一种用于扩增MERS‑CoV的LAMP引物组及试剂盒的制作方法

文档序号:12698112阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于扩增MERS-CoV的LAMP引物组,其特征在于,所述LAMP引物组包括以下五组引物组中的一种或几种:针对MERS-CoV的orf1a区片段扩增的引物组、针对MERS-CoV的orf1b区片段扩增的引物组、针对MERS-CoV的N2区片段扩增的引物组、针对MERS-CoV的N3区片段扩增的引物组和针对MERS-CoV的upE区片段扩增的引物组;

其中,所述针对MERS-CoV的orf1a区片段扩增的引物组包括两对引物,分别为:Orf1a-F3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,Orf1a-B3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;以及,Orf1a-FIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,Orf1a-BIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;

所述针对MERS-CoV的orf1b区片段扩增的引物组包括两对引物,分别为:Orf1b-F3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,Orf1b-B3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示;以及,Orf1b-FIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示,Orf1b-BIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示;

所述针对MERS-CoV的N2区片段扩增的引物组包括两对引物,分别为:N2-F3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示,N2-B3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示;以及,N2-FIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示,N2-BIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示;

所述针对MERS-CoV的N3区片段扩增的引物组包括两对引物,分别为:N3-F3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示,N3-B3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示;以及,N3-FIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示,N3-BIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示;

所述针对MERS-CoV的upE区片段扩增的引物组包括两对引物,分别为:upE-F3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示,upE-B3:其核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示;以及,upE-FIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示,upE-BIP:其核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示。

2.根据权利要求1所述的LAMP引物组,其特征在于,所述LAMP引物组包括针对MERS-CoV的orf1a区片段扩增的引物组、针对MERS-CoV的orf1b区片段扩增的引物组、针对MERS-CoV的N2区片段扩增的引物组和针对MERS-CoV的N3区片段扩增的引物组。

3.一种用于检测MERS-CoV的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的LAMP引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括LAMP反应液和LAMP显色液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述LAMP反应液包括:Bst聚合酶、AMV反转录酶、LAMP反应缓冲液和超纯水。

6.一种非疾病诊断目的MERS-CoV病毒检测方法,包括以下步骤:

1)取核酸样本、权利要求1或2所述LAMP引物组的工作液与LAMP反应液、超纯水、LAMP密封液混合,制得扩增反应液;

2)取制得的扩增反应液,60~65℃反应20~80min,根据显色结果判断样品是否含有MERS-CoV病毒。

7.根据权利要求6所述的检测方法,其特征在于,所述LAMP引物组的工作液中,引物Orf1a-F3与Orf1a-B3的浓度均为0.2~0.4μM,引物Orf1a-FIP与Orf1a-BIP的浓度均为1~2μM;

所述引物Orf1b-F3与Orf1b-B3的浓度均为0.2~0.4μM,引物Orf1b-FIP与Orf1b-BIP的浓度均为1~2μM;

所述引物N2-F3与N2-B3的浓度均为0.2~0.4μM,引物N2-FIP与N2-BIP的浓度均为1~2μM;

所述引物N3-F3与N3-B3的浓度均为0.2~0.4μM,引物N3-FIP与N3-BIP的浓度均为1~2μM;

所述引物upE-F3与upE-B3的浓度均为0.2~0.4μM,引物upE-FIP与upE-BIP的浓度均为1~2μM。

8.权利要求1或2所述LAMP引物组在非疾病诊断目的的MERS-CoV病毒检测中的应用。

9.权利要求3-5任一所述试剂盒在非疾病诊断目的的MERS-CoV病毒检测中的应用。

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