本发明涉及取代的异吲哚啉酮化合物、药物组合物及其使用方法，该方法通过给予此类化合物用于(i)在感染HIV的个体中抑制HIV复制，或(ii)治疗感染HIV的个体。
发明领域
本发明涉及取代的异吲哚啉化合物、药物组合物及其使用方法，该方法通过给予此类化合物用于(i)在感染HIV的个体中抑制HIV复制，或(ii)治疗感染HIV的个体。
发明背景
1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)导致获得性免疫缺陷疾病(AIDS)的患病(contraction)。HIV病例的数量继续上升，目前全世界超过二千五百万名个体患有该病毒。目前，用抗逆转录病毒药物长期抑制病毒复制是治疗HIV-1感染的唯一选择。事实上，美国食品药品监督管理局已经批准了跨六种不同抑制剂类别的二十五种药物，其已显示大大增加患者的存活率和生活质量。然而，仍然需要另外的疗法，这是由于不期望的药物-药物相互作用；药物-食品相互作用；不遵守治疗；以及靶标酶突变所引起的耐药性。
目前，几乎所有HIV阳性患者都用称为高效抗逆转录病毒疗法(“HAART”)的抗逆转录病毒药物组合的治疗方案来治疗。然而，HAART疗法通常是复杂的，因为必须经常每天给予患者不同药物的组合以避免耐药性HIV-1变体的快速出现。尽管HAART对患者存活率具有积极影响，但耐药性仍然能发生。多药耐药HIV-1分离株的出现具有严重的临床后果，并且必须用新的称为挽救疗法的药物方案抑制。
目前的指南建议挽救疗法包括至少两种，且优选三种完全活性药物。通常，一线疗法组合三至四种靶向病毒酶逆转录酶和蛋白酶的药物。挽救疗法的一个选择是给予来自对抗性分离株保持活性的相同机制类别的药物的不同组合。然而，该方法的选择通常有限，因为抗性突变常常赋予相同类别中不同药物广泛交叉抗性。随着融合、进入和整合酶抑制剂的开发，替代性治疗策略最近变得可用。然而，在实验室和患者中都已经报道了对所有三种新药物类别的耐药性。因此，用抗逆转录病毒药物持续成功地治疗HIV-1感染的患者将需要持续开发具有新的靶标和作用机理的新的和改进的药物。
例如，在过去十年中，已经报道HIV抑制剂靶向HIV-1整合酶和晶状体上皮源性生长因子/p75(“LEDGF”)之间的蛋白质-蛋白质相互作用。LEDGF是HIV-1整合酶的细胞转录辅助因子，其通过将预整合复合物束缚于染色质来促进逆转录病毒cDNA进入宿主细胞基因组的病毒整合。由于其在HIV复制的早期阶段中的关键作用，LEDGF和整合酶之间的相互作用代表了HIV药物疗法的另一有吸引力的靶标。
发明概述
简言之，在一方面，本发明公开了式I的化合物：
其中：
R1是C1-6烷基；
R2是C5-14芳基、C3-7环烷基、(C3-7)环烯基、(C2-9)杂环和(C2-9)杂芳基，其各自任选被一至四个选自卤素、C1-6烷基、C1-6杂烷基或C1-6亚烷基或C1-6亚杂烷基的取代基取代，其中所述C1-6亚烷基或C1-6亚杂烷基与所述C5-14芳基、C3-7环烷基、(C3-C7)环烯基、(C2-C9)杂环或(C2-C9)杂芳基上的相邻碳原子键合以形成环，并且其中每个杂环、杂芳基、杂烷基和亚杂烷基包含一至三个选自S、N或O的杂原子；
L是键或C1-3亚烷基；
R3是H、C1-6烷基、C5-14芳基、C3-7环烷基、(C3-7)环烯基、(C2-9)杂环和(C2-9)杂芳基，其各自任选被一至四个选自卤素、C1-6烷基的取代基取代，并且其中每个杂环和杂芳基包含一至三个选自S、N或O的杂原子。
在另一方面，本发明公开了式I的化合物的药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明公开了包含式I的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在另一方面，本发明公开了一种用于治疗患者的至少部分由病毒的逆转录病毒科中的病毒介导的病毒感染的方法，所述方法包括向所述患者给予包含式I的化合物或其药学上可接受的盐的组合物。在一些实施方案中，所述病毒感染由HIV病毒介导。
在另一方面，本发明的具体实施方案提供了一种治疗感染HIV的个体的方法，其包括向所述个体给予治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。
在又一方面，本发明的具体实施方案提供了一种抑制处于感染HIV的风险中的个体的HIV感染进展的方法，其包括向所述个体给予治疗有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐。那些和其他实施方案在下文中进一步描述。
根据本发明的另一实施方案，提供了一种用于预防或治疗哺乳动物的至少部分由病毒的逆转录病毒科中的病毒介导的病毒感染的方法，所述方法包括向已经诊断患有所述病毒感染或处于发展所述病毒感染的风险中的哺乳动物给予式I定义的化合物，其中所述病毒是HIV病毒，并且进一步包括给予治疗有效量的一种或多种对HIV病毒具有活性的药剂，其中所述对HIV病毒具有活性的药剂选自核苷酸逆转录酶抑制剂；非核苷酸逆转录酶抑制剂；蛋白酶抑制剂；进入、附着和融合抑制剂；整合酶抑制剂；成熟抑制剂；CXCR4抑制剂；和CCR5抑制剂。
发明详述
优选地，R1是叔丁基。
优选地，R2是任选取代的苯基或环己烯基。最优选地，R2是任选被一至四个选自氟、甲基或-CH2CH2CH2O-或-NHCH2CH2O-的取代基取代的苯基，其中所述-CH2CH2CH2O-或-NHCH2CH2O-与所述苯基上的相邻碳原子键合以形成双环。
优选地，R3是苯基。
优选地，OR1所键合的碳上的立体化学如下所示。
“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域公知的多种有机和无机抗衡离子的药学上可接受的盐，并且包括，仅举例而言，钠、钾、钙、镁、铵和四烷基铵，以及当分子含有碱性官能团时，包括有机或无机酸的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐和草酸盐。合适的盐包括在P. Heinrich Stahl，Camille G. Wermuth (Eds.)，Handbook of Pharmaceutical Salts Properties，Selection，and Use；2002中描述的那些。
治疗或预防代谢障碍的方法可以包括单独给予本发明的化合物或盐作为单一疗法。本发明的化合物和盐也可以与其它治疗剂组合使用。与本发明的化合物和盐组合使用的合适的药剂包括例如胰岛素敏感性增强剂、葡萄糖吸收抑制剂、双胍类、胰岛素分泌增强剂或二甲双胍。
实施例
本发明的化合物可以通过多种方法制备，包括公知的标准合成方法。示例性的一般合成方法如下所述，然后在工作实施例中制备本发明的特定化合物。
方案1
实施例1：2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
步骤1：2-苄基-5-(苄基二甲基甲硅烷基)-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮
从如Org. Biomol. Chem.，2004，2，1287 – 1294中所述的已知程序制备N-苄基-N-(丁-2-炔-1-基)丁-2-炔酰胺。
从如J. Am. Chem. Soc.，2005，127，3666 - 36667中所述的已知程序制备苄基(乙炔基)二甲基甲硅烷。
用N2将苄基(乙炔基)二甲基甲硅烷(5.2 g，29.8 mmol)的1,2-DCE (15 mL)溶液脱气5 min，并用Cp*ClRu(cod) (0.253 g，0.666 mmol)处理。经10 min向其中滴加N-苄基-N-(丁-2-炔-1-基)丁-2-炔酰胺 (1.5 g，6.66 mmol)的1,2-DCE (15 mL)脱气溶液。1 h后，将反应混合物真空浓缩，残留物通过硅胶色谱法(0-30% EtOAc/己烷)纯化，得到黄色固体状的标题化合物(1.66 g 62%产率；区域异构体的4:1混合物)。主要异构体 - 1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.39 - 7.29 (m，5H)，7.26 (s，1H)，7.22 - 7.15 (m，2H)，7.11 - 7.05 (m，1H)，7.00 - 6.91 (m，2H)，4.81 (s，2H)，4.16 - 4.09 (m，2H)，2.99 - 2.66 (m，3H)，2.46 - 2.36 (m，2H)，2.28 - 2.18 (m，3H)，0.37 - 0.29 (m，6H)；LC/MS (m/z) ES+= 400 (M+1)。
步骤2：2-苄基-5-羟基-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮
用TBAF (16.62 mL，16.62 mmol)经5 min时段滴加处理2-苄基-5-(苄基二甲基甲硅烷基)-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮 (1.66 g，4.15 mmol)的四氢呋喃 (10 mL)冰冷溶液。额外10 min后，加入甲醇(30 mL)、KHCO3 (0.832 g，8.31 mmol)和H2O2 (4.24 mL，41.5 mmol)，并将混合物温热至环境温度。45 min后，将反应混合物在sat. aq. Na2S2O3(1 mL)和EtOAc (3 x 10 mL)之间分配。用盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-3% MeOH/DCM)纯化，得到白色固体状的标题化合物(0.67 g，60%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.37 - 7.28 (m，6H)，6.67 (s，1H)，5.82 (br. s.，1H)，4.77 (s，2H)，4.10 (s，2H)，2.66 (s，3H)，2.08 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 268 (M+1)。
步骤3：2-苄基-6-溴-5-羟基-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮
用NBS (1.6 g，9.0 mmol)处理2-苄基-5-羟基-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮 (1.6 g，6.0 mmol)和NaHCO3 (1.5 g，18.0 mmol)的DCM (30 mL)悬浮液。20 min后，用饱和Na2S2O3水溶液处理反应混合物，并分离各层。用水洗涤有机相，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到白色固体状的标题化合物(1.5 g，70%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.29 (m，5H)，6.01 (s，1H)，4.75 (s，2H)，4.05 (s，2H)，2.81 (s，3H)，2.15 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 348 (M+2)。
步骤4：2-苄基-5-羟基-4,7-二甲基-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮
用N2将2-苄基-6-溴-5-羟基-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮 (300 mg，0.867 mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(464 mg，3.468 mmol)和Na2CO3 (8.67 mL，4.335 mmol，2 M水溶液)的1,4-二噁烷 (12 mL)溶液脱气 5 min，用Pd(dppf)Cl2·DCM (142 mg，0.1734 mmol)处理，并加热至100℃。3 h后，将反应混合物冷却至环境温度，通过Celite垫过滤，并用EtOAc洗涤固体。真空浓缩滤液，残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到无色油状的标题化合物 (150 mg，60%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.31 (m，5H)，6.74 (m，1H)，6.02 (s，1H)，5.81 (dd，1H)，5.55 (dd，1H)，4.77 (s，2H)，4.09 (s，2H)， 2.67 (s，3H)，2.11 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 294 (M+H)。
步骤5：三氟甲磺酸2-苄基-4,7-二甲基-1-氧代-6-乙烯基异吲哚啉-5-基酯
用1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(219 mg，0.614 mmol)处理2-苄基-5-羟基-4,7-二甲基-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮 (150 mg，0.614 mmol)和K2CO3 (85 mg，0.614 mmol)的DMF (4 mL)悬浮液。1h后，用EtOAc稀释反应混合物，并倒入水中。分离各层，用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到无色油状的标题化合物 (191 mg，88%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ 7.32 (m，5H)，6.66 (m，1H)，5.73 (dd，1H)，5.45 (d，1H)，4.78 (s，2H)，4.13 (s，2H)，2.74 (s，3H)，2.25 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 426 (M+H)。
步骤6：2-苄基-4,7-二甲基-5-(对甲苯基)-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮
用N2将三氟甲磺酸2-苄基-4,7-二甲基-1-氧代-6-乙烯基异吲哚啉-5-基酯(175 mg，0.412 mmol)、对甲苯基硼酸(224 mg，1.648 mmol)和Na2CO3 (4 mL，2.06 mmol，2.0 M水溶液)的DMF (5 mL)溶液脱气5 min，用四(三苯基膦)钯(0) (95 mg，0.0824 mmol)处理，并加热至80℃。30 min后，将反应混合物冷却至环境温度，用EtOAc稀释，并通过Celite垫过滤。用EtOAc洗涤固体，用水、盐水洗涤滤液，干燥(MgSO4)，过滤，并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到无色油状的标题化合物 (114 mg，75%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ 7.31 (m，5H)，7.18 (d，2H)，6.94 (d，2H)，6.32 (m，1H)，5.30 (m，1H)，5.04 (m，1H)，4.81 (s，2H)，4.12 (s，2H)，2.80 (s，3H)，2.38 (s，3H)，1.88 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 368 (M+H)。
步骤7：2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-甲醛
用二水合锇酸钾(44.1 mg，0.120 mmol)和高碘酸钠(384 mg，1.796 mmol)处理2-苄基-4,7-二甲基-5-(对甲苯基)-6-乙烯基异吲哚啉-1-酮 (110 mg，0.299 mmol)的THF/H2O (6 mL的3:1溶液)溶液。30 min后，用Na2S2O3 (6 mL，10%水溶液)处理反应混合物，并用EtOAc萃取。用水、盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到白色固体状的标题化合物 (42 mg，38%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ 9.79 (s，1H)，7.33 (m，5H)，7.26 (d，2H)，7.05 (d，2H)，4.82 (s，2H)，4.18 (s，2H)，3.06 (s，3H)，2.42 (s，3H)，1.96 (s，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 370 (M+H)。
步骤8、9、10：2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯
用碘化锌(II) (18 mg，0.057 mmol，0.5 equiv)和三甲基氰硅烷(0.153 mL，1.14 mmol，10 equiv)处理2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-甲醛 (42 mg，0.114 mmol)的DCM (3 mL)冰冷溶液。10 min后，用水处理反应混合物，并分离各层。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-((三甲基甲硅烷基)氧基)乙腈 (60 mg粗物质)，其不经进一步纯化立即使用。LC/MS (m/z) ES+ = 469 (M+H)。
用HCl (g)使2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-((三甲基甲硅烷基)氧基)乙腈 (60 mg，0.129 mmol)的MeOH (40 mL)冰冷溶液起泡。30 min后，将反应混合物真空浓缩，用HCl (aq.) (100 mL，1.0 N)处理，并加热至90℃。1h后，将反应混合物冷却至环境温度，并用EtOAc萃取。然后用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩，得到2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸甲酯(70 mg粗物质)，其不经进一步纯化立即使用。 LC/MS (m/z) ES+ = 430 (M+H)。
用HClO4 (0.49 mL，70%)处理2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸酯(70 mg，0.163 mmol)的乙酸叔丁酯(15 mL)溶液。15 min后，将反应混合物冷却至0℃，并使用50% NaOH水溶液将pH调节至8。用EtOAc萃取水层，并将有机层干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到无色油状的标题化合物 (24 mg，经三个步骤43%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ 7.32 (m，5H)，7.23 (m，3H)，7.04 (d，1H)，5.07 (s，1H)，4.78 (s，2H)，4.09 (s，2H)，3.67 (s，3H)，2.85 (s，3H)，2.40 (s，3H)，1.83 (s，3H)，0.94 (s，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 486 (M+H)。
步骤11：(2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
用LiOH (0.52 mL，0.52 mmol，1.0 M水溶液)处理2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (10 mg，0.021 mmol)的1,4-二噁烷 (2 mL)溶液，并加热至80℃。6h后，将反应混合物真空浓缩，并在EtOAc和1M HCl之间分配。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过反相HPLC纯化，得到白色固体状的标题化合物 (6 mg，62%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ 7.30 (m，8H)，7.05 (d，1H)，5.20 (s，1H)，4.79 (d，2H)，4.10 (d，2H)，2.84 (s，3H)，2.40 (s，3H)，1.85 (s，3H)，0.97 (s，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 472 (M+H)。
实施例2：(S)-(2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
在PIC prep SFC系统(PIC Solution；Avignon，France)上使用S,S Whelk-O柱(250x30 mm i.d.，5 μm；Regis Technologies，Morton Grove，Illinois)在维持在40℃、140 bar的超临界条件下，用在90ml/min的组合流速下递送的甲醇改性CO2 (30% MeOH，70% CO2)纯化2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(对甲苯基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸的样品。使用Knauer可选波长UV-Vis检测器在220 nm下进行触发式收集(Triggered collection)。
在配备有DAD检测器并在220 nm下监测的Aurora Fusion A5 Evolution SFC系统(Agilent Technologies，Santa Clara，CA)上，通过手性分析型HPLC在S,S Whelk-O柱(250x4.6 mm i.d.，5 μm；RegisTechnologies，Morton Grove，IL)上在维持在40℃、140 bar的超临界条件下，用在2 ml/min的组合流速下递送的甲醇改性CO2 (40% MeOH，60% CO2)测定手性纯度。在这些条件下标题化合物的保留时间是5.67 min。
实施例3：2-(2-苄基-6-(4-氯苯基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
标题化合物以与实施例1类似的方式制备，除了在步骤5中使用4-氯苯基硼酸以外。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.54 - 7.30 (m，8H)，7.12 (br. s.，1H)，5.21 - 5.06 (m，1H)，4.81 (s，2H)，4.13 (d，J=2.0 Hz，2H)，2.87 (br. s.，3H)，1.86 (s，3H)，1.11 - 0.98 (m，9H)； LC/MS (m/z) ES+ = 492 (M+1)。
实施例4：2-(2-苄基-6-(色满-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
标题化合物以与实施例1类似的方式制备，除了在步骤5中使用2-(色满-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷以外。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.39 - 7.29 (m，5H)，7.17 (br. s.，1H)，6.92 - 6.77 (m，2H)，5.27 (br. s.，1H)，4.89 - 4.75 (m，2H)，4.24 (t，J=5.1 Hz，2H)，4.12 (br. s.，2H)，2.91 - 2.75 (m，5H)，2.11 - 2.00 (m，2H)，1.90 (d，J=4.5 Hz，3H)，1.01 (br. s.，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 514 (M+1)。
方案2
实施例5：(S)-2-((M)-2-苄基-6-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
步骤1：2-(2-苄基-6-羟基-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸乙酯
从WO2009/062285中所述的已知程序制备2-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷。
用TiCl4 (0.413 mL，3.74 mmol)处理2-苄基-5-羟基-4,7-二甲基异吲哚啉-1-酮 (1 g，3.74 mmol)的DCM (30 mL)冰冷溶液。5 min后，加入2-氧代乙酸乙酯(0.742 mL，3.74 mmol)。5 h后，将反应混合物冷却至0℃，并用另外的TiCl4 (0.207 mL，1.87 mmol)处理。18 h后，将反应混合物倒入水中，并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到白色泡沫状的标题化合物 (1.01 g，73%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 8.22 (s，1H)，7.38 - 7.28 (m，5H)，5.73 (s，1H)，4.85-4.67 (m，2H)，4.30 (qd，J=7.1，10.7 Hz，1H)，4.18 - 4.11 (m，1H)，4.05 (s，2H)，3.84 (s，1H)，2.84 (s，3H)，2.08 - 2.04 (m，3H)，1.22 (t，J=7.2 Hz，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 370 (M+1)。
步骤2：2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-((三乙基甲硅烷基)氧基)乙酸乙酯
用咪唑 (0.332 g，4.87 mmol)和三乙基氯硅烷(0.545 mL，3.25 mmol)处理2-(2-苄基-6-羟基-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸乙酯 (1 g，2.71 mmol)的二氯甲烷(20 mL)冰冷溶液。30 min后，将反应混合物倒入水中，并分离各层。用1N HCl、盐水洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到黄色油状的2-(2-苄基-6-羟基-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-((三乙基甲硅烷基)氧基)乙酸甲酯。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 8.72 (s，1H)，7.37 - 7.28 (m，5H)，5.68 (s，1H)，4.76 (d，J=2.0 Hz，2H)，4.27 - 4.17 (m，1H)，4.15 - 4.08 (m，1H)，4.06 (d，J=2.0 Hz，2H)，2.85 (s，3H)，2.06 (s，3H)，1.03 - 0.90 (m，15H)；LC/MS (m/z) ES+ = 484 (M+1)。
将残留物溶于DCM (30 mL)，冷却至-78℃，并用三乙胺(0.874 mL，6.27 mmol)和Tf2O (0.457 mL，2.71 mmol)处理。1h后，将反应混合物倒入水中，并分离各层。用1N HCl、sat. aq. NaHCO3洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到无色胶状的标题化合物 (1.48 g，89%产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.41 - 7.29 (m，5H)，5.74 (s，1H)，4.89 - 4.68 (m，2H)，4.30 - 4.07 (m，4H)，2.81 (s，3H)，2.26 (s，3H)，1.20 (t，J=7.2 Hz，3H)，0.93 - 0.86 (m，9H)，0.69 - 0.54 (m，6H)；LC/MS (m/z) ES+ = 616 (M+1)。
步骤3：2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-氧代乙酸乙酯
用48% HF (5.0 mL，138 mmol)处理2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-((三乙基甲硅烷基)氧基)乙酸乙酯 (1.46 g，2.371 mmol)的四氢呋喃 (20 mL)冰冷溶液，并温热至环境温度。1.5 h后，用EtOAc稀释反应混合物，并通过加入固体NaHCO3淬灭。通过Celite垫过滤反应混合物，并用EtOAc萃取滤液。用盐水洗涤合并的有机萃取物，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到白色泡沫状的2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸乙酯(1.1 g，97%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.40 - 7.29 (m，5H)，5.64 (d，J=2.5 Hz，1H)，4.79 (d,J=3.0 Hz，2H)，4.37 - 4.20 (m，2H)，4.16 (s，2H)，3.42 (d，J=2.8 Hz，1H)，2.78 (s，3H)，2.27 (s，3H)，1.23 (t，J=7.2 Hz，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 502 (M+1)。
用Dess-Martin高碘烷(1.207 g，2.85 mmol)处理2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸乙酯 (1.1 g，2.293 mmol)的DCM (20 mL)溶液。1h后，通过加入sat. aq. Na2S2O3和sat. aq. NaHCO3淬灭反应混合物。15 min后，用DCM稀释反应混合物，并分离各层。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩，得到黄色泡沫状的标题化合物 (1.1 g，93%)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.41 - 7.29 (m，5H)，4.81 (s，2H)，4.40 (q，J=7.1 Hz，2H)，4.21 (s，2H)，2.74 (s，3H)，2.33 - 2.28 (m，3H)，1.39 (t，J=7.2 Hz，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 500 (M+1)。
步骤5：(S)-2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-羟基乙酸乙酯
用儿茶酚硼烷(4.20 mL，4.20 mmol，1.0 M在THF中)滴加处理2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-氧代乙酸乙酯 (1.1 g，2.102 mmol)和(R)-CBS (117 mg，0.420 mmol)的甲苯(15 mL) -45℃溶液。使反应混合物经1.5 h 温热至-20℃。用EtOAc稀释反应混合物，并用2M Na2CO3水溶液处理。将反应混合物剧烈搅拌30 min，并分离各层。用sat. aq. NH4Cl洗涤有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过硅胶色谱法(0-100% EtOAc-己烷)纯化，得到胶状固体的标题化合物 (950 mg，90 %产率)。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.40 - 7.29 (m，5H)，5.64 (d，J=2.5 Hz，1H)，4.79 (d，J=1.8 Hz，2H)，4.37 - 4.21 (m，2H)，4.16 (s，2H)，3.42 (d，J=2.8 Hz，1H)，2.79 (s，3H)，2.28 (s，3H)，1.24 (t，J=7.0 Hz，3H)；LC/MS (m/z) ES+ = 502 (M+1)。
步骤6：(S)-2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸乙酯
步骤7：(S)-2-((M)-2-苄基-6-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸乙酯
用N2将(S)-2-(2-苄基-4,7-二甲基-3-氧代-6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯(120 mg，0.215 mmol)、2-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷 (81.73 mg，0.279 mmol)和氟化铯(130.7 mg，0.86 mmol)的DME (5 mL)溶液脱气5 min，用Sphos Palladacycle (49.11 mg，0.065 mmol)处理，并在130℃下在微波中照射40 min。用EtOAc稀释反应混合物，用sat. aq. NaHCO3、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物使用硅胶色谱法(0-50% EtOAc-己烷)纯化，得到白色固体状的标题化合物 (30 mg，24%)。 1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.37 - 7.28 (m，5H)，6.62 (d，J=11.3 Hz，1H)，5.04 (s，1H)，4.80 (s，2H)，4.28 (t，J=5.1 Hz，2H)，4.13 - 4.04 (m，4H)，2.93 (s，3H)，2.70 (d，J=4.8 Hz，2H)，2.14 (d，J=5.3 Hz，2H)，1.79 (s，3H)，1.75 (s，3H)，1.17 (t，J=7.2 Hz，3H)，1.10 (s，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 574 (M+1)。
步骤8：(S)-2-((M)-2-苄基-6-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
用LiOH (0.5 mL，2.0 M)处理(S)-2-((M)-2-苄基-6-(8-氟-5-甲基色满-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸乙酯 (30 mg，0.052 mmol)的THF/EtOH (1.5 mL，2:1)溶液，并加热至65℃。5 h后，将反应混合物冷却至环境温度，用1N HCl酸化，并用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机物，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。残留物通过反相HPLC纯化，得到白色固体状的标题化合物 (13.4 mg)。1H NMR (400MHz，甲醇-d4) δ = 7.42 - 7.28 (m，5H)，6.64 (d，J=11.3 Hz，1H)，5.12 (s，1H)，4.83 (s，2H)，4.28 - 4.23 (m，4H)，2.90 (s，3H)，2.74 (t，J=6.5 Hz，2H)，2.13 (d，J=4.8 Hz，2H)，1.83 (s，3H)，1.81 (s，3H)，1.12 (s，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 546 (M+1)。
以下化合物以类似于上文实施例1-5中所述的程序的方式制备。
实施例6：(S)-2-(2-苄基-6-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
标题化合物以与实施例5类似的方式制备，除了在步骤7中使用(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)硼酸以外。1H NMR (400MHz，甲醇-d4) 位移 = 7.42 - 7.24 (m，5H)，5.73 - 5.40 (m，2H)，4.80 (s，2H)，4.22 (s，2H)，2.84 (d，J=2.8 Hz，3H)，2.62 - 2.49 (m，1H)，2.18 - 1.95 (m，6H)，1.66 - 1.50 (m，2H)，1.27 - 1.18 (m，9H)，1.16 - 1.04 (m，6H)；LC/MS (m/z) ES+ = 490 (M+1)。
实施例7：(S)-2-((M)-2-苄基-6-(8-氟-5-甲基-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)-4,7-二甲基-3-氧代异吲哚啉-5-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
标题化合物以与实施例5类似的方式制备，除了在步骤7中使用8-氟-5-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪(从WO 2013/12649中所述的已知程序制备)以外。1H NMR (400MHz，氯仿-d) δ = 7.41 - 7.28 (m，5H)，6.27 (d，J=11.0 Hz，1H)，5.19 (br. s.，1H)，4.90 - 4.73 (m，2H)，4.35 (t，J=4.4 Hz，2H)，4.14 (s，2H)，3.57 (td，J=4.3，6.7 Hz，2H)，2.86 (s，3H)，1.80 (s，3H)，1.73 (s，3H)，1.15 (s，9H)；LC/MS (m/z) ES+ = 547 (M+1)。
生物学实施例
抗HIV活性
MT4测定
基于先前描述的方法(Hazen等人，2007，In vitro antiviral activity of the novel，tyrosyl-based human immunodeficiency virus (HIV) type 1 protease inhibitor brecanavir (GW640385) in combination with other antiretrovirals and against a panel of protease inhibitor-resistant HIV) (Hazen等人，“In vitro antiviral activity of the novel，tyrosyl-based human immunodeficiency virus (HIV) type 1 protease inhibitor brecanavir (GW640385) in combination with other antiretrovirals and against a panel of protease inhibitor-resistant HIV”，Antimicrob. Agents Chemother. 2007，51：3147-3154；和Pauwels等人，“Sensitive and rapid assay on MT-4 cells for the detection of antiviral compounds against the AIDS virus”，J. of Virological Methods 1987，16：171-185)，在HTLV-1转化的细胞系MT-4中平行测量来自表1的本发明化合物的抗病毒HIV活性和细胞毒性值。
通过加入CellTiter-Glo(Promega，Madison，Wis.)于96小时后测量荧光素酶活性。相对于无化合物对照绘制细胞保护数据的抑制百分比。在相同条件下，使用CellTiter-Glo™ (Promega，Madison，Wis)测定化合物的细胞毒性。从10点剂量反应曲线确定IC50，对于每种化合物使用3-4倍连续稀释，其跨越>1000倍的浓度范围。
使用标准的四参数逻辑斯谛方程将这些值对摩尔化合物浓度作图：
其中：
Y2 = y最小值 n = 斜率因子
Vmax= y最大值 x = 化合物浓度[M]
K = EC50。
当在MT4测定中测试时，发现化合物具有列于表1中的IC50值。
表1
。