的合成:秤取1.00g(3.74mmol )3-醛基7-(N-乙基-N-( 2-叠氮）乙基)氨基 香豆素(化合物7)溶于40mL无水二氯甲烷和无水乙醇(V:V= 1:1)混合液中，搅拌下分别加 入850mg(6.24mm〇l)4-羟基苯乙酮和10滴吡咯烷，溶液由棕黄色变为红黑色，室温反应24h。 点板(二氯甲烷：甲醇= 50:1)原料反应完，旋干反应液。加入少量的二氯甲烷溶解反应液， 加入大量的石油醚，有大量的红色固体析出，抽虑。滤饼晾干后过硅胶柱，得红色固体 lSOrng。1!! NMR(400MHz，DMS0-d6)S:10.38(s，lH)，8.41(s，lH)，7.99(d，J=15.4Hz，lH)，9.92 (d，J = 8.7Hz，2H)，7.56(d，J=15.4Hz，lH)，7.46(d，J = 9.0Hz，lH)，6.87(d，J = 8.7Hz，2H)， 6.76(dd，Ji = 2.2Hz，j2 = 9.0Hz，lH)，6.56(d，J = 2.1Hz，lH)，3.67(t，J = 5.4Hz，2H)，3.59 (t，J = 5.4Hz，2H)，3.55(q，J = 7.0Hz，2H)，1.15(t，J = 6.9Hz，3H)。
[0064] 化合物9的合成：秤取180mg((h45mmol)化合物8,量取40mL的THF于lOOmL的三口烧 瓶中，氮气保护下滴加97.311^(0.67111111〇1)三苯基磷（溶于21111^冊），60°(：反应211后加入411^ 水，继续反应22h。点板(二氯甲烷：甲醇= 60:6)，原料反应完全，旋干反应液。过硅胶柱（二 氯甲烷:甲醇= 50:3)，得120mg红色固体。1H NMR(400MHz，DMS0-d6)S:10.38(s，lH)，8.41(s， lH)，7.99(d，J=15.4Hz，lH)，9.92(d，J = 8.7Hz，2H)，7.56(d，J=15.4Hz，lH)，7.46(d，J = 9.0Hz，lH)，6.87(d，J = 8.7Hz，2H)，6.76(dd，Ji = 2.2Hz，j2 = 9.0Hz，lH)，6.56(d，J = 2.1Hz， lH)，3.52(q，J = 6.9Hz，2H)，3.43(t，J = 7.3Hz，2H)，2.76(t，J = 7.2Hz，2H)，1.14(t，J = 6.9Hz，3H)〇
[0065] 化合物10的合成：砰取65mg(0 · 26mmol )D_生物素，53mg(0 · 31mmol )H0BT和62mg (0.31mmol)EDC.HCl，量取6mLDMF于50mL的单口烧瓶中，滴加 65uL(0.47mmol)的三乙胺，室 温下反应15min后加入100mg(0.26mmol)化合物9，继续反应5h。点板(二氯甲烷：甲醇=60: 6)原料反应完全，加入100mL饱和食盐水，有大量红色固体析出，抽虑，保留滤饼。将红色固 体溶液二氯甲烧中，分别用饱和碳酸氢铵(50mL X 2)饱和碳酸氢钠 (50mL X 2)、饱和食盐水 (50mLX 3)清洗，清洗后旋干有机相过硅胶柱(二氯甲烷：甲醇= 60:3)，得95mg红色固体。1Η NMR(400MHz，DMS0-d6)S:10.38(s，lH)，8.41(s，lH)，7.99(d，J=15.4Hz，lH)，9.92(d，J= 8.7Hz，2H)，7.56(d，J= 15.4Hz，lH)，7.46(d，J = 9 ·0Ηζ，1Η)，6.87(d，J = 8.7Hz，2H)，6.76 (dd，Jl = 2.2Hz，J2 = 9.0Hz，lH)，6.56(d，J = 2.1Hz，lH)，6.45(s，lH)，6.39(s，lH)，4.32-4.28(m，lH)，4.13-4.10(m，lH)，3.5卜3.43(m，4H)，3.25(q，J = 6.1Hz，2H)，3 ·09-3·04(ι?， lH)，2.95(s，lH)，2.81(dd，Ji = 5.0Hz，j2 = 12.5Hz，lH)，2.58(d，J=12.4Hz，lH)，2.06(t，J = 7.3Hz，2H)，1.64-1.23(m，5H)，1.13(t，J = 6.8Hz，4H)。
[0066]
[0067] 化合物SPS1的合成:称取90mg (0.15mmo 1)化合物10，量取65 (〇. 47mmo 1)的三 乙胺和50mL二氯甲烷于100mL的三口烧瓶中，氮气保护。冰浴下缓慢滴加 47.6mg(0.18mmol) 2,4_二硝基苯磺酰氯(溶于5mL二氯甲烷中），继续反应5h。点板(二氯甲烷：甲醇= 50:6)，原 料反应完全，旋干有机相过硅胶柱（二氯甲烷：甲醇= 50:3)，得50mg红色固体。1H NMR (400MHz，DMS〇-d6)S :9.13(d，J = 2.3Hz，lH)，8.62(dd，Ji = 2.3Hz，j2 = 8.6Hz，lH)，8.48(s， lH)，8.29(d，J = 8.7Hz，lH)，8.09(d，J = 8.8Hz，2H)，7.99(d，J=15,4Hz，lH)，7.66(d，J = 15.3Hz，lH)，7.50(d，J = 9.0Hz，lH)，7.40(d，J = 8.8Hz，2H)，6.87 (dd，Jl = 2. lHz，J2 = 9.0Hz，lH)，6.73(d，J=1.9Hz，lH)，6.42(s，lH)，6.34(s，lH)，4.32-4.28(m，lH)，4.13-4.10 (m，lH)，3.52-3.44(m，4H)，3.26(q，J=6.1Hz，2H)，3.09-3.04(m，lH)，2.95(s，lH)，2.81 (dd，Ji = 5.0Hz，j2 = 12.5Hz，lH)，2.58(d，J=12.4Hz，lH)，2.06(t，J = 7.3Hz，2H)，1.57-1.39(m，3H)，1.32-1.23(m，3H)，1.13(t，J = 6.8Hz，3H) .13C NMR(100MHz，DMS0-d6)S: 172.6， 162.7,159.8,156.4,152.5,151.6,151.2,148.1，146.1，140.2,137.5,133.6,130.6， 130·6，130·5，127·6，122·5，121·1，120·5，113·2，110·1，108·6,96·6,61·0,59·1，55·4， 48.9,45.7,45.0,36.2,35.2,28.2,28.0,25.0，12.0.HR-MS m/z:857.1884(M+Na) + ;分子量 计算值 C38H38N60i2S2:835 · 2023f or (M+H) +，测试值857 · 1887 (M+Na) +。
[0068] 缓冲溶液体系测定巯基蛋白和小分子硫醇：
[0069] 准确称取一定量的化合物SPS1溶于10mL二甲基亚砜中制得ImM的储备液避光保 存;准确称取一定量的卵清蛋白0VA溶于10mL水中，制得0.1g/mL的蛋白质储备液。准确移取 10OyL化合物SPS1的储备液至1 OmL容量瓶中，用1:4乙腈-磷酸缓冲溶液(PBS，2OmM，pH = 7.4)稀释至刻度，得1(^111〇5?的缓冲溶液。向该溶液中滴加 1〇〇\1^的0￥4储备液，测定不 同时间时体系的荧光和紫外光谱，经数据处理可得1. Omg/mL OVA对探针SPS1的时间滴定曲 线；同法得到探针小分子硫醇以及其它蛋白质在1:4乙腈-20mM PBS(pH = 7.4)中对探针得 时间滴定曲线。
[0070] 对照例：图6所不的Probel，Probe2和Probe3是文献报道的基于2,4_二硝基苯磺酸 酯的硫醇探针。Probe 1在CH3CN: PBS = 3:7 (V: V)混合体系中对巯基氨基酸具有较强的光谱 响应，硫醇的存在使得探针在716nm处的荧光增强50倍;在DMS0:PBS = 50: 50(V: V)混合体 系，巯基氨基酸使得Peobe 2在690nm处的荧光强度增强约15倍;在MeCN:PBS = 8:2(V:V) 中，Probe3对巯基氨基酸亦具有较强的光谱响应。上述几种探针对小分子硫醇均具有较大 的光谱响应，因而不能用于巯基蛋白的选择性检测。实施例1的探针SPS1在PBS缓冲溶液中 对小分子硫醇的光谱响应很小，而对巯基蛋白具有较强的光谱响应，本案例在选择性检测 疏基蛋白质方面具有潜在应用。（a)L Yuan，W · Lin，S · Zhao，W · Gao，B · Chen，L · He，and S.Zhu,J. Am.Chem.Soc.,2012,134,13510；b)X.D.Jiang,J.Zhang,X.Shao and ff.Zhao, Org·Biomol·Chem.，2012，10，1966;c)M.Li，X.Wu，Y.Wang，Y·Li，W.Zhu and T·D·James， Chem.Commun.，2014,50,1751-1753.)
[0071]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种含2，4-二硝基苯横酷基香豆素类化合物，其特征在于，其结构通式：式中:R为含氧，氮取代的烷基，生物素，吗嘟，葡萄糖或者果糖； 2，4-二硝基苯横酷基在幾基的邻、间和对位。2. -种含2，4-二硝基苯横酷基香豆素类化合物的合成方法，其特征在于，其具体步骤 为： (1) 将溶剂，3-甲氧基苯胺，碳酸钟，舰化钢，四下基漠化锭TBABW及漠乙烧加入到反应 器中，将混合物加热回流4~10小时后，真空旋蒸去除溶剂;反应产物过硅胶柱，得无色油状 物1; 所述的溶剂为乙腊或N，N-二甲基甲酯胺或四氨巧喃或二甲基亚讽； 3-甲氧基苯胺和碳酸钟的摩尔比为1:1~1:3;3-甲氧基苯胺和舰化钢的摩尔比为1: 0.05~1:0.15;3-甲氧基苯胺和四下基漠化锭TBAB的摩尔比为1:0.05~1:0.2; 3-甲氧基苯 胺和漠乙烧的摩尔比为1:0.8~1:1.5:3-甲氧基苯胺W及漠乙烧二者混合物与溶剂的固液 比为7~9:45~55; (2) 将步骤(1)得到的无色油状物1和CS2CO遺于有机溶剂中揽拌加热回流；当溶液回流 5~30min后再逐滴