使用辛酸纯化蛋白质的方法与流程

文档序号:12284490阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从样品中纯化目标蛋白质的方法,其包括以下步骤:

i.将含有蛋白质的样品加载至固定相上,以使目标蛋白质结合至所述固定相;

ii.使具有结合的目标蛋白质的固相接触辛酸溶液;其中该辛酸溶液处于允许形成游离辛酸的pH下,并且其中如针对游离辛酸所测量的,该辛酸溶液是浓度为1至50mM的辛酸缓冲液;以及

iii.洗脱所述目标蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法,其中目标蛋白质的纯化包括所述样品中病毒的灭活。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法,其用于无病毒蛋白质溶液的制备。

4.根据权利要求1至3所述的方法,其中所述辛酸溶液包含一定比例的i)辛酸盐和ii)无机或有机酸的组合,从而提供这样一种溶液:其pH低于7.0,如6.5或更低,并且如针对游离辛酸所测量的,其辛酸浓度为至少1mM,如至少2mM,如2至10mM的浓度。

5.根据权利要求1至4所述的方法,其中所述蛋白质选自抗体或其片段,凝血因子如FV、FVII、FVIII、FIX、FX、FXI和FVIII,以及生长激素。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述样品选自发酵液、细胞培养物、细胞系培养基、腹水、组织培养基、转基因细胞培养基、包含血浆成分的人类或动物血浆。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述固定相是层析柱。

8.根据权利要求7所述的方法,其中将所述样品加载至选自离子交换层析柱、亲和层析柱、混合模式层析柱、快速蛋白质液相层析柱和膨胀床吸附(EBA)层析柱的固定相上。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述辛酸溶液具有将所述病毒灭活而不使所述目标蛋白质变性的pH。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中辛酸溶液的pH为6.1或更低,如2-6,如pH为2<pH≤6,优选3<pH≤6,更优选4<pH≤6,如4.5<pH≤6,如4.6≤pH<6,如约4.6、约4.7、约4.8、约4.9、约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8和约5.9,如4.9<pH<6。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中辛酸溶液是一种辛酸缓冲液,如针对游离辛酸所测量的,其浓度为1至20mM,如2至20mM或1至10mM,更优选2至10mM如2至8mM,如2至6mM。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述样品包含有包膜病毒、无包膜病毒、或无包膜病毒和有包膜病毒两者。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其为自动化的,或是自动化蛋白质纯化过程的一部分。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其进一步将支原体灭活。

15.一种用于纯化选自凝血因子、抗体或其Fab的蛋白质的方法,其包括以下步骤:

i.将包含一种或多种所述蛋白质的样品加载至用于亲和层析的固定相上;

ii.使固相接触pH为4.9<pH<6.2的、如针对游离辛酸所测量的2至10mM如2至8mM,如2至6mM的辛酸溶液,以便灭活并洗掉病毒;

iii.洗脱所述目标蛋白质。

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