α2A肾上腺素能受体拮抗剂及其应用的制作方法

本发明属于小分子药物领域，尤其是涉及1种α2a肾上腺素能受体拮抗剂及其应用。

背景技术：

脓毒症是一种感染后发生的难以控制的全身系统性炎症反应，为icu中重症患者致死的主要原因。α2a肾上腺素能受体brl可改善clp大鼠生存和心功能，明显降低clp大鼠心肌tnf-α含量，抑制心肌中性粒细胞浸润，降低心肌mpo的表达，并减少p38、jnk、ikbα的磷酸化与心肌细胞凋亡。由此可知阻断α2a肾上腺素能受体一方面通过促进心脏交感神经释放ne，激活a1-ar，由此减少心肌tnf-α、抑制细胞凋亡和ctni磷酸化，增强心肌收缩力；另一方面通过阻断ne与心脏血管内皮α2a肾上腺素能受体结合，减轻心肌中性粒细胞浸润和心肌损伤，从而达到治疗的作用。据研究表明，多数α2a肾上腺素能受体拮抗剂由于能促进胰岛素释放，所以有降低血糖浓度的作用。

因此α2a肾上腺素能受体拮抗剂的发现对于因α2a肾上腺素能受体高表达或活性过高所导致的相关疾病的治疗具有重大意义。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明旨在提出1种α2a肾上腺素能受体拮抗剂及其应用。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供结构式(i)表示的化合物及其药学上可接受的盐。

结构式(i)表示的化合物及其药学上可接受的盐：

常用名为荷叶碱，英文名为nuciferine，cas号为475-83-2，其分子式为c19h21no2，分子量为295.375。

上述化合物及其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防α2a肾上腺素能受体高表达或活性过高导致的相关疾病或病症的药物的用途。

上述化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗抗脓毒症药物和降低血糖浓度的用途。

一种药物组合物，包括上述化合物及其药学上可接受的盐及其药学上可接受的赋形剂。

所述药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。具体如糖浆、阿拉伯胶和淀粉等。该药物组合物可以通过静脉、口服、舌下、经肌肉或皮下、皮肤黏膜途径给药。

所述药物组合物的制剂形式为液体制剂或固体制剂。具体如片剂、胶囊剂和注射剂等。各剂型均可以以药学常规方法制备而成。

一种复方药物，包含上述化合物及其药学上可接受的盐以及能够与其联用的药物。

相对于现有技术，本发明所述的1种α2a肾上腺素能受体拮抗剂及其应用具有以下优势：

本发明所述的1种化合物中有两个化合物的α2a肾上腺素能受体功能实验(adrenergicalpha-2areceptortargetedpharmacologicalscreeningbyfliprassay)的ic50在微摩尔级别，化合物475-83-2的ic50为17.89μm。

附图说明

图1为功能实验中本发明化合物475-83-2对α2a肾上腺素能受体的抑制率曲线。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

本发明涉及化合物475-83-2购自成都德斯特生物技术有限公司。

下面结合实施例来详细说明本发明。

实施例

实验步骤

1、细胞培养于dmem/f12培养基中，培养基中含有：10％胎牛血清，1×青链霉素混合液及0.6mg/ml潮霉素b(37℃，5％co2)

2、于实验前一天将细胞消化下来，使用细胞计数仪计算细胞数量。用于实验的细胞需确保其活率＞85％。

3、将细胞以12000个细胞每孔的密度种在细胞培养板中，每孔含有10μl铺板用培养。铺板培养基为dmem/f12培养基中含有1％胎牛血清及1×青链霉素混合液。将细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养(37℃，5％co2)。

4、按照fluo-4direct^tm试剂盒说明书配置2×染料：

a.每瓶染料中加入10ml反应缓冲液(1×hbss加入终浓度为20mm的hepes，ph7.4)；

b.每瓶中加入500mm的丙磺舒储液100μl；

c.使用振荡器震荡1～2分钟。

5、向细胞板中加入10μl每孔的2×染料，将细胞板置于37℃孵育60分钟。

6、使用反应缓冲液配置3×化合物溶液：

a.向化合物稀释板的第1列及3-12列加入40μl每孔的dmso；

b.将3mm的brimonidine，1mm的rauwolscinehydrochloride及30mm的待测化合物加入到稀释板的第2列，每孔加入的化合物体积为60μl；

c.将化合物从第2列开始进行三倍梯度稀释，稀释到第12列；

d.将化合物按照以下步骤用echo550转移到新的化合物板中：

i.转移60nl每孔参比化合物到化合物板中；

ii.转移67.5nl每孔待测化合物到化合物板中(化合物第一个浓度点转移200nl每孔的30mm化合物储液)；

iii.转移67.5nl每孔的dmso作为对照。

e.向化合物板中加入20μl每孔的反应缓冲液；

f.将化合物板放于震板仪上震荡2分钟得到3×化合物溶液。

7、将细胞板及化合物板放于flipr仪器中，使用仪器从化合物板中转移10μl每孔的化合物溶液到细胞板中。

8、转移同时以1秒的间隔读取160秒，获得激动剂模式的数据。将细胞板置于37℃避光孵育30分钟。

9、利用激动剂模式的数据计算参比激动剂的ec80。

10、制备4倍浓度参比激动剂的ec80溶液，以20μl每孔的体积将4×ec80溶液加入到新的化合物板中。

11、在加入了化合物的细胞板避光孵育30分钟后，将细胞板和化合物板一同放入flipr仪器中。

12、使用flipr仪器转移10μl4×ec80溶液到细胞板中，转移同时以1秒的间隔读取160秒，得到抑制剂模式的数据。

数据分析

1、在“最大值-最小值”统计模式下导出0-160秒的相对荧光单位(rfu)，以确定钙信号对抑制剂的响应。

2、在抑制剂模式中，利用以下公式计算得出化合物的百分比抑制率，之后利用百分比抑制率及化合物浓度采用xlfit拟合hill方程计算得出化合物的ic50。

％inhibition＝1-(rfucompound-rfuvehicle)/(rfupositive-rfuvehicle)×100％

通过本实施例，发现了1种α2a肾上腺素能受体拮抗剂，化合物475-83-2的体外抑制活性为17.89μm，。