一种脂分离纯化白芍芍药苷的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种脂分离纯化白芍芍药苷的工艺，属于生物医药技术领域。
【背景技术】
[0002]汉代张仲景《金匮要略》中的名古方一当归芍药散，由白芍、茯苓、泽泻、白术、当归、)I丨芎组成，原主治妇科疾病，药理研究表明，方中诸药均能调节血脂，其君药白芍的有效成份芍药苷可抗氧化、抗血栓、降血脂。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是:提供一种脂分离纯化白芍芍药苷的工艺，该方法简单可行，分离效果好，能满足大生产的要求，以克服现有技术的不足。
[0004]本发明的技术方案
一种脂分离纯化白芍芍药苷的工艺，利用大孔吸附树脂分离纯化芍药苷，采用静态与动态的吸附一解吸2种方法，以反相高效液相色谱法测定芍药苷的含量为评价指标进行工艺筛选。
[0005]前述的一种脂分离纯化白芍芍药苷的工艺中，采用D I O I型大孔树脂进行分离，其最佳工艺为饱和动态吸附一洗脱量9 4.5mg / g、上样液芍药苷质量与树脂质量比1: 10.5、上样液体积与树脂质量比1ml: I g，上样液pH值6?7、以2?3 m I / m i η的速率吸附,用3 B V树脂床体积的水、以3?4ml / mi η的流速冲洗杂质，用3 B V 4 O %乙醇、以2?3 m I / m i η的流速洗脱，再经D I O I处理后。
[0006]由于采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明中上样液有效成分以分离的目标产物白芍芍药苷计，可消除白芍药材产地、品种等不同造成的芍药苷含量差异，有利于保证吸附完全及减少损失，本研究上样液体积与树脂比为I Q: I (芍药苷质量:树脂质量= 1:10.5)时效果好，为保证吸附完全，实际生产中树脂量应约大于此比例，以保证达到饱和吸附及吸附完全，目前，尚未见有大孔吸附树脂分离纯化白芍芍药苷上样浓度的报道，本研究表明，在树脂未饱和吸附的前提下，适当提高上样液中被分离有效成分浓度有利于吸附和节省时间。
【附图说明】
[0007]附图1为大孔树脂对芍药苷的静态饱和吸附洗脱结果图；
附图2为乙醇浓度对洗脱率的影响示意图；
附图3为 P H对饱和吸附量的影响(η = 3 )示意图；
附图4为芍药苷的动态吸附一洗脱结果(η = 3 )示意图；
附图5为树脂用量对吸附芍药苷的影响(η = 3 )示意图；
附图6为上柱液浓度对吸附芍药苷的影响(η = 3 )示意图；
附图7为冲洗杂质用水体积对吸附芍药苷的影响(η = 3 )示意图；附图8为洗脱次数对吸附芍药苷回收率的影响(η = 3 )示意图。
【具体实施方式】
[0008]下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。
[0009]本发明的实施例:
I仪器与试药
高效液相色谱仪L C 1Advp (日本岛津)；超声波清洗仪(北京医疗设备二厂)；电子天平(上海天平仪器厂)；甲醇、乙腈为色谱纯(美国T IADI E );其他试剂均为分析纯；大孔吸附树脂D I O I等购自天津市海光化工有限公司；芍药苷对照品(批号110736 — 20032 O )购自中国药品生物制品检定所，白芍购自贵阳市药材公司。
[0010]2 方法与结果
2.1芍药苷的含量测定方法 2.1.1 色谱条件
Sh imad z u V P O D S ( 4.6 mm X I 5 O mm, 5 μ m);流动相为乙腈 0.1 %磷酸溶液(14: 86);检测波长2 3 O n m ;流速Iml / m i η ;柱温
35。。。
[0011]2.1.2 溶液的制备
标准溶液的制备:精密称取芍药苷对照品10.52mg，置于50ml量瓶中，力口7 O %乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得标准溶液(每I m I含芍药苷0.2 m g )。样品溶液的制备:取白芍粗粉5 O O g，加9倍量水煎煮3次，每次1.5 h，合并滤液，即得白芍提取液，冷藏备用。
[0012]2.1.3 标准曲线分别精密吸取上述标准溶液
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0,7.0、8.0ml,置 25ml 量瓶中，加7 O %乙醇至刻度，摇匀，则分别制得浓度为8、I 6、24、32、40、48、5 6、6 4 mg / L的一系列对照品溶液，分别按前述色谱条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为:Y = 1 0 1 2 4 0 3 8.6 9 X-9 2 1 5.964284，相关系数 r = 0.9 9 9 9，线性范围 8 ?64mg/L。
[0013]2.1.4 白芍芍药苷的测定
精密量取白芍提取液I m I，置I Oml容量瓶中，加7 O %乙醇6 m I，超声处理2 O m i η，取出，放冷，加7 O %乙醇至刻度，摇匀，精密量取此液I m I，置2 5m I容量瓶中，加7 O %乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，分别精密吸取标准溶液、续滤液各I Q μ I，注入液相色谱仪，测定，即得(芍药苷含量:9.5 g / L)。
[0014]2.2 大孔吸附树脂的筛选 2.2.1大孔吸附树脂的预处理
X-5型、Dl O I型、NKA-9型、AB-8型、S - 8型树脂，用乙醇连续洗脱至洗脱液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，洗脱液在紫外区无吸收为树脂前处理合格，用水反复清洗无醇味，备用。
[0015]2.2.2 不同型号大孔吸附树脂吸附量和洗脱率的比较精密称取上述已经预处理的5种树脂，每种3份，每份I g，置I O Om I三角瓶中，精密加入样品溶液2 0ml，震荡吸附，每I Omi η震荡I次，频率为I 2 O次/ m in, 2 h后停止震荡，静置2 O h，使其达到饱和吸附，吸取上层液，测定吸附后芍药苷浓度，计算树脂饱和吸附量。将经静态饱和吸附芍药苷后的树脂滤出，吸干表面水分，精密加入6 O %浓度的乙醇2 O m I，同上法震荡2 h后滤出，测定洗脱液芍药苷浓度，计算洗脱率，结果见附图1。
[0016]附图1表明，5种树脂中DlOl型的饱和吸附量和洗脱率最高，因此选择DI O I树脂。
[0017]2.3 洗脱剂浓度的筛选
精密称取预处理好的D I O I型干树脂7份，每份I g，分别置I O O ml三角瓶中，精密加入样品溶液2 O m I，按2.2.2项下方法震荡吸附后，分别加入浓度为3 O %、
4O 5 O 6 O 7 O 8 O 9 O %的乙醇各2 O m I，同法震荡洗脱，测定洗脱液芍药苷浓度，计算洗脱率，结果见附图2 (η