一种用于PARP抑制剂药物敏感诊断的引物组合及检测试剂盒的制作方法

文档序号:12249877阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于PARP抑制剂药物敏感诊断的引物组合,其特征在于,包括以下引物组:M1775K引物组、P151T引物组、G129E引物组、C712R引物组和Q569K引物组,所述M1775K引物组包括M1775K-wild-F引物、M1775K-wild-R引物、M1775K-mutant-F引物和M1775K-mutant-R引物;所述P151T引物组包括P151T-wild-F引物、P151T-wild-R引物、P151T-mutant-F引物和P151T-mutant-R引物;所述G129E引物组包括G129E-wild-F引物、G129E-wild-R引物、G129E-mutant-F引物和G129E-mutant-R引物;所述C712R引物组包括C712R-wild-F引物、C712R-wild-R引物、C712R-mutant-F引物和C712R-mutant-R引物;所述Q569K引物组包括Q569K-wild-F引物、Q569K-wild-R引物、Q569K-mutant-F引物和Q569K-mutant-R引物;所述M1775K-wild-F引物的序列如SEQ ID NO:1所示,所述M1775K-wild-R引物的序列如SEQ ID NO:2所示,所述M1775K-mutant-F引物的序列如SEQ ID NO:3所示,所述M1775K-mutant-R引物的序列如SEQ ID NO:4所示,所述P151T-wild-F引物的序列如SEQ ID NO:5所示,所述P151T-wild-R引物的序列如SEQ ID NO:6所示,所述P151T-mutant-F引物的序列如SEQ ID NO:7所示,所述P151T-mutant-R引物的序列如SEQ ID NO:8所示,所述G129E-wild-F引物的序列如SEQ ID NO:9所示,所述G129E-wild-R引物的序列如SEQ ID NO:10所示,所述G129E-mutant-F引物的序列如SEQ ID NO:11所示,所述G129E-mutant-R引物的序列如SEQ ID NO:12所示,所述C712R-wild-F引物的序列如SEQ ID NO:13所示,所述C712R-wild-R引物的序列如SEQ ID NO:14所示,所述C712R-mutant-F引物的序列如SEQ ID NO:15所示,所述C712R-mutant-R引物的序列如SEQ ID NO:16所示,所述Q569K-wild-F引物的序列如SEQ ID NO:17所示,所述Q569K-wild-R引物的序列如SEQ ID NO:18所示,所述Q569K-mutant-F引物的序列如SEQ ID NO:19所示,所述Q569K-mutant-R引物的序列如SEQ ID NO:20所示。

2.一种含有权利要求1所述引物组合的检测试剂盒,包括反应缓冲液、dNTP混合物和聚合酶,其特征在于,还包括第一探针和第二探针,所述第一探针的序列如SEQ ID NO:21所示,所述第二探针的序列如SEQ ID NO:22所示;所述第一探针的首端连接有FAM、末端连接有Dabcyl进行修饰;所述第二探针的首端连接有HEX、末端连接有Dabcyl进行修饰。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,所述反应缓冲液中含有的组分及浓度如下:500mM的Tris-HCl、200mM的KCl、200mM(NH4)2SO4和20mM的MgSO4

4.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,所述dNTP混合物的浓度为0.25mM。

5.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,所述聚合酶为Klenow聚合酶。

6.根据权利要求2-5任一所述的检测试剂盒,其特征在于,还包括阳性对照物和阴性对照物。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒,其特征在于,所述阳性对照物包括含有BRCA1、BRCA2、TP53、PTEN和RB1突变序列的质粒和含有BRCA1、BRCA2、TP53、PTEN和RB1野生序列的质粒,所述阴性对照为不含有BRCA1、BRCA2、TP53、PTEN和RB1突变序列和野生序列的质粒。

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