专利名称：：α<sub>1</sub>-肾上腺素受体拮抗剂及其制备方法和医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类a-肾上腺素受体拮抗剂，本发明还公开了其制备方法和医药用途。
背景技术：
：a「肾上腺素受体(a广adrenoceptor简称a广AR)属于鸟苷酸结合蛋白(G蛋白)偶联(GPCRs)膜表面受体家族，激动后通过激活G蛋白引发信号转导过程。c^-AR存在多种亚型，目前可以确定ai-AR至少有a1A，a11和a10三种亚型。三种a广AR亚型拥有相似的结构特性，都是单一的多肽链，每种亚型都具有七个跨膜区域(TMD),三种亚型的TMD之间具有65%-75%同源性。on-AR广泛分布在多种组织器官中，在中枢神经系统中3种亚型均有高度表达；在心肌中以OHA-AR为主；输精管和其它平滑肌组织以a1A-AR和a^AR为主(也存在a1B-AR信使和蛋白)；人和鼠的肝脏分别以a,B-AR和a,厂AR为主。高血压是世间范围的多发病，aAR拮抗剂是WHO和国际高血压联盟1999年"高血压治疗指南"推荐的6大类一线抗高血压药物之一[']，它通过阻断动脉平滑肌细胞的a,-AR，产生血管扩张效应。目前用于降压治疗的a,-AR拮抗剂有哌唑嗪、特拉唑嗪、乌拉地尔等。该类药物无反射性交感神经兴奋性增高，因此对各种心血管应激的反应性降低，心排血量不变或轻度升高，心血管的反射-调控机制维持于良好状态。由于a,-AR拮抗剂对血脂、糖代谢和改善左心室肥厚等方面的有益影响，因此对高血压的治疗在某些方面仍具有一定的优势。一般认为参与全身阻力血管和血压调节的功能性a,-AR属于am亚型。由于a1B-AR亚型还介导心肌细胞收縮和生长以及远曲肾小管的Na+重吸收，并通过与{3-AR的交互作用加强e-AR介导的心肌正性变力效应，因此，研制a1B-AR亚型选择性拮抗剂作为新的抗高血压药物应具有一定的优越性和临床应用前景。众多的构效关系研究「3'^提出了不同的a1B-AR亚型选择性模型，但是还没有得到对亚型选择性具有较好的预测能力的模型，迄今为止所发现的a,B-AR亚型选择性化合物还比较少，也没有a!B-AR亚型选择性的药物上市。临床上用于治疗高血压的哌唑嗪、特拉唑嗪等h-AR拮抗剂是非亚型选择性的。良性前列腺增生(BenignProstaticHyperplasia,以下简称BPH)是常见的老年男性泌尿系统疾病之一。BPH是前列腺的尿道周围区细胞的良性腺瘤性增生，腺体的进行性肿大使前列腺尿道狭窄，引起膀胱尿液流出梗塞造成排尿障碍，BPH是老年男性尿急、尿频及排尿困难的主要原因。ai-AR拮抗剂能够放松前列腺和下尿道的平滑肌，现已成为临床上广泛应用的治疗药物。根据不同亚型的组织分布，已经证实，aM-AR的选择性拮抗剂对良性前列腺增生治疗非常有效，而对血压影响不大。因此a1A-AR亚型选择性拮抗剂(如Tamsulosin)是临床上治疗BPH的主要药物。申请人在先前的研究中发明了l-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐(简称DDPH)，是一个较强的a「AR拮抗剂，兼有弱的钙拮抗作用。DDPHDDPH是正在研制的国家一类抗高血压新药。经大量的药理和毒理试验表明DDPH降压效果明显，缓和，毒副作用很小，无明显的反射性心率加快。本发明公开了一类DDPH的衍生物，其抗高血压效果明显优于DDPH，并且本发明的化合物是良好的a,-肾上腺素受体拮抗剂，具有优良的治疗良性前列腺增生效果。本发明的化合物结构如下其中X代表Br或甲基。药理试验证明，本发明的化合物I具有优良的a,-肾上腺素受体拮抗作用，并且药效明显大于DDPH，下面是部分药理学试验和结果1、大鼠肛尾肌实验测定化合物的拮抗活性大鼠肛尾肌富含a,-AR，受胆碱能神经支配较少，选择性arAR激动剂能使之产生依赖性的收縮反应；而且大鼠肛尾肌在离体情况下，存活时间较长，对药物反应的可重复性较好，能进行大量的样品筛选。选取体重为300~350g的雄性SD大鼠，颈动脉放血致死，取肛尾肌标本，置Krebs营
发明内容养液中，通95%02、5%<302混合气体，浴槽温度37'C.营养液pH-7.4、静息负荷lg的条件下，平衡lh.基线稳定后，灌流液中加入盐酸可卡因、氢化可的松、普奈洛尔使其终浓度分别为M)nmolL-1、30pmolL"及1pmolL—1.20min后制备新福林累积量效曲线(CRC)，然后在三种不同浓度的哌唑嗪和待测药物存在条件下重复测定新福林CRC，Schild做图法求pA2值(pA2值，是指剂量比为2时竞争性拮抗药物浓度的负对数值。pA2值越高，表明拮抗a广AR受体的能力越强)。表l、本发明化合物对Phe引起的肛尾肌收縮的抑制作用(mean士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表中化合物代号对应的结构见实施例。由表l可见本发明的化合物拮抗Od-AR受体的能力明显优于DDPH，特别是XBMI。2、亚型选择性实验通过建立共转alA、alB或alD肾上腺素受体和Ga16的细胞系，使得受体被激活后能引起Gal6蛋白的活化，进而激活磷脂酶C(PLC)产生IP3和DAG，IP3可与细胞内内质网和线粒体上的IP3受体结合，从而引起胞内钙的释放。因此，测定胞内钙的变化可以作为检测受体活化状态的方法。Fluo-4/AM是一种钙荧光探针指示剂用来测量钙离子，作为非极性脂溶性的化合物，进入细胞后在细胞脂解酶的作用下，M基团解离，释出Fluo-4;由于Fluo-4是极性分子，不易通过脂质双分子膜，它可使Fluo-4长时间保留在细胞内。最终可以通过测量被激发的荧光强度来反映Ga蛋白被激活的水平。表2本发明化合物的alA-AK、alB-AR、alD-AR亚型选择性<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表2可见XBMI、XBMI1对alA-AR亚型选择性比阳性对照药Tamsulosin和DDPH更高。3、抗前列腺增生体内评价本发明化合物XBMII，XBMI的抗前列腺增生作用，阳性药为保列治(非那雄胺片)。取雄性SD大鼠，体重范围300~350g。其中给药组在无菌术下手术切除双侧睾丸。另6只在无菌术下切开阴囊后缝合作为假手术组。一周后将大鼠根据体重随机分为以下组别_表3造模后分组情况_组别给药剂量给药途径动物例数模型组XBMII组XBMI组阳性对照组(保列治_^12_假手术组每天皮下注射灭菌食用油，切除睾丸的各组大鼠每天皮下注射丙酸睾丸素0.5mg/0.1ml/只，同时每天灌胃给予药物，给药容积lml/100g体重，每天一次，连续15天。末次给药24h后，动物称量体重，颈动脉放血处死大鼠，剖腹取前列腺，称取前列腺湿重，并计算前列腺脏器系数，同时采用排水法测定前列腺体积。分别取每只大鼠约一半的前列腺组织用10%甲醛固定后，进行组织学检査；另一半在6(TC烘箱中烘烤24h后称重并计算前列腺干重指数。各指标数据进行组间t检验以观察有无统计学意义。各前列腺经10%福尔马林液固定，常规取材，脱水，石蜡包埋，制片(4pm)，HE染色，由专业病理人员在光学显微镜下阅片，根据病变轻重程度不同，依次标记为"-、+、++、+++"，其中"-"为无明显改变，"+++"为严重的病理改变，并且测量腺腔直径和腺上皮高度。结果见表4。连续灌胃给药15天后(同时每天皮下注射丙酸睾丸素)，与假手术组比较，模型组大鼠的前列腺体积、湿重指数和干重指数都明显增加(PO.Ol)，说明在本实验条件下，丙酸睾丸素可以诱导去势大鼠的前列腺产生明显的增生。与模型组比较，保列治组大鼠的前列腺湿重指数、紛列腺体积和前列腺干重指数均显著减少(户O.Ol)。而XBMII组、XBMI组的大鼠的前列腺千重指数(户O.Ol)明显降低。表4.XBMI、II对去势大鼠前列腺体积和重量的影响U士s)組.别剂量(mg/kg)n大鼠体重(g)前列腺湿重指数(mg/100g体重)前列腺体积(ml)前列腺干重指数(mg/100g体重)假手术组-341±29O細土O細0.233±0.05214.5±4.0模型组-6347±4.20.165±0細**0.583±0.160**32.7±4.6**保列治组56332±250.098±0.025##0.367±0.103#20.0±5.6##0.5%CMC-Na(lml/層g)ig68mg/kgig68mgZkgig55mg/kgig6XBMII86339±260.139±0.0230.483±0.07522.0±3.8冊础XBMI85—331土33Q.141土0.0170.500土0.06322.7±3.0糾**尸<0.01，与假手术组比较；弁尸<0.05，##P<0.01，与模型组比较。病理组织学检查结果见表5、6。结果表明①假手术组腺体无增生或萎縮。腺上皮完整，排列紧密，无明显变性、坏死、脱落，无乳头状增生，腺腔平均直径约为0.536mm，腺上皮平均高度约为0.05mm。间质未见明显充血及炎细胞浸润，平滑肌与纤维结缔组织无增生。②模型组6例腺体明显增生，腺腔大小不一，腺上皮腔内呈轻-重度的乳头状增生和形成大量皱折。腺腔直径约为0.358mm，腺上皮高度约为0.09mm。腺上皮无明显变性、坏死、脱落，间质未见明显充血及炎细胞浸润，平滑肌与纤维结缔组织无增生。③保列治组2例腺体增生，腺腔大小不一，腺上皮腔内呈轻度的乳头状增生，腺腔平均直径约为0.518mm，腺上皮高度约为0.06nim，腺卜.皮无明显变性、坏死、脱落，间质未见明显充血及炎细胞浸润，平滑肌与纤维结缔组织无增生。④XBMII组3例腺体增生，腺腔人小不一，腺上皮腔内呈轻至中度的乳头状增生，腺腔平均直径约为0.478mm，腺上皮高度约为0.08mm，腺上皮无明显变性、坏死、脱落，间质未见明显充血及炎细胞浸润，平滑肌与纤维结缔组织无增生。⑤XBMI组2例腺体增生，腺腔大小不-，腺上皮腔内呈轻-中度的乳头状增生，腺腔直径约为0.486mm，腺上皮高度约为0.07mm，腺上皮无明显变性、坏死、脱落，间质未见明显充血及炎细胞浸润，平滑肌与纤维结缔组织无增生。表5.XBMI、II对大鼠前列腺增生治疗作用病理学检查记录组另lj腺体增生腺上皮向腔内呈乳头状增生纤维结缔组织增生间质炎细胞浸润++++++—++++++-++++++-++++++假手术组55——-5——-模型组-141-1326--■6---保列治组42--42--6---6---XBMII321-321-G---6---XBMI311-311-5——-5——-表5结果表明，与假手术组相比，模型组的前列腺腺体增生明显，腺上皮向腔内呈乳头状增生明显，且未见纤维结缔组织增生及间质炎细胞浸润，表明造模成功。而与模型组相比，保列治组能明显改善腺体增生以及腺上皮向腔内呈乳头状增生情况，且未见纤维结缔组织增生及间质炎细胞浸润；而xbmii，xbmi组也均有不同程度地改善腺体增生以及腺上皮向腔内呈乳头状增生情况，未见纤维结缔组织增生及间质炎细胞浸润。但改善程度不如保列治组。表6.xbmi、ii对大鼠前列腺增生镜检前列腺腺腔直径和腺上皮高度的影响剂量腺上皮高度腺腔直径(mg/kg)__(mm)_(mm)假手术组-0.536±0.0730.050±0.010模型组-0.358±0.059*0.093士0.016"保列治组0.518±0.067##0.06±0.010##xbmn80.478±0.096#0.08±0.023xbmi80.486±0.074#0.07±0.019><0.05，尸O.Ol，与假手术组比较；*尸<0.05，##iM).01，弓模型组比较。结果表明，模型组与假手术组的腺上皮高度具有显著性差异，腺腔直径具有极显著性差异，表明造模成功。阳性药保列治组与模型组相比，腺上皮高度及腺腔直径均有极显著性差异。xbmii、xbmi与模型组比较，腺上皮高度具有显著性差异，表明xbmii、xbmi对于大鼠良性前列腺增生具有一定作用。4、大鼠降压实验正常雄性SD大鼠，体重250350g，氨基甲酸乙酯(1.0g.kg—')腹腔注射麻醉。动脉麻醉后，颈总动脉插管测量血压，股静脉插管用于给药。颈总动脉插管连接血压换能器，压力信号经放大器后通过A/D卡输入计算机，由计算机自动采样压力信号并分析处理得收縮压(SAP)、舒张压(DAP)、平均动脉压(MAP)及心率(HR)数据。由于xbmii水溶性不佳，故先用二甲亚砜助溶，然后加入生理盐水(二甲亚砜含量少于5%)，配制成质量浓度为2.0mg.raL'的溶液。亍'术后观察2h左右，待血压及心率稳定后进行给药，给药剂量为5.0tug.kg—1(0.25mL/100g)，观察静脉给药后对大鼠血压的影响。结果见表-5。表7、化合物对麻醉大鼠的血压和心率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表7可见，本发明的化合物高血压作用明显强于DDPH。具体实施例方式实施例1XBMI:l-(2,6-二甲基-4-溴苯氧基)-2-(3-甲氧基-4-羟基)丙垸盐酸盐将1.5mmol4-溴-2,6-二甲基苯氧丙酮和1.6mmo3-甲氧基-4-羟基基苯乙胺溶于甲醇5ml中，加入少量的对甲苯磺酸作催化剂，回流3h，降至室温，分批加入0.2gKBH4，使反应液的温度不超过3(TC，室温反应3h。减压蒸出甲醇，用少量乙酸乙酯提取，滤去不溶物，蒸去乙酸乙酯，残余物用绝对乙醚溶解，通入干燥的HC1气体。得白色固体，mp149.8-152.4。C，收率35%。IR(KBr,cm-1):3420，2926,1605,1524,1279,1207,1032。'HNMR(DMSO-D6)S:1.43(d,3H,J=6.47Hz，CHCHf),2.26(s,6H,2xArCH3),2.94(m,2H,ArCH2)，3.21(m,2H,NCH2),3.63(m,1H,CHN),3.76(s,3H,ArOCH3)，3,98(m,2H，OCH2)，6.657.27(m,5H,ArH)，8.83(s，1H,OH),9.34(s,2H,NH2+)。Formula:C2()H26BrN03.HCl。HRMS:[M+H]+Meas.Mass,408.11425;Calc.Mass,408.11688。实施例2XBMII:l-(2,4,6-三甲基苯氧基)-2-(3-甲氧基-4-羟基)丙烷盐酸盐合成方法同XBMI，得白色固体，mpl64-166°C，收率36%。IR(KBr,cm-1):3427,2934，1610,1524,1269,1217,1034。iHNMR(DMSO-D6)S:1.43(d,J=6.70Hz,3H，CHCHA2.19(s,3H,ArCH3),2.22(s,6H,2xArCH3),2.97(m，2H,ArCH2),3.21(m,2H，NCH2),3.63(m,1H,CHN),3.73~3.76(2s,6H,2xArOCH3),3.91(m,2H，OCH2)，6.29~6.93(m，5H，ArH)，9.06(d，2H,J=37.35Hz,NH2+)。Formula:C21H29N03.HCl。HRMS:[M+H〗+Meas.Mass,344.22145;Calc.Mass，344.22202。权利要求1、通式I的化合物其中X代表Br或甲基。2、权利要求1的化合物用于制备a,-肾上腺素受体拮抗剂的用途。3、权利要求2的用途，其中a「肾上腺素受体拮抗剂是治疗良性前列腺增生的药物(4、权利要求2的用途，其中af肾上腺素受体拮抗剂是治疗高血压的药物。全文摘要本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类结构式I的α<sub>1</sub>-肾上腺素受体拮抗剂，其中X代表Br或甲基。式I化合物具有较强的α<sub>1</sub>-肾上腺素受体拮抗功能，治疗良性前列腺增生和高血压效果显著，本发明还公开了其制备方法。文档编号C07C217/00GK101486659SQ20091002445公开日2009年7月22日申请日期2009年2月24日优先权日2009年2月24日发明者习保民,倪沛洲,江振洲,涛王申请人:中国药科大学