kg、0. 2mg/kg和0· 5mg/kg ;2, 6-二甲基吡嗪、2, 3, 5-三甲基吡嗪、2-乙基-6甲基 吡嗪、2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪和2, 3-二甲基-5-乙基吡嗪低中高水平加入量分别为0. 2mg/ kg、lmg/kg、2mg/kg，将加标酒样直接过膜后进液相色谱-质谱联用进行分析，8种啦嗪化合 物回收率结果见表5,回收率在82. 3%~107. 3%之间，重复性即RSD在1.4%~4. 2%之 间，回收率良好。由于质谱检测器的高专属性和高灵敏度，大大的简化了样品的前处理过 程，样品不需要提取转移等前处理直接过膜进样，从而保证了方法的准确性和精密度。实现 了简单、准确地同时测定白酒中8种吡嗪类化合物的目标。
[0075] 表5模拟酒样回收率及RSD (η = 18,每种酒度各加标6个）
[0076]
[0077] 4部分酱香型白酒中8种吡嗪化合物的含量测定
[0078] 采用建立的分析方法，对酱香型白酒进行分析，部分有代表性的酱香型酒样吡嗪 类化合物的含量见表6。
[0079] 表6部分酱香型白酒中吡嗪化合物的含量（mg/L)
[0083] 从这三十个酱香型白酒酒样测定数据我们可以看出，其中四甲基吡嗪在20个酒 中含量排在第一位，在7个酒中含量排在第二位，在3个酒中含量排在第三位；三甲基吡嗪 在17个酒中含量排在第二位，在7个酒中含量排在第一位，在6个酒中含量排在第三位； 2, 6-二甲基吡嗪在三个酒样中排在前三位的占29个，这和本发明最早气质全扫描初步定 量的结果是相吻合的，可以看出四甲基吡嗪和三甲基吡嗪含量大约都在几个毫克每升，对 于白酒中的吡嗪类物质来说含量算高的。
[0084] 5 结论
[0085] 上述实验结果表明：利用质谱检测器特有的专属性和高灵敏度，采用选择性更 高的苯基柱进行分离，通过流动相中添加三氟乙酸和梯度洗脱程序等关键技术，大大的简 化了样品前处理方法，建立了 APCI源的高效液相色谱-串联质谱法测定酱香型白酒中8 种啦嗪类物质含量的方法，色谱条件如下：色谱柱，Gemini 5 μ C6 - Phenyl 110A苯基柱 (250mmX4. 6mm);流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A :含0. 1 %甲酸和0. 1 %三氟 乙酸的水溶液；流动相B :甲醇；梯度洗脱流动相设置：按体积计算，Omin :含流动相A95%， 流动相B5 % ;20min :流动相A80 %，流动相B20 % ;25min :流动相A55 %，流动相B45 % ; 28min :流动相A95%，流动相B5% ;35min :流动相A95%，流动相B5%;流速：1. OmL/min ;柱 温：30°C ;进样量：10yL。
[0086] 质谱检测器质谱条件：APCI离子源（+)，2-甲基吡嗪的定量离子对为95. 1/68. 1 ; 2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪的定量离子对为109. 1/68. 1 ; 2, 3, 5-三甲基吡嗪和2-乙基-6-甲基吡嗪的定量离子对为123. 1/82. 0 ;2, 3, 5, 6-四甲基 吡嗪和2, 3-二甲基-5-乙基吡嗪的定量离子对为137. 0/80. 1。该方法对8种吡嗪化合物 测定的回收率为82. 3%~107. 3%，相对标准偏差1.4%~4. 4%，检出限为：0.01mg/L~ 0. 05mg/L。说明该方法准确度、灵敏度和重复性好，而且样品不需要前处理，只需过膜后直 接进样分析，操作简便快速。可望用于白酒中吡嗪类化合物的日常检测。
【附图说明】
[0087] 图1是酒样的总离子流图。
[0088] 图2是DAD检测器时lppm 8种吡嗪化合物标准品的最佳分离色谱图，出峰顺序 1-8号峰分别为2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪、2-甲基吡嗪、2, 3, 5-三甲基吡嗪、2, 3-二甲基吡嗪、 2, 6-二甲基吡嗪、2, 5-二甲基吡嗪2, 3-二甲基-5-乙基吡嗪、2-乙基-6甲基吡嗪。
[0089] 图3是DAD检测器时酒样进行测定的色谱图，2, 3-二甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪 出峰位置有很大的干扰峰。
[0090] 图4是FLD为检测器时，lppm 8种吡嗪化合物标准品的色谱图。
[0091] 图5是FLD为检测器时酒样进行测定的色谱图，2, 3-二甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡 嗪出峰位置的干扰峰相对紫外检测器来说有所减小，但是干扰仍无法消除。
[0092] 图6是C1S柱（Agilent)时8种吡嗪化合物的分离图，8种吡嗪化合物最多只能分 出7个峰。峰1为2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪、峰2和峰3包含了 2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二甲基 吡嗪和2, 6二甲基吡嗪三种物质、峰4为2-甲基吡嗪、峰5为2, 3, 5-三甲基吡嗪、峰6为 2, 3-二甲基-5乙基吡嗪、峰7为2-乙基-6-甲基吡嗪。
[0093] 图7是C1S柱（Phenomenex)时8种化合物的分离图，8种P比嗪化合物最多只能分 出7个峰。峰1为2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪、峰2为2-甲基吡嗪、峰3为2, 3, 5-三甲基吡嗪、 峰4和峰5包含了 2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二甲基吡嗪和2, 6二甲基吡嗪三种物质、峰6为 2, 3-二甲基-5乙基吡嗪、峰7为2-乙基-6-甲基吡嗪。
[0094] 图8是苯基柱（Phenomenex)时8种化合物的分离图，8种P比嗪化合物实现了分 离。峰1为2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪、峰2为2-甲基吡嗪、峰3为2, 3, 5-三甲基吡嗪、峰4为 2, 3-二甲基吡嗪、峰5为2, 6-二甲基吡嗪、峰6为2, 5二甲基吡嗪、峰7为2, 3-二甲基-5 乙基吡嗪、峰8为2-乙基-6-甲基吡嗪。
[0095] 图9是有机相-水（甲酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二甲基吡嗪和2, 6-二 甲基吡嗪三个化合物的分离图，其中三个化合物只有两个峰。
[0096] 图10是甲醇-水（0· 1%甲酸+0.05%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图。
[0097] 图11是甲醇-水（0. 1 %甲酸+0. 1 %三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :甲醇；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 20min:A70%，B30% ;25min:A60%，B40% ;30min:A95%，B5% ;35min:A95%，B5%。
[0098] 图12是甲醇-水（0. 1%甲酸+0. 1%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :甲醇；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 20min :A75%，B25% ;25min :A55%，B45% ;30min :A95%，B5% ;35min :A95%，B5%。
[0099] 图13是甲醇-水（0. 1%甲酸+0. 1%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :甲醇；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 20min:A80%，B20% ;25min:A55%，B45% ;28min:A95%，B5% ;35min:A95%，B5%。
[0100] 图14是乙腈-水（0. 1%甲酸+0. 1%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :乙腈；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 20min :A85%，B15% ;25min :A70%，B30% ;30min :A95%，B5% ;35min :A95%，B5%。
[0101] 图15是乙腈-水（0. 1%甲酸+0. 1%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :乙腈；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 5min ：A95%, B5% ；20min ：A90%, BIO% ；25min ：A70%, B30% ；28min ：A95%, B5% ；35min ： A95%，B5%〇
[0102] 图16是乙腈-水（0. 1%甲酸+0. 1%三氟乙酸）体系时2, 3-二甲基吡嗪、2, 5-二 甲基吡嗪和2, 6-二甲基吡嗪三个化合物的分离图，此时的梯度洗脱程序为：流动相A : 含0. 1%甲酸和0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :乙腈；梯度洗脱：0min :A95%，B5% ; 15min ：A95%,B5% ；20min ：A90%,B10% ；25min ：A70%,B30% ；28min ：A95%,B5% ；35min ： A95%，B5%。可以看出即使在5%有机相等度的条件下，三个同分异构体还是不能完全分 离。
[0103] 图17是8种吡嗪化合物的标样选择离子流图。
[0104] 图18是酒样中8种吡嗪化合物的选择离子流图。
[0105] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明；
【具体实施方式】
[0106] 实施例1 :
[0107] -种酱香型白酒中吡嗪类化合物的检测方法，包括下述步骤：
[0108] (1)精密称取2, 3, 5-三甲基吡嗪、2, 3, 5, 6-四甲基吡嗪、2, 3-二甲基-5-乙基吡 嗪、2-乙基-6甲基吡嗪、2, 6-二甲基吡嗪、2, 3-二甲吡嗪、2, 5-二甲基吡嗪和2-甲基吡嗪 对照品各l〇〇mg，用甲醇定容至10mL，配成10mg/mL的标准储备液，用纯水稀释为质量浓度 从低到高依次为 20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、500ppb、1000ppb、2000ppb、5000ppb 的吡嘆 类混合对照品溶液。以峰面积（Y)对质量浓度（X，ng/mL)进行线性回归，建立八种吡嗪类 化合物的校正曲线，用于外标法定量计算。
[0109] (2)将53度的酱香型白酒酒样摇匀后，取2mL过0. 22 μπι滤膜，供高效液相色 谱-串联质谱仪分析；高效液相色谱检测色谱条件：色谱柱：Gemini 5 μ C6 - Phenyl 110Α 苯基柱（250mmX4.6mm);流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A:含0. 1%甲酸和 0. 1%三氟乙酸的水溶液；流动相B :甲醇；梯度洗脱流动相设置：按体积计算，Omin :含流 动相A95%，流动相B5%;20min :流动相A80%，流动相B20%;25min :流动相A55%，流动相 B45% ;28min :流动相A95%，流动相B5% ;35min :流动相A95%，流动相B5% ;流速：1. Om