的床），所述床包含多微孔的和大孔的正电性的和负电性的介质+等 体积的多微孔亲脂颗粒的组合：QAE Sephadex A_25、SP Sephadex C_25、Nuvia Q、Nuvia S 和S印hadex LH-20。然后将IgM捕获在阳离子交换剂上。经两步法的IgM回收率为80%， 且通过分析SEC确认纯度超过90 %，没有明显的聚集体。
[0098] 实施例19.将1升含有单克隆IgG的细胞培养物上清液用1 %尿囊素和0. 02%依 沙吖啶处理15分钟。将黄色沉淀物通过膜过滤除去，并将光学上闪烁的澄清亮黄色滤液施 加于IOmL柱，所述柱填充了 Chelex 100和Macroprep High Q的等量混合物。然后将经处 理的材料施加于蛋白A柱至20mg/mL的负载，洗绦10个柱体积，并洗脱IgG。洗脱的IgG与 从加载未经处理的细胞培养物上清液的蛋白A洗脱的抗体相比，含有少大致80倍的宿主细 胞蛋白污染物：10ppm相对于800ppm。这些结果特别凸显了本发明的除去污染物的能力，所 述污染物不可通过下游纯化方法有效地除去。建立平行实验来确定加载了经处理的样品和 未经处理的样品的蛋白A柱的动态结合能力。在加载了经处理的样品的柱上的动态能力比 加载了未处理的样品的柱高约20% :35mg/mL相对于28mg/mL。这些结果特别凸显了本发 明的除去污染物的能力，所述污染物直接干扰下游纯化方法的功能。
[0099] 实施例20.将带负电荷的金属螯合苯乙稀二乙稀基苯颗粒（ChelexlOO)、带正 电荷的聚甲基丙稀酸醋多孔颗粒Macroprep High-Q和带负电荷的聚甲基丙稀酸醋颗粒 (MacroPrep High-S)的等量混合物与IgM_529(其预先已经用NaCl处理至20mS/cm的最 终电导率）、1%尿囊素和0.025%依沙吖啶的样品混合。颗粒与样品的体积比为1:20。在 10分钟、20分钟、40分钟和60分钟取样，并通过微滤除去颗粒。图1显示了高分子量聚集 体在所有时间点的急剧下降，但是所有聚集体随时间逐渐更大地下降，伴随着宿主细胞蛋 白污染物的同样明显大幅下降。随后的分析表明，聚集体和宿主蛋白的下降反映了来自样 品的染色质残余物的组合下降。在所有时间点还从样品除去了依沙吖啶。
[0100] 实施例21.图2A和2B解释了如下处理IgM-84之前和之后得到的尺寸排阻色谱 法曲线：用200mM NaCl、1 %尿囊素和0. 025%依沙吖啶处理IgM-84,然后用与实施例7相同 的介质混合物处理，但是使样品穿过这样的装置：其中将混合的介质夹在足够窄的网的纺 织聚合物截留器之间以截留颗粒。与大多数较小聚集体一起，HMW聚集体被完全消除。下 面的表1表明，DNA和组蛋白最初分布在所有聚集体级分中，在IgG级分中，和在所有含有 蛋白的级分中。
[0101] 表I. SEC级分的IgM和污染物含量.
[0102]
【主权项】
1. 从样品选择性地分离生物祀标的方法，所述样品包含生物祀标材料或疑似包含所述 生物祀标，所述方法包括下述步骤；（i)提供在其表面处包含酷脈部分的固体；（ii)使所述 样品与所述固体接触，由此使所述样品中的大部分生物祀标结合所述酷脈部分；和（iii) 将所述固体与所述样品分离。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标具有在选自W下的范围内的大小： (1)约10皿至约200皿，0)约200皿至约1微米，0)约1微米至约20微米，和（4)约20 微米或更大。
3. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标是具有在W下范围内的分子量的大 生物祀标；（1)约100千道尔顿至约500千道尔顿，（2)约500千道尔顿至约100万道尔顿， (3)约100万道尔顿至约1000万道尔顿，和（4)约1000万道尔顿或更大。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标是细胞。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞包含选自W下的一种；（i)哺乳动物细 胞，扣）昆虫细胞，（iU)酵母细胞，（iv)细菌细胞和（V)另一种生物细胞。
6. 根据权利要求1-5所述的方法，其中所述生物祀标包含细胞的亚结构。
7. 根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞的亚结构包含选自W下的一种；（i)细胞 器，扣）包涵体，（iU)内毒素，或（iv)另一种细胞的亚结构。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述细胞的亚结构包含选自W下的细胞器；（i)外 泌体，扣）核糖体，（iU)线粒体，（iv)叶绿体，或（V)另一种细胞的亚结构。
9. 根据权利要求1-8所述的方法，其中至少50%的所述生物祀标结合所述酷脈部分。
10. 根据权利要求9所述的方法，其中至少75%的所述生物祀标结合所述酷脈部分。
11. 根据权利要求9所述的方法，其中至少90%的所述生物祀标结合所述酷脈部分。
12. 根据权利要求9所述的方法，其中至少95%的所述生物祀标结合所述酷脈部分。
13. 根据权利要求9所述的方法，其中至少99%的所述生物祀标结合所述酷脈部分。
14. 根据权利要求1-13所述的方法，其中基本上所有的所述生物祀标结合所述酷脈部 分。
15. 根据权利要求1-14所述的方法，其中所述酷脈部分存在于尿囊素上。
16. 根据权利要求1-15所述的方法，其中所述酷脈部分是结晶性的，且所述固体呈粉 末形式。
17. 根据权利要求15所述的方法，其中所述尿囊素是在水性液体中，且通过W过饱和 浓度存在而呈固体。
18. 根据权利要求15所述的方法，其中所述尿囊素是在水性液体中，且所述尿囊素处 于由 W下之一组成的浓度；（i)大于 0. 56%、（ii)0. 56-20%、（iii)5-10%、（iv) 1-2%、 (v)2-5%、（vi)20-50%。
19. 根据权利要求1所述的方法，其中通过过滤或沉降，将与所述固体结合的生物祀标 与所述样品分离。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中如下洗漆所述生物祀标；将它重新悬浮于清洁 缓冲液中，然后通过沉降或过滤回收所述固体。
21. 根据权利要求20所述的方法，其中所述酷脈是过饱和的尿囊素，且所述清洁缓冲 液包含处于饱和或接近饱和的尿囊素。
22. 根据权利要求20和21所述的方法，其中洗漆步骤可W重复一次或多次。
23. 根据权利要求19-22所述的方法，其中所述酷脈部分体现在尿囊素中，且通过溶解 所述尿囊素的至少一些，将所述生物祀标与所述尿囊素的至少一些分离。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中随后通过渗滤来浓缩所述生物祀标。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中再溶解所述生物祀标是与渗滤同时的。
26. 根据权利要求24和25所述的方法，其中随后通过额外的分级分离方法纯化所述生 物祀标。
27. 根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是液体或气体。
28. 根据权利要求1和27所述的方法，其中所述样品是含有细胞的细胞培养物收获物 或裂解的细胞。
29. 根据权利要求28所述的方法，其中所述细胞可W已经预先除去。
30. 根据权利要求27所述的方法，其中所述样品是部分地纯化的。
31. 根据权利要求27所述的方法，其中所述样品是高度纯化的。
32. 根据权利要求1和27所述的方法，其中所述样品是水性的。
33. 根据权利要求1和27所述的方法，其中所述样品是水。
34. 根据权利要求1和27所述的方法，其中所述样品是空气。
35. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标是要纯化的期望的生物祀标。
36. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标是要除去的不希望的生物祀标。
37. 根据权利要求1所述的方法，其中所述生物祀标可W包含超过一种要除去的生物 祀标。
38. 根据权利要求36和37所述的方法，其中W在0. 001-0. 1 %范围内的总体浓度，用 一种或多种具有相同净电荷的可溶性的有机多价离子处理所述样品。
39. 根据权利要求38所述的方法，其中所述可溶性的有机多价离子包括在 0. 001-0. 1%范围内的浓度的、选自依沙町晚、氯己定或辛酸的一种或多种。
40. 根据权利要求36和37所述的方法，其中在期望蛋白基本上不结合固定化的有机多 价离子的条件下，用在固体表面上的一种或多种具有相同或不同净电荷的固定化的有机多 价离子处理所述样品。
41. 根据权利要求36和37所述的方法，其中用可溶性的和固定化的有机多价离子处理 所述样品，且其中至少一种固定化的有机多价离子具有与所述可溶性的有机多价离子相反 的净电荷。
42. 根据权利要求41所述的方法，其中所述固定化的有机多价离子包括相反净电荷的 物质。
43. 根据权利要求39-42所述的方法，其中至少一种有机多价阳离子包含金属亲和官 能团。
44. 根据权利要求39-43所述的方法，其中用可溶性的有机多价离子的处理首先发生， 或与向可溶性的和固定化的有机多价离子的暴露基本上同时发生。
45. 根据权利要求1-44所述的方法，其中在选自W下的抑值实施所述方法；（i) 7、 (ii)6. 5-7. 5、（iii)6-8、（iv)5-9、（v)4-10、（vi)小于 4 和（vii)中间抑值。
46. 根据权利要求1-45所述的方法，其中在选自W下的电导率实施所述方法： (i)12-15mS/cm、（ii)5-20mS/cm、（iii)l-30mS/cm(iv)l-50mS/cm(v)l-100mS cm(vi)小于 ImS/cm、（vii)超过lOOmS/cm和（viii)中间电导率值。
47. 根据权利要求1-46所述的方法，其中将要与所述酷脈结合的所述生物祀标与所述 酷脈一起温育选自W下的时间段；（i) 1分钟、（ii) 5分钟、（iii) 10分钟、（iv) 15分钟、（V) 30 分钟、（vU60分钟、（vU)超过60分钟或（viU)中间时间段。
48. 根据权利要求1所述的方法，其中要与所述酷脈结合的所述生物祀标是进行处理 W将其灭活的病毒。
49. 根据权利要求48所述的方法，其中病毒灭活处理是选自W下的一种；暴露于（i) pH 3-5、（ii)pH 9-ll、（iii)依沙町晚、（iv)氯己定、（V)苯扎氯锭、（vi)表面活性剂、（vii) S (正了基）磯酸盐、（viii)亚甲藍、（ix)聚己締亚胺、（X)脈、（xi)脈、（xii)辛酸、（xiii) 氯化钢或（xiv)精氨酸。
50. 试剂盒，其用于方便地实施权利要求1-49所述的方法中的任一种。
【专利摘要】一种从样品选择性地分离生物靶标的方法，所述样品包括生物靶标材料或疑似包括生物靶标，所述方法包括以下步骤：(i)提供在其表面处包括酰脲部分的固体，(ii)使所述样品与所述固体接触，由此使所述样品中的大部分生物靶标结合所述酰脲部分，和(iii)将所述固体与所述样品分离。
【IPC分类】B01D15-00, G01N33-48, C12N7-02
【公开号】CN104619388
【申请号】CN201380038205
【发明人】彼得·加尼翁
【申请人】新加坡科技研究局
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2013年5月30日
【公告号】EP2854980A1, US20150184132, WO2013180655A1