一种NK细胞培养基及体外扩增NK细胞的方法与流程

文档序号:12411444阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种NK细胞培养基,其特征在于,包括基础培养基和添加物,所述添加物各组分及浓度为:8-12g/L人血清白蛋白、2.5-7.5mmol/L尼克酰胺、0.5-2.0μmol/L来那度胺、8-16mmol/L HEPES。

2.根据权利要求1所述的NK细胞培养基,其特征在于,所述基础培养基为MEM-alpha培养基。

3.根据权利要求2所述的NK细胞培养基,其特征在于,所述添加物各组分及浓度为:9-11g/L人血清白蛋白、3.5-6.5mmol/L尼克酰胺、0.8-1.5μmol/L来那度胺、9-15mmol/L HEPES。

4.根据权利要求3所述的NK细胞培养基,其特征在于,所述添加物各组分及浓度为:10g/L人血清白蛋白、5mmol/L尼克酰胺、1.0μmol/L来那度胺、10mmol/L HEPES。

5.一种体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,包括以下步骤:

将制备的NK细胞悬于NK细胞培养基中,并将悬有NK细胞的培养基转移至细胞培养瓶中,NK细胞的密度为4.5×106-5.5×106个/20ml;

在所述细胞培养瓶中加入体积比为15%-25%的自体血浆及5-15μg/ml抗Her-2单克隆抗体、950-1050U/ml重组人IL-2、25-35ng/ml重组人IL-15、5-15ng/ml重组人IL-21,并将所述细胞培养瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中培养;

间隔预定时间补加所述NK细胞培养基及950-1050U/ml重组人IL-2、25-35ng/ml重组人IL-15、5-15ng/ml重组人IL-21,当培养体系为90-110ml时,将细胞悬液转移至细胞培养袋中培养;

培养预定天数后,获得扩增的NK细胞;

其中,所述NK细胞培养基包括基础培养基和添加物,所述添加物各组分及浓度为:8-12g/L人血清白蛋白、2.5-7.5mmol/L尼克酰胺、0.5-2.0μmol/L来那度胺、8-16mmol/L HEPES。

6.根据权利要求5所述的体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,初始悬于NK细胞培养基中的NK细胞的密度为5×106个/20ml。

7.根据权利要求6所述的体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,所述自体血浆的浓度为体积比20%,所述抗Her-2单克隆抗体的浓度为10μg/ml,所述重组人IL-2的浓度为1000U/ml,所述重组人IL-15的浓度为30ng/ml,所述重组人IL-21的浓度为10ng/ml。

8.根据权利要求7所述的体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,所述基础培养基为MEM-alpha培养基。

9.根据权利要求8所述的体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,所述添加物各组分及浓度为:10g/L人血清白蛋白、5mmol/L尼克酰胺、1.0μmol/L来那度胺、10mmol/L HEPES。

10.根据权利要求8所述的体外扩增NK细胞的方法,其特征在于,所述细胞培养袋为透气细胞培养袋。

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