一种酪蛋白来源的降胆固醇肽及其制备方法和应用与流程

文档序号:11095827阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种酪蛋白来源的降胆固醇肽,其特征在于,所述降胆固醇肽包含下述的氨基酸序列:SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

2.权利要求1所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:

(1)制备酪蛋白酶解液:配制40~60mg/mL的酪蛋白溶液,加入蛋白酶,蛋白酶的终浓度为50~70mg/mL,酶解pH为6.0~8.0,酶解温度为45~50℃,酶解时间为3~4h,加热灭活,离心取上清;

(2)制备酪蛋白肽超滤液:将步骤(1)收集的上清液进行超滤,超滤膜压力为0.1~0.4MPa,流速为5~10mL/min;

(3)制备降胆固醇粗肽:采用凝胶色谱分离纯化步骤(2)制备获得的酪蛋白肽超滤液,220nm检测出峰位置,收集各吸收峰,以胆固醇胶束溶解度抑制率为评价指标测定降胆固醇活性,具有降胆固醇活性的组分进行冷冻干燥;

(4)降胆固醇肽序列分析:采用超高效液相-质谱联用分析降胆固醇粗肽的氨基酸序列;

(5)降胆固醇肽合成:根据步骤(4)的氨基酸序列分析结果合成降胆固醇肽,收集具有降胆固醇活性的多肽。

3.根据权利要求2所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述酪蛋白溶液浓度为50mg/mL,蛋白酶的终浓度为60mg/mL,酶解pH为7.0,酶解温度为47.5℃,酶解时间为3.5h。

4.根据权利要求2所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述蛋白酶为中性蛋白酶。

5.根据权利要求2所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述超滤膜压力为0.25MPa,流速为7.5mL/min。

6.根据权利要求2所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述凝胶色谱采用的过滤介质为Sephadex G-10凝胶,蒸馏水平衡,上样量为1~2%凝胶色谱柱体积,洗脱速度为2.5~3.5mL/min。

7.根据权利要求2所述的一种酪蛋白来源的降胆固醇肽的制备方法,其特征在于,步骤(4)所述超高效液相-质谱联用分析中液相色谱分析柱采用的是ACQUITY UPLC BEH130 C18柱,规格为2.1×150nm,1.7μm,质谱仪采用的是WATERS MALDI SYNAPT Q-TOF MS。

8.权利要求1所述的酪蛋白来源的降胆固醇肽在功能食品中的应用。

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