本发明属于药物分析
技术领域：
，涉及检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的方法，更具体地涉及采用高效液相色谱检测(r)-1-(1-萘基)乙胺的手性纯度、异构体含量、ee值的方法。
背景技术：
：(r)-1-(1-萘基)乙胺是生产西那卡塞的重要中间体，其手性纯度、异构体含量、ee值直接影响西那卡塞的手性纯度、异构体含量、ee值，而西那卡塞的手性纯度直接影响该药物疗效，因此检测(r)-1-(1-萘基)乙胺的手性纯度、异构体含量对于控制(r)-1-(1-萘基)乙胺的质量是非常中药的。(r)-1-(1-萘基)乙胺的化学式为式ⅰ：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱检测法具有分离能力好、灵敏度高、分析速度快和操作方便等优点，广泛用于化工和医药等领域的分离。目前，还未发现(r)-1-(1-萘基)乙胺的异构体及手性纯度检测方法的相关报导，为了加强(r)-1-(1-萘基)乙胺的质量控制，以更好地控制制备的西那卡塞的药效，有必要研发一种简便、准确、快速、可靠、稳定的(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的高效液相检测方法。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种简便、准确、快速、可靠、稳定的(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的高效液相检测方法，该方法能使(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺实现有效分离，从而准确地检测(r)-1-(1-萘基)乙胺的手性纯度、异构体含量和ee值。本发明采用的技术方法是：一种检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺，置于同一容量瓶中，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配置成每毫升各含0.5mg的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取供试品适量，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配制成浓度为1mg/ml的溶液，到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，计算供试品溶液中手性异构体的含量；其中，流动相溶液为正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液，其中正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为820-950:30-48:50-65:1-4:1-5。供试品溶液制备具体为：取代检测的(r)-1-(1-萘基)乙胺，采用正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为820-950:30-48:50-65:1-4:1-5的正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液作为溶剂，配制成浓度大约为1mg/ml的溶液。色谱图中，出峰顺序为(s)-1-(1-萘基)乙胺，(r)-1-(1-萘基)乙胺，其分离度大于2.0，优选的分离度为2-3.5。测定过程，运行时间一般为20min左右，供试品溶液中如有与(s)-1-(1-萘基)乙胺峰保留时间一致的峰，按峰面积归一化法计算。优选的，步骤4)中，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量。优选的，步骤3)中，所述高效液相色谱条件为：色谱柱采用chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为36-43℃，以正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液为流动相，流动相流速为0.7-1.5ml/min，进样量为15-23ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为260-290nm。更优选的，步骤3)中，所述高效液相色谱条件为：色谱柱采用chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为40℃，以正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液为流动相，流动相流速为1ml/min，进样量为20ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为280nm。优选的，流动相中，正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为820-950:30-48:50-65:1-4:1-5。更优选的，流动相中，正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为900:40:60:2:2。优选的，其特征在于，chiralcelod-h色谱柱的尺寸为4.6mm*250mm*5μm。优选的，(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的结构为本发明的有益效果是：本发明采用高效液相色谱检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的手性纯度、异构体含量、ee值，该高效液相检测方法简便、准确、快速、可靠，稳定，能准确地检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的含量，从而能更好地控制(r)-1-(1-萘基)乙胺的质量和生产的制备的西那卡塞的药效。附图说明图1为实施例1中系统适应性溶液的高效液相色图谱，其中，出峰顺序为(s)-1-(1-萘基)乙胺、(r)-1-(1-萘基)乙胺，分离度应大于2.0；图2为实施例1中供试品溶液的色谱图。具体实施方式取3批同一生产规格指令生产的(r)-1-(1-萘基)乙胺产品，按照实施例1-3中的检测方法进行检测，采用面积归一化法进行手性纯度及对应异构体计算。实施例1一种检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺，置于同一容量瓶中，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配置成每毫升各含0.5mg的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取供试品适量，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配制成浓度为1mg/ml的溶液，到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为36℃，以正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液为流动相溶液，流动相流速为0.8ml/min，进样量为18ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为270nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量；其中，流动相溶液为正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液，其中正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为880:36:57:1:2。其中，图1为实施例1中系统适应性溶液的高效液相色图谱，其中，出峰顺序为s)-1-(1-萘基)乙胺、(r)-1-(1-萘基)乙胺，分离度大于2；图2为实施例1中供试品溶液的色谱图，表1为实施例1中供试品溶液的色谱图中的具体峰表，表2为供试品(r)-1-(1-萘基)乙胺溶液中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。表1实施例1中供试品溶液的色谱图中的峰表实施例2一种检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺，置于同一容量瓶中，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配置成每毫升各含0.5mg的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取供试品适量，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配制成浓度为1mg/ml的溶液，到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为40℃，以正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液为流动相溶液，流动相流速为1ml/min，进样量为20ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为280nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量；其中，流动相溶液为正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液，其中正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为900:40:60:2:2。其中所得结果如表2所示，表2为(r)-1-(1-萘基)乙胺中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。实施例3一种检测(r)-1-(1-萘基)乙胺手性异构体的方法，包括以下步骤：1)系统适用性溶液制备：分别称取适量的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺，置于同一容量瓶中，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配置成每毫升各含0.5mg的(r)-1-(1-萘基)乙胺和(s)-1-(1-萘基)乙胺的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液制备：称取供试品适量，加1ml乙醇溶解，再用流动相溶液配制成浓度为1mg/ml的溶液，到供试品溶液；3)进样：将系统适用性溶液、供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，按照设定的高效液相色谱条件测定，记录色谱图，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱采用尺寸为4.6mm*250mm*5μm的chiralcelod-h色谱柱，色谱柱的柱温为42℃，以正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液为流动相溶液，流动相流速为1.ml/m2in，进样量为22ul，采用紫外线检测器，检测波长设置为290nm；4)计算：根据系统适用性溶液的色谱图和供试品溶液的色谱图，采用面积归一化法计算供试品溶液中手性异构体的含量；其中，流动相溶液为正己烷、异丙醇、乙醇、二乙胺和三氟乙酸的混合液，其中正己烷:异丙醇:乙醇:二乙胺:三氟乙酸的体积比为920:43:62:3:3。其中所得结果如表2所示，表2为(r)-1-(1-萘基)乙胺中手性异构体的手性纯度、异构体含量和ee值。表2实施例1-3中所测定得到的手性纯度、异构体含量和ee值批号分离度理论板数手性纯度异构体含量ee值实施例12.500879599.16％0.84％98.32％实施例22.256830899.63％0.37％99.26％实施例32.388862699.440.56％98.88％该高效液相检测方法简便、准确、快速、可靠，稳定，重复性高，能有效分离(r)-1-(1-萘基)乙胺及(s)-1-(1-萘基)乙胺，更好地控制(r)-1-(1-萘基)乙胺的质量。当前第1页12