异构酶制齐11 诸如依托泊巧、依立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊巧、托泊替康、氨糞非特、贝洛替 康、依利醋锭、voreloxin; 微管调节剂 诸如卡己他赛、多西他赛、艾日布林、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、 长春地辛、长春氣宁、康布斯汀（fosbret油ulin)、替司他赛； 杭代谢药 诸如天口冬酷胺酶、阿扎胞巧、左亚叶酸巧、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞巧、依诺他滨、 氣尿巧、氣达拉滨、氣尿喀晚、吉西他滨、琉嚷岭、甲氨蝶岭、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲沙、 硫挫嚷岭、硫鸟嚷岭、卡莫氣、去氧氣尿巧、艾西拉滨、雷替曲塞、沙帕他滨、替加氣、曲美沙 特； 杭痛杭牛素 诸如博来霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、左旋咪挫、米替福新、丝裂霉 素C、罗米地辛、链佐星、戊柔比星、净司他T、佐柔比星、道诺霉素、光神霉素、阿柔比星、培 来霉素、化喃阿霉素； 激素/枯杭剂 诸如阿己瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡鲁睾酬、Ξ对甲氧苯氯乙締、地加瑞 克、地塞米松、雌二醇、氣可龙、氣铃甲基睾丸素、氣他胺、氣维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮 丙瑞林、甲地孕酬、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肤、泼尼松龙、雷洛昔芬、他莫昔 芬、促甲状腺激素α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己締雌酪、阿考比芬、达那挫、德舍瑞 林、环硫雄醇、cxrteronel、恩杂鲁胺； 芳呑酶抑制剂 诸如氨鲁米特、阿那曲挫、依西美坦、法個挫、来曲挫、睾内脂、福美坦； 小分子激酶抑制剂 诸如克挫替尼、达沙替尼、厄洛替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕挫帕尼、瑞格非 尼、鲁索利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、维罗非尼、博舒替尼、吉非替尼、阿西替尼、 阿法替尼、alisertib、达拉菲尼、达可替尼、dinaciclib、多韦替尼、恩扎妥林、尼达尼布、 乐伐替尼、利尼伐尼、linsitinib、马赛替尼、米噪妥林、莫特塞尼、来那替尼（neratinib)、 orantinib、赃立福辛、普纳替尼、拉多替尼、rigosertib、替R比法尼、tivantinib、 tivozanib、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼、卡波替尼S-苹 果酸盐、卡非佐米、依鲁替尼、埃克替尼； 化敏剂 诸如甲氧沙林、化吩姆钢、他拉泊芬、替莫泊芬； 抗体 诸如阿仑单抗、贝西索单抗、贝伦妥单抗-维多汀、西妥昔单抗、迪诺塞麦、易普利单 抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、群司珠单抗、贝伐单抗、卡妥索单抗、 elotuzumab、依中白珠单抗、farletuzumab、mogamulizumab、necitumumab、尼妥珠单抗、奥 奴珠单抗、ocaratuzumab、奥戈伏单抗、雷莫芦单抗、利妥木单抗、司妥昔单抗、托珠单抗、 扎鲁木单抗、扎木单抗、马妥珠单抗、达妥珠单抗、onartuzumab、帕妥珠单抗、雷妥莫单抗、 tabalumab; 细胸巧子 诸如阿地白介素、干扰素α、干扰素a2a、干扰素α化、他索纳明、替西白介素、奥普瑞 白介素； 药物辆合物 诸如地尼白介素-毒素连接物、替伊莫单抗、舰节脈1123、松龙苯芥、曲妥珠单 抗-emtansine、雌莫司汀、吉妥珠单抗奥挫米星、阿柏西普、cintredekinbesudotox、依多 曲肤、奥英妥珠单抗、那莫单抗、莫奥珠单抗、得巧9mTc)阿西莫单抗、vinta化lide; Μ 诸女日sipuleucel、维特毋?朋、emepepimut-S、oncoVAX、rindopepimut、troVax、stimuvax; 其化药物 阿利维A酸、贝沙罗汀、欄替佐米、依维莫司、伊班麟酸、咪唾莫特、来那度胺、農茹多 糖、甲酯氨酸、米伐木版、帕米麟酸、培加帕酶、喷司他下、sipuleucel3、西佐糖、他米己罗 汀、替西莫司、沙利度胺、维甲酸、维莫德吉、蜂来麟酸、沙利度胺、伏立诺他、塞来考昔、西仑 吉版、恩替诺特、依他硝P坐、ganetespib、idronoxil、inipar;Lb、ixazomib、氯尼达明、尼莫 口坐、帕比司他、培瑞维A酸、plitid邱sin、泊马度胺、procodazol、ridaforolimus、他唾莫 德、telotristat、胸腺法新、替控扎明、托多司他、trabedersen、乌苯美司、伐司朴达、今又 生（gendicine)、溶链菌、reolysin、盐酸瑞他霉素、trebanan;Lb、维鲁利秦D
[0117] 下列缩写分别指W下定义： aq(水性），h(小时），g(克），L(升），mg(毫克），MHz(兆赫），min.(分钟），mm(毫米），mmol(毫摩尔），mM(毫摩尔当量），m.p.(烙点），eq(当量），mL(毫升）， L(微升），ACN(乙腊），AcOH(乙酸），CDCI3(気化氯仿），CD3OD(気化甲醇），CHsCN (乙腊），c-hex(环己烧），DCC(二环己基碳二亚胺），DCM(二氯甲烧），DIC(二异丙 基碳二亚胺），DIEA(二异丙基乙胺），DMF(二甲基甲酯胺），DMS0 (二甲亚讽），DMS〇-de (気化二甲亚讽），邸C(1-(3-二甲基-氨基-丙基）-3-乙基碳二亚胺），ESI(电喷雾 电离），化OAc(乙酸乙醋），化2〇 (乙酸），化地（乙醇），HATU(二甲基氨基-([1，2,3] Ξ挫并[4, 5-b]化晚-3-基氧基）-亚甲基]-二甲基-锭六氣憐酸盐），HPLC(高效液相 色谱），i-PrOH(2-丙醇），K2CO3(碳酸钟），LC(液相色谱），MeOH(甲醇），MgS〇4(硫酸 儀），MS(质谱），MT邸（甲基叔下基酸），胞肥〇3(碳酸氨钢），化肌4(棚氨化钢），NMM (N-甲基吗嘟），NMR(核磁共振），PyBOP(苯并Ξ挫-1-基-氧基-Ξ-化咯烧子基-憐 鐵六氣憐酸盐），RT(室溫），Rt(保留时间），SPE(固相提取），TBTU(2- (1-H-苯并Ξ 挫-1-基）-1，1，3,3-四甲基脈鐵四氣棚酸盐），TEA(Ξ乙胺），TFA(Ξ氣乙酸），THF(四 氨巧喃），化C(薄层色谱），UV(紫外线）。 引体外测定法的描沐缩写： GST=谷脫甘肤-S-转移酶FRET=巧光共振能量转移 HTRF? =(均相时间分辨巧光） 肥阳S= 4-(2-?基乙基）-1-赃嗦乙烧横酸缓冲液DTT=二硫苏糖醇 BSA=牛血清白蛋白 CHAPS=去垢剂； CHAPS= 3-[(3-胆酷氨基（cholamido)丙基）二甲基锭基（ammonio)]-l-丙烷横酸±h πττ. ο
[0119] 链霉抗生物素-XLent?是高等级链霉抗生物素-XL665缀合物，对此偶合条件已被 优化W产生具有用于一些测定，特别是需要高灵敏性的测定的增强性能的缀合物。
[0120] 端错聚合酶1和2的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化（Autoparsylation) 测定 自动聚ADP核糖化测定W两个步骤进行：酶促反应（其中GST-标记的端错聚合酶-1、resp端错聚合酶-2将生物素化ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD转移至其自身） 和检测反应（其中分析了结合于酶的GST标签的穴状化合物标记的抗-GST和结合生物 素-聚ADP核糖化残基的Xlent?标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚 ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。
[012。 自动聚ADP核糖化测定作为格雷纳低量（Greinerlowvolume)nb384-孔微量 滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio，Codolet，化ance)测定形式进行并用于高通量筛 选。在试验化合物（10倍稀释浓度）不存在或存在下，将250nMGST-标记的端错聚合 酶-1 (1023-1327aa)，分别约 250nMGST-标记的端错聚合酶-2 (873-1166aa)和 5μΜ bi0-NAD度iolog,LifescienceInst. ,Bremen,Germany)作为共同底物W总体积 5μ1 巧0ml肥阳S、4ml氯化儀、0. 05 % 普流罗尼克F-68U.4mlDTT、0. 5 %DMSO,pH7. 7) 于30°C解育90min。通过加入1μ1 50ml邸ΤΑ溶液停止反应。加入2μ1检测溶液（1.6 μΜSA-Xlent? (Cisbio,Codolet,Rrance), 7. 4ηΜ抗-GST-K? 巧U-标记的抗-GST, Cisbio,Codolet,化ance)在下列中：50ml肥阳S，800mlKF、0. 1 %BSA、20ml邸ΤΑ、 0. 1 %CHAPS,pH7. 0)。于室溫下解育1小时后，用化vision多模阅读器（PerkinElmer LASGermanyGmbH)W激发波长340皿（激光模式）和发射波长615皿和665皿测量 HTRF。测定发射信号的比率。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5μΜ 的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值（I巧0)使用程序SymyxAssayExplorer?或 者来自GeneData的Condosseo? 测定。
[0122] 端错聚合酶的细胞抑制作用的测定 因为端错聚合酶已被描述为调节Axin2的细胞水平化uang等人，2009 ;化化re)，Axin2水平的增加被用作在基于Luminex的测定法中测定端错聚合酶的细胞抑制作用的读 数。
[0123] 将结肠癌细胞系DLD1的细胞W每孔1. 5xl04个细胞接种于96孔板。第二天，用系 列稀释的试验化合物W7个步骤，按0. 3%的最终DMS0浓度一式Ξ份处理细胞。24小时后， 在裂解缓冲液（20mMTris/肥1pH8. 0、150mM化Cl、l%NP40U0%甘油）中裂解细胞并通 过96孔滤出板化65化）离屯、清除裂解产物。通过与结合于巧光簇基珠粒（carboxybeads) 的单克隆抗-Axin2抗体（R&DSystems#MB6078) -起解育从细胞裂解产物分离Axin2蛋 白。然后，用多克隆抗-Axin2抗体（CellSi即aling#2151)和适宜的阳-巧光第二抗体 特异性检测结合的Axin2。根据制造商说明书，在Luminex2°°机器（LuminexCo巧oration) 上，通过计算每孔中100个事件，测定分离的Axin2蛋白的量。试验化合物对端错聚合酶 的抑制作用导致较高水平的Axin2,其与可检测巧光的增加直接相关。作为对照，仅用溶剂 (中性对照）和用端错聚合酶参考抑制剂IWR-2 (3E-06M)(其指作为对Axin2的最大增 加的对照）处理细胞。为了分析，将获得的数据针对未处理的溶剂对照标准化并使用Assay Explorer软件（AcceliTs)进行拟合，W确定EC日。值。
[0124] PARP1测定的描述 PARP-1的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化测定 自动聚ADP核糖化测定W两个步骤进行：酶促反应（其中化S-标记的Pa巧-1将生物 素化ADP-核糖/ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD/NAD转移至其自身）和检测反 应（其中分析了结合于酶的His标签的穴状化合物标记的抗-His抗体和结合生物素-聚 ADP核糖化残基的XIent?标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚ADP核糖 化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。
[01巧]自动聚ADP核糖化测定作为格雷纳低量nb384-孔微量滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio,Codolet,化ance)测定形式进行。在试验化合物（10倍稀释浓度）不存在或存 在下，将 35nMHis-标记的Pa巧-1 (人，重组体，Ι?ηζοLifeSciencesGmbH,LSrracli, Germany)和作为共同底物的 125nMbio-NAD度iolog,LifescienceInst. ,Bremen, Germany)和 800nMNAD的混合物W总体积 6μ1 (100mlTris/肥1、4ml氯化儀、0. 01 〇/〇 IGEPAL?CA630、lmMDTT、0. 5 〇/〇DMSO,pH8、13ng/μL激活的DM度PSBioscience,San Diego,U巧）于23°C解育150min。通过加入4μ1的终止/检测溶液（70nMSA-Xlent? (Cisbio,Codolet,Rrance)、2. 5nM抗-His-K? 巧u-标记的抗-His,Cisbio,Codolet, 化ance)在下列中：50ml肥阳S, 400mlKF、0. 1 %BSA、20ml邸TA,pH7. 0)终止反 应。于室溫下解育1小时后，用化vision多模阅读器（PerkinElmerLASGermanyGmbH) W激发波长340nm(激光模式）和发射波长615nm和665nm测量HTRF。测定发射信 号的比率。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在1μΜ的最终浓度中的 Olaparib(XCl油S,Woburn,U巧。抑制值（I巧0)使用程序SymyxAssayExplorer? 或者 来自GeneData的Condosseo? 测定。
[012引 TNKS1和TNKS2ELISA测定的描述 TNKS1和2的生物化学活性测试：活性ELISA(自动聚ADP核糖化测定） 为分析TNKS1和2的自动聚ADP核糖化活性，进行活性化ISA:在第一步中，在谷脫甘 肤涂布的板上捕获GST标记的TNKS。然后在化合物不存在/存在下，用生物素化NAD进行 活性测定。在酶促反应期间，GST标记的TNKS将生物素化ADP-核糖由作为共同底物的生 物素化NAD转移至其自身。为了检测，加入结合于生物素化TNKS的链霉抗生物素-HRP缀 合物，由此被捕获到板上。生物素化resp自动聚ADP核糖化TNKS的量用HRP的发光底物 检测。发光信号的水平与自动聚ADP核糖化TNKS的量直接相关，由此也与TNKS活性直接 相关。
[0127]活性化ISA在384孔谷脫甘肤涂布的微量滴定板（快速捕获谷脫甘肤涂布的板(ExpresscaptureGlutathionecoatedplate),Biocat,Heidelberg,Germany)上进 行。用PBS预平衡各板。然后将板用50μ1 20ng/孔GST-标记的Tnks-1 (1023-1327 aa，内部制备），分别GST-标记的化ks-2 (873-1166aa，内部制备）在测定缓冲液巧0 ml肥阳S、4ml氯化儀、0. 05 %普流罗尼克F-68、2mlDTT,pH7. 7)于4°C解育过夜。用 PBS-Tween-20洗涂各板3次。通过于室溫下用50μ1封闭缓冲液（PBS、0. 05 %Tween-20、 0. 5 %BSA)解育20分钟封闭各孔。此后用PBS-Tween-20洗涂各板3次。酶促反应在试 验化合物（10倍稀释浓度）不存在或存在下，在50μ1反应溶液巧0ml肥PES、4ml氯 化儀、0