八角莲的快速繁殖方法_2

文档序号:9292601阅读:来源:国知局
] 第三、中药粉中含有八角莲植株形成过程中所需的多种微量元素和有益物质,中 药粉加入至植株再生培养基中,提高八角莲植株的抗病能力,使得后期移栽的成活率达 90 %以上,同时加入海泡石粉配合使用,吸收培养基中的有害物质,有助于培育优质的八角 莲植株;促茎培养基中加入了琼脂形成凝固状培养基,在此培养基中加入中药粉和海泡石 粉,在对八角莲幼苗供给营养和对培养基灭菌的同时,可以改善促茎培养基的通透性,使得 培育出的八角莲幼苗的茎更强壮;
[0035] 第四、通过对八角莲植株进一步的壮苗培养得到根茎更大,免疫力更强的八角莲 幼苗,再将八角莲幼苗进行移栽,使得移栽的八角莲幼苗更强壮,进一步保证八角莲移栽的 成活率,壮苗培养过程中根据八角莲根茎生长所需的环境和营养的不同,采用促根培养基 和促茎培养基的搭配,加速八角莲植株的生长速度,保证形成的八角莲幼苗快速成熟的营 养;
[0036] 第五、上下可拆卸的培养箱设计结构简单,操作简便,为八角莲幼苗同时提供两种 不同培养基,在温度较低时可以将保温套套装在下箱体外部,保证八角莲幼苗生长所需的 环境;
[0037] 第六、将八角莲幼苗连带促茎培养基和聚乳酸薄膜一起移栽至基质中,给八角莲 幼苗提供一定的适应期,避免环境突变对八角莲幼苗刺激过大而引起的死亡,提高八角莲 移栽的成活率,在八角莲适应基质环境后,将促茎培养基捣碎,促茎培养基仍然可以在八角 莲的后期生长过程中为其提供营养物质,聚乳酸薄膜为可降解的薄膜,覆盖在基质上部对 基质有保温保暖的作用,聚乳酸薄膜最终降解为八角莲所需的营养物质,提高了促茎培养 基和聚乳酸薄膜的经济使用价值。
【附图说明】
[0038] 图1为本发明中实施例中所述培养箱的结构示意图。
【具体实施方式】:
[0039] 〈实施例1>
[0040] -种八角莲的快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0041] 步骤一:制作八角莲的无菌外植体,选取八角莲的叶片或根或茎作为外植体,将所 述外植体置于烧杯中,用两性表面活性剂浸泡,并置于超声波中震荡l〇min,用去离子水冲 洗40min,在冲洗过程中用软毛刷轻轻洗刷所述外植体表面的污垢,然后用无菌滤纸吸干所 述外植体外部的水分后切成5mm 2的小块,得到所述无菌外植体,八角莲的外植体消毒首先 采用两性表面活性剂浸泡,甜菜碱性的两性表面活性剂具有很好的抗菌性,可以抑制部分 细菌和真菌的生长繁殖,同时两性表面活性剂中的烷基二甲基的甜菜碱对二价铜具有很好 的螯合能力,将二价铜从多酚氧化酶中螯合出来,使得多酚氧化酶失去氧化能力,减少八角 莲外植体的褐变;
[0042] 所述两性表面活性剂为:20重量份的N-长链烷氧基羧酸型甜菜碱,15重量份的 α -十六烷基三甲基甜菜碱,10重量份的N-烷基-β -亚氨基二丙酸,5重量份的十二烷基 二甲基甜菜碱和60重量份的无菌水的混合溶液;
[0043] 步骤二:利用诱导培养基培养所述无菌外植体,培养条件为温度20°C,pH值5. 6, 暗培养15天后得到胚性愈伤组织,所述诱导培养基包括MS、0. 5mg/L的2,4-D生长素、 1.0 mg/L的木醋液、0· 2mg/L的植物精油和6g/L的琼脂;
[0044] 步骤三:利用第一增殖培养基培养所述胚性愈伤组织,继代培养2代,培养条件 为温度20°C,pH值5. 6,暗培养15天后得到继代愈伤组织,所述第一增殖培养基包括MS、 0· 5mg/L的2,4-D生长素、20mg/L的水苏糖和6g/L的琼脂;
[0045] 步骤四:利用分化培养基培养所述继代愈伤组织,培养条件为温度20°C,pH值 5. 6,暗培养15天后得到体胚,所述分化培养基包括MS、0. 5mg/L的萘乙酸和6g/L的琼脂;
[0046] 步骤五:利用第二增殖培养基培养所述体胚,培养条件为温度20°C,pH值5. 6,暗 培养15天后得到继代体胚,所述第二增殖培养基包括MS、0. 5mg/L的萘乙酸;所述第二增殖 培养基位于转速为120r/min的摇床中,且所述第二增殖培养基每隔3~5天更换一次培养 基;
[0047] 步骤六:利用植株再生培养基培养所述继代体胚,培养条件为24°C,1000 Lux光照 条件下培养至植株形成,光照时间为每天l〇h,所述植株再生培养基包括MS、1.0 mg/L的中 药粉、1.0 mg/L的赤霉素3,0· 2mg/L的吲哚丁酸、0· 3mg/L的海泡石粉和6g/L的琼脂;
[0048] 所述中药粉的制作方法为:将重量份数为30份的八角莲、18份的风流果、23份的 灵香草、15份的融安金桔和10份的白僵蚕混合后煎煮30min,过滤得中药渣,经高压灭菌后 烘干,然后粉碎过200目筛网,即得所述中药粉,中药粉中含有八角莲植株形成过程中所需 的多种微量元素和有益物质,中药粉加入至植株再生培养基中,提高八角莲植株的抗病能 力,使得后期移栽的成活率达90%以上,同时加入海泡石粉配合使用,吸收培养基中的有害 物质,有助于培育优质的八角莲植株;
[0049] 步骤七、将所述八角莲植株移至壮苗培养基中培养15天,得到八角莲幼苗,所述 壮苗培养基包括促根培养基和促茎培养基,所述壮苗培养基放置于培养箱中,所述促茎培 养基位于所述促根培养基的上方,从八角莲植株的下方开始,将八角莲植株的1/5浸没于 所述促根培养基,将八角莲植株的1/3置于所述促茎培养基中;
[0050] 所述促茎培养基包括MS、1.0 mg/L的所述中药粉、1.0 mg/L的赤霉素 3,0. 2mg/L的 吲哚丁酸、〇. 3mg/L的海泡石粉和6g/L的琼脂;促茎培养基中加入了琼脂形成凝固状培养 基,在此培养基中加入中药粉和海泡石粉,在对八角莲幼苗供给营养和对培养基灭菌的同 时,可以改善促茎培养基的通透性,使得培育出的八角莲幼苗的茎更强壮;
[0051] 所述促根培养基包括MS、10mg/L的柚子皮提取液、0. 8mg/L的吲哚丁酸和1.0 mg/ L的木醋液;所述柚子皮的提取液的制作方法为:将柚子皮切碎,暴晒1天,然后放入沸水中 煮沸30min,趁热过滤,并向热的滤液中加入柚子皮质量0. 1倍的硼酸,将所述滤液真空减 压浓缩至6mg/L,设置真空度为0. 05MPa,减压浓缩时控制温度为55°C,即得所述柚子皮提 取液;
[0052] 步骤八、将所述八角莲幼苗移栽至基质中培养,将所述八角莲幼苗连带所述促茎 培养基和所述聚乳酸薄膜3 -起移栽至基质中,使得所述聚乳酸薄膜3的下表面紧贴所述 基质上表面,所述聚乳酸薄膜3的上表面承载所述促茎培养基,将八角莲幼苗连带促茎培 养基和聚乳酸薄膜3-起移栽至基质中,给八角莲幼苗提供一定的适应期,避免环境突变 对八角莲幼苗刺激过大而引起的死亡,提高八角莲移栽的成活率,所述八角莲幼苗在基质 中培养8天后,将所述促茎培养基捣碎,在八角莲适应基质环境后,将促茎培养基捣碎,促 茎培养基仍然可以在八角莲的后期生长过程中为其提供营养物质,调整所述八角莲幼苗在 基质中的间距,使得每相邻的两个所述八角莲幼苗间距为30cm,继续培养至八角莲成熟; 聚乳酸薄膜3为可降解的薄膜,覆盖在基质上部对基质有保温保暖的作用,聚乳酸薄膜3最 终降解为八角莲所需的营养物质,提高了促茎培养基和聚乳酸薄膜3的经济使用价值;
[0053] 所述基质从下到上由草原灰,壤土,珍珠岩,木肩,松针叶按重量比为 1 : 8 : 2 : 4 : 3 构成。
[0054] 如图1所示,其中,所述培养箱包括上箱体1和下箱体2,所述上箱体1与所述下箱 体2可拆卸连接,所述上箱体1为上下贯通的筒体,所述上箱体1的下平面设置有与其下平 面尺寸一致的厚度为0. 01毫米的聚乳酸薄膜3,所述聚乳酸薄膜3上开有多个通孔4, 一株 所述八角莲植株穿过一个所述通孔4 ;
[0055] 所述下箱体2为下部封闭上部敞开的筒体,所述下箱体2外部套设有可拆卸的保 温套5,所述促茎培养基放置在所述聚乳酸薄膜3上,所述促根培养基放置在所述下箱体2 内;
[0056] 上下可拆卸的培养箱设计结构简单,操作简便,为八角莲幼苗同时提供两种不同 培养基,在温度较低时可以将保温套5套装在下箱体2外部,保证八角莲幼苗生长所需的环 境。
[0057] 〈实施例2>
[0058] -种八角莲的快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0059] 步骤一:制作八角莲的无菌外植体,选取八角莲的叶片或根或茎作为外植体,将所 述外植体置于烧杯中,用两性表面活性剂浸泡,并置于超声波中震荡20min,用去离子水冲 洗50min,在冲洗过程中用软毛刷轻轻洗刷所述外植体表面的污垢,然后用无菌滤纸吸干所 述外植体外部的水分后切成5mm 2的小块,得到所述无菌外植体,八角莲的外植体消毒首先 采用两性表面活性剂浸泡,甜菜碱性的两性表面活性剂具有很好的抗菌性,可以抑制部分 细菌和真菌的生长繁殖,同时两性表面活性剂中的烷基二甲基的甜菜碱对二价铜具有很好 的螯合能力,将二价铜从多酚氧化酶中螯合出来,使得多酚氧化酶失去氧化能力,减少八角 莲外植体的褐变;
[0060] 所述两性表面活性剂为:25重量份的N-长链烷氧基羧酸型甜菜碱,18重量份的 α -十六烷基三甲基甜菜碱,13重量份的N-烷基-β -亚氨基二丙酸,10重量份的十二烷基 二甲基甜菜碱和70重量份的无菌水的混合溶液;
[0061] 步骤二:利用诱导培养基培养所述无菌外植体,培养条件为温度24°C,pH值6. 0, 暗培养20天后得到胚性愈伤组织,所述诱导培养基包括MS、2. Omg/L的2,4-D生长素、 1. 5mg/L的木醋液、0· 5mg/L的植物精油和6g/L的琼脂;
[0062] 步骤三:利用第一增殖培养基培养所述胚性愈伤组织,继代培养3代,培养条件 为温度24°C,pH值6. 0,暗培养20天后得到继代愈伤组织,所述第一增殖培养基包括MS、 2. Omg/L的2,4-D生长素、25mg/L的水苏糖和6g/L的琼脂;
[0063] 步骤四:利用分化培养基培养所述继代愈伤组织,培养条件为温度24°C,pH值 6. 0,暗培养20天后得到体胚,
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