专利名称：用于制备微球的方法
技术领域：
本发明涉及一种通过在水中干燥法制备微球的改进方法，更尤其，本发明涉及一种由乳液制备微球的方法，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相中通过在水中干燥法乳化，该方法包括，使用配有气体分离膜的装置，将要进行在水中干燥的乳液供给至所述气体分离膜的一侧，蒸发掉有机溶剂至所述气体分离膜的另一侧，这样可有效地去除有机溶剂，尤其所述工艺能够在密闭体系中进行，并因此可用于在工业规模上制备微球。
背景技术：
所谓的“在水中干燥法”是一种用于制备微球的已知方法，它包括，将通过在沸点低于水的水不混溶性有机溶剂中溶解水难溶聚合物而制成的有机相分散在水相中以制备O/W型乳液，并随后去除有机溶剂(参见，例如，JP-B-56-19324；JP-A-63-91325；JP-A-8-151321；KajeevJain等人，“可生物降解的聚(酯)设备的受控药物释放不同的制备路径”，药物开发和工业药剂学，vol.24(No.8)，pp.703-727，1998；JP-A-60-100516；JP-A-62-201816；JP-A-9-221417；和JP-A-6-21 1648)。
考虑到环境污染，该在水中干燥法包括去除有机溶剂的问题。
例如，已知一种方法，包括将聚合物在二氯甲烷中的包含药物的溶液在水相中乳化并随后通过在室温下长时间放置时搅拌该乳液而去除有机溶剂(参见，JP-A-9-221417，等)，但根据该方法，二氯甲烷通过水相在空气中释放。
用于防止环境污染的法规已由Kanagawa Prefecture发布，因此二氯甲烷在工厂排放口的浓度规定低于50ppm(参见，“合理使用氯烃的手册”由氯烃卫生协会发行，1996)，而根据1999年7月13日出版的“在监控特定化学物质在环境中的排放量等和控制其开发的法律”并根据政府于2000年3月29日发布的命令，其它有机溶剂如二氯甲烷，氯仿定义为应该由工业工厂进行适当控制的I级化学物质。
因此，如果有机溶剂如二氯甲烷在工业规模上使用，考虑到环境问题，需要通过在密闭体系中使用一种装置以进行处理，这样其外部排放应该受到良好控制。
另外，如果所得的微球用作药剂(尤其，不经肠利用如注射剂，锭)，重要的是在其制备步骤中消毒并需要在密闭体系中制备微球以防微生物对外部的污染。
对于控制有机溶剂排放的方法，已经研究在密闭体系中制备微球。例如，提出了一种方法，其中外水相和气相的接触面积以及循环速率和乳液的搅拌速度受到控制并进一步将气体吹入该乳液以增加气体在乳液表面上的运动速度(参见，JP-A-9-221418)。
但通过向表面上吹气的方法，与气体接触的乳液的表面积受到限制，并因此在实际使用时不足以有效地去除有机溶剂，而且去除有机溶剂的效率非常低，使得需要大量的水相以防乳液的凝聚。因此，该方法的问题在于，难以使用于制备微球的装置微型化。
另一方面，还提出使用聚合物膜以处理废水并回收有机溶剂的蒸气(参见，ind.Eng.Chem.Res.，vol.32，p.533，1993)，并已经发现某些用于分离和回收氯有机溶剂的膜(比较，JP-A-5-15749，JP-A-6-55166，JP-A-7-284641，JP-A-8-57274，JP-A-9-117642)。
本发明的公开内容本发明是要提供一种通过已知的在水中干燥法工业制备微球的改进方法，其中在过去成为问题的有机溶剂去除可高效进行并进一步可在密闭体系中进行，并因此在环境观点上有利。
本发明人已经发现，在一种通过在水中干燥法制备微球的方法，如果乳液通过使用气体分离膜而处理且有机溶剂通过所述气体分离膜蒸发掉，有机溶剂的理想去除可有效地进行。本发明已在这些新发现的基础上完成。
即，本发明是要提供一种由乳液制备微球的方法，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相通过在水中干燥法乳化，包括(1)使用配有气体分离膜的装置；(2)将要进行在水中干燥的一部分或所有乳液供给至所述气体分离膜的一侧；(3)将包含在所述乳液中的有机溶剂蒸发至所述气体分离膜的另一侧。
根据本发明的方法，因为微球可在密闭体系中通过在水中干燥法制备，它可有利地应用于本质上需要在基本上无菌条件下制备的微球，例如，药剂，尤其不经肠制剂如注射制剂，锭的制备。此外，由于它可在密闭体系中进行，没有有机溶剂释放到外部的问题，并因此优点在于没有任何环境污染的问题。
另外，有机溶剂的去除可在本发明方法中高效进行，这样可在非常短的时间内生产所需微球。还有利的是，有效地防止包含在有机相中的药剂向水相中的非所需泄漏，而且微球难以发生非所需的凝聚。
另外，根据本发明的方法，有机溶剂的去除可在少量水相的情况下进行，并因此有可能使容易在密闭体系中操作的该装置微型化，这样可有利地将该方法工业化时的问题，即对乳液搅拌的抵抗性减至最低。另外，本发明的方法可通过在将有机溶剂蒸发至乳液中之后循环液体而连续进行，因此本发明方法特别可用于在工业规模上制备微球。
附图的简要描述
图1是用于生产微球的循环型装置的示意图。
图2是用于生产微球的浸渍型装置的示意图。
图3是具有乳化功能的用于生产微球的循环型装置的示意图。
图4是具有乳化功能的用于生产微球的浸渍型装置的示意图。
图5是能够控制温度的用于生产微球的浸渍型装置的示意图。
图6给出了在用于生产微球的浸渍型装置中氮气的通过率和二氯甲烷的去除率之间的关系。
图7给出了由微球在370℃下溶解出的特太林(taltirelin)的聚集量随着时间的变化。
图8给出了在370℃下留在微球中的乙酸亮丙瑞林(leuprorelin)的量随着时间的变化。
a1-a5密闭容器b1，b3中空纤维膜组件b2，b4，b5圆柱形中空纤维膜组件c1，c3循环泵d1，d3，d5搅拌叶片d2，d4磁力搅拌片e1，e3过滤器f1，f3通风(吸气)孔f2，f4，f5用于经过气体的路径g1，g3循环路径h2，h4磁力搅拌器i3，i4匀化器j5用于控制温度的夹套用于实现本发明的最佳方式应用于本发明的微球制备方法的乳液是一种O/W型乳液其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相中乳化，而且当有机相包含药剂，成像材料(如，颜料，着色剂)(参见，JP-A-62-95366，JP-A-62-254833，JP-A-6-118636)时，可得到包含那些材料的微球。
以上“乳液”可根据有机相的种类通过各种常规方法制成，包括以下种类。
(a)其中药剂，等等直接溶解或分散在水难溶聚合物中的有机相，它在分散至水相中时得到O/W型乳液(参见，JP-B-56-19324，JP-A-63-91325，JP-A-6-32732，JP-A-8-151321，Jain等人的上述文献，等。)(b)其中药剂，等的水溶液分散在水难溶聚合物的溶液中的W/O型乳液的有机相，它在分散至水相中时得到(W/O)/W型乳液(参见，JP-A-60-100516，JP-A-62-201816，JP-A-9-221417，Jain等人的上述文献，等。)
(c)使用两种或多种水难溶聚合物的O/O型乳液的有机相，其中药剂，等溶解或分散在一种水难溶聚合物的溶液中，该溶液分散在其它的水难溶聚合物的溶液中，它在分散至水相中时得到(O/O)/W型乳液(参见，JP-A-6-211648)。
用于以上方法的沸点低于水的有机溶剂包括卤化脂族烃溶剂(如，二氯甲烷，氯仿，四氯化碳，氯乙烷，二氯乙烷，三氯乙烷，等)，脂肪酸酯溶剂(如，乙酸甲酯，乙酸乙酯，等)，芳族烃溶剂(如，苯)，脂族烃溶剂(如，n-己烷，n-戊烷，环己烷，等)，酮溶剂(如，甲基乙基酮，等)，醚溶剂(如，二乙基醚，二异丙基醚，甲基异丁基醚，甲基叔-丁基醚，四氢呋喃，等)。
这些有机溶剂在去除有机溶剂的条件下沸点比水低15-60℃，且尤其优选的有机溶剂是二氯甲烷，氯仿，和乙酸乙酯。
用于本发明方法的水难溶聚合物包括各种水难溶聚合物，但如果所要制备的微球用于药用场合，它优选为生物可降解的聚合物。
生物可降解的聚合物包括羟基脂肪酸和其衍生物的聚酯(如，聚乳酸，聚乙醇酸，聚柠檬酸，聚苹果酸，聚-β-羟基丁酸，ε-己内酯开环聚合物，乳酸-乙醇酸共聚物，2-羟基丁酸-乙醇酸共聚物，聚乳酸-聚乙二醇共聚物，聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物，等)，α-氰基丙烯酸烷基酯的聚合物(如，聚(2-氰基丙烯酸丁酯)，等)，聚草酸亚烷基酯(如，聚草酸三亚甲基酯，聚草酸四亚甲基酯，等)，聚原酯，聚碳酸酯(如，聚碳酸乙烯酯，聚碳酸亚乙基亚丙基酯，等)，聚邻-碳酸酯，聚氨基酸(如，聚-γ-L-丙氨酸，聚-γ-苄基-L-谷氨酸，聚-γ-甲基-L-谷氨酸，等)，透明质酸酯，和类似物，且可以使用一种或多种这些聚合物。
在这些聚合物中，尤其优选的是具有平均分子量2,000-约800,000,更优选2,000-约200,000的羟基脂肪酸的聚酯。
在以上羟基脂肪酸的聚酯中，更优选的是聚乳酸，乳酸-乙醇酸共聚物，2-羟基丁酸-二醇酸共聚物。乳酸-乙醇酸共聚物的乳酸/乙醇酸摩尔比优选为90/10-30/70，更优选80/20-40/60，且2-羟基丁酸-乙醇酸共聚物的2-羟基丁酸/乙醇酸摩尔比优选为90/10-30/70，更优选80/20-40/60。
以上水难溶聚合物以有机相浓度0.01-90％重量，优选0.1-70％重量溶解在有机溶剂中。
用于本发明在水中干燥法的O/W型乳液可通过将以上水难溶聚合物在有机溶剂(有机相)中的溶液与水(水相)混合并随后乳化该混合物而制成。制备可通过将有机相一次加入水相并随后乳化所得混合物，或另外通过将有机相加入少部分的水相，乳化该混合物，和进一步将剩余的水相加入所得乳液而进行。
以上乳化步骤可容易地通过常规方法，例如，通过使用已知的乳化装置如螺旋桨搅拌器，涡轮机叶轮混合器，高压乳化器，超声分散混合器，静电混合器，等搅拌混合有机相和水相而进行。此外，乳化也可通过其它的方法如膜乳化法，喷雾法进行。
利用膜乳化法的乳化可通过在有机相和水相之间提供多孔膜(如，其表面视需要被化学改性的多孔陶瓷，多孔玻璃，等)，通过向聚合物溶液加压，如果需要在搅拌水相的同时，将有机相由多孔膜的细孔挤出到水相，例如通过微囊包封杂志，vol.11(2)，pp.171-178，1994中所公开的方法来进行。
此外，利用喷雾法的乳化可通过用常规喷雾装置将有机相喷雾到水相上来进行。在该方法，如果需要，可以搅拌水相。喷雾装置包括，例如，空气喷嘴，压力喷嘴，超声喷嘴，旋转雾化器，等。
如此制备的乳液包含有机相和水相，其中水相的比率为1-10,000体积份，优选2-1,000体积份，每1体积份有机相。
在制备以上乳液时，乳化剂可视需要加入水相中以稳定化该乳液。乳化剂包括，例如，阴离子表面活性剂(如，油酸钠，硬脂酸钠，月桂基硫酸钠，等)，非离子表面活性剂(如，聚氧基亚乙基脱水山梨醇脂肪酸酯(如，Tween 80，Tween 60，由Nikko Chemicals Co.，Ltd.制造)，聚乙烯蓖麻油衍生物(如，HCO-60，HCO-50，由Nikko Chemicals Co.，Ltd.制造)，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧基甲基纤维素，甲基纤维素，卵磷脂，明胶，等)。
乳化剂加入以上水相的量是0.001-20％重量，优选0.01-10％重量。
如果乳液中的有机相包含药剂或成像材料(如，颜料，着色剂，等)，等，可得到包含这种药剂，等的微球。这些药剂等的加入量可以是基于水难溶聚合物重量的0.01-60％重量，优选0.1-40％重量，更优选1-30％重量。
此外，为了制备包含药剂，等的微球，那些药剂等可事先粉碎以提高它们在微球中的吸收速率，这可随着所要使用的聚合物和溶剂的种类等而变化。另外，如果药剂等形成盐并因此在微球中的吸收速率低，它们可首先转化成游离形式并随后进行微球制备。
以上药剂，等的粉碎可视需要通过常规粉碎方法进行，即，可用喷射磨机，锤磨机，旋转球磨机，振动球磨机，珠磨机，震动器磨机，杆磨机，管磨机，等物理粉碎，或在高压下湿粉碎，或另外，通过结晶而进行，例如，将药剂等首先溶解在溶剂中，通过调节pH，改变温度，溶剂组分，等而将它们沉淀并随后通过离心或过滤而将它们回收。
应用于本发明的药剂包括各种药剂，如抗肿瘤剂，生理活性肽，抗生素，退热剂，止痛剂，抗炎症剂，镇咳药，除痰剂，镇静剂，肌肉弛缓药，抗癫痫剂，治疗溃疡病药，抗抑郁剂，抗变态反应剂，强心剂，抗心律失常剂，血管舒张药，抗高血压药利尿剂，治疗糖尿病药，抗高脂血剂，抗凝剂，止血剂，抗痨剂，激素，抗麻醉剂，骨骼吸收抑制剂，骨生成促进剂，抗血管生成剂，镇吐药，维生素，等。这些药剂的具体例子列举如下。
抗肿瘤剂紫杉酚，博莱霉素，甲氨蝶呤，放线菌素D，丝裂霉素C，长春碱硫酸盐，长春新碱硫酸盐，柔红霉素，阿霉素，新制癌菌素(neocercinostatin)，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟尿嘧啶，四氢呋喃基-5-氟尿嘧啶，云芝多糖(krestin)，溶链菌制剂(picibanil)，香菇多糖，他莫昔芬，左旋咪唑，贝他定(bestatin)，溶链菌制剂(azimexon)，甘草酸，顺铂，卡铂，等。
生理活性肽胰岛素，促生长素抑制素，奥曲肽(sandostatin)，生长激素，催乳激素，亲肾上腺皮质的激素(ACTH)，ACTH衍生物，刺激黑素细胞的激素(MSH)，释放促甲状腺素的激素(TRH)和其衍生物(如，特太林(taltirelin)，等)，刺激甲状腺的激素(TSH)，黄体化激素(LH)，释放黄体化激素的激素(LHRH)和其衍生物(如，乙酸亮丙瑞林，等)，卵泡刺激的激素(FSH)，加压素，去氨加压素，催产素，降钙素，依降钙素(eleatonin)，副甲状腺激素(PTH)，高血糖素，胃泌素，促胰液素，肠促酶素肽，缩胆囊肽，血管紧张素，人胎盘催乳激素，人绒膜促性腺素(HCG)，脑啡肽，脑啡肽衍生物，内啡肽，京都酚(kyotorphin)，干扰素(如，α-，β-，γ-，等)，白介素(如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，等)，特夫素(taftsin)，胸腺生成素，胸腺素，抑核苷素，胸腺体液因子(THF)，血清胸腺因子(FTS)和其衍生物，和其它的胸腺因子，肿瘤坏死因子(TNF)，菌落刺激的因子(如，CSF，GCSF，GMCSF，MCSF，等)，胃动素，强啡肽(dinorphin)，铃蟾肽，神经降压素，浅蓝菌素，缓激肽，尿激酶，天冬酰胺酶，激肽释放酶，物质P，胰岛素状生长因子(IGF-I，IGF-II)，神经生长因子(NGF)，细胞生长因子(如，EGF，TGF-α，TGF-β，PDGF，FGF盐酸盐，碱性FGF，等)，骨骼形态形成蛋白质(BMP)，神经营养因子(如，NT-3，NT-4，CNTF，GDNF，BDNF，等)，血液凝聚因子VIII和IX，溶菌酶氯化物，杯苞菊属B，粘菌素，短杆菌肽，杆菌肽，红细胞生成素(EPO)，血栓形成素(TPO)，等。
抗生素庆大霉素，地贝卡星，于乍那霉素，利维霉素，妥布霉素，丁胺卡那霉素，新霉素，西索米星，四环素盐酸盐，土霉素盐酸盐，罗列环素，多西环素盐酸盐，氨苄青霉素，哌拉西林，羟基噻吩青霉素，头孢噻吩，头孢噻啶，头孢替安，头孢磺啶，头孢甲肟，头孢美唑，头孢唑啉，头孢噻肟，头孢哌酮，头孢唑肟，拉氧头孢，沙纳霉素，磺胺泽辛，氨曲南，等。
退热剂，镇痛剂和抗-炎症剂5-氨基-水杨酸，水杨酸，安乃近(sulpyrine)，氟芬那酸，双氯芬酸，消炎痛，吗啡，哌替啶盐酸盐，左吗啡酒石酸盐，羟吗啡酮，等。
镇咳药和祛痰药麻黄素盐酸盐，甲基麻黄碱盐酸盐，那可丁盐酸盐，可卡因磷酸盐，双氢可待因磷酸盐，阿洛拉胺盐酸盐，氯苯达诺盐酸盐，吡哌乙胺盐酸盐，氯哌斯汀，普罗托醇盐酸盐，异丙肾上腺素盐酸盐，沙丁胺醇硫酸盐，特布他林硫酸盐，等镇静剂氯丙嗪，普鲁氯嗪，三氟拉嗪，阿托品硫酸盐，甲基东莨菪碱(methyscopolamine)溴化物，等。
肌肉弛缓药哌二苯丙醇甲烷磺酸盐，筒箭毒硷氯化物，泮库溴铵，等。
镇癫痫剂苯妥英，乙琥胺，钠乙酰唑胺，利眠宁，等。
治疗溃疡病药甲氧氯普胺，组氨酸盐酸盐，思前列素(enprostil)，等。
抗抑郁剂米帕明，氯米帕明，诺昔替林，苯乙肼硫酸盐，等。
抗变态反应剂苯海拉明盐酸盐，氯苯吡胺马来酸酯，曲吡那敏盐酸盐，甲地嗪盐酸盐，克立咪唑盐酸盐，二苯拉林盐酸盐，甲氧那明盐酸盐，等。
强心剂反式-π-氧化樟脑，茶碱醇，氨茶碱，依替福林盐酸盐，地诺帕明(denopamine)，等。
抗心律失常剂普萘洛尔，阿普洛尔，布非洛尔，氧吩诺(oxyprenolol)，阿米林(azimilide)，等。
血管舒张药奥昔非君盐酸盐，地尔硫鎓盐酸盐，妥拉唑林盐酸盐，海索苯定，巴美生硫酸盐，等。
抗高血压利尿剂六甲铵溴，吩逐鎓(pentrilium)，美加明盐酸盐，乙肼苯哒嗪(ecarazine)盐酸盐，可乐定，等。
治疗糖尿病药格列嘧啶钠，吡磺环己脲(glypizide)，苯乙福明盐酸盐，丁福明盐酸盐，甲福明，等。
抗高脂血剂普代他汀(pravastatin)钠，斯代他汀(simvastatin)，克利贝特，氯贝特，双贝特，苯扎贝特，等。
抗凝剂肝素钠，等。
止血剂组织促凝血酶原激酶，凝血酶，甲萘醌钠亚硫酸氢盐，乙酰甲萘醌，ε-氨基己酸，氨甲环酸，卡巴克洛钠磺酸盐，肾上腺素红单氨基胍甲烷磺酸盐，等。
抗结核剂异烟肼，乙胺丁醇，p-氨基水杨酸，等。
激素氢化泼尼松，氢化泼尼松钠磷酸盐，地塞米松钠盐酸盐，己烷雌酚磷酸盐，甲巯咪唑，雌酮，等。
抗麻醉剂左洛啡烷酒石酸盐，烯丙吗啡盐酸盐，纳洛酮盐酸盐，等。
骨骼吸收抑制剂异丙氧黄酮(ipriflavone)，等。
骨生成促进剂多肽如BMP，PTH，TGF-β，IGF-I，等。
抗血管生成剂血管生成抑制类固醇，夫马霉素，夫马霉素衍生物，等。
镇吐药5-羟基色胺型受体拮抗药如昂丹司琼(ondansetron)或曲匹西隆(tropisetron)，等，神经激肽1受体拮抗药，等。
维生素维生素A，β-胡萝卜素，维生素B1，维生素B2，烟酸，烟酰胺，泛酸，泛酸钙，维生素B6，维生素B12，叶酸，肌醇，对-氨基马尿酸，生物素，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，等。
以上提及的药剂可以是游离形式或药物可接受的盐形式。例如，如果药剂具有碱性基团如氨基基团，等，它可以与无机酸(如，氢氯酸，硫酸，硝酸，等)或与有机酸(如，碳酸，琥珀酸，等)的盐的形式使用。如果药剂具有酸性基团如羧基基团，它可以与无机碱(如，碱金属如钠，钾，等)或与有机碱(如，有机胺如三乙基胺，碱性氨基酸如精氨酸，等)的盐的形式使用。
有机溶剂透过本发明气体分离膜的蒸发通过任何一种或两种或多种以下方法的组合而进行(1)一种将气体经过气体分离膜的一侧，即供给乳液的对面(“另一面”，以下仅称作“乳液的对面”)的方法；(2)一种将气体分离膜的乳液的所述对面减压的方法；或(3)一种加热供给至气体分离膜一侧的乳液的方法(以下仅称作“乳液侧”)。
在任何方法中，优选蒸发有机溶剂而不将乳液暴露于外部空气，这样保持无菌条件并防止有机溶剂释放到外部。
以下更详细描述这些用于蒸发有机溶剂的方法。
(1)一种将气体经过气体分离膜的乳液的对面的方法气体的经过可通过任何常规方法如吹气，吸气，等而进行且所要经过的气体包括空气，氮气，氦气，氩气，等。如果制备用于药用场合的微球，优选使用消毒的和无尘的(过滤的)气体。
气体的经过速率通常不低于0.8升/分钟，优选不低于6.7升/分钟，每1m2膜面积。
(2)一种将气体分离膜的乳液的对面减压的方法减压使用减压泵，水-空气泵，等进行，且减压进行使得乳液侧和乳液的所述对面的压差为1-100kPa，优选20-100kPa。优选以这样一种方式控制，其中乳液侧是常压且乳液的对面变成减压。
(3)一种加热乳液侧的方法加热通过使用恒温器，外浴，蒸汽浴，等进行使得乳液保持在规定温度下。温度的优选范围可根据与压力的关系而变化，但优选在乳液对面的压力下设定温度不低于有机溶剂的沸点，且温度通常是30-80℃，优选40-60℃，但它可随着溶剂的种类而变化。
此外，在任何的以上方法中，为了从乳液中有效地去除有机溶剂，优选通过常规搅拌装置，如螺杆型，磁力搅拌器型，或桨型装置搅拌乳液。
利用以上方法的有机溶剂蒸发优选进行至有机溶剂在微球中的含量变成35000ppm或更低。如果二氯甲烷用作有机溶剂，该制剂的溶剂最终剩余含量应该不超过600ppm(参见，用于药剂剩余溶剂的准则，根据关于一致化在Japan，U.S.A.和欧洲注册用于人体用途的药物的技术要求的国际会议(ICH))，但有机溶剂可进一步通过在生产微球之后处理而去除。
在本发明的方法中，用于蒸发以上有机溶剂的气体分离膜包括以下提及的渗透蒸发膜或多孔膜。
(1)渗透蒸发膜它是一种非多孔膜(均相膜)，它利用气态分子在膜中的溶解速率和其向膜中的扩散速率之间的差异而有效地分离气体。其例子是硅-橡胶渗透蒸发膜(尤其由聚二甲基硅氧烷制成的渗透蒸发膜)，通过将硅橡胶填充到多孔聚四氟乙烯中而制成的膜(参见，JP-A-5-15749)，聚乙烯醇混合膜(参见，化学工程，1998年3月，pp.25-29)。膜的使用尺寸是0.1-10,000m2，优选10-5,000m2，每1m3水相。
(2)多孔膜该膜适合利用气体分子在多孔膜内的流速差异而分离有机溶剂。例子是由聚四氟乙烯或聚丙烯制成的憎水多孔膜(参见，日本化学工程杂志，vol.31，no.1，pp.153-156，1998)，离子化的交联脱乙酰壳多糖/聚丙烯腈复合体的中空纤维膜(参见，日本化学工程杂志，vol.25，no.1，pp.17-21，1992)。膜的使用尺寸可以是0.1-10,000m2，优选10-5,000m2，每1m3水相。
在本发明的方法中，上述渗透蒸发膜和多孔膜都可使用，但渗透蒸发膜是优选的，这样可保持密闭容器的消毒状态并防止外部微球穿过该膜侵入。
此外，通过用这些气体分离膜处理乳液，优选设定使得有机溶剂穿过膜的渗透速率大于水的速率，但有机溶剂的沸点低于水，因此，如果适当控制温度，有机溶剂可选择性地去除而与气体分离膜的渗透速率无关。
利用以上气体分离膜的有机溶剂蒸发可通过下述的各种方法进行。
(1)循环型将一部分乳液导向进行有机溶剂蒸发处理的气体分离膜的一侧，并在去除有机溶剂之后，将所得液体循环返回至乳液。在该工艺中，气体分离膜以形成中空纤维的多个气体分离膜的束形式使用，这样扩大表面积。优选将乳液引入中空纤维形式的气体分离膜的内侧。
循环型气体分离膜的合适例子是硅氧烷膜组件(由NagayanagiKogyo Kabushiki Kaisha制造的“NAGASEP”)，脱气膜元件(SG-100系列，由Toray Industries，Inc.制造)，高性能脱气膜元件(SG-100系列，由Toray Industries，Inc.制造)，三层复合体中空纤维膜(脱气膜组件，由Mitsubishi Rayon Co.，Ltd.制造)，中空纤维膜组件(“SEPAREL”，由Dainippon Ink和Chemicals Inc.制造)。
所要处理的液体的循环通常通过使用循环泵按照以下方式进行。
(a)一种循环方法，包括，仅取乳液的一部分水相作为乳液的一部分乳液的一部分水相的循环可通过将乳液经过过滤器(如，不锈网眼过滤器，玻璃过滤器，陶瓷过滤器)，或利用有机相和水相之间的比重差异通过使用上和下的液液对流装置(采用由Tokyo Rikakikai Co.，Ltd.制造的提取器)来进行。在这些方法中，优选使用的方法是经过一个过滤器，这样乳液的有机相较少变形。该方法包括循环一部分水相，因此它可有利地经过直径小于空洞的中空纤维气体分离膜的内侧而不会堵塞该中空纤维气体分离膜。
(b)一种在乳液状态下循环的方法该方法包括，在进行有机溶剂蒸发之后循环一部分乳液，其中乳液的有机相接触气体分离膜，因此，应该选择气体分离膜的种类以适合有机相的种类。
此外，如果将一部分乳液加入中空纤维气体分离膜的内侧，中空纤维气体分离膜的中空纤维的合适尺寸应该选择以防堵塞，而且在这种情况下，优选将气体分离膜的乳液的对面减压或加入乳液以提供至气体分离膜的一侧。
在循环型中去除有机溶剂的方法可用包括以下基本元件的装置进行，且用于填充乳液的容器可视需要配有过滤器，上和下液液对流装置。
(i)用于填充乳液的容器；(ii)用于从乳液中蒸发掉有机溶剂的气体分离膜组件；(iii)连接容器和气体分离膜组件的循环路径；和(iv)用于将乳液循环经过气体分离膜组件的泵。
(2)浸渍型
该方法包括将乳液浸渍在管状气体分离膜中，其中将气体经过管的内部。
优选的是，管状气体分离膜为形成中空纤维的多个气体分离膜的束形式并具有较小的管直径以增加表面积，且将束浸渍在乳液中并将气体经过管状气体分离膜的内侧。在该方法中，乳液的有机相接触气体分离膜，因此，应该选择气体分离膜的种类以适合有机相的种类。
分离膜基本上与以上的循环型膜相同。但如果搅拌乳液以使乳液接触气体分离膜，优选使用构图成板或圆柱体形状的中空纤维分离膜的束。
使用浸渍型气体分离膜去除有机溶剂的方法通过使用基本上包括以下元件的装置来进行(i)用于填充乳液的容器；和(ii)浸渍在容器的乳液中的气体分离膜组件，用于从乳液中蒸发掉有机溶剂。
(3)通道型根据这种方法，微球通过在将乳液以以下方式经过一个路径的步骤中蒸发有机溶剂而制成(a)将乳液流向气体分离膜的外部，其中管状气体分离膜排列在路径内，并在与乳液流动相反的方向上将气体经过该管状气体分离膜的内部，或(b)将乳液流向气体分离膜的内侧，其中管状气体分离膜排列在路径内，并在与乳液流动相反的方向上将气体经过该管状气体分离膜的外部。
根据该方法，微球连续地生产而不用每次(间歇体系)进行以下操作将乳液填充到容器中，去除有机溶剂并随后从容器中收集微球，它不同于循环型方法或浸渍型方法。
用于本发明工艺的装置可合适地设计以适合各种气体分离膜而不限于任何特定的一种，但优选的一种在以下的工作实施例中说明。
要按照上述蒸发的有机溶剂可优选回收并再利用。回收通过一种冷却液化的方法，一种引入冷水的方法，或一种吸附到多孔颗粒中的方法来进行。吸附法使用一种用纤维活性碳吸附的装置，回收氯烃废气的通用装置，回收氯烃废气的小型装置，回收低浓度氯烃废气的装置，用粒状活性碳吸附的装置，用球形活性碳吸附的流化床装置，通过深度冷却而压缩和冷凝的装置来进行(参见，氯烃使用手册，pp.85-93)。更具体地，使用市售装置如用于溶剂回收和除臭的装置(由Kurimoto Ltd.制造的“Ameig”)和用于吸附和冷凝低浓度的溶剂气体的装置(由Toyobo Co.，Ltd.制造的“Haloneater”)。
在蒸发有机溶剂之后，将通过本发明工艺制成的微球通过常规方法如离心，过滤，或筛分从乳液中分离和回收。
另外，如果微球在水相中的有机溶剂的沸点上加热(参见，JP申请No.11-39599)或在覆盖有高熔点添加剂之后加热干燥(参见，JP-A-9-221417)，可以去除剩余的有机溶剂。
如此得到的微球进一步洗涤以去除粘附到表面上的水相的添加剂，等，并加入防聚集剂如糖，糖醇，无机碱，优选甘露糖醇，山梨醇以防微球之间的聚集，并随后进行冷冻干燥。
另外，为了得到具有所需颗粒尺寸的微球，产物优选例如用1,000μm或更低的筛进行筛选。尤其，如果微球用作注射制备，微球优选经过一个150μm或更低的筛以容易通过针。
通过本发明方法制成的微球通过在制备微球的过程中将药剂，成像材料加入有机相而引入这些药剂，成像材料(如，颜料，着色剂)，并因此可通过选择添加剂而用于药剂，非碳纸，含水油墨，或类似物。
如果微球包含药剂，它们可以是细粒剂，悬浮液，包埋型制剂，注射剂，施用到皮肤上的制剂的形式，并可以口服或不经肠给药[肌内注射，皮下注射，血管给药，经皮给药，通过粘膜的给药(经口腔，经阴道给药，经直肠给药，等)]。
如果包含药剂的微球用作注射制剂或悬浮液制剂(如，用于口服给药的干糖浆)，它们可优选通过引入分散剂(如，非离子表面活性剂，聚乙烯蓖麻油衍生物，纤维素增稠剂)而制成液体制剂的形式，或另外，它们可通过加入上述的分散剂和赋形剂(如，甘露糖醇，山梨醇，乳糖，葡萄糖，麦芽糖，半乳糖，蔗糖)而分散在水中，并通过冷冻干燥，减压干燥，喷雾干燥，等而凝固，然后在使用时将凝固的制剂溶解在用于注射的蒸馏水中。
以上注射制剂可进一步视需要引入防腐剂(如，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，苄基醇，氯丁醇，山梨酸，硼酸，等)，等渗剂(如，氯化钠，甘油，山梨醇，葡萄糖，等)，pH调节剂(如，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氯酸，磷酸，柠檬酸，草酸，碳酸，乙酸，精氨酸，赖氨酸，等)。
实施例本发明通过以下实施例，对比例，实验进行说明，但不应理解为局限于此。
(装置的例子)可用于制备本发明微球的装置在图1-图5中说明。
为了通过使用图1所示的装置制备微球，将要进行在水中干燥的乳液填充在密闭容器(a1)中，并将经过一个位于密闭容器(a1)中间的过滤器(e1)(如，不锈网眼)的乳液的一部分水相用搅拌叶片(d1)搅拌循环，其中使用循环泵(c1)经过由硅氧烷橡胶，等制成的循环路径(g1)通过一个中空纤维膜组件b。在循环过程中，如果将该水相部分经过中空纤维膜组件，包含在其中的有机溶剂就通过和透过中空纤维膜并通过通风(或吸气)孔(f1)蒸发，这样可有效地从体系中蒸发掉有机溶剂，并因此在位于密闭容器(a1)中的过滤器(e1)上形成微球。
为了使用图2所示的装置制备微球，将要进行在水中干燥的乳液填充在密闭容器(a2)中，并将圆柱形中空纤维膜组件(b2)浸渍在乳液中。在这种状态下，空气由通风路径(f2)经过，同时用磁力搅拌器(h2)和磁力搅拌片(d2)搅拌该乳液，这样乳液中的有机溶剂就通过和透过中空纤维膜并有效地从体系中蒸发掉，并因此在密闭容器(a2)中形成微球。
为了by使用图3所示的装置制备微球，将要进行在水中干燥的乳液的油相和水相填充在密闭容器(a3)中并用匀化器(i3)乳化。乳化之后，将经过一个位于密闭容器(a3)中间的过滤器(e3)(如，不锈网眼)的乳液的一部分水相用搅拌叶片(d3)搅拌循环，其中使用循环泵(c3)经过由硅氧烷橡胶，等制成的循环路径(g3)通过一个中空纤维膜组件b。在循环过程中，如果将该水相部分经过中空纤维膜组件，包含在其中的有机溶剂就通过和透过中空纤维膜并通过通风(或吸气)孔(f3)蒸发，这样可有效地从体系中蒸发掉有机溶剂，并因此在位于密闭容器(a3)中的过滤器(e3)上形成微球。
为了使用图4所示的装置制备微球，将要进行在水中干燥的乳液的油相和水相填充在密闭容器(a4)中并用匀化器(i4)乳化。乳化之后，将圆柱形中空纤维膜组件(b4)浸渍在乳液中。在这种状态下，空气由通风路径(f4)经过，同时用磁力搅拌器(h4)和磁力搅拌片(d4)搅拌该乳液，这样乳液中的有机溶剂就通过和透过中空纤维膜并有效地从体系中蒸发掉，并因此在密闭容器(a4)中形成微球。
为了使用图5所示的装置制备微球，将要进行在水中干燥的乳液的油相和水相填充在密闭容器(a5)中并将圆柱形中空纤维膜组件(b5)浸渍在乳液中。在这种状态下，空气由通风路径(f5)经过，同时用搅拌叶片(d5)搅拌该乳液，这样乳液中的有机溶剂就通过和透过中空纤维膜并有效地从体系中蒸发掉，并因此在密闭容器(a5)中形成微球。)在该装置中，乳液的温度可通过温度控制夹套(j5)而控制，因此有机溶剂可更有效地从体系中蒸发掉。
在图1-图5的装置中，通风(吸气)孔(f1)，(f3)和通风路径(f2)，(f4)，(f5)可视需要连接到具有冷却、吸附等功能的用于回收有机溶剂的装置上。
实施例1(1)向乳酸-乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(0.45g)中加入二氯甲烷(特定级试剂，由Katayama ChemicalIndustries，Ltd.制造)(0.75g)，并将该混合物用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到用作油相的匀质溶液。
将油相加入聚乙烯醇(Poval 220C，由Kuraray Co.，Ltd.制造)的0.5％水溶液(3mL)中，并将该混合物用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径7mm)在2,500rpm下匀化5分钟，得到O/W型乳液。
(2)将乳液倒入图1所示装置的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加500mL水，并用位于三-一马达(BL-600,由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌1小时。
然后，在用四个搅拌叶片搅拌的同时，将经过一个位于容器下部的不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)的水相引入硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，这样二氯甲烷在减压(外压力80kPa)下蒸发至中空纤维膜的外部，而经过硅氧烷橡胶中空纤维膜组件的水相则返回至容器。该循环在速率250mL/分钟下继续2小时。
所用的硅氧烷橡胶中空纤维膜组件是具有以下规格的NAGASEPM40-A(由Nagayanagi Kogyo Kabushiki Kaisha制造)中空纤维膜的厚度40μm中空纤维膜的内径170μm中空纤维的数目3000中空纤维膜的有效面积0.3m2(3)将密闭容器的内容物经过一个由日本药典定义的网眼(100目，开口尺寸150μm)并随后用不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)分离微球颗粒。如此得到的微球颗粒用蒸馏水洗涤几次并随后转移至玻璃制样品管(全容积5mL，由Iuchi Seieido制造)并向其中加入少量的蒸馏水，然后将该混合物用冷冻干燥器(RLE-52ES，由Kyowa Shinku Co.制造)在20℃下冷冻干燥3小时(外压不超过0.3kPa)和在20C(外压力不超过0.3kPa)下冷冻干燥15小时，得到微球颗粒(平均颗粒尺寸60μm)。
将如此得到的微球粉末(0.01g)溶解在氯仿(用于高性能液体色谱，由Kanto Kagaku K.K.制造)(10mL)中，得到试验样品液体。试验样品液体(2μL)用气体色谱装置(主体GC-14B，积分器CR-7A，由ShimadzuCorporation制造)[柱填充物；Gaschropack 54(由GL Science制造)，柱温度150℃；检测器FID；注射温度170℃；移动气体氮气；流速60mL/h]，并根据由二氯甲烷在氯仿中的标准溶液事先得到的校正曲线，估计试验样品液体的浓度，并随后根据所要使用的微球颗粒，计算二氯甲烷在微球颗粒中的含量。结果，该值是25,000ppm。
实施例2按照实施例1所述的相同方式生产具有平均颗粒尺寸69μm的微球颗粒，只是搅拌时间是30分钟且在硅氧烷橡胶中空纤维膜组件中的循环时间是1小时。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照与实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是30,000ppm。
实施例3(1)将在实施例1-(1)得到的O/W型乳液倒入图1所示装置的圆柱形密闭容器(内径80mm内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌，并同时将经过位于容器下部的不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)的水相引入硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，这样二氯甲烷在减压(外压力80kPa)下蒸发至中空纤维膜的外部，并将经过硅氧烷橡胶中空纤维膜组件的水相返回至容器。循环在速率250mL/分钟下进行1小时。
所用的硅氧烷橡胶中空纤维膜组件与用于实施例1-(2)的相同。
(2)按照与实施例1-(3)所述的相同方式，处理该密闭容器的内容物以得到具有平均颗粒尺寸66μm的微球颗粒。
此外，按照与实施例-(3)所述相同的方式计算二氯甲烷在微球颗粒中的含量。结果，该值是32,000ppm。
实施例4(1)将在实施例1-(1)中得到的O/W型乳液倒入图1所示装置的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径5cm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在200rpm下在室温下搅拌，并同时将经过位于容器下部的不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)的水相引入硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，这样二氯甲烷在减压(外压力80kPa)下蒸发至中空纤维膜的外部，并将经过硅氧烷橡胶中空纤维膜组件的水相返回至容器。循环在速率100mL/分钟下进行1小时。
所用的硅氧烷橡胶中空纤维膜组件与用于实施例1-(2)的相同。
(2)按照实施例1-(3)所述的相同方式，处理该密闭容器的内容物，得到具有平均颗粒尺寸64μm的微球颗粒。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照与实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是30,000ppm。
实施例5(1)向维生素B12细颗粒(0.2g)(平均直径3μm，由Rh6ne-Poulenc制造)和乳酸乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(1.8g)的混合物中加入二氯甲烷(3g)，并将该混合物用浴型声能器(Sonorex Super RK514BH，由Banderine制造)充分混合，得到用作油相的匀质分散体。
将油相加入聚乙烯醇(Poval 220C，由Kuraray Co.，Ltd.制造)的0.5％水溶液(8mL)中，并将该混合物用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径10mm)在2,500rpm下乳化5分钟，得到O/W型乳液。
(2)将乳液倒入图1所示装置的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌30分钟。
然后，在用四个搅拌叶片搅拌的同时，将经过一个位于容器下部的不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)的水相引入实施例1所述的硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，这样二氯甲烷在减压(外压力80kPa)下蒸发至中空纤维膜的外部，而经过硅氧烷橡胶中空纤维膜组件的水相则返回至容器。该循环在速率250mL/分钟下继续1小时。
(3)按照实施例1-(3)所述的相同方式处理密闭容器的内容物，得到红色微球颗粒(平均颗粒尺寸70μm)。
将如此得到的微球颗粒(0.01g)称重并向其中加入乙腈(5mL)以溶解微球颗粒。向该溶液中加入0.5M含水氯化钠溶液(10mL)，并将该混合物在2,000rpm下离心处理5分钟以分离沉淀物。
对于所得上层清液，在360nm处的吸光度用分光光度计(UV-2500PC，由Shimadzu Corporation制造)测定，并根据事先准备的校正曲线，估计维生素B12的含量，并随后根据微球颗粒的重量，计算维生素B12在微球颗粒中的含量。结果，该值是7.8％。
此外，如果根据所用维生素B12的量，维生素B12在微球颗粒中的含量和所得微球颗粒的量计算，78％的所用维生素B12进入微球颗粒。
另外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是21,000ppm。
实施例6(1)向维生素B12细颗粒(0.25g)(平均直径3μm，由Rh6ne-Poulenc制造)和乳酸乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(9.75g)的混合物中加入二氯甲烷(15g)，并将该混合物用浴型声能器(Sonorex Super RK514BH，由Banderine制造)充分混合，得到用作油相的匀质分散体。
将油相加入聚乙烯醇(Poval 220C，由Kuraray Co.，Ltd.制造)的0.5％水溶液(40mL)中，并将该混合物用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径20mm)在2,500rpm下乳化5分钟，得到O/W型乳液。
(2)将乳液倒入图2所示装置的圆柱形密闭容器(内径110mm，内容积1L)中，其中事先加入500mL，并用磁力搅拌器(IS-3DS，由IkedaRika制造)和涂有Tefron的搅拌片(40mm尺寸)在600rpm下在室温下搅拌，并同时通过使用插入容器内的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件将二氯甲烷从容器中蒸发掉，其中将氮气通过中空纤维的内部。氮气的通过速率是4.5L/分钟。该处理进行1小时。
所用的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件是具有以下规格的圆柱体形状的NAGASEP M60-1800圆柱体的直径100mm圆柱体的尺寸120mm×120mm中空纤维膜的厚度60μm中空纤维膜的内径200μm中空纤维膜的外径320μm中空纤维的数目1800中空纤维膜的有效面积0.15m2(3)按照实施例1-(3)所述的相同方式处理密闭容器的内容物，得到红色微球颗粒(平均颗粒尺寸59.6μm)(产率78％)。
通过按照实施例1-(3)和实施例5-(3)所述的相同方式计算，维生素B12的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为2.3％和36,000ppm，且90.3％的所用维生素B12进入微球颗粒。
实施例7(1)向维生素B12细颗粒(0.1g)(平均直径3μm，由Rhne-Poulenc制造)和乳酸乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(0.9g)的混合物中加入二氯甲烷(2g)，并将该混合物用浴型声能器(Sonorex Super RK514BH，由Banderine制造)充分混合，得到用作油相的匀质分散体。
油相进入图3所示的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先填充有聚乙烯醇(Gosenol EG-40，由Nippon合成化学工业有限公司制造)的0.5％水溶液(400mL)，并用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径20mm)在8,000rpm下乳化3分钟，得到O/W型乳液。
(2)该乳液用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌30分钟。
然后，在用四个搅拌叶片搅拌的同时，将经过一个位于容器下部的不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)的水相引入实施例1所述的硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，这样二氯甲烷在减压(外压力80kPa)下蒸发至中空纤维膜的外部，而经过硅氧烷橡胶中空纤维膜组件的水相则返回至容器。该循环在速率250mL/分钟下继续1小时。
(3)将密闭容器的内容物转移到50mL容积的Teflon制成的离心管中并用离心分离器(KN-30F，由Kubota Shoji K.K.制造)在2,000rpm下离心处理5分钟，并丢弃上层清液。将沉淀的颗粒用少量水洗涤，并如上进行离心处理。重复该离心处理三次，并将最后得到的微球颗粒按照实施例1所述的相同方式冷冻干燥，得到红色微球颗粒(平均颗粒尺寸34.8μm)。
通过按照实施例1-(3)和实施例5-(3)所述的相同方式计算，维生素B12的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为7.9％和13,500ppm，且79.0％的所用维生素B12进入微球颗粒。
实施例8(1)向维生素B12细颗粒(0.1g)(平均直径3μm，由Rhne-Poulenc制造)和乳酸乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(0.9g)的混合物中加入二氯甲烷(2g)，并将该混合物用浴型声能器(Sonorex Super RK514BH，由Banderine制造)充分混合，得到用作油相的匀质分散体。
油相进入图4所示的圆柱形密闭容器(内径110mm，内容积1L)中，其中事先填充有聚乙烯醇(Gosenol EG-40，由Nippon合成化学工业有限公司制造)的0.5％水溶液(400mL)，并用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径20mm)在8,000rpm下乳化3分钟，得到O/W型乳液。
(2)乳液用磁力搅拌器(IS-3DS，由Ikeda Rika制造)和涂有Tefron的搅拌片(40mm尺寸)在600rpm下在室温下搅拌，并同时通过使用插入容器内的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件将二氯甲烷从容器中蒸发掉，其中将氮气通过中空纤维的内部。氮气的通过速率是2.4L/分钟。该处理进行1小时。
所用的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件与用于实施例6的相同。
(3)将所得物按照实施例7-(3)所述的相同方式处理，得到红色微球颗粒(平均颗粒尺寸29.0μm)。
通过按照实施例1-(3)和实施例5-(3)所述的相同方式计算，维生素B12的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为7.3％和12,900ppm，且73.0％的所用维生素B12进入微球颗粒。
实施例9(1)向维生素B12细颗粒(0.1g)(平均直径3μm，由Rhne-Poulenc制造)和乳酸乙醇酸共聚物(平均分子量10,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；PLGA 5010，由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制造)(0.9g)的混合物中加入二氯甲烷(2g)，并将该混合物用浴型声能器(Sonorex Super RK514BH，由Banderine制造)充分混合，得到用作油相的匀质分散体。
将油相加入聚乙烯醇(Poval 220C，由Kuraray Co.，Ltd.制造)的0.5％水溶液(4mL)中，并将该混合物用匀化器(POLYTRON匀混器；Kinematica AG，Littau，末端直径10mm)在2,500rpm下匀化5分钟，得到O/W型乳液。
(2)将乳液倒入图5所示的圆柱形密闭容器(内径110mm，内容积1L)中，其中事先加入500mL水，并将该混合物用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌，并同时通过使用插入容器内的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件将二氯甲烷从容器中蒸发掉，其中将氮气通过中空纤维的内部。氮气的通过速率是3.6L/分钟。随后，在相同条件下连续通过氮气的同时，用一种循环恒温水的装置(RM-6，由Rauda制造)将具有温度40℃的水循环进入密闭容器的夹套外部以加热乳液3小时。另外，在相同条件下连续通过氮气的同时，将循环水的温度升至60℃并继续进行用于去除二氯甲烷的步骤1小时。在完成该步骤之后，在相同条件下连续通过氮气的同时，将循环水的温度降至约5℃，并将该乳液冷却至约30℃或更低。
所用的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件与用于实施例6的相同。
(3)将所得物按照实施例1-(3)所述的相同方式处理，得到红色微球颗粒(平均颗粒尺寸57.8μm)。
通过按照实施例1-(3)和实施例5-(3)所述的相同方式计算，维生素B12的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为4.3％和低于200ppm，且42.9％的所用维生素B12进入微球颗粒。
实施例10(1)将乳酸-乙醇酸共聚物(平均分子量8,000；乳酸∶乙醇酸＝1∶1；RGS02H；由Boehringer Inge1heim制造)(0.45g)和特太林水合物(TRH衍生物)(50mg)称重并放入玻璃制的测试管中，并向其中加入二氯甲烷(特定级试剂，由Katayama Chemical Industries，Ltd.制造)(2mL)和乙醇(特定级试剂，由Katayama Chemical Industries，Ltd.制造)(0.5mL)的混合物，并将该混合物用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到一种匀质溶液。
该溶液使用块加热器(Dry Block Bath MG-2，由Tokyo RikakikaiCo.，Ltd.制造)通过在约60℃下在氮气流下加热约30分钟而蒸发至干燥。随后，将其中的有机溶剂使用一种按比例缩小的冷冻干燥器(SpeedBack Concentrator，由SABATO制造)进一步蒸发，得到固体溶液。
(2)向所得固体溶液中加入二氯甲烷(1g)，并将该混合物使用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到一种用作油相的匀质溶液。
(3)油相进入图5所示的圆柱形密闭容器(内径100mm，内容积1000mL)中，其中事先填充有聚乙烯醇(Gosenol EG-40，由Nippon合成化学工业有限公司制造)的0.5％水溶液(400mL)并配有板-型硅氧烷橡胶中空纤维膜组件，并用匀化器(POLYTRON匀混器；KinematicaAG，Littau，末端直径20mm)在20,000rpm下乳化3分钟，得到O/W型乳液。所用的板-型硅氧烷橡胶中空纤维膜组件是具有以下规格的NAGASEP M60-290L-650，而且在乳化步骤过程中，将氮气以速率1.2L/分钟通过中空纤维膜的内部。
中空纤维膜的有效长度290mm中空纤维膜的厚度60μm中空纤维膜的内径200μm中空纤维膜的外径320μm中空纤维的数目650中空纤维膜的有效面积0.15m2(4)在乳化之后，迅速取出用于乳化的末端，同时继续通入氮气，并用位于三-一马达(BL-6600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌1小时，这样从容器中取出二氯甲烷。
(5)在完成以上步骤之后，将密闭容器的内容物(微球分散体)经过一个不锈网眼过滤器(开口尺寸20μm)，并转移至50mL容积的Teflon制成的离心管中，用离心分离器(KN-30F，由Kubota Shoji K.K.制造)在2,000rpm下离心处理10分钟，然后丢弃上层清液。将沉淀的颗粒用少量水洗涤，并如上进行离心处理。重复该离心处理三次，并将最后得到的微球颗粒转移至玻璃制成的样品管(全容积5mL，由IuchiSeieido制造)并向其中加入少量蒸馏水，然后将该混合物用冷冻干燥器(RLE-52ES，由Kyowa Shinku Co.制造)在20℃(外压力不超过0.3kPa)下冷冻干燥15小时，得到白色微球颗粒(平均颗粒尺寸7μm)。
(6)将如此得到的微球颗粒(0.01g)称重并溶解在乙腈(3mL)中，然后向其中加入0.035M甲酸酯缓冲液(pH3.0，2mL)，并将混合物在2,000rpm下离心处理5分钟。上层清液(200μL)通过HPCL方法测定，然后根据事先准备的校正曲线，估计药剂的含量，并随后根据所用微球颗粒的重量，计算药剂在微球颗粒中的含量。结果，该值是8.9％。此外，如果根据所用药剂的量，药剂在微球颗粒中的含量和所得微球颗粒的量计算，89％的所用药剂进入微球颗粒。
(7)如此得到的微球颗粒(0.02g)溶解在氯仿(用于高性能液体色谱，由Kanto Kagaku K.K.制造)(1mL)中，得到测试样品液体。测试样品液体(2μL)用气体色谱装置(主体GC-14B，积分器CR-7A，由Shimadzu Corporation制造)[柱填充物；Gaschropack 54(由GLScience制造)，柱温度150℃；检测器FID；注射温度170℃；移动气体氮气；流速60mL/h]，并根据由二氯甲烷在氯仿中的标准溶液事先得到的校正曲线，估计试验样品液体的浓度，并随后根据所要使用的微球颗粒，计算二氯甲烷在微球颗粒中的含量。结果，该值低于检测限度(即，低于100ppm)。
实施例11向按照实施例10-(1)所述的相同方式制成的固体溶液(实施例10-(1)的双量)中加入二氯甲烷(2g)，并将该混合物使用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到一种用作油相的匀质溶液。该油相按照实施例10-(3)至-(5)所述的相同方式处理，只是聚乙烯醇的0.5％水溶液的量与实施例10-(3)相同，得到白色微球颗粒(平均颗粒尺寸7μm)。
通过实施例10-(6)和-(7)所述的相同方式计算，药剂的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为10％和130ppm，且100％的所用药剂进入微球颗粒。
实施例12向按照实施例10-(1)所述的相同方式制成的固体溶液(实施例10-(1)的4倍量)中加入二氯甲烷(4g)，并将该混合物使用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到一种用作油相的匀质溶液。该油相按照实施例10-(3)至-(5)所述的相同方式处理，只是聚乙烯醇的0.5％水溶液的量与实施例10-(3)相同，得到白色微球颗粒(平均颗粒尺寸7μm)。
通过实施例10-(6)和-(7)所述的相同方式计算，药剂的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为10％和270ppm，且100％的所用药剂进入微球颗粒。
实施例13将聚乳酸(平均分子量20,000；R2O2H；由Boehringer Ingelheim制造)(0.225g)和乙酸亮丙瑞林(LHRH衍生物，由BACHEM AG制造)(25mg)称重并放入玻璃制成的测试管中，然后向其中加入二氯甲烷(特定级试剂，由Katayama Chemical Industries，Ltd.制造)(1.3mL)和乙醇(特定级试剂，由Katayama Chemical Industries，Ltd.制造)(0.25mL)的混合物，并将该混合物用混合器(Touch混合器MT-51，由Yamato制造)充分混合，得到一种匀质溶液。
该溶液使用块加热器(Dry Block Bath MG-2，由Tokyo RikakikaiCo.，Ltd.制造)通过在约60℃下在氮气流下加热约30分钟而蒸发至干燥。随后，将其中的有机溶剂使用一种按比例缩小的冷冻干燥器(SpeedBack Concentrator，由SABATO制造)进一步蒸发，得到固体溶液。
所得固体溶液按照实施例10-(2)至-(5)所述的相同方式处理，只是二氯甲烷和聚乙烯醇的0.5％水溶液的量与实施例10相同。在完成以上步骤之后，将密闭容器的内容物(微球分散体)经过一个聚二氟乙烯膜过滤器(膜直径25mm，膜孔尺寸5μm，Durapore SVLP025，由NihonMillipore Corporation制造)以分离微球颗粒。所得微球颗粒转移至玻璃制成的样品管(全容积5mL，由Iuchi Seieido制造)并向其中加入少量蒸馏水，然后将该混合物用冷冻干燥器(RLE-52ES，由KyowaShinku Co.制造)在20℃(外压力不超过0.3kPa)下冷冻干燥15小时，得到白色微球颗粒(平均颗粒尺寸12.9um)。
将如此得到的微球颗粒(5mg)称重并向其中加入乙腈(1.5mL)以溶解微球颗粒。向溶液中加入0.5M氯化钠水溶液(3.5mL)，然后将该混合物在2,000下离心处理10分钟以分离沉淀物。
所得上层清液(200μL)通过HPLC方法测定，然后根据事先准备的校正曲线，估计乙酸亮丙瑞林(LHRH衍生物)的含量，并随后根据微球颗粒的重量，计算乙酸亮丙瑞林在微球颗粒中的含量。结果，该值是7.5％。
此外，如果根据所用乙酸亮丙瑞林的量，乙酸亮丙瑞林在微球颗粒中的含量和所得微球颗粒的量计算，84.5％的所用乙酸亮丙瑞林进入微球颗粒。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照实施例10-(7)所述的相同方式计算。结果，该值是520ppm。
对比例1(1)将在实施例1-(1)中得到的乳液倒入图1所示的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌3小时。
(2)密闭容器的内容物按照实施例1-(3)所述的相同方式处理，得到具有平均颗粒尺寸80μm的微球颗粒。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是31,000ppm。
对比例2(1)将在实施例1-(1)中得到的乳液倒入图1所示的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌2小时。
(2)密闭容器的内容物按照实施例1-(3)所述的相同方式处理，得到具有平均颗粒尺寸73μm的微球颗粒。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是39,000ppm。
对比例3(1)将在实施例1-(1)中得到的乳液倒入图1所示的圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中，其中事先加入500mL水，并用位于三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌1小时。
(2)密闭容器的内容物按照实施例1-(3)所述的相同方式处理，得到具有平均颗粒尺寸77μm的微球颗粒。
此外，二氯甲烷在微球颗粒中的含量按照实施例1-(3)所述的相同方式计算。结果，该值是50,000ppm。
对比例4(1)将在实施例6-(1)中得到的乳液倒入图2所示的圆柱形密闭容器(内径110mm，内容积1L)中，其中事先加入500mL水，并用磁力搅拌器(IS-3DS，由Ikeda Rika制造)和涂有Teflon的搅拌片(40mm尺寸)在600 rpm下在室温下搅拌1小时。
(2)密闭容器的内容物按照实施例1-(3)所述的相同方式处理，但不能得到微球颗粒，因为内容物没有凝固。
对比例5(1)将在实施例7-(1)中得到的乳液用位于图1所示圆柱形密闭容器(内径80mm，内容积800mL)中的三-一马达(BL-600，由HEIDON制造)上的四个搅拌叶片(直径50mm，螺旋桨R型，由HEIDON制造)在400rpm下在室温下搅拌1.5小时。
(2)密闭容器的内容物按照实施例7-(3)所述的相同方式处理，得到具有平均颗粒尺寸35.4μm的微球颗粒。
此外，通过按照实施例1-(3)和实施例5-(3)所述的相同方式计算，维生素B12的含量和二氯甲烷在微球颗粒中的含量分别为7.9％和22,600ppm，且79.2％的所用维生素B12进入微球颗粒。
实验1向图2所示的密闭容器(内径110mm，内容积1L)中加入1％含水二氯甲烷溶液(1L)，并用磁力搅拌器(IS-3DS，由Ikeda Rika制造)和涂有Teflon的搅拌片(40mm尺寸)在600rpm下在室温下搅拌，并同时通过使用插入容器内的圆柱形硅氧烷橡胶中空纤维膜组件(NAGASEPM60-1800，圆柱形形状)将二氯甲烷从容器中蒸发掉，其中将氮气通过中空纤维的内部。氮气的通过速率是130mL，520mL，1.8L，和4L/分钟。
随着恒定时间的流逝，每次取少量的试验样品液体，然后用实施例1所述的气体色谱装置测定二氯甲烷在样品液体中的浓度(每次按照实施例1所述的相同方式进行测定，前提是二氯甲烷在样品液体中的浓度使用由二氯甲烷水溶液准备的校正曲线计算)。根据其浓度的变化，计算二氯甲烷在取样时的浓度相对二氯甲烷在通入气体之前的浓度的百分数(1％水溶液计算为100)，并将相对时间的数据画图。如此得到的图在图6中给出。
实验2将在实施例10，11和12中得到的包含特太林的微球制剂分别考虑为微球1，2，3，并将10mg的每种微球精确称重并转移到具有盖的测试管(容积15mL)中。向该管加入1/30M磷酸盐缓冲液(pH7.4，10mL)，并密封。将该管放在受控在37℃下并以旋转速度25rpm振荡的空气整温腔(Biochamber BC-1200，由TAITEC制造)中的旋转孵卵器(RT-50，由TAITEC制造)上。随着规定时间的流逝，取出洗出液，并在随后另外加入与所取出的洗出液体积相同的1/30M磷酸盐缓冲液，并进一步重复相同的步骤。从微球中溶解出的特太林的量通过HPLC方法计算。从微球溶解出的特太林(TRH衍生物)在37℃下的聚集量以与溶解时间的关系画图。如此得到的图在图7中给出。
实验3将在实施例13中制成的包含乙酸亮丙瑞林的微球制剂考虑作微球4，并将其5mg精确称重并转移到具有盖的测试管(容积15mL)中。向如此制备的具有盖的五个测试管中加入包含0.05％Tween 80(聚氧基亚乙基脱水山梨醇脂肪酸酯，由Nikko Chemicals Co.，Ltd.制造)的1/30M磷酸盐缓冲液(pH7.0，10mL)。将每个测试管密封，并放在受控在37℃下并以旋转速度25rpm振荡的空气整温腔(BiochamberBC-1200，由TAITEC制造)中的旋转孵卵器(RT-50，由TAITEC制造)上。随着规定时间的流逝，取出每个管，并用离心分离器(KN-30F，由KubotaShoji K.K.制造)在2,000rpm下离心处理10分钟以沉淀微球。丢弃上层清液，并为了蒸馏掉水分，将该管在减压下在包含硅胶的玻璃制干燥器中保持过夜。向该管加入乙腈(1.5mL)并溶解干燥的微球颗粒。然后，将0.5M氯化钠水溶液(3.5mL)加入该管，并将该管在2,000rpm下离心处理10分钟以去除沉淀物。所得上层清液(200μm)通过HPCL方法测定，并根据事先准备的校正曲线，估计保留在微球中的乙酸亮丙瑞林的量。在37℃下留在微球中的乙酸亮丙瑞林的量以与溶解时间的关系作图。如此得到的图在图8中给出。
工业实用性根据本发明的方法，如果微球使用具有气体分离膜的在水中干燥法，通过由该膜的一侧供给乳液而制成并将有机溶剂蒸发至其另一侧，有机溶剂可非常有效地去除，且工艺步骤可进行在密闭体系中进行，因此本发明的改进工艺在环境角度上也是非常优异的。
权利要求
1.一种由乳液制备微球的方法，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相通过在水中干燥法乳化，包括(1)使用配有气体分离膜的装置；(2)将要进行在水中干燥的一部分或所有乳液供给至所述气体分离膜的一侧；(3)将包含在所述乳液中的有机溶剂蒸发至所述气体分离膜的另一侧。
2.根据权利要求1的用于制备微球的方法，其中药剂包含在有机相中。
3.根据权利要求2的用于制备微球的方法，其中药剂的含量比率是基于水难溶聚合物重量的0.01-60％重量。
4.根据权利要求3的用于制备微球的方法，其中在包含药剂的有机相中，药剂直接溶解或分散在水难溶聚合物的溶液中，或药剂的水溶液分散在水难溶聚合物的溶液中，或药剂溶解或分散在一种水难溶聚合物的分散溶液中，该溶液分散在其它的水难溶聚合物的溶液中。
5.根据任何一项权利要求1-4的用于制备微球的方法，其中水难溶聚合物是一种水难溶的生物可降解的聚合物。
6.根据权利要求5的用于制备微球的方法，其中水难溶的生物可降解的聚合物是羟基脂肪酸的聚酯。
7.根据权利要求6的用于制备微球的方法，其中羟基脂肪酸的聚酯是一种或多种选自以下的物质聚乳酸，乳酸-乙醇酸的共聚物，和2-羟基丁酸-乙醇酸的共聚物。
8.根据任何一项权利要求1-7的用于制备微球的方法，其中水难溶聚合物以浓度0.01-90％重量包含在有机相中。
9.根据任何一项权利要求1-8的用于制备微球的方法，其中沸点低于水的有机溶剂是一种或多种选自以下的物质卤化脂族烃溶剂，脂族酯溶剂，芳族烃溶剂，脂族烃溶剂，酮溶剂，和醚溶剂。
10.根据权利要求9的用于制备微球的方法，其中有机溶剂在其蒸发条件下的沸点比水低15-60℃。
11.根据权利要求9的用于制备微球的方法，其中有机溶剂选自二氯甲烷，氯仿和乙基乙酸酯。
12.根据任何一项权利要求1-11的用于制备微球的方法，其中水相包含一种或多种选自乳化剂，聚乙烯蓖麻油衍生物，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧基甲基纤维素，甲基纤维素，卵磷脂，和明胶的物质。
13.根据任何一项权利要求1-12的用于制备微球的方法，其中在乳液中，水相以1-10,000倍有机相体积的体积被包含。
14.根据任何一项权利要求1-13的用于制备微球的方法，其中气体分离膜是渗透蒸发膜或多孔膜。
15.根据权利要求14的用于制备微球的方法，其中气体分离膜是渗透蒸发膜。
16.根据权利要求15的用于制备微球的方法，其中气体分离膜是硅橡胶渗透蒸发膜。
17.根据任何一项权利要求14-16的用于制备微球的方法，其中气体分离膜以形成中空纤维的多个气体分离膜的束形式使用。
18.根据任何一项权利要求1-17的用于制备微球的方法，其中有机溶剂至气体分离膜另一侧的蒸发通过一种方式或选自以下的方式的组合而进行将气体经过气体分离膜的所述另一侧，将气体分离膜的所述另一侧减压，或加热供给至气体分离膜一侧的乳液。
19.根据权利要求18的用于制备微球的方法，它通过循环重复以下步骤而进行取出一部分乳液；将其供给至气体分离膜的一侧；并随后将所得液体在蒸发有机溶剂之后返回至原始乳液。
20.根据权利要求19的用于制备微球的方法，其中仅取出通过过滤乳液而得到的水相的一部分，并随后将其供给至气体分离膜的一侧。
21.根据权利要求19或20的用于制备微球的方法，其中使用形成中空纤维的多个气体分离膜的束，并将一部分用于在水中干燥的乳液引入形成中空纤维的所述气体分离膜的内部并将有机溶剂蒸发至所述气体分离膜的外部。
22.根据权利要求18的用于制备微球的方法，其中将形成中空纤维的多个气体分离膜的束浸渍在乳液中，并在形成中空纤维的所述气体分离膜的内部经过气体以蒸发有机溶剂。
23.根据任何一项权利要求1-22的用于制备微球的方法，其中所要蒸发的有机溶剂通过冷却或通过吸附至多孔物质而回收。
24.根据任何一项权利要求1-23的用于制备微球的方法，其中利用在水中干燥法的微球制备在密闭体系中进行。
25.一种通过在水中干燥法从乳液中制备微球的装置，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相中乳化，它由以下元件组成(a)用于填充乳液的容器；(b)用于从乳液中蒸发掉有机溶剂的气体分离膜组件；(c)连接容器和气体分离膜组件的循环路径；和(d)用于将乳液循环经过气体分离膜组件的泵。
26.一种通过在水中干燥法从乳液中制备微球的装置，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相中乳化，它由以下元件组成(a)用于填充乳液的容器；和(b)要浸渍在容器乳液中的气体分离膜组件，用于从乳液中蒸发掉有机溶剂。
全文摘要
本发明要提供一种由乳液制备微球的方法，其中包含沸点低于水的有机溶剂和水难溶聚合物的有机相在水相通过在水中干燥法乳化，包括(1)使用配有气体分离膜的装置；(2)将要进行在水中干燥的乳液供给至所述气体分离膜的一侧；(3)蒸发掉包含在所述乳液中的有机溶剂至所述气体分离膜的另一侧，它可高效地去除有机溶剂并可在密闭体系中进行，因此在环境角度是有利的。
文档编号B01J13/12GK1426433SQ01808763
公开日2003年6月25日 申请日期2001年4月26日 优先权日2000年4月28日
发明者铃木健彦, 松川泰久, 铃木彰 申请人:田边制药株式会社