醇(75mL)中并且在85℃下加热过夜。反应通过LC/MS和HPLC(在215nm处的UV)以及TLC(碘染色法，15:85MeOH:DCM)是完全的。将混合物冷却至室温并且将挥发物蒸发。将浅黄色油经由硅胶色谱法(40g,5％→25％[在MeOH中的10％NH4OH]:二氯甲烷)纯化。(±)-(3,4-反式)-4-{[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(1.23g)作为浅黄色粘稠的油被分离。结构通过在298K和368K下的可变的温度的¹H NMR、¹³C NMR、COSY和HMQC来确证。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ,298K):7.40-7.28(m,5H),5.10-5.00(m,2H),4.78(br s,1H),3.55-3.10(m,10H),2.91-2.73(m,3H),1.76-1.66(m,1H),1.60-1.54(m,2H),1.39-1.27(m,1H)。LC/MS＝277.00(MH)+。

76f)将具有搅拌棒的管装载有4-(4-氯-5-环丁基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(100.0mg,0.2592mmol)、(±)-(3,4-反式)-4-{[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(100.0mg,0.3619mmol)、N,N-二异丙基乙胺(136.0μL,0.7808mmol)、4-二甲基氨基吡啶(3mg,0.02mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。将管密封并且将混合物在室温下搅拌过夜。将DMF在减压下蒸发。将残余物经由硅胶色谱法(12g,0％→5％甲醇:二氯甲烷)纯化。将期望的级分合并并且蒸发成红棕色树脂(0.124g)，该红棕色树脂与期望的中间体一致并且在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.02(s,1H),9.08(s,1H),8.74-8.67(m,2H),8.56(d,J＝5.1Hz,1H),7.88(d,J＝5.1Hz,1H),7.53(d,J＝7.9Hz,1H),7.49-7.44(m,1H),7.41-7.29(m,5H),7.18-7.13(m,1H),5.30-5.05(m,3H),4.65-4.45(m,1H),4.33-4.15(m,1H),4.05-3.95(m,1H),3.88-3.58(m,3H),3.50-3.10(m,2H),2.72-2.62(m,1H),2.48-2.34(m,2H),2.20-1.70(m,7H)。LC/MS＝626.28(MH)+。

将红棕色树脂溶解在二氯甲烷(1mL)和二甲基硫醚(1mL)中并且冷却至0℃，然后逐滴地添加三氟化硼醚合物(320.0μL,2.50mmol)。搅拌的混合物立即形成悬浮液，加温至室温并且搅拌过夜。将混合物蒸发成黄色固体。将固体溶解在甲醇(10mL)中并且在减压下蒸发。将残余物经由反相色谱法(以0.1％TFA作为改性剂的5％→50％乙腈:水)纯化。将期望的级分合并，冷冻并且冻干。外消旋的、相对-(3aS,7aS)-1-[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-八氢-吡咯并[3,2-c]吡啶-3a-醇(0.0759g,48％)作为三氟乙酸盐被分离为黄色冻干物。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.07(s,1H),9.15(s,1H),8.80-8.70(m,4H),8.58(d,J＝5.1Hz,1H),7.86(d,J＝5.1Hz,1H),7.54(d,J＝7.9Hz,1H),7.51-7.46(m,1H),7.21-7.16(m,1H),5.80(br s,1H),4.33-4.22(m,3H),4.05-3.95(m,1H),3.35-2.94(m,5H),2.79-2.69(m,1H),2.52-2.38(m,2H),2.30-1.80(m,6H)。LC/MS＝492.18(MH)+。

式[K023]的胺可以从式[K017]的化合物来合成，如在方案[E4]中发现的。吡啶苄基化、随后用NaBH₄还原并且然后苯甲酰基化给出式[K021]的化合物，式[K021]的化合物可以经由环氧化和甲胺环氧化物开环(methylamine eposide opening)被转化以给出式[K023]的化合物。利用与在方案[D3]中发现的程序类似的程序，[K023]可以被用于给出实施例77(及其他)。实施例77的合成的详述在下文被概述。

方案[E3]

实施例77.(±)-(3,4-反式)-4-{[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇

77a)将3-甲基-吡啶(5.0mL,51mmol)和苄溴(6.1mL,51mmol)在甲苯(10mL,90mmol)中的溶液在50℃下加热持续3小时。将两相混合物冷却并且将甲苯在减压下蒸发。在不进一步纯化的情况下使用粗制的1-苄基-3-甲基-吡啶-1-鎓溴化物(16g)。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):9.15(s,1H),9.04(d,J＝6.1Hz,1H),8.47(d,J＝8.0Hz,1H),8.08(dd,J＝7.9,6.1Hz,1H),7.56-7.40(m,5H),5.80(s,2H),2.51(s,3H)。LC/MS＝183.98(M)+。

77b)具有搅拌棒、回流冷凝器和气体入口接头的500mL圆底烧瓶在氮气的气氛下被添加有1-苄基-3-甲基-吡啶-1-鎓溴化物(14g,53mmol)在甲醇(100mL)中的溶液。将混合物在冰水浴中冷却至5℃。将硼氢化钠(6.0g,160mmol)分批地(0.50g x 12)添加至剧烈地搅拌的溶液。在每次添加期间注意到剧烈的气体放出。将黄色溶液在室温下搅拌过夜，然后蒸发至干燥。添加水(300mL)并且将混合物在室温下搅拌持续30分钟。将混合物转移至分液漏斗并且用二氯甲烷(3x 100mL)萃取。使合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发。粗制的1-苄基-5-甲基-1,2,3,6-四氢-吡啶(10.3g)作为橙色油被分离并且在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.15(m,5H),5.41-5.36(m,1H),3.52(s,2H),2.74-2.71(m,2H),2.42(t,J＝5.7Hz,2H),2.05-1.99(m,2H),1.57-1.55(m,3H)。LC/MS＝188.01(MH)+。

77c)在室温下经由添加漏斗向1-苄基-5-甲基-1,2,3,6-四氢-吡啶(6.78g,36.2mmol)在甲苯(100mL)中的溶液逐滴地添加氯甲酸苄酯(7.8mL,54mmol)在甲苯(100mL)中的溶液。在添加完成之后，将混合物在100℃下在干燥的氮气下加热持续18小时。将混合物冷却至室温并且将挥发物蒸发。将残余物经由硅胶色谱法(24g,0％→20％乙酸乙酯:己烷)纯化。将期望的级分合并并且蒸发。5-甲基-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(6.46g)作为黄色油被回收。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.52(br s,1H),5.09(s,2H),3.76(br s,2H),3.42(br s,2H),2.07-2.00(m,2H),1.64(s,3H)。LC/MS＝231.96(MH)+和253.95(M+Na)+。

77d)在0℃下在冰水浴中向5-甲基-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸苄酯(1.0g,4.3mmol)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌的冷却的溶液添加m-CPBA70-75％(70:30,间氯过氧苯甲酸:3-氯苯甲酸,1.5g,6.0mmol)。将混合物搅拌并且加温至室温。在30分钟之后，使混合物在二氯甲烷(50mL)和水(25mL)之间分配。将有机物用水(25mL)、然后饱和的含水碳酸氢钠(2x 25mL)、然后饱和的含水氯化钠(10mL)洗涤。使有机层经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液蒸发。(±)-1-甲基-7-氧杂-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(1.0g)作为黄色油(1.083g)被回收并且在不进一步纯化的情况下被使用。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.06(s,2H),3.84-3.76(m,1H),3.52-3.34(m,2H),3.16-3.02(m,2H),1.89-1.81(m,2H),1.26(s,3H)。LC/MS＝247.96(MH)+和269.95(M+Na)+。

77e)向具有压力计和搅拌棒的厚壁压力容器添加(±)-1-甲基-7-氧杂-3-氮杂-双环[4.1.0]庚烷-3-羧酸苄酯(0.63g,2.5mmol)和在甲醇中的2.0M的甲胺(10mL,20mmol)。将容器密封并且将混合物加温至50℃在防爆盾后面过夜。在加热期间，压力增加5psi。将混合物冷却至室温，将内容物转移至圆底烧瓶并且将挥发物蒸发。将混合物加载至Phenomenex SX-C筒(2x 2g)上，用甲醇(2x 10mL，每次)冲洗并且将产物用在甲醇中的2N氨(2x 10mL，每次)释放。将含氨的滤液合并并且在减压下蒸发。反-(±)-3-羟基-3-甲基-4-甲基氨基-哌啶-1-羧酸苄酯(0.38g)作为黄色粘稠的油被回收，黄色粘稠的油在室温下静置若干天之后固化。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):7.40-7.28(m,5H),5.10-4.98(m,2H),4.67(s,1H),3.90-3.82(m,1H),3.65(dd,J＝12.7,1.3Hz,1H),3.00-2.62(m,2H),2.31-2.25(m,4H),1.79(dddd,J＝16.7,3.6,3.6,3.6Hz,1H),1.65(br s,1H),1.13-1.01(m,1H),0.97(s,3H)。LC/MS＝278.96(MH)+。

77f)将具有搅拌棒的管装载有4-(4-氯-5-环丁基-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(100.0mg,0.2592mmol)、反-(±)-3-羟基-3-甲基-4-甲基氨基-哌啶-1-羧酸苄酯(100.0mg,0.3593mmol)、N,N-二异丙基乙胺(135.0μL,0.7750mmol)、4-二甲基氨基吡啶(3.0mg,0.024mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。将管密封并且将混合物在室温下搅拌过夜。将DMF在减压下蒸发。将残余物经由硅胶色谱法(12g,0％→5％甲醇:二氯甲烷)纯化。将期望的级分合并并且蒸发。回收的红棕色树脂(0.096g)通过LC/MS与期望的中间体一致。将回收的红棕色树脂溶解在二氯甲烷(1mL,20mmol)中，然后添加二甲基硫醚(1mL,10mmol)、随后三氟化硼醚合物(98.53μL,0.7775mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将挥发物蒸发。将回收的黄色固体溶解在甲醇(10mL)中并且在减压下蒸发成油。将残余物经由反相色谱法(以0.1％TFA作为改性剂的5％→50％乙腈:水)纯化。将期望的级分合并，冷冻并且冻干。(±)-(3,4-反式)-4-{[5-环丁基-2-(9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-4-基)-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基}-3-甲基哌啶-3-醇(0.06652g,42％)作为三氟乙酸盐作为黄色冻干物被回收。回收的产物示出非常复杂的1H NMR，这最可能是由于旋转对映异构(atropisomerism)。分离的材料在HPLC中是单峰。¹HNMR(400MHz,d6-DMSO,δ):12.19-12.03(m,1H),9.50-8.20(m,6H),7.85-7.75(m,1H),7.60-7.45(m,2H),7.23-7.12(m,1H),5.62-1.12(m,21H)。LC/MS＝494.20(MH)+。

以下胺使用在指示的参考文献中发现的程序来合成。胺[K024]使用与在US2013/0079321中发现的程序类似的程序来合成。[K024]用于使用与在方案D3中概述的程序类似的程序来合成实施例230、231(及其他)。胺[K025]使用与在2006/081178中发现的程序类似的程序来合成。[K025]用于使用与在方案D3中概述的程序类似的程序来合成实施例135(及其他)。胺[K026]使用与在J.AM.CHEM.SOC.2010,132,13111-13113中发现的程序类似的程序来合成。[K024]用于使用与在方案D3中概述的程序类似的程序来合成实施例207(及其他)。

中间体胺[K032]、[K034]和[K038]如在以下方案[E4]中描述的、以S或Rα-甲基苄胺开始、通过根据W.Qian等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2012(22),1061-1067的修改的程序来制备。第一步，缩合成亚胺在甲苯中在回流下在分子筛和硫酸镁作为脱水剂的存在下进行以给出[K030]，[K030]被还原以给出[K031]，[K031]被氢化以给出[K032]，[K032]经由方案D3进行至实施例153(及其他)。中间体[K034]从中间体1经由2步，烷基化/氢解程序来制备并且经由方案D3进行至实施例212(及其他)。其他对映异构体[K038]以相同的方式利用[K035]来制备并且进行至实施例154(及其他)。

方案[E4]

在方案[E5]中的中间体[K042]根据以下方案以2-步程序：Boc保护/苄基氢解来制备，并且经由方案[D3]进行至实施例155(及其他)。

方案[E5]

表A中的以下化合物根据在方案中示出的一般合成使用与在其中描述的程序和中间体类似的程序和中间体来合成。

表A

VI.生物学

PKCιIC₅₀测定

测定基于PKCι在体外使可商购的肽底物磷酸化的能力。肽底物是FAM-PKCε拟肽衍生的肽，并且包括氨基酸序列5FAM-ERMRPRKRQGSVRRRV-NH₂。在Sf21昆虫细胞中表达的重组的、全长人类PKCι也是可商购的。内部(in-house)表达并且纯化重组的、激酶域人类PKCι。

以下程序解释如何获得PKCι的抑制剂的剂量应答曲线。描述的筛选是对于384孔格式但测定可以根据需要改编为1536格式或其他格式。

将待被测试的化合物溶解在100％DMSO中。将化合物根据需要稀释以给出在测定中的4％DMSO(v/v)的最终浓度。将1μl平铺到立即使用的384孔黑色低结合平底测定板中。使用Matrix和MatrixPlus液体操作系统进行化合物至测定板的稀释和添加。

在筛选当天，在包含20mM tris-HCl pH7.5、10mM MgCl₂、0.01％Triton X100、250μM EGTA以及1mM DTT的缓冲剂中制备PKCι/底物工作溶液和ATP工作溶液。使用的PKCι的最终浓度取决于蛋白质的批次而变化，但典型地是15pM。肽底物在测定中的最终浓度是100nM。ATP在包含全长或激酶域PKCι的测定中分别以150μM或25μM的最终浓度被使用，所述浓度分别对应于ATP对每种酶的K_M^表观的五倍或等于ATP对每种酶的K_M^表观。在测定中的最终缓冲剂浓度是18mM tris-HCl pH7.5、9mM MgCl₂、0.009％Triton X100、225μM EGTA以及0.9mM DTT。包括有关的对照，即没有化合物并且没有酶。对于全长或激酶域PKCι，使用16通道Matrix移液器分别将在30pM和200nM下的5μl PKCι/底物工作溶液添加至孔，随后是分别在375μM或62.5μM下的4μl ATP工作溶液。允许反应在室温下温育持续60分钟，之后停止反应并且通过20μl IMAP^TM显影剂(Molecular Devices)的添加显影。IMAP显影剂由0.25％(v/v)IMAP逐步结合试剂(progressive binding reagent)、17％(v/v)IMAP逐步结合缓冲剂A以及3％(v/v)IMAP逐步结合缓冲剂B组成。然后将板在室温下温育持续2小时，之后使用合适的板读数器例如Molecular Devices HT Analyst或BMG Pherastar读数。使用在485nm的激发下和在530nm的发射下，以及在505nm下的二向色镜的荧光偏振操作读取板。

使用没有化合物和没有酶的对照值分别作为0％抑制和100％抑制来从荧光偏振值计算百分数抑制值。IC50确定用ExcelFit软件(IDBS)使用曲线拟合205进行。对于每个测试板，确定Z′因数并且全部高于0.5。

可选择地，使用固定金属离子亲和颗粒荧光偏振检测系统(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)测试化合物抑制重组人类杆状病毒表达的PKCι的激酶活性的能力。在包含1mM DTT的1X IMAP测定缓冲剂(Molecular Devices)中制备底物混合物(2X)，使得最终测定浓度是15pM PKCι(EMD Millipore,Billerica,MA)和100nM 5-荧光素-氨基磷酸酯(FAM)-PKC€-拟底物(5-FAM-ERMRPRKRQGSVRRRV-NH2)(Molecular Devices)。将2X工作溶液以5μL/孔添加到384孔黑色、非结合、平底测定板(Corning,Corning,NY)中。在100％DMSO中进行化合物连续稀释，然后使用BioMek NX针工具(Beckman Coulter,Indianapolis,IN)，将100nL转移至包含5μL的2X酶/底物溶液的测定板中。通过5μL 2X ATP的添加开始酶反应，使得最终测定浓度是150μM。将测定板在25℃温育器中温育持续1小时，之后是20μL检测试剂的添加。检测试剂包含85％1X缓冲剂A和15％1X缓冲剂B以及1:400稀释的结合试剂。然后，将测定板在25℃温育器中温育持续2小时。温育之后，使用PerkinElmer Envision^TM 2102板读数器(PerkinElmer,Waltham,MA)在480nm的激发波长和535nm的发射波长下测量荧光偏振。

结果

实施例化合物的生物学数据在以下表中被呈现。活性被阐述如下：

IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCi的IC50：

++++＝<100nM

+++＝100nM至1,000nM

++＝1,000nM至10,000nM

+＝10,000nM至40,000nM

优选地，本申请的化合物(即式(I)的化合物和/或其盐)在IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCι具有<40μM的IC₅₀。在一个实施方案中，本申请的化合物在IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCι具有40μM–10μM的IC₅₀。更优选地，本申请的化合物在IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCι具有10μM–1μM的IC₅₀。在一个实施方案中，本申请的化合物在IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCι具有1μM–0.1μM的IC₅₀。更优选地，本申请的化合物在IMAP测定中在150μM ATP下针对全长PKCι具有<0.1μM的IC₅₀。

优选地，本申请的化合物(即式(I)的化合物或其盐)在IMAP测定中在25μM ATP下针对激酶域PKCι具有<40μM的IC₅₀。在一个实施方案中，本申请的化合物在IMAP测定中在25μM ATP下针对激酶域PKCι具有40μM–10μM的IC₅₀。更优选地，本申请的化合物在IMAP测定中在25μM ATP下针对激酶域PKCι具有10μM–1μM的IC₅₀。在一个实施方案中，本申请的化合物在IMAP测定中在25μM ATP下针对激酶域PKCι具有1μM–0.1μM的IC₅₀。更优选地，本申请的化合物在IMAP测定中在25μM ATP下针对激酶域PKCι具有<0.1μM的IC₅₀。

如本领域技术人员将理解，鉴于上文教导，本文提供的主题的许多修改和变型是可能的。因此，应理解，在所附权利要求的范围内，本申请的主题除了如本文具体地描述的可以以其他方式被实践，并且本申请的范围和权利要求意图涵盖所有这样的变型。

本文参考的每个出版物通过引用以其整体并入以用于全部目的。