肿瘤驱动基因变异的检测剂、检测试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及生物
技术领域：
，特别是涉及一种肿瘤驱动基因变异的检测剂、检测试剂盒及其应用。
背景技术：
：肿瘤是一种高发病率和高死亡率的疾病，严重危害公众健康。随着对肿瘤发病机制及其生物学行为不断深入的研究，越来越多地将研究焦点集中在alk基因、braf基因及kras基因等肿瘤驱动基因，及时检测这些肿瘤驱动基因的变异，对于早期的肿瘤筛查及对肿瘤病人的个体化治疗具有重要的指导意义。然而，肿瘤的发生可能伴随着多种肿瘤驱动基因的变异，同时，肿瘤其中基因的变异形式多样，如突变或融合等变异形式。传统的检测方法或检测产品能够检测的肿瘤驱动基因的变异形式较少，单次只能检测一种变异类型，当一次性检测多种基因变异类型时，多条引物或探针之间存在相互干扰，导致引物二聚体、假阳性等问题，不能有效指导肿瘤患者的治疗。技术实现要素：基于此，有必提供一种能够一次性检测肿瘤驱动基因的多种变异类型的肿瘤驱动基因变异的检测剂、检测试剂盒及其应用。一种her2基因突变检测剂，包括：第一正向引物，所述第一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2263_2264tt>cc的突变，所述第一正向引物的核苷酸序列如seqidno.01所示；第二正向引物，所述第二正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生del2262_2269inscccga的突变，所述第二正向引物的核苷酸序列如seqidno.02所示；第三正向引物，所述第三正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生del2266_2268的突变，所述第三正向引物的核苷酸序列如seqidno.03所示；第四正向引物，所述第四正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2324_2325insatacgtgatggc的突变，所述第四正向引物的核苷酸序列如seqidno.04所示；第五正向引物，所述第五正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2325_2327del2326ginsttgt的突变，所述第五正向引物的核苷酸序列如seqidno.05所示；第六正向引物，所述第六正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2325_2327del2326ginsatat的突变，所述第六正向引物的核苷酸序列如seqidno.06所示；第七正向引物，所述第七正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2326_2327inst(c/g)t的突变，所述第七正向引物的核苷酸序列如seqidno.07所示；第八正向引物，所述第八正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2328_2329insgtgtgt的突变，所述第八正向引物的核苷酸序列如seqidno.08所示；第九正向引物，所述第九正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2339_2340inscggctcgcc的突变，所述第九正向引物的核苷酸序列如seqidno.09所示；第十正向引物，所述第十正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生c.2339_2340insgggctcccc的突变，所述第十正向引物的核苷酸序列如seqidno.10所示；第十一正向引物，所述第十一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生c.2339_2340instggctcccc的突变，所述第十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.11所示；第十二正向引物，所述第十二正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2325_2326instacgtgatggct的突变，所述第十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.12所示；第十三正向引物，所述第十三正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2322_2323insgcatacgtgatg的突变，所述第十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.13所示；第十四正向引物，所述第十四正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2340_2341insggctcccca的突变，所述第十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.14所示；第十五正向引物，所述第十五正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2326_2327insttt的突变，所述第十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.15所示；第十六正向引物，所述第十六正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2326g>c、2326g>a或2326g>t的突变，所述第十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.16所示；第十七正向引物，所述第十七正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2329g>a或2329g>t的突变，所述第十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.17所示；第十八正向引物，所述第十八正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2327g>t的突变，所述第十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.18所示；第十九正向引物，所述第十九正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2380g>a的突变，所述第十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.19所示；第二十正向引物，所述第二十正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生del2494_2649的突变，所述第二十正向引物的核苷酸序列如seqidno.20所示；第二十一向引物，所述第二十一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中所述her2基因发生2677t>c的突变，所述第二十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.21所示；第一反向引物，所述第一反向引物的核苷酸序列如seqidno.22所示；第二反向引物，所述第二反向引物的核苷酸序列如seqidno.23所示；第三反向引物，所述第三反向引物的核苷酸序列如seqidno.24所示；第一探针，所述第一探针的核苷酸序列如seqidno.25所示；第二探针，所述第二探针的核苷酸序列如seqidno.26所示；及第三探针，所述第三探针的核苷酸序列如seqidno.27所示。上述her2基因突变检测剂包括21条正向引物、3条反向引物及3条探针，21条正向引物针对her2基因的多种突变类型而设计，能够一次性即同时检测her2基因的至少21种突变类型，检测灵敏度较高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种met基因突变检测剂，包括:第二十二正向引物，所述第二十二正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3028g>c或c.3028g>a的突变，所述第二十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.28所示；第二十三正向引物，所述第二十三正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3028+1g>t的突变，所述第二十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.29所示；第二十四正向引物，所述第二十四正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3024_3028delagaaggtatatt的突变，所述第二十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.30所示；第二十五正向引物，所述第二十五正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3001_3021delgtagactaccgagctactttt的突变，所述第二十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.31所示；第二十六正向引物，所述第二十六正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3028_3028+1delgg的突变，所述第二十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.32所示；第二十七正向引物，所述第二十七正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3025_3028+2delgaaggt的突变，所述第二十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.33所示；第二十八正向引物，所述第二十八正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3028_3028+15delggtatatttcagttta的突变，所述第二十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.34所示；第二十九正向引物，所述第二十九正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3016a>c的突变，所述第二十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.35所示；第三十正向引物，所述第三十正向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.3017_3028delcttttccagaaggta的突变，所述第三十正向引物的核苷酸序列如seqidno.36所示；第四反向引物，所述第四反向引物的核苷酸序列如seqidno.37所示；及第四探针，所述第四探针的核苷酸序列如seqidno.38所示。上述met基因突变检测剂包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，9条正向引物针对met基因的多种突变类型设计，能够一次性即同时检测met基因的至少9种突变类型，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种met基因突变检测剂，包括第三十一正向引物，所述第三十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.39所示；第五反向引物，所述第五反向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.2888-5_2944del62的突变，所述第五反向引物的核苷酸序列如seqidno.40所示；第六反向引物，所述第六反向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.2887-18>2887-7del12的突变，所述第六反向引物的核苷酸序列如seqidno.41所示；第七反向引物，所述第七反向引物用于检测所述met基因的14号外显子发生c.2888-19_2888-2delctttctctctgttttaa的突变，所述第七反向引物的核苷酸序列如seqidno.42所示；及第五探针，所述第五探针的核苷酸序列如seqidno.43所示。上述met基因突变检测剂包括1条正向引物、3条反向引物及1条探针，3条反向引物针对met基因的3种突变类型设计，能够一次性即同时检测met基因的3种突变类型，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种肿瘤驱动基因突变检测试剂盒，包括：如上述实施例中所述的her2基因突变检测剂；met基因突变检测剂，所述met基因突变检测剂选自如上述实施例所述的met基因突变检测剂中的至少一种；kras基因突变检测剂，所述kras基因突变检测剂包括：第三十二正向引物，所述第三十二正向引物用于检测所述kras基因中2号外显子的第34、35及38位的碱基中的一个被替换后形成的kras突变基因，所述第三十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.44所示，第八反向引物，所述第八反向引物的核苷酸序列如seqidno.45所示，第六探针，所述第六探针的核苷酸序列如seqidno.46所示；及braf基因突变检测剂，所述braf基因突变检测剂包括：第三十三正向引物，所述第三十三正向引物用于检测所述braf基因中15号外显子的第1797～1800位点区域内的碱基中的至少一个被替换后形成的braf突变基因，所述第三十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.47所示，第九反向引物，所述第九反向引物的核苷酸序列如seqidno.48所示，第七探针，所述第七探针的核苷酸序列如seqidno.49所示。在其中一个实施例中，所述第六探针的3'端结合mgb，所述第六探针的5'端结合荧光基团；及/或，所述第七探针的3'端结合mgb，所述第七探针的5'端结合荧光基团。一种alk融合检测剂，包括：第三十四正向引物，所述第三十四正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与eml4基因的13号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.50所示；第三十五正向引物，所述第三十五正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的6号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.51所示；第三十六正向引物，所述第三十六正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的6号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.52所示；第三十七正向引物，所述第三十三十七正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的20号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十三十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.53所示；第三十八正向引物，所述第三十八正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.54所示；第三十九正向引物，所述第三十九正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第三十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.55所示；第四十正向引物，所述第四十正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的2号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第四十正向引物的核苷酸序列如seqidno.56所示；第四十一正向引物，所述第四十一正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的2号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第四十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.57所示；第四十二正向引物，所述第四十二正向引物用于检测所述alk基因的20号外显子与所述eml4基因的13号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，所述第四十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.58所示；第十反向引物，所述第十反向引物的核苷酸序列如seqidno.59所示；及第八探针，所述第八探针的核苷酸序列如seqidno.60所示。上述alk融合检测剂包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，9条正向引物针对多种eml4-alk融合基因设计，能够一次性即同时检测至少9种eml4-alk融合基因，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种ros1融合检测剂，包括：第四十三正向引物，所述第四十三正向引物用于检测所述ros1基因与slc34a2基因融合形成的slc34a2-ros1融合基因，所述slc34a2-ros1融合基因由所述ros1基因的32号外显子与所述slc34a2基因的4号外显子融合形成，或者，由所述ros1基因的34号外显子与所述slc34a2基因的4号外显子融合形成，所述第四十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.61所示；第四十四正向引物，所述第四十四正向引物用于检测所述ros1基因与所述slc34a2基因融合形成的slc34a2-ros1融合基因，所述slc34a2-ros1融合基因由所述ros1基因的32号外显子与所述slc34a2基因的14号外显子del2046融合形成，或者，由所述ros1基因的34号外显子与所述slc34a2基因的14号外显子del2046融合形成，所述第四十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.62所示；第四十五正向引物，所述第四十五正向引物用于检测cd74-ros1融合基因，所述cd74-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子与cd74基因的6号外显子融合形成，或者，由所述ros1基因的34号外显子与所述cd74基因的6号外显子融合形成的cd74-ros1融合基因，所述第四十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.63所示；第四十六正向引物，所述第四十六正向引物用于检测所述ros1基因的32号外显子与sdc4基因的2号外显子融合形成的sdc4-ros1融合基因，所述第四十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.64所示；第四十七正向引物，所述第四十七正向引物用于检测sdc4-ros1融合基因，所述sdc4-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子sdc4基因的4号外显子融合形成，或者，所述ros1基因的34号外显子与所述sdc4基因的4号外显子融合形成的sdc4-ros1融合基因，所述第四十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.65所示；第四十八正向引物，所述第四十八正向引物用于检测所述ros1基因的34号外显子与ezr基因的10号外显子融合形成的ezr-ros1融合基因，所述第四十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.66所示；第四十九正向引物，所述第四十九正向引物用于检测所述ros1基因的35号外显子与lrig3基因的16号外显子融合形成的lrig3-ros1融合基因，所述第四十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.67所示；第五十正向引物，所述第五十正向引物用于检测所述ros1基因的35号外显子与tpm3基因的8号外显子融合形成的tpm3-ros1融合基因，所述第五十正向引物的核苷酸序列如seqidno.68所示；第五十一正向引物，所述第五十一正向引物用于检测所述ros1基因的35号外显子与gopc基因的8号外显子融合形成的gopc-ros1融合基因，所述第五十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.69所示；第五十二正向引物，所述第五十二正向引物用于检测所述ros1基因的36号外显子与所述gopc基因的4号外显子融合形成的gopc-ros1融合基因，所述第五十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.70所示；第十一反向引物，所述第十一反向引物的核苷酸序列如seqidno.71所示；第十二反向引物，所述第十二反向引物的核苷酸序列如seqidno.72所示；第十三反向引物，所述第十三反向引物的核苷酸序列如seqidno.73所示；第十四反向引物，所述第十四反向引物的核苷酸序列如seqidno.74所示；第九探针，所述第九探针的核苷酸序列如seqidno.75所示；第十探针，所述第十探针的核苷酸序列如seqidno.76所示；第十一探针，所述第十一探针的核苷酸序列如seqidno.77所示；及第十二探针，所述第十二探针的核苷酸序列如seqidno.78所示。上述ros1融合检测剂包括10条正向引物、4条反向引物及4条探针，10条正向引物针对ros1基因与多种基因融合形成的多种融合基因，能够一次性即同时检测ros1基因与多种基因融合形成的多种基因融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒，包括：上述实施例所述的her2基因突变检测剂；上述实施例所述的met基因突变检测剂中的至少一种；上述实施例所述的alk融合检测剂；及上述实施例所述的ros1融合检测剂。在其中一个实施例中，所述肿瘤驱动基因突变的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、2μl的检测样本dna、0.2μm～1.0μm的正向引物、0.2μm～1.0μm的反向引物及0.1μm～0.5μm的探针；及/或，所述肿瘤驱动基因融合的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、15u～40u的逆转录酶、2μl的检测样本rna、0.2μm～1.0μm的正向引物、0.2μm～1.0μm的反向引物及0.1μm～0.5μm的探针。上述实施例任一项所述的肿瘤驱动基因突变检测试剂盒在肿瘤驱动基因变异检测装置中的应用；或上述实施例任一项所述的肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒在肿瘤驱动基因变异检测装置中的应用。附图说明图1-1为实施例2的不同浓度的her2突变基因的扩增曲线；图1-2为实施例2的不同浓度的met-a突变基因的扩增曲线；图1-3为实施例2的不同浓度的met-b突变基因的扩增曲线；图1-4为实施例2的不同浓度的kras突变基因的扩增曲线；图1-5为实施例2的不同浓度的braf突变基因的扩增曲线；图2为实施例3中her2实验组与her2对照组的扩增曲线对比图；图3为实施例4中met-a实验组与met-a对照组的扩增曲线对比图；图4-1为实施例5中含有her2突变基因的临床样品的扩增曲线；图4-2为实施例5中含有met-a突变基因的临床样品的扩增曲线；图4-3为实施例5中含有met-b突变基因的临床样品的扩增曲线；图4-4为实施例5中含有krasf突变基因的临床样品的扩增曲线；图4-5为实施例5中含有braf突变基因的临床样品的扩增曲线；图5-1为实施例6的不同浓度的alk融合基因的扩增曲线；图5-2为实施例6的不同浓度的ros1融合基因的扩增曲线；图6为实施例7中alk实验组与alk对照组的扩增曲线对比图；图7为实施例8中ros1实验组与ros1对照组的扩增曲线对比图；图8-1为实施例9中含有alk融合基因的临床样本的扩增曲线；图8-2为实施例9中含有ros1融合基因的临床样本的扩增曲线；图9为实施例10中检测未知临床样本的扩增曲线；图10为实施例10中未知临床样本的测序图。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳的实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。一实施方式her2基因突变检测剂，该her2基因突变检测剂包括21条正向引物、3条反向引物及3条探针，用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生的二十一种突变类型。her2基因定位于染色体17q21(即17号染色体长臂第2区第1带)，其编码产物为185kd的跨膜精蛋白her2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2)，即为人类表皮生长因子受体2，又称为neu、erbb-2、cd340(分化群340)或p185。her2蛋白是一种由1255个氨基酸组成的蛋白质，其720～987位属于醋氨酸激酶区。her2蛋白通常只在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。然而在多种人类肿瘤中却过度表达，如乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、原发性肾细胞癌、子宫内膜癌等，并提示预后不良。在其中一个实施方式中，her2基因突变检测剂中的21条正向引物如下：第一正向引物，第一正向引物的核苷酸序列如seqidno.01所示，第一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2263_2264tt>cc的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2263～2264位点区域的碱基序列tt被碱基序列cc替换；第二正向引物，第二正向引物的核苷酸序列如seqidno.02所示，第二正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生del2262_2269inscccga的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2262～2269位点区域的碱基序列被碱基序列cccga替换；第三正向引物，第三正向引物的核苷酸序列如seqidno.03所示，第三正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生del2266_2268的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2266～2268位点区域的碱基序列缺失；第四正向引物，第四正向引物的核苷酸序列如seqidno.04所示，第四正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2324_2325insatacgtgatggc的突变，即7号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2324位碱基与第2325位碱基之间插入碱基序列atacgtgatggc；第五正向引物，第五正向引物的核苷酸序列如seqidno.05所示，第五正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2325_2327del2326ginsttgt的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2326位的g碱基缺失且第2325位碱基与第2327位碱基之间插入碱基序列ttgt；第六正向引物，第六正向引物的核苷酸序列如seqidno.06所示，第六正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2325_2327del2326ginsatat的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2326位的g碱基缺失且第2325位碱基与第2327位碱基之间插入碱基序列atat；第七正向引物，第七正向引物的核苷酸序列如seqidno.07所示，兼并碱基s表示c碱基或g碱基，第七正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2326_2327inst(c/g)t的突变，即7号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生第2326位碱基与第2327位碱基之间插入碱基序列tct或碱基序列tgt；第八正向引物，第八正向引物的核苷酸序列如seqidno.08所示，第八正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2328_2329insgtgtgt的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2328位碱基与第2329位碱基之间插入碱基序列gtgtgt；第九正向引物，第九正向引物的核苷酸序列如seqidno.09所示，第九正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2339_2340inscggctcgcc的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2339位碱基与第2340位碱基之间插入碱基序列cggctcgcc；第十正向引物，第十正向引物的核苷酸序列如seqidno.10所示，第十正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生c.2339_2340insgggctcccc的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2339位碱基与第2340位碱基之间插入碱基序列gggctcccc；第十一正向引物，第十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.11所示，第十一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生c.2339_2340instggctcccc的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2339位碱基与第2340位碱基之间插入碱基序列tggctcccc；第十二正向引物，第十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.12所示，第十二正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2325_2326instacgtgatggct的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2325位碱基与第2326位碱基之间插入碱基序列tacgtgatggct；第十三正向引物，第十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.13所示，第十三正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2322_2323insgcatacgtgatg的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2322位碱基与第2323为碱基之间插入碱基序列gcatacgtgatg；第十四正向引物，第十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.14所示，第十四正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2340_2341insggctcccca的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2340位碱基与第2341为碱基之间插入碱基序列ggctcccca；第十五正向引物，第十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.15所示，第十五正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2326_2327insttt的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2326位碱基与第2327为碱基之间插入碱基序列ttt；第十六正向引物，第十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.16所示，其中，兼并碱基h表示c碱基、a碱基或t碱基，第十六正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2326g>c、2326g>a或2326g>t的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因的第2326位的g碱基被c碱基、a碱基或t碱基替换；第十七正向引物，第十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.17所示，其中，兼并碱基w表示a碱基或t碱基，第十七正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2329g>a或2329g>t的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因的第2329位的g碱基被a碱基或t碱基替换；第十八正向引物，第十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.18所示，第十八正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2327g>t的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因的第2327位的g碱基被t碱基替换；第十九正向引物，第十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.19所示，第十九正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2380g>a的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2380位g碱基被a碱基替换；第二十正向引物，第二十正向引物的核苷酸序列如seqidno.20所示，第二十正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生del2494_2649的突变，即7号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2494～2649位点区域的碱基序列缺失；第二十一正向引物，第二十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.21所示，第二十一正向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因发生2677t>c的突变，即17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2677位的t碱基被c碱基替换。在其中一个实施方式中，her2基因突变检测剂中的3条反向引物如下：第一反向引物，第一反向引物的核苷酸序列如seqidno.22所示，第一反向引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2262～2341位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变；第二反向引物，第二反向引物的核苷酸序列如seqidno.23所示，第二反应引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2380位g碱基被a碱基替换；第三反向引物，第三反向引物的核苷酸序列如seqidno.24所示，第三反应引物用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2494～2677位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，her2基因突变检测剂中的3条探针如下：第一探针，第一探针的核苷酸序列如seqidno.25所示，第一探针用于检测检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2262～2341位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变；第二探针，第二探针的核苷酸序列如seqidno.26所示，第二探针用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2380位g碱基被a碱基替换；第三探针，第三探针的核苷酸序列如seqidno.27所示，第三探针用于检测17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2494～2677位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，第一探针的3'端结合荧光猝灭基团，第一探针的5'结合荧光基团，用于标记17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2262～2341位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变而形成的her2突变基因，进而特异性地、定量地检测该her2突变基因的量。具体地，第一探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第一探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，第二探针的3'端结合荧光猝灭基团，第二探针的5'结合荧光基团，用于标记17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2380位g碱基被a碱基替换而形成的her2突变基因，进而特异性地、定量地检测该her2突变基因的量。具体地，第二探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第二探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，第三探针的3'端结合荧光猝灭基团，第三探针的5'结合荧光基团，用于标记17号染色体长臂第2区第1带中her2基因第2494～2677位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变而形成的her2突变基因，进而特异性地、定量地检测该her2突变基因的量。具体地，第三探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第三探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，her2基因突变检测剂中上述21条正向引物、3条反向引物及3条探针分别放置在不同的存储容器中，使用时再加入一个反应容器中，从而避免在运输或存储的过程中的各引物或探针之间的相互干扰，进而有利于延长上述her2基因突变检测剂的存储期。当然，需要说明的是，上述的引物和探针也均可以放置于一个存储容器中进行存储和运输。上述her2基因突变检测剂包括21条正向引物、3条反向引物及3条探针，上述的引物和探针均基于arms技术设计，即利用引物的3'端末端碱基必须与其模板dna互补才能够有效扩增的原理，从而特异性扩增突变基因，如序列seqidno.1：ccagtggccatcaaagtgcc，其中，3’端末位两碱基是cc，是her22263_2264的突变位点，利用taq酶缺少3’-5’外切酶活性无法切除cc校正，从而无法扩增野生型模板，当该位点发生cc突变后，此引物才会扩增。21条正向引物针对her2基因的多种突变类型而设计，能够一次性即同时检测her2基因的至少21种突变类型，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。当然，需要说明的是，反向引物和探针的数量均不限于三条，也均可以为一条，还均可以为更多条，只要保证各条引物与探针之间不发生相互干扰即可。第一实施方式的met基因突变检测剂，该met基因突变检测剂包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，用于检测met基因14号外显子发生的九种突变。met蛋白由原癌基因c-met编码，是肝细胞生长因子hgf的受体。met蛋白与多种细胞行为相关，参与细胞的信号传导、细胞骨架重排，促进细胞的增殖与分化。met基因14外显子是met蛋白泛素化降解过程中的结合位点，met基因14外显子跳读突变会导致met蛋白无法被泛素化降解，从而引起met蛋白的持续表达，进而导致细胞的恶性增殖与分化。在其中一个实施方式中，上述met基因突变检测剂的9条正向引物如下：第二十二正向引物，第二十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.28所示，兼并碱基m表示c碱基或t碱基，第二十二正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3028g>c或c.3028g>a的突变，即met基因的14号外显子的第3028位的g碱基被c碱基或a碱基替换；第二十三正向引物，第二十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.29所示，兼并碱基m表示c碱基或t碱基，第二十三正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3028+1g>t的突变，即met基因的14号外显子的第3028+1位的g碱基被t碱基替换；第二十四正向引物，第二十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.30所示，第二十四正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3024_3028delagaaggtatatt的突变，即met基因的14号外显子第3024～3028位点区域缺失碱基序列agaaggtatatt；第二十五正向引物，第二十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.31所示，第二十五正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3001_3021delgtagactaccgagctactttt的突变，即met基因的14号外显子第3001～3021位点区域缺失碱基序列gtagactaccgagctactttt。第二十六正向引物，第二十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.32所示，第二十六正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3028_3028+1delgg的突变，即检测met基因的14号外显子第3028～3028+1位点区域缺失碱基序列gg；第二十七正向引物，第二十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.33所示，第二十七正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3025_3028+2delgaaggt的突变，即met基因的14号外显子第3025～3028+2位点区域缺失碱基序列gaaggt；第二十八正向引物，第二十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.34所示，第二十八正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3028_3028+15delggtatatttcagttta的突变，即met基因的14号外显子第3028～3028+15位点区域缺失碱基序列ggtatatttcagttta；第二十九正向引物，第二十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.35所示，第二十九正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3016a>c的突变，即met基因的14号外显子第3016的a碱基被c碱基替换；第三十正向引物，第三十正向引物的核苷酸序列如seqidno.36所示，第三十正向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.3017_3028delcttttccagaaggta的突变，即met基因的14号外显子第3017～3028位点区域缺失碱基序列cttttccagaaggta；在其中一个实施方式中，上述met基因突变检测剂的1条反向引物如下：第四反向引物，第四反向引物的核苷酸序列如seqidno.37所示，第四反向引物用于检测met基因的14号外显子第3001～3028位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，上述met基因突变检测剂的1条探针如下：第四探针，第四探针的核苷酸序列如seqidno.38所示，其中，兼并碱基r表示g碱基或a碱基，第四探针用于检测met基因的14号外显子第3001～3028位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，第四探针的3'端结合荧光猝灭基团，第四探针的5'结合荧光基团，用于标记met基因的14号外显子第3001～3028位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变而形成的met突变基因，进而特异性地、定量地检测该met突变基因的量。具体地，第四探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第四探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，met基因突变检测剂中上述9条正向引物、1条反向引物及1条探针分别放置在不同的存储容器中，使用时再加入一个反应容器中，从而避免在运输或存储的过程中的各引物或探针之间的相互干扰，进而有利于延长上述met基因突变检测剂的存储期。当然，需要说明的是，上述的引物和探针也均可以放置于一个存储容器中进行存储和运输。上述met基因突变检测剂包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，上述的引物和探针均基因arms技术设计，其中，9条正向引物针对met基因的多种突变类型而设计，能够一次性即同时检测met基因的至少9种突变类型，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。第二实施方式的met基因突变检测剂包括1条正向引物、3条反向引物及1条探针，用于检测met基因的两种突变类型。在其中一个实施方式中，met基因突变检测剂的1条正向引物如下：第三十一正向引物，第三十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.39所示，第三十一正向引物用于检测met基因的14号外显子第2887～2944位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，met基因突变检测剂的3条反向引物如下：第五反向引物，第五反向引物的核苷酸序列如seqidno.40所示，其中，兼并碱基r表示g碱基或a碱基，第五反向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.2888-5_2944del62的突变，即met基因的14号外显子的第2888-5～2944位点区域缺失含有62个碱基的序列，其中，62个碱基的序列为：ttaagatctgggcagtgaattagttcgctatgatgcaagagtacacactcctcatttggata；第六反向引物，第六反向引物的核苷酸序列如seqidno.41所示，第六反向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.2887-18>2887-7del12的突变，即met基因的14号外显子的第2887-18～2887-7位点区域缺失含有12个碱基的序列，其中，12个碱基的序列为：tctttctctctg；第七反向引物，第七反向引物的核苷酸序列如seqidno.42所示，第七反向引物用于检测met基因的14号外显子发生c.2888-19_2888-2delctttctctctgttttaa的突变，即met基因的14号外显子第2888-19～2888-2位点区域缺失碱基序列ctttctctctgttttaa。在其中一个实施方式中，met基因突变检测剂的1条探针如下：第五探针，第五探针的核苷酸序列如seqidno.43所示，第五探针用于检测met基因的14号外显子第2887～2944位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，第五探针的3'端结合荧光猝灭基团，第五探针的5'结合荧光基团，用于标记met基因的14号外显子第2887～2944位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变而形成的met突变基因，进而特异性地、定量地检测该met突变基因的量。具体地，第五探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第五探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，met基因突变检测剂中上述1条正向引物、3条反向引物及1条探针分别放置在不同的存储容器中，使用时再加入一个反应容器中，从而避免在运输或存储的过程中的各引物或探针之间的相互干扰，进而有利于延长上述met基因突变检测剂的存储期。当然，需要说明的是，上述的引物和探针也均可以放置于一个存储容器中进行存储和运输。上述met基因突变检测剂包括1条正向引物、3条反向引物及1条探针，上述的引物和探针均基因arms技术设计，且3条反向引物针对met基因的3种突变类型设计，能够一次性即同时检测met基因的3种突变类型，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一实施方式的肿瘤驱动基因突变检测试剂盒，包括如上述实施方式的her2基因突变检测剂、第一实施方式的met基因突变检测剂及第二实施方式的met基因突变检测剂中的至少一种、kras基因突变检测剂及braf基因突变检测剂。在其中一个实施方式中，kras基因突变检测剂包括1条正向引物、1条反向引物及1条探针，用于检测kras基因的2号外显子的12号密码子及13号密码子发生碱基的插入、缺失及替换等突变。kras基因是一种鼠类肉瘤病毒癌基因，属于ras基因家族的成员，对人类癌症影响最大。kras基因编码的kras蛋白是egfr信号传导通路中的一个关键的下游调节因子。kras基因突变而编码的异常蛋白，剌激恶性肿瘤细胞的生长和扩散，且不受egfr信号影响。在其中一个实施方式中，kras基因突变检测剂的正向引物如下：第三十二正向引物，第三十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.44所示，第三十二正向引物用于检测kras基因中2号外显子的第34、35及38位的碱基中的一个被替换后形成的kras突变基因。具体地，第三十二正向引物能够检测kras基因中2号外显子的第34位的g碱基被a碱基、c碱基或t碱基替换后形成的kras突变基因；及/或第三十二正向引物能够检测kras基因中2号外显子的第35位的g碱基被a碱基、c碱基或t碱基替换后形成的kras突变基因；及/或第三十二正向引物能够检测kras基因中2号外显子的第38位的g碱基被a碱基替换后形成的kras突变基因。在其中一个实施方式中，kras基因突变检测剂的反向引物如下：第八反向引物，第八反向引物的核苷酸序列如seqidno.45所示，第八反向引物用于检测kras基因中2号外显子的第34、35及38位的碱基中的一个被替换后形成的kras突变基因。在其中一个实施方式中，kras基因突变检测剂的探针如下：第六探针，第六探针的核苷酸序列如seqidno.46所示，其中，兼并碱基r表示g碱基、t碱基或a碱基，第六探针用于检测kras基因中2号外显子的第34、35及38位的碱基中的一个被替换后形成的kras突变基因。在其中一个实施方式中，第六探针的3'端结合mgb，第六探针的5'结合荧光基团，用于标记kras基因中2号外显子的第34、35及38位的碱基中的一个被替换后形成的kras突变基因。mgb能够与dna螺旋的小沟契合，通过稳定dna双螺旋结构来提高dna双链杂交的准确性和特异性，进而特异性地、定量地检测该kras突变基因的量。具体地，第六探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，braf基因突变检测剂包括1条正向引物、1条反向引物及1条探针，用于检测braf基因第1797～1800位点区域发生碱基的插入、缺失及替换等突变。在其中一个实施方式中，braf基因突变检测剂的正向引物如下：第三十三正向引物，第三十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.47所示，第三十三正向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1797～1800位点区域内的碱基中的至少一个被替换后形成的braf突变基因。具体地，第三十三正向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1799位的t碱基被a碱基替换后形成的braf突变基因；或，第三十三正向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1799～1800位点区域内碱基序列tg被碱基序列aa、ac或at替换后形成的braf突变基因；或，第三十三正向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1798～1799位点区域内碱基序列gt被碱基序列aa、ag或at替换后形成的braf突变基因；或，第三十三正向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1797～1799位点区域内碱基序列agt被碱基序列gag替换后形成的braf突变基因。在其中一个实施方式中，braf基因突变检测剂的反向引物如下：第九反向引物，第九反向引物的核苷酸序列如seqidno.48所示，第九反向引物用于检测braf基因中15号外显子的第1797～1800位点区域内的碱基中的至少一个被替换后形成的braf突变基因。在其中一个实施方式中，braf基因突变检测剂的探针如下：第七探针，第七探针的核苷酸序列如seqidno.49所示，兼并碱基m表示c碱基或t碱基，兼并碱基r表示g碱基或a碱基，第七探针用于检测braf基因中15号外显子的第1797～1800位点区域内的碱基中的至少一个被替换后形成的braf突变基因。在其中一个实施方式中，第七探针的3'端结合mgb，第七探针的5'结合荧光基团，用于标记braf基因中15号外显子的第1797～1800位点区域内的碱基中的至少一个被替换后形成的braf突变基因。mgb能够与dna螺旋的小沟契合，通过稳定dna双螺旋结构来提高dna双链杂交的准确性和特异性，进而特异性地、定量地检测该braf突变基因的量。具体地，第七探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因突变检测试剂盒还包括dna提取试剂，用于提取检测样品的dna。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因突变检测试剂盒还包括能够检测内参基因的试剂。在其中一个实施方式中，能够检测内参基因的试剂包括内参基因pcr扩增正向引物、内参基因pcr扩增反向引物和内参基因pcr扩增的探针。通过检测内参基因的试剂检测内参基因的含量，以此为基准计算her2基因、mte基因、kras基因及braf基因发生各种突变类型形成的突变基因的含量，从而校正突变基因的检测过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。具体地，内参基因选自u6、gapdh及β-actin中的至少一种。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因突变检测试剂盒还包括mg2+、dntps、taq酶、ung酶及10×buffer。当然，需要说明的是，肿瘤驱动基因突变检测试剂盒还可以包括其他pcr反应常用的试剂和酶。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因突变检测试剂盒的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、2μl的检测样本dna、正向引物、反向引物及探针。其中，上述反应体系中单条正向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条反向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条探针的浓度为0.1μm～0.5μm。上述肿瘤驱动基因突变检测试剂盒包括her2基因突变检测剂、met基因突变检测剂、kras基因突变检测剂及braf基因突变检测剂，上述的各条引物和探针均基于arms技术设计，且kras基因突变检测剂及braf基因突变检测剂中还结合有mgb探针平台，提高检测的特异性和准确度。上述试剂盒能够检测her2基因、met基因、kras基因及braf基因的多种突变类型，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。当然，需要说明的是，her2基因突变检测剂、met基因突变检测剂、kras基因突变检测剂及braf基因突变检测剂也可以分别单独应用于相应的基因突变检测试剂盒中。一实施方式的alk融合检测剂，包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，用于检测alk基因与eml4基因。alk(anaplasticlymphomakinase，alk)基因是一种强力致癌驱动基因，其编码的alk蛋白为间变性淋巴瘤激酶。eml4和alk两个基因分别位于人类2号染色体的p21带和p23带，这两个基因片段的倒位融合能够使得组织表达新的融合蛋白eml4-alk。不同的eml4-alk融合突变体均具有恶性转化和致瘤性能力。在其中一个实施方式中，alk融合检测剂的9条正向引物如下：第三十四正向引物，第三十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.50所示，第三十四正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的13号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即eml4-alk融合基因(v1)，其中，v1表示eml4-alk融合基因的v1亚型；第三十五正向引物，第三十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.51所示，第三十五正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的6号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的6号外显子(e6a)融合形成的eml4-alk融合基因(v3a)，其中，e6a表示eml4基因的6号外显子a亚型，v3a表示eml4-alk融合基因的v3a亚型；第三十六正向引物，第三十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.52所示，第三十六正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的6号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的6号外显子(e6b)融合形成的eml4-alk融合基因(v3b)，其中，e6b表示eml4基因的6号外显子b亚型，v3b表示eml4-alk融合基因的v3b亚型；第三十七正向引物，第三十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.53所示，第三十七正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的20号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的20号外显子融合形成的eml4-alk融合基因(v2)，其中，v2表示eml4-alk融合基因的v2亚型；第三十八正向引物，第三十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.54所示，第三十八正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因(v4)，其中，v4表示eml4-alk融合基因的v4亚型；第三十九正向引物，第三十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.55所示，第三十九正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因(v7)，其中，v7表示eml4-alk融合基因的v7亚型；第四十三正向引物，第四十正向引物的核苷酸序列如seqidno.56所示，第四十正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的2号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的2号外显子(e2a)融合形成的eml4-alk融合基因(v5a)，其中，e2a表示eml4基因的2号外显子a亚型，v5a表示eml4-alk融合基因的v5a亚型；第四十一正向引物，第四十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.57所示，第四十一正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的2号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的2号外显子(e2b)融合形成的eml4-alk融合基因(v5b)。其中，e2b表示eml4基因的2号外显子b亚型，v5b表示eml4-alk融合基因的v5b亚型；第四十二正向引物，第四十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.58所示，第四十二正向引物用于检测alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因，即alk基因的20号外显子与eml4基因的14号外显子融合形成的eml4-alk融合基因(v6)，其中，v6表示eml4-alk融合基因的v6亚型。在其中一个实施方式中，alk融合检测剂的1条反向引物如下：第十反向引物，第十反向引物的核苷酸序列如seqidno.59所示，第十反向引物用于检测alk基因与eml4基因融合形成的上述9种eml4-alk融合突变体。在其中一个实施方式中，alk融合检测剂的1条探针如下：第八探针，第八探针的核苷酸序列如seqidno.60所示，第八探针用于检测alk基因与eml4基因融合形成的上述9种eml4-alk融合突变体。在其中一个实施方式中，第八探针的3'端结合荧光猝灭基团，第八探针的5'结合荧光基团，用于标记alk基因与eml4基因融合形成的多种eml4-alk融合突变体，进而特异性地、定量地检测该eml4-alk融合基因的量。具体地，第八探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第八探针的5'结合的荧光基团fam。上述alk融合检测剂包括9条正向引物、1条反向引物及1条探针，这些引物和探针均基于arms技术设计，能够一次性检测alk基因与eml4基因融合形成的多种eml4-alk融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一实施方式的ros1融合检测剂，包括10条正向引物、4条反向引物及4条探针，用于检测ros1基因与多种基因融合形成的多种基因融合突变体。ros1基因与vros肉瘤生长，其编码的蛋白为受体酪蛋白激酶(rtk)。rosl基因在第32、34和35号外显子处均存在断点，可以与多种基因发生融合，进而影响肿瘤细胞表达。在其中一实施方式中，ros1融合检测剂的10条正向引物如下：第四十三正向引物，第四十三正向引物的核苷酸序列如seqidno.61所示，第四十三正向引物用于检测ros1基因与slc34a2基因融合形成的slc34a2-ros1融合基因；其中，slc34a2-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子与slc34a2基因的4号外显子融合形成，或者，由ros1基因的34号外显子与slc34a2基因的4号外显子融合形成；slc34a2(solutecarrierfamily34member2)基因，即溶质转运蛋白家族34成员2基因，属于溶质转运蛋白家族slc34的成员之一，其编码的蛋白为na依赖的pi转运蛋白napi-iib，在维持体内无机磷的平衡中起着极其重要的作用；第四十四正向引物，第四十四正向引物的核苷酸序列如seqidno.62所示，第四十四正向引物用于检测ros1基因与slc34a2基因融合形成的slc34a2-ros1融合基因，slc34a2-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子与slc34a2基因的14号外显子del2046融合形成，或者，由ros1基因的34号外显子与slc34a2基因的14号外显子del2046融合形成，其中，slc34a2基因的14号外显子del2046表示slc34a2基因的14号外显子缺失一段含有2046个碱基的序列；第四十五正向引物，第四十五正向引物的核苷酸序列如seqidno.63所示，第四十五正向引物用于检测cd74-ros1融合基因，cd74-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子与cd74基因的6号外显子融合形成，或者，由ros1基因的34号外显子与cd74基因的6号外显子融合形成；其中，cd47基因用于表达跨膜糖蛋白，其编码的蛋白又称为整合素相关蛋白，具有免疫调节作用。第四十六正向引物，第四十六正向引物的核苷酸序列如seqidno.64所示，第四十六正向引物用于检测ros1基因的32号外显子与sdc4基因的2号外显子融合形成的sdc4-ros1融合基因；其中，sdc4(syndecan-4)基因，其编码的蛋白为多配体蛋白聚糖4(sdc4蛋白)，由硫酸乙眈肝素和硫酸软骨素链组成，属于跨膜蛋白聚糖家族，可与多种肝素类生长因子结合充当复合受体，调节信号转导，也可以作为细胞结构的组成成分；第四十七正向引物，第四十七正向引物的核苷酸序列如seqidno.65所示，第四十七正向引物用于检测sdc4-ros1融合基因，sdc4-ros1融合基因由ros1基因的32号外显子sdc4基因的4号外显子融合形成，或者，由ros1基因的34号外显子与sdc4基因的4号外显子融合形成；第四十八正向引物，第四十八正向引物的核苷酸序列如seqidno.66所示，第四十八正向引物用于检测所述ros1基因的34号外显子与ezr基因的10号外显子融合形成的ezr-ros1融合基因；其中，ezrin基因(即ezr基因)，其编码的ezrin蛋白是erm(ezrin-radixin-moesin)家族成员之一，主要参与细胞骨架与胞膜之间的连接；第四十九正向引物，第四十九正向引物的核苷酸序列如seqidno.67所示，第四十九正向引物用于检测ros1基因的35号外显子与lrig3基因的16号外显子融合形成的lrig3-ros1融合基因；其中，lrig3基因编码的富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样多肽3(leucine-richrepeatsandimmunoglobulin-likedo-mainprotein3，lrig3)，是一种细胞因子，属于lrigs家族一员；第五十正向引物，第五十正向引物的核苷酸序列如seqidno.68所示，第五十正向引物用于检测ros1基因的35号外显子与tpm3基因的8号外显子融合形成的tpm3-ros1融合基因；其中，原肌球蛋白3基因(tropomyosin3，tpm3)是肌肉收缩过程中重要的蛋白调节基因之一，能够影响并调控肌动球蛋白之间的相互作用；第五十一正向引物，第五十一正向引物的核苷酸序列如seqidno.69所示，第五十一正向引物用于检测ros1基因的35号外显子与gopc基因的8号外显子融合形成的gopc-ros1融合基因；其中，gopc基因编码的gopc蛋白(golgi-associatedpdzandcoiled-coilmotif-caontainingprotein)，是一种包含pdz结构域的蛋白质，具有重要的生物学功能；第五十二正向引物，第五十二正向引物的核苷酸序列如seqidno.70所示，第五十二正向引物用于检测ros1基因的36号外显子与gopc基因的4号外显子融合形成的gopc-ros1融合基因。在其中一实施方式中，ros1融合检测剂的4条反向引物如下：第十一反向引物，第十一反向引物的核苷酸序列如seqidno.71所示，第十反向引物用于检测ros1基因的32号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、cd74基因的6号外显子、sdc4基因的2号外显子或sdc4基因的4号外显子融合形成的ros1融合基因；第十二反向引物，第十二反向引物的核苷酸序列如seqidno72所示，第十二反向引物用于检测ros1基因的34号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、ezr基因的10号外显子、sdc4基因的4号或cd74基因的6号外显子形成的ros1融合基因；第十三反向引物，第十三反向引物的核苷酸序列如seqidno.73所示，第十三反向引物用于检测ros1基因的35号外显子与lrig3基因的16号外显子、tpm3基因的8号外显子或gopc基因的8号外显子形成的ros1融合基因；第十四反向引物，第十四反向引物的核苷酸序列如seqidno.74所示，第十四反向引物用于检测ros1基因的36号外显子与gopc基因的4号外显子形成的ros1融合基因。在其中一实施方式中，ros1融合检测剂的4条探针如下：第九探针，第九探针的核苷酸序列如seqidno.75所示，第九探针用于检测ros1基因的32号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、cd74基因的6号外显子、sdc4基因的2号外显子或sdc4基因的4号外显子融合形成的ros1融合基因；第十探针，第十探针的核苷酸序列如seqidno.76所示，第十探针用于检测ros1基因的34号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、ezr基因的10号外显子、sdc4基因的4号或cd74基因的6号外显子形成的ros1融合基因；第十一探针，第十一探针的核苷酸序列如seqidno.77所示，第十一探针用于检测ros1基因的35号外显子与lrig3基因的16号外显子、tpm3基因的8号外显子或gopc基因的8号外显子形成的ros1融合基因；第十二探针，第十二探针的核苷酸序列如seqidno.78所示，第十二探针用于检测ros1基因的36号外显子与gopc基因的4号外显子形成的ros1融合基因。在其中一个实施方式中，第九探针的3'端结合荧光猝灭基团，第九探针的5'结合荧光基团，用于标记ros1基因的32号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、cd74基因的6号外显子、sdc4基因的2号外显子或sdc4基因的4号外显子融合形成的ros1融合基因，进而特异性地、定量地检测该eml4-alk融合基因的量。具体地，第九探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第九探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，第十探针的3'端结合荧光猝灭基团，第十探针的5'结合荧光基团，用于标记ros1基因的34号外显子与slc34a2基因的4号外显子、slc34a2基因的14号外显子del2046、ezr基因的10号外显子、sdc4基因的4号或cd74基因的6号外显子形成的ros1融合基因，进而特异性地、定量地检测该eml4-alk融合基因的量。具体地，第十探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第十探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，第十一探针的3'端结合荧光猝灭基团，第十一探针的5'结合荧光基团，用于标记ros1基因的35号外显子与lrig3基因的16号外显子、tpm3基因的8号外显子或gopc基因的8号外显子形成的ros1融合基因，进而特异性地、定量地检测该eml4-alk融合基因的量。具体地，第十一探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第十一探针的5'结合的荧光基团fam。在其中一个实施方式中，第十二探针的3'端结合荧光猝灭基团，第十二探针的5'结合荧光基团，用于标记ros1基因的36号外显子与gopc基因的4号外显子形成的ros1融合基因，进而特异性地、定量地检测该eml4-alk融合基因的量。具体地，第十二探针的3'端结合的荧光猝灭基团为bhq，第十二探针的5'结合的荧光基团fam。上述ros1融合检测剂包括10条正向引物、4条反向引物及4条探针，这些引物和探针均基于arms技术，能够一次性检测ros1基因与多种基因融合形成的多种基因融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。一种肿瘤驱动基因融合检测试剂盒，包括：上述实施方式的alk融合检测剂和上述实施方式的ros1融合检测剂。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因融合检测试剂盒还包括用于提取检测样品的rna的rna提取试剂和将提取的rna逆转录成dna的逆转录试剂。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因融合检测试剂盒还包括能够检测内参基因的试剂。在其中一个实施方式中，能够检测内参基因的试剂包括内参基因pcr扩增正向引物、内参基因pcr扩增反向引物和内参基因pcr扩增的探针。通过检测内参基因的试剂检测内参基因的含量，以此为基准计算alk基因及ros1基因发生各种融合类型形成的融合基因的含量，从而校正融合基因的检测过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。具体地，内参基因选自u6、gapdh及β-actin中的至少一种。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因融合检测试剂盒还包括mg2+、dntps、taq酶、ung酶、逆转录酶及10×buffer。当然，需要说明的是，肿瘤驱动基因融合检测试剂盒还可以包括其他pcr反应常用的试剂和酶。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因融合检测试剂盒的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、15u～40u的逆转录酶、2μl的检测样本rna、正向引物、反向引物及探针。其中，上述反应体系中单条正向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条反向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条探针的浓度为0.1μm～0.5μm。上述肿瘤驱动基因融合检测试剂盒包括alk融合检测剂及ros1融合检测剂，能够检测akl基因、ros1基因与其他基因融合形成的多种融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。当然，需要说明的是，alk融合检测剂及ros1融合检测剂也可以分别单独应用于相应的基因突变检测试剂盒中。一实施方式的肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒，其特征在于，包括：上述her2基因突变检测剂、第一实施方式的met基因突变检测剂及第二实施方式的met基因突变检测剂中的至少一种、上述alk融合检测剂及上述ros1融合检测剂。当然，需要说明的是，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒还可以包括上述braf基因突变检测剂及kras基因突变检测剂中的至少一种。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒还包括用于提取检测样品的dna的dna提取试剂、提取检测样品的rna的rna提取试剂和将提取的rna逆转录成dna的逆转录试剂。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒还包括能够检测内参基因的试剂。在其中一个实施方式中，能够检测内参基因的试剂包括内参基因pcr扩增正向引物、内参基因pcr扩增反向引物和内参基因pcr扩增的探针。通过检测内参基因的试剂检测内参基因的含量，以此为基准计算上述各种突变基因及融合基因的含量，从而校正突变基因和融合基因的检测过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。具体地，内参基因选自u6、gapdh及β-actin中的至少一种。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒还包括mg2+、dntps、taq酶、ung酶及10×buffer。当然，需要说明的是，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒还可以包括其他pcr反应常用的试剂和酶。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒中肿瘤驱动基因突变的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、2μl的待测样本dna、正向引物、反向引物及探针。其中，上述反应体系中单条正向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条反向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条探针的浓度为0.1μm～0.5μm。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒中肿瘤驱动基因融合的实时荧光定量pcr反应体系为：1×buffer、200μm～500μm的mg2+、10μm～30μm的dntps、1u～3u的taq酶、0.1u～0.5u的ung酶、15u～40u的逆转录酶、2μl的待测样本rna、正向引物、反向引物及探针。其中，上述反应体系中单条正向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条反向引物的浓度为0.2μm～1.0μm，单条探针的浓度为0.1μm～0.5μm。上述肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒不仅能够检测her2基因、met基因、kras基因及braf基因的多种突变类型，也能够检测akl基因、ros1基因与其他基因融合形成的多种融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，同时，通过上述联合检测试剂盒检测突变基因和融合基因时，可以使用同种缓冲体系，使用起来更加简单方便，能够满足临床快速检测的时间需求。上述实施方式的肿瘤驱动基因突变检测试剂盒、上述实施方式的肿瘤驱动基因融合检测试剂盒或上述实施方式的肿瘤驱动基因变异联合检测试剂盒在肿瘤驱动基因变异检测装置中的应用。在其中一个实施方式中，肿瘤驱动基因变异检测装置为基因芯片。上述肿瘤驱动基因变异检测装置不仅能够检测her2基因、met基因、kras基因及braf基因的多种突变类型，也能够检测akl基因、ros1基因与其他基因融合形成的多种融合突变体，灵敏度高，检测速度快，操作简单，能够满足临床快速检测的时间需求。以下为具体实施例部分。以下实施例中，如无特别说明，未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。实施例1基于arms技术结合mgb探针，设计并合成特异性引物和探针，根据检测基因和突变位点的种类，选择对应的引物和探针。其中，肿瘤驱动基因突变的引物和探针详见表1，肿瘤驱动基因融合的引物和探针详见表2。表1肿瘤驱动基因突变的引物和探针其中，表2中的e13；a20表示elm4的第13号外显子与alk的第20号外显子融合，其他也是类似的含义。经验证，表1～2中的引物的扩增产物的长度均为100bp～120bp，且tm值均在60℃～65℃，满足实际需求。实施例2(1)按照allprepdna/rna/mirnauniversalkit(qiagencat.no.80224)的使用说明提取野生型组织样本的dna，得到野生型组织样本dna，并将稀释至5ng/μl。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)分别构建her2基因突变的阳性质粒、met-a的阳性质粒、met-b的阳性质粒、kras基因突变的阳性质粒及braf基因突变的阳性质粒，按照质粒提取试剂盒(b518191，上海生工)使用说明提取各阳性质粒中的dna，得到her2突变基因dna、met-a基因突变dna、met-b基因突变dna、kras基因突变dna及braf基因突变dna，其中，her2突变基因dna含有实施例1中her2基因的c.2339_2340insgggctcccc突变类型，met-a基因突变dna含有实施例1中met基因的c.3028+1g>t突变类型，met-b基因突变dna含有实施例1中met基因的c.2888-5_2944del62突变类型，kras基因突变dna含有实施例1中kras基因的c.35g>a突变类型，braf基因突变dna含有实施例1中braf基因的c.1799t>a突变类型。用qbuit检测各突变基因dna的质量和浓度。用野生型组织样本dna分别稀释用各突变基因dna，得到系列稀释浓度为0.5％和1％的各突变基因dna。(3)使用表1中的相应的引物和探针并采用实时荧光定量pcr检测稀释后的野生型组织样本dna、稀释后各突变基因dna。其中，每个稀释后的突变基因dna均取两份，并将两份每个稀释后的突变基因dna同时进行测定，即两个重复样。采用实时荧光定量pcr检测扩增野生型组织样本中的内参基因β-acting、野生型组织样本dna、各阳性质粒中的内参基因β-acting及稀释后的各突变基因dna的ct值，其中，各阳性质粒由fam信号指示，野生型组织样本由hex信号指示。定量的反应体系如下表3所示。表3：pcr反应体系试剂体系的总浓度模板dna2μl10×buffer1×buffermg2+350μmdntps20μmtaq酶2uung酶0.35u正向引物0.6μm反向引物0.6μm探针0.3μm补纯化水至25μl其中，选用表1所示的相应的正向引物、反向引物及探针，且每条正向引物的终浓度均为0.2μm，每条反向引物的终浓度均为0.2μm，每条探针的终浓度均为0.1μm。例如对发生2263_2264tt>cc突变的kras基因进行pcr检测时，第一正向引物的终浓度为0.2μm，第一反向引物的终浓度为0.2μm，第一探针的终浓度为0.1μm。反应条件：ung酶于50℃消化2分钟，1个循环；95℃预变性2分钟，1个循环；95℃变性10秒，60℃退火及延伸40秒，40个循环。在60℃时收集fam荧光信号和hex荧光信号。不同浓度的各突变基因的扩增曲线结果详见图1-1～图1-5。her2、met-a、met-b、kras及braf的扩增曲线分别为图1-1～图1-5。经检测，阳性质粒和野生型样本组织中内参基因β-acting的ct均在23～27之间，平均为25，两者差异不显著。从图1-1可以看出，不同浓度的her2突变基因的扩增曲线共有两条，分别为浓度为1％的her2突变基因的扩增曲线及浓度为0.5％的her2突变基因的扩增曲线，其中，两份浓度为0.5％的her2突变基因的扩增曲线重叠，两份浓度为1％的her2突变基因的扩增曲线重叠。从图1-2～图1-5可以看出，不同浓度的met-a突变基因的扩增曲线、不同浓度的met-b突变基因的扩增曲线、不同浓度的kras突变基因的扩增曲线及不同浓度的braf突变基因的扩增曲线均为四条，均分别为两份浓度为1％的相应突变基因的扩增曲线及两份为1％的相应突变基因的扩增曲线。从图1-1～图1-5可以看出，将上述的各突变基因dna稀释至1％和0.5％均仍能够检出，说明对各突变基因的检测的灵敏度较高，灵敏度可达0.5％。实施例3(1)按照实施例2的步骤(1)的操作，得到浓度为5ng/μl的野生型组织样本dna。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)构建her2基因突变的阳性质粒，并提取阳性质粒中的dna，得到her2突变基因dna，其中，该her2突变基因dna含有实施例1中her2基因的14种突变类型。用qbuit检测her2突变基因dna的质量和浓度，其中，每种her2突变基因dna的浓度为5ng/μl。(3)采用表1中相应的21条正向引物、3条反向引物和3条探针，并按照实施例2的操作，对上述her2突变基因dna进行定量分析，即为her2实验组。将第一正向引物替换成碱基序列为ccagtggccatcaaagtgaa的正向引物，其他不变，并对上述her2突变基因dna进行定量分析，即为her2对照组。各组的扩增曲线分别详见图2。her2实验组、her2对照组的扩增曲线分别为图2-1及图2-2。从图2-1可以看出，her2实验组扩增出21条s形的扩增曲线，说明表1中的21条正向引物、3条反向引物和3条探针之间不存在相互干扰导致不检出的问题，能够一次性检测表1中her2基因的所有突变类型，且检测时间为70分钟。从图2-2可以看出，her2对照组的s形的扩增曲线共有20条，分别针对如下突变类型：del2262_2269inscccga、del2266_2268、2324_2325insatacgtgatggc、2325_2327del2326ginsttgt、2325_2327del2326ginsatat、2326_2327inst(c/g)t、2328_2329insgtgtgt、2339_2340inscggctcgcc、c.2339_2340insgggctcccc、c.2339_2340instggctcccc、2325_2326instacgtgatggct、2322_2323insgcatacgtgatg、2340_2341insggctcccca、2326_2327insttt、2326g>c或2326g>a或2326g>t、2329g>a或2329g>t、2327g>t、2380g>a、del2494_2649及2677t>c，如图2-2中的箭头所示，her2对照组中针对位点2263_2264tt>cc的扩增曲线类似于直线，说明碱基序列为ccagtggccatcaaagtgaa的正向引物不能检出2263_2264tt>cc的突变位点，进一步说明表1中针对her2基因突变的各条引物和探针不存在相互影响。实施例4(1)按照实施例2的步骤(1)的操作，得到浓度为5ng/μl的野生型组织样本dna。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)构建met-a基因突变的阳性质粒，并提取阳性质粒中的dna，得到met突变基因dna，其中，该met突变基因dna含有实施例1中met-a基因的9种突变类型。用qbuit检测met突变基因dna的质量和浓度，其中，每种met突变基因dna的浓度为5ng/μl。(3)采用表1中相应的9条正向引物、1条反向引物和1条探针，并按照实施例2的操作，对上述met突变基因dna进行定量分析，即为met-a实验组。并将第二十三正向引物替换成碱基序列为tgtagactaccgagctacttttccagaagc的正向引物，其他不变，并对上述met突变基因dna进行定量分析，即为met-a对照组。各组的扩增曲线分别详见图3。met-a实验组、met-a对照组的扩增曲线分别为图3-1及图3-2。由图3-1可以看出，met-a实验组扩增出9条s形的扩增曲线，说明表1中的9条正向引物、1条反向引物和1条探针之间不存在相互干扰导致不检出的问题，能够一次性检测表1中met-a基因的所有突变类型，且检测时间为70分钟。从图3-2可以看出，met-a对照组的s形的扩增曲线共有8条，分别针对如下突变类型：c.3028g>c或c.3028g>a、c.3024_3028delagaaggtatatt、c.3001_3021delgtagactaccgagctactttt、c.3028_3028+1delgg、c.3025_3028+2delgaaggt、c.3028_3028+15delggtatatttcagttta、c.3016a>c及c.3017_3028delcttttccagaaggta，由图3-2中箭头所示，met-a对照组中针对c.3028+1g>t位点的扩增曲线类似于直线，说明碱基序列为tgtagactaccgagctacttttccagaagc的正向引物不能检出c.3028+1g>t的突变位点，进一步说明表1中针对met-a基因突变的各条引物和探针不存在相互影响。实施例5(1)按照实施例2的步骤(1)的操作，得到浓度为5ng/μl的野生型组织样本dna，即为阴性对照。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)提取确诊为her2基因突变(c.2339_2340inscggctcgcc)的临床样本、met-a基因突变(c.3028+1g>t)的临床样本、met-b基因突变(c.2888-5_2944del62)的临床样本、kras基因突变(c.35g>a)的临床样本及braf基因突变(c.1799t>a)的临床样本的dna，用qbuit检测met突变基因dna的质量和浓度，并用野生型组织样本的dna将各临床样本的dna的浓度调整至5ng/μl。其中，各临床样本均为新鲜肿瘤组织。(3)采用表1中相应的引物和探针，并按照实施例2的操作，对各临床样本(即阳性)的dna进行定量分析。上述含有突变基因的临床样本的扩增曲线详见图4-1～图4-5。her2、met-a、met-b、kras及braf的扩增曲线分别为图4-1～图4-5所示。由图4-1～图4-5可以看出，各临床样本的扩增曲线均为s型的扩增曲线，说明表1中的引物和探针能够检测相应的临床样本的突变类型。实施例6(1)按照allprepdna/rna/mirnauniversalkit(qiagencat.no.80224)的使用说明提取野生型组织样本的rna，得到野生型组织样本rna，并将稀释至100ng/μl。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)分别构建elm4-alk融合基因的阳性rna包被颗粒及slc34a2-ros1融合基因的阳性rna包被颗粒，按照核酸提取试剂盒(allprepdna/rna/mirnauniversalkit(qiagencat.no.80224))使用说明提取rna，得到elm4-alk融合基因rna、slc34a2-ros1融合基因rna，其中，elm4-alk融合基因rna含有实施例1中e13；a20突变类型，slc34a2-ros1融合基因含有实施例1中sl4；r34突变类型。用qbuit检测各融合基因rna的质量和浓度。用野生型组织样本rna稀释各融合基因rna，得到0.5％、1％、5％和10％的各融合基因rna。(3)使用表2中的相应的引物和探针并采用实时荧光定量pcr检测稀释后的野生型组织样本rna、稀释后各融合基因rna进行定量分析。其中，每个稀释后的融合基因rna均取两份，并将两份每个稀释后的融合基因rna同时进行测定，即两个重复样。采用实时荧光定量pcr检测扩增野生型组织样本中的内参基因β-acting、野生型组织样本rna、各样本中的内参基因β-acting及稀释后的各突变基因rna的ct值，其中，各突变位点由fam信号指示，内参基因由hex信号指示。定量的反应体系如下表4所示。表4：pcr反应体系其中，选用表2所示的相应的正向引物、反向引物及探针，且每条正向引物的终浓度均为0.2μm，每条反向引物的终浓度均为0.2μm，每条探针的终浓度均为0.1μm。例如对ezr-ros1融合基因进行pcr检测时，第三十八正向引物的终浓度为0.2μm、第十一反向引物的终浓度为0.2μm，第十探针的反向引物的终浓度为0.1μm。反应条件：50℃逆转录25分钟，1个循环；95℃预变性2分钟，1个循环；95℃变性10秒，60℃退火及延伸40秒，40个循环。在60℃时收集fam荧光信号和hex荧光信号。不同浓度的各融合基因的扩增曲线结果详见图5-1和图5-2。alk融合基因及ros1融合基因的扩增曲线分别为图5-1和图5-2。经检测，各阳性样本和野生型样本组织中内参基因β-acting的ct均在24～28之间，平均为26，两者差异不显著。从图5-1可以看出，不同浓度的alk融合基因rna的扩增曲线共有四条，分别为两份浓度为0.5％的alk融合基因rna的扩增曲线及两份浓度为1％的alk融合基因rna的扩增曲线。从图5-2可以看出，不同浓度的ros1融合基因rna的扩增曲线共有3条，分别为两份浓度为0.5％的ros1融合基因rna的扩增曲线及两份浓度为1％的ros1融合基因rna的扩增曲线，其中，图5-2中两份浓度为0.5％的ros1融合基因dna的扩增曲线曲线重合。从图5-1和图5-2可以看出，将上述的各融合基因rna稀释至1％和0.5％均仍能够检出，说明对各融合基因的检测的灵敏度较高，灵敏度可达0.5％。实施例7(1)按照实施例6的步骤(1)的方法得到浓度为100ng/μl的野生型组织样本的rna。其中，野生型组织样本为阴性样本。(2)构建elm4-alk融合基因的阳性rna包被颗粒，并提取rna，得到elm4-alk融合基因rna，其中，该elm4-alk融合基因rna含有实施例1中9种elm4-alk融合基因。用qbuit检测elm4-alk融合基因rna的质量和浓度，其中，每种elm4-alk融合基因的浓度为100ng/μl。(3)采用表2中相应的9条正向引物、1条反向引物和1条探针，并按照实施例6的操作，对上述elm4-alk融合基因rna进行定量分析，即为alk融合基因实验组。并将第三十五正向引物替换成碱基序列为cataaagatgtcatcatcaaccaagtgttgg的正向引物，其他不变，并对上述elm4-alk融合基因rna进行定量分析，即为alk融合基因对照组。各组的扩增曲线详见图6。alk实验组、alk对照组的扩增曲线分别为图6-1及图6-2。由图6-1可以看出，elm4-alk实验组扩增出9条s形的扩增曲线，说明表2中的9条正向引物、1条反向引物和1条探针之间不存在相互干扰导致不检出的问题，能够一次性检测9种elm4-alk融合基因，且检测时间为90分钟。由图6-2可以看出，elm4-alk对照组共有8条的s形扩增曲线，分别针对如下elm4-alk融合基因：elm4-alk(v1)、eml4-alk(v3b)、eml4-alk(v2)、eml4-alk(v4)、eml4-alk(v7)、eml4-alk(v5a)、eml4-alk(v5b)及eml4-alk(v6)，由图6-2的箭头所示，elm4-alk对照组中针对elm4-alk(v3a)融合基因的扩增曲线类似于直线，说明碱基序列为cataaagatgtcatcatcaaccaagtgttgg的正向引物不能检出elm4-alk(v3a)融合基因，进一步说明表2中针对elm4-alk融合基因的各条引物和探针不存在相互影响。实施例8(1)按照实施例6的步骤(1)的方法得到浓度为100ng/μl的野生型组织样本的rna。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)构建ros1融合基因的阳性rna包被颗粒，并提rna，得到ros1融合基因rna，其中，该ros1融合基因rna含有实施例1中所有ros1融合基因。用qbuit检测ros1融合基因rna的质量和浓度，其中，每种ros1融合基因rna的浓度为100ng/μl。(3)采用表2中相应的10条正向引物、4条反向引物和4条探针，并按照实施例6的操作，对上述ros1融合基因rna进行定量分析，即为ros1实验组。并将第四十三正向引物替换成碱基序列为tgtgctccctggatattcttagtacgc的正向引物，其他不变，并对上述ros1融合基因rna进行定量分析，即为ros1对照组。各组的扩增曲线详见图7。ros1实验组、ros1对照组的扩增曲线分别为图7-1及图7-2。由图7-1可以看出，ros1实验组扩增出10条s形的扩增曲线，说明表2中的10条正向引物、4条反向引物和4条探针之间不存在相互干扰导致不检出的问题，能够一次性检测实施例1中所有ros1融合基因，且检测时间为90分钟。由图7-2可以看出，ros1对照组共扩增出9条s形扩增曲线，能够检测包括如下融合类型：sl14；r32、sl14；r34、、c6；r32、c6；r34、s2；r32、s4；r32、s4；r34、e10；r34、l16；r35、t8；r35、go8；r35及go4；r36，由图7-2中箭头所示，ros1对照组中针对slv34a2-ros1融合基因中sl4；r32或sl4；r34的融合类型的扩增曲线类似于直线，说明碱基序列为tgtgctccctggatattcttagtacgc的正向引物不能检出slv34a2-ros1融合基因中sl4；r32或sl4；r34的融合类型，进一步说明表2中针对ros1融合基因的各条引物和探针不存在相互影响。实施例9(1)按照实施例6的步骤(1)的方法得到浓度为100ng/μl的野生型组织样本的rna。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)提取确诊为elm2-alk融合基因融合类型为e13；a20临床样本的rna、ros1融合基因融合类型为sl4；r32临床样本的rna，用qbuit检测alk融合和ros1融合基因临床样本rna的质量和浓度，其中，并用野生型组织样本的rna分别将alk融合和ros1融合基因临床样本的rna的浓度调整至100ng/μl。其中，各临床样本均为新鲜组织。(3)采用表2中相应的引物和探针，并按照实施例6的操作，对临床样本的rna进行定量分析。上述含有融合基因的临床样本的扩增曲线详见图8。其中，elm2-alk融合基因临床样本、ros1融合基因临床样本的扩增曲线分别为图8-1、图8-2。由图8-1和图8-2可以看出，各临床样本的扩增曲线均为s型的扩增曲线，说明表2中的引物和探针能够检测上述相应地临床样本的融合类型。实施例10(1)按照实施例2的步骤(1)及实施例6的步骤(1)的方法得到浓度为5ng/μl的野生型组织样本的dna及rna。其中，野生型组织样本为正常组织。(2)提取未知临床样本的dna及rna，用qbuit检测该临床样本dna的质量和浓度，其中，并用野生型组织样本的dna将该临床样本dna的浓度调整至5ng/μl，并用野生型组织样本的rna将该临床样本rna的浓度调整至100ng/μl。其中，未知临床样本为新鲜肿瘤组织。(3)分别采用表1中her的所有引物和探针、met-a的所有引物和探针、met-b的所有引物和探针、kras的所有引物和探针、braf的的所有引物和探针，并按照实施例2的操作，对上述未知临床样本dna进行分析。分别采用表2中alk的所有引物和探针及ros1的所有引物和探针，并按照实施例6的操作，对上述未知临床样本rna进行分析。测定结果详见图9。(4)采用直接测序法检测上述未知临床样本dna、上述未知临床样本rna进行分析。测定结果详见图10。由图9可以看出，alk融合的引物和探针对上述未知临床样品进行检测时，能够得到s型的扩增曲线，说明上述未知临床样品含有alk融合基因的变异。同时，由图10可以看出，经直接测序法验证，上述未知临床样本具有如图10中a-a'线所示的融合处(即“融合处”图标所指的“ca”与“ct”之间)，在该融合处之前(即a-a'线之前)的核苷酸序列表示alkexon20，在该融合处之后(即a-a'线之后)的核苷酸序列表示eml4exon6b，因此上述未知临床样本的融合类型为eml4-alk(v3b)，说明表1和表2中的各条引物和探针能够准确检测未知临床样品的变异。实施例11采用表1的各引物和探针并按照实施例2的操作分别对含有表1中her2基因突变类型的临床病例、含有表1中met-a基因突变类型的临床病例、含有表1中met-b基因突变类型的临床病例、含有表1中kras基因突变类型的临床病例及含有表1中braf基因突变类型的临床病例进行检测，上述五组临床病例均为50例。采用表2中的各引物和探针并按照实施例6的操作分别对含有表2中alk融合基因突变类型的临床病例及含有表2中ros1融合基因突变类型的临床病例进行检测，并计算检出率，其中，检出率＝相应变异类型的检测数/50*100，％)。检测结果详见表5。表5对50例的相应临床病例进行基因变异类型的检测变异类型her2met-amet-bkrasbrafalkros1检出率(％)95.35％94.12％94.76％96.16％94.54％92.24％93.54％从表5可以看出，表1和表2中的各引物和探针对相应临床病例的检测率均在92％以上，检出率较高，能够有效地指导肿瘤患者的治疗。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。序列表<110>常州桐树生物科技有限公司<120>肿瘤驱动基因变异的检测剂、检测试剂盒及其应用<160>78<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>20<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1ccagtggccatcaaagtgcc20<210>2<211>19<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>2tggccatcaaagtgcccga19<210>3<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>3ccagtggccatcaaagtgttgg22<210>4<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>4cgtgatggcatacgtgatggc21<210>5<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>5acgaagcatacgtgatggctttgt24<210>6<211>30<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>6tcttagacgaagcatacgtgatggctatat30<210>7<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>7cgaagcatacgtgatggctgts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