专利名称：：哲罗鲑线粒体全基因组序列及其扩增引物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种线粒体全基因组序列及其扩增引物。
背景技术：
：线粒体是细胞内一个重要的细胞器，它具有自身的一套基因组，在鱼类中线粒体基因组由于其母系遗传的特点，复制过程中缺乏修复机制导致序列的累积变异速率远远大于核基因组的变异速率等特点，使其作为保护生物学和进化生物学研究的一种非常有效的工具。同时由于线粒体在细胞内起到产能及能量传递的重要作用，其基因组中的碱基突变或缺失能造成重大线粒体疾病(如人类的线粒体肌肉病及线粒体脑肌肉病等)，且其基因组的多态性与物种的经济性状相关，因此对线粒体基因组的研究十分重要。目前鲑科鱼类中已有13个物种对线粒体基因组进行了测序，而哲罗鲑(Huchotaimen)的线粒体基因组序列到目前为止仍未测定。哲罗鲑是我国土著的珍稀名贵的鱼类，是鲑科鱼类中体型最大。由于环境恶化及过度捕捞等因素，其目前的资源量已十分稀少、濒临灭绝；因此，1998年哲罗鲑被列入《中国濒危动物红皮书(鱼类)》，2004年被列入《中国物种红色名录》。哲罗鲑同时也是一种优良的冷水性养殖鱼类，其具有生长快速、抗逆性强的特点，目前已成功进行了野生哲罗鲑的人工驯养，并在此基础上成功开展了规模化繁殖和养殖。但由于其自残严重、不耐高温、不耐低氧及在北方地区低温季节(如冬春季水文在1(TC以下季节)生长缓慢等特性影响了生产的成本和产量。因此，确定哲罗鲑线粒体全基因组序列可以在哲罗鲑的保护遗传学、进化遗传学及优良养殖品种的分子标记辅助选择上起到重要作用。
发明内容本发明的目的是确定哲罗鲑线粒体全基因组序列，为哲罗鲑的保护遗传学、进化遗传学及优良养殖品种的分子标记辅助选择提供物质基础。哲罗鲑线粒体全基因组序列如SEQIDNO:1所示。哲罗鲑线粒体全基因组序列的扩增引物为33对；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第1对的正向引物为5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物为5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第2对的正向引物为5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第3对的正向引物为5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第4对的正向引物为5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物为5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第5对的正向引物为5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物为5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第6对的正向引物为5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物为5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3'哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第7对的正5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物为5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第8对的正5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物为5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3'哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第9对的正反向引物为5'-GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3';5，TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-哲罗鲑线粒体5'-CCCTTTGACCTCACAGAAGG-哲罗鲑线粒体5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-哲罗鲑线粒体5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-哲罗鲑线粒体5，-CACCAGCTGTGACTGCGATA-哲罗鲑线粒体5'-CCCATGCCTTCGTTATGATT-哲罗鲑线粒体5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG-哲罗鲑线粒体5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-哲罗鲑线粒体全5，-AATGGCACATCCCTCACAAC-哲罗鲑线粒体5'-GACGTCCTTCACTCCTGAGC-哲罗鲑线粒体5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-哲罗鲑线粒体5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-哲罗鲑线粒体5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT-哲罗鲑线粒体5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-哲罗鲑线粒体5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-哲罗鲑线粒体5，-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC-哲罗鲑线粒体3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全基因组序列反向引物为5'-基因组序列反向引物为5'-基因组序列反向引物为5'-基因组序列反向引物为5'-基因组序列反向引物为5'-基因组序列反向引物为5'-基因组序列扩增引物第10对的CTGGCAAAGGTGAGGACTGT-3:扩增引物第11对的GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT-3:扩增引物第12对的TGTGGGATAAAGTCCTGCAA-3:扩增引物第13对的TCAGGGGCTCCGATTATTAG-3:扩增引物第14对的TGGGCTCAAACGATAAATCC-3:扩增引物第15对的CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3'向向向向向向向向向向正向引正向引正向引正向引正向引正向引正向引扩增引物第16对的3'，反向引物为5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA-3';基因组序列扩增引物第17对的正向反向引物为5'-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';基因组序列扩增引物第18对的正向反向引物为5'-TGCTGGGTAAATCGGTTGAT-3';基因组序列扩增引物第19对的正向引反向引物为5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG-3'基因组序列扩增引物第20对的反向引物为5'-GATTGTAAATGGGGCTTCGT-3基因组序列扩增引物第21对的反向引物为5'-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA-3基因组序列扩增引物第22对的反向引物为5'-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG-3基因组序列扩增引物第23对的反向引物为5'-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3基因组序列扩增引物第24对的反向引物为5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG-3'基因组序列扩增引物第25对的正正向引向向向向向正向引正向引正向引正向引向引物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物为5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3'5哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第26对的正向引物为5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物为5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第27对的正向引物为5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物为5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第28对的正向引物为5'-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物为5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第29对的正向引物为5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物为5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第30对的正向引物为5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物为5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第31对的正向引物为5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物为5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第32对的正向引物为5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物为5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第33对的正向引物为5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物为5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。本发明确定了哲罗鲑线粒体全基因组序列，为哲罗鲑的保护遗传学、进化遗传学及优良养殖品种的分子标记辅助选择提供物质基础。哲罗鲑线粒体全基因组序列共16797bp，含有22个tRNA基因，l个12SrRNA基因，l个16SrRNA基因和13个蛋白编码基因。本发明所设计引物的扩增产物应覆盖整个线粒体全基因组，每对引物的扩增产物长度在5001300bp，且相邻两对引物获得的序列重叠100300bp。图1是具体实施方式三提取的哲罗鲑线粒体基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图，图2是具体实施方式三哲罗鲑线粒体基因组DNA的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图。具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式哲罗鲑线粒体全基因组序列如SEQIDNO:1所示。哲罗鲑线粒体全基因组序列共16797bp，含有22个tRNA基因，1个12SrRNA基因，1个16SrRNA基因和13个蛋白编码基因，哲罗鲑线粒体中的基因及其他结构相应序列位置如表1所示。表1基因/部件序列位置bp序列大小编码链起始密码子终止密码子tRNA-Phe基因16868bp6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>具体实施方式二本实施方式哲罗鲑线粒体全基因组序列的扩增引物为33对；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第1对的正向引物为5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物为5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第2对的正向引物为5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第3对的正向引物为5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第4对的正向引物为5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物为5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第5对的正向引物为5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物为5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第6对的正向5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物为5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第7对的正向5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物为5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第8对的正5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物为5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3'哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第9对的正5，-TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-3，，反向引物为5，GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第10对的5'-CCCTTTGACCTCACAGAAGG-3'，反向引物为5'-CTGGCAAAGGTGAGGACTGT—3哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第11对的5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-3'，反向引物为5'-GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT—3哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第12对的5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-3'，反向引物为5'-TGTGGGATAAAGTCCTGCAA—3哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第13对的5'-CACCAGCTGTGACTGCGATA-3'，反向引物为5'-TCAGGGGCTCCGATTATTAG—3哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第14对的5'CCCATGCCTTCGTTATGATT-3'，反向引物为5'-TGGGCTCAAACGATAAATCC—3'哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第15对的反向引物为5'-CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3'基因组序列扩增引物第16对的3'，反向引物为5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA-3';基因组序列扩增引物第17对的正向反向引物为5'基因组序列反向引物为5'基因组序列反向引物为5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG-3'基因组序列反向引物为5'基因组序列反向引物为5'基因组序列反向引物为5'基因组序列反向引物为5'基因组序列反向引物为5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG-3'5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG-3，，哲罗鲑线粒体全5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-哲罗鲑线粒体全5，-AATGGCACATCCCTCACAAC哲罗鲑线粒体5，-GACGTCCTTCACTCCTGAGC哲罗鲑线粒体5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC哲罗鲑线粒体5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC哲罗鲑线粒体5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT哲罗鲑线粒体5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT哲罗鲑线粒体5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT哲罗鲑线粒体5'-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC向向向向向向向向向正向引正向引正向引正向引正向引正向引-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，全-3，，.全-3，，.正向引-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';扩增引物第18对的正向-TGCTGGGTAAATCGGTTGAT-3';扩增引物第19对的正向引扩增引物第20对的-GATTGTAAATGGGGCTTCGT-3:扩增引物第21对的-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA-3:扩增引物第22对的-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG-3:扩增引物第23对的-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3:扩增引物第24对的正向引向向向向向正向引正向引正向引正向引物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为物为哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第25对的正向引物为5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物为5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第26对的正向引物为5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物为5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第27对的正向引物为5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物为5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第28对的正向引物为5'-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物为5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第29对的正向引物为5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物为5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第30对的正向引物为5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物为5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第31对的正向引物为5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物为5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第32对的正向引物为5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物为5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第33对的正向引物为5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物为5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。本实施方式所设计引物的扩增产物应覆盖整个线粒体全基因组，每对引物的扩增产物长度在5001300bp，且相邻两对引物获得的序列重叠100300bp。具体实施方式三本实施方式利用具体实施方式二中的33对引物按以下步骤扩增获得哲罗鲑线粒体全基因组序列—、提取哲罗鲑的线粒体基因组DNAA、取200mg新鲜或-2(TC保存的哲罗鲑的肌肉、肝脏用无菌水洗净研磨，然后提取线粒体(线粒体提取操作步骤及参数参见商业化线粒体提取试剂盒使用操作手册)；B、向含线粒体悬浮液的离心管中加入质量浓度为20%的SDS，使SDS的终浓度达到0.8%，再37t:水浴15min;C、在离心管中加入与离心管中液体等体积的酚氯仿抽提，轻轻摇匀至乳白色，冰上静止10min;D、在4t:条件下10000g离心10min，取上清液移至另一离心管中；E、重复步骤C和D12次(去除蛋白质)，加入离心管中液体总体积0.2倍的醋酸钠(浓度为lmol/L)，再加入原离心管中液体总体积2倍的温度为-20°C的无水乙醇，置于_201:环境中放置4h;F、在fC条件下15000g离心30min，弃去上清液，用上清液2倍体积的体积浓度为75%乙醇洗涤两次；G、加入50iiL0.1XTE溶液溶解线粒体DNA;二、用具体实施方式二中的33对引物对哲罗鲑线粒体基因组DNA进行PCR扩增33对引物PCR扩增反应体系都为25iiL，均由3.5iiL浓度为20ng/iiL的哲罗鲑线粒体基因组DNA、2.5iiL高保真TaqDNA聚合酶商业包装中的10XBuffer、1.5yL浓度为25mmol/L的MgCl2、2iiL浓度为2.5mmol/L的dNTP、1.6iiL浓度为10pmo1/iiL正向引物、1.6iiL浓度为10pmol/iiL反向引物、0.3iiL浓度为5U/iiL高保真TaqDNA聚合酶和余量无菌去离子水组成；扩增反应程序为94t:预变性5min，循环设置为94。C变性30s、退火30s、72。C延伸30s60s，72。C延伸10min;其中哲罗鲑线粒体全基因组序列第1对扩增引物的退火温度为56t:，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第2对扩增引物的退火温度为54t:，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第3对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第4对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第5对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第6对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第7对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第8对扩增引物的退火温度为54t:，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第9对扩增引物的退火温度为5(TC，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第10对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第11对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第12对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第13对扩增引物的退火温度为53°C，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第14对扩增引物的退火温度为53°C，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第15对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第16对扩增引物的退火温度为5(TC，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第17对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第18对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第19对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第20对扩增引物的退火温度为54t:，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第21对扩增引物的退火温度为50°C，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第22对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第23对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第24对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第25对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第26对扩增引物的退火温度为53t:，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第27对扩增引物的退火温度为5(TC，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第28对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第29对扩增引物的退火温度为5(TC，循环38次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第30对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第31对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第32对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；哲罗鲑线粒体全基因组序列第33对扩增引物的退火温度为53t:，循环35次；三、对获得的PCR扩增产物进行纯化回收，并进行序列测定PCR扩增产物的纯化回收和测序交由上海生物工程技术有限公司进行商业操作，PCR扩增产物序列测定的测序引物为步骤二中PCR扩增的正向引物或反向引物其中第1对引物的扩增产物用第1对中的正向引物测序；第2对引物的扩增产物用第2对中的正向引物测序；第3对引物的扩增产物用第3对中的正向引物测序；第4对引物的扩增产物用第4对中的正向引物测序；第5对引物的扩增产物用第5对中的正向引物测序；第6对引物的扩增产物用第6对中的正向引物测序；第7对引物的扩增产物用第7对中的正向引物测序；第8对引物的扩增产物用第8对中的正向引物测序；第9对引物的扩增产物用第9对中的正向引物测序；第IO对引物的扩增产物用第IO对中的正向引物测序；第ll对引物的扩增产物用第ll对中的正向引物测序；第12对引物的扩增产物用第12对中的反向引物测序；第13对引物的扩增产物用第13对中的正向引物测序滞14对引物的扩增产物用第14对中的正向引物测序；第15对引物的扩增产物用第15对中的正向引物测序；第16对引物的扩增产物用第16对中的正向引物测序；第17对引物的扩增产物用第17对中的正向引物测序；第18对引物的扩增产物用第18对中的正向引物测序；第19对引物的扩增产物用第19对中的正向引物测序；第20对引物的扩增产物用第20对中的反向引物测序；第21对引物的扩增产物用第21对中的正向引物测序；第22对引物的扩增产物用第22对中的正向引物测序；第23对引物的扩增产物用第23对中的反向引物测序；第24对引物的扩增产物用第24对中的正向引物测序；第25对引物的扩增产物用第25对中的正向引物测序；第26对引物的扩增产物用第26对中的正向引物测序；第27对引物的扩增产物用第27对中的正向引物测序；第28对引物的扩增产物用第28对中的正向引物测序；第29对引物的扩增产物用第29对中的正向引物测序；第30对引物的扩增产物用第30对中的正向引物测序；第31对引物的扩增产物用第31对中的正向引物测序；第32对引物的扩增产物用第32对中的正向引物测序；第33对引物的扩增产物用第33对中的正向引物测序；四、采用序列拼接软件对获得的序列进行质量控制，并根据各条序列中的重叠部分进行全基因组序列拼接获得的PCR产物序列用序列拼接软件Staden进行测序峰的读取及质量控制，并进行全基因组序列拼接；在读取测序峰和序列拼接时采用置信度控制序列质量，去除平均置信度小于15以下的序列；五、采用序列分析软件对获得的全基因组序列进行结构、功能分析，并对序列进行注释采用tRNAScan-SE软件确定哲罗鲑线粒体全基因组序列的21个tRNA基因，第22个tRNA基因tRNA-Ser(AGY)采用Blast软件与其他鲑科鱼类线粒体全基因序列比对确定；采用ORFFinder、GetORF和Sequin软件确定哲罗鲑线粒体全基因组序列的13个蛋白质编码基因；采用Blast软件与其他鲑科鱼类线粒体全基因序列比对确定12SrRNA、16SrRNA基因、线粒体基因组复制转录控制区CR(ControlRegion)和线粒体基因组轻链复制起始区0L(0riginofR印lication)。本实施方式提取的哲罗鲑线粒体基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图如图1所示，其中图1中"M"泳道标样为Marker,第二泳道标样为基因组DNA，"mt"泳道标样为哲罗鲑线粒体基因组DNA。本实施方式哲罗鲑线粒体基因组DNA的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图如图2所示，其中图2中"M"泳道标样为Marker,第"313"泳道标样为第3对至第13对哲罗鲑线粒体基因组扩增引物，每对引物扩增用两个哲罗鲑样品，第一个样本H表示哲罗鲑红花尔基群体野生样品，BH表示哲罗鲑北洪群体野生样品。序列表〈110〉中国水产科学研究院黑龙江水产研究所〈120〉哲罗鲑线粒体全基因组序列及其扩增引物〈160>67〈210>1〈211>1679712〈212>DNA〈213〉哲罗鲑(Huchotaimen)〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列。〈400〉1GCTAGCGTAGCTTAACTAAAGCATAACACTGAAGCTGTTAAGATGGACCCTAGAAAGTCC60CGAAGGCACAAAGGCTTGGTCCTGACTTTACCATCAGCTTTAACTGAACTTACACATGCA120AGTCTCCGCATTCCTGTGAGGATGCCCTTAATCCCCTGCCCGGGGACGAGGAGCCGGCAT180CAGGCACGCCCCGGCAGCCCAAGACGCCTTGCTAAGCCACACCCCCAAGGAAACTCAGCA240GTGATAGACATTAAGCCATAAGCGAAAGCTTGACTTAGTTAAGGTTAAGAGGGCCGGTAA300AACTCGTGCCAGCCACCGCGGTTATACGAGAGGCCCTAGTTGATGGTTACCGGCGTAAAG360AGTGGTTATGAAAAAGTATTTAATAAAGCCGAACACCCCCTTAGCCGTCATACGCACCTG420GGGGCACGAAGACCTACTGCGAAAGCAGCTTTAATTATACCTGAACCCACGACAGCTACG■ACACAAACTGGGATTAGATACCCCACTATGCCTAGCCGTAAACTTTGATAAAAACATACA540ACTGATATCCGCCAGGGAACTACAAGCGCCAGCTTAAAACCCAAAGGACTTGGCGGTGCC600TCAGACCCACCTAGAGGAGCCTGTTCTAGAACCGATAACCCCCGTTCAACCTCACCACCT660CTTGTTTTCCCCGCCTATATACCACCGTCGTCAGCTTACCCTGTGAAGGCCTTATAGTAA720GCAAAATGGGCAAAACCCAAAACGTCAGGTCGAGGTGTAGCGCATGGGGTGGGAAGAAAT780GGGCTACATTCTCTAAATTAGAGCACTACGAACCACGCTGTGAAACCAGCGTCCGAAGGT840GGATTTAGCAGTAAACAGAAAACAGAGAGTTCTCTTGAAACTGGCTCTGAGGCGCGCACA■CACCGCCCGTCACTCTCCCCGAGTTCAATTTATCCTTCTAACTAAGAAGTTAACCGAACA960AAGGGGAGGCMGTCGTAACATGGTMGTGTACCGGAAGGTGCACTTGGAATAACCAGAG1020TGTAGCTAAGATAGAMAGCACCTCCCTTACACCGAGAAGACATCCGTGCAATTCGGGTC1080ACCCTGAGCTGACTAGCTAGCCCACACCTTGGTCTAACACCACAACATACATACCCCTM1140AAGACTTAGAACTAAGTTAACAAACCATTTTTCCACCTTAGTACGGGCGACGGAAMGGA1200GATAATCGAGCAACAGAGAAAGTACCGCAAGGGAMGCTGAAAGAGAACTGAAACAACCC1260ATTTAAGCCTAGAAAAGCAGAGATTMATCTCGTACCTTTTGCATCATGATTTAGCCAGC1320AMCCTGGGCMAGAGAACTTTAGTTCAGGCCCCCGAAACTAGACGAGCTACTCCGGGAC1380AGCCTATTATAGGGCCAACCCGTCTCTGTGGCAAMGAGTGGGACGAGCCCCGAGTAGAG1440GTGATAMCCTATCGAGCCTAGTTATAGCTGGTTGCTTAGGAAATGMTAGMGTTCAGC1500CCCCTGGCCTTCTTAGGACCTCAAGGTAAAACTAACCTTGTCCCMAGAAACCMGGGAG1560TTAGTCMAGGAGGTACAGCTCCTTTGAACAAGGACACAACCTTMCAGGCGGCTAAGGA1620TCATAATTACTAAGGTAACCTGTTACAGTGGGCCTAAGAGCAGCCACCTGCATAGAAAGC1680GTTAAAGCTCAGACAGATATMGCCTCTTATCCTGATAAGAAATCCTACCCCCTAACCGT1740ACTAAGCCATTCCATGCCCCCATGGMGAGATTATGCTAGAATGAGTAATAAGAGGGMT1800AACCCTCTCCCAGCACATGTGTAAGTCGGACCGGACCCCCCGCCGACAAATAACGAACCC1860AAGCCAAGAGGGAACTGTAGGCCAGMTAAACACCAAGAAGAACCTACACCAATAAATCG1920TTAACCCCACACAGGAGTGCCCACAGGGAAAGACCCAAAGGAAGAGAAGGAACTCGGCM1980ACACAAGCCTCGCCTGTTTACCAAAMCATCGCCTCTTGCAAATCAAAGCATAAGAGGTC2040CCGCCTGCCCTGTGACTATGGGTTTMCGGCCGCGGTATTTTGACCGTGCGAAGGTAGCG2100CMTCACTTGTCTTTTAAATGAAGACCTGTATGAATGGCATCACGAGGGCTTAGCTGTCT2160CCTCTTCCAAGTCAATGAAATTGATCTGCCCGTGCAGAAGCGGACATAAGCACATAAGAC2220GAGAAGACCCTATGGAGCTTTAGACACCAGGCAGATCACGTCAAGCAACCTTGMCTAAC2280AAGTAAMACGCAGTGACCCCTAGCCCATATGTCTTTGGTTGGGGCGACCGCGGGGGAAA2340ACAAAGCCCCCATGTGGACTGGGGGCACTGCCCCCCACAGCCAAGAGCTACAACTCTAAG2400CACCAGMTTTCTGACCAAAMTGATCCGGCGAACGCCGATCAACGGACCGAGTTACCCT2460AGGGATMCAGCGCAATCCTCTCCCAGAGTCCCTATCGACGAGGGGGTTTACGACCTCGA2520TGTTGGATCAGGACATCCTAATGGTGCAGCCGCTATTAAGGGTTCGTTTGTTCMCGATT2580AMGTCCTACGTGATCTGAGTTCAGACCGGAGTAATCCAGGTCAGTTTCTATCTATGAAG2640TGATGTTTCCTAGTACGAAAGGACCGGAAAGAAGGGGCCCATGCTTTAGGCACGCCCCAC2700CCCCACCTGATGAAGGCAACTAAAACAGACAAGGGGGCACACCAAGATTGTGCCTAAAAG2760AACGGCGCGCTAAGGTGGCAGAGCCCGGTAATTGCGAGAGGCCTMGCCCTCTTTTTCAG2820AGGTTCMGTCCTCTCCTTAGCTATGACTACCCTTATTACCCATGTTATTAACCCACTCG2880TATACATTGTGCCTGTTCTCCTAGCAGTTGCTTTCCTCACCCTCCTCGAACGAMAGTTC2940TCGGGTACATGCAACTTCGAAAGGGACCTAATATTGTTGGTCCATATGGATTACTTCAAC3000CCATTGCAGACGGCCTTAAGCTATTTATTAAAGAACCAGTTCGACCATCCACCTCTTCCC3060CCTTTCTATTTCTCGCCACACCAATACTTGCCTTMCACTTGCACTCACCTTATGAGCCC3120CMTACCAATCCCCTACCCCGTCACAGACCTCAACCTAGGAATACTATTTATTCTAGCAC3180TATCAAGCCTCGCGGTATACTCAATCCTAGGGTCAGGATGAGCATCAAATTCCMATATG3240CATTAATCGGAGCCCTACGAGCAGTAGCCCAMCTATTTCCTATGMGTCAGCCTAGGAC3300TMTCCTACTMGCGTGATTATCTTCACAGGAGGATACACACTACAAACATTTMCATCA3360CCCAAGMAGTATCTGACTACTCATACCAGCCTGACCCCTTGCCGCCATATGATACATCT3420CMCCCTAGCTGAGACAAACCGTGCACCATTCGACCTAACAGAAGGAGAATCAGAACTGG3480TATCCGGCTTTAATGTAGAATATGCTGGAGGACCCTTCGCCCTTTTTTTCTTAGCCGAAT3540ACGCTAATATCCTTCTAATAMTACACTCTCAGCCATCCTATTCCTAGGCGCATCCCATA3600TCCCAGCTCTCCCTGMCTAACAGCCCTTAATCTCATAACAAAAGCTGCCCTACTCTCCG3660TTGTATTCTTATGAGTACGAGCATCCTACCCCCGATTTCGGTACGACCAACTTATACACT3720TAGTTTGAAAMGCTTCCTACCTCTMCTTTAGCCCTTGTCCTATGACACCTTGCACTCC3780CTATTGCTATAGCAGGCCTCCCTCCCCAACTTTAATTTCACAAGGAATTGTGCCTGAATG3840CTTAAGGACCACCTTGATAGCGTGGCTGATAGGGGTTCAAGTCCCCTCAATTCTAGAGAG3900AAGGGGCTCGMCCCATCCTCAAGAGATCAAAACTCTTGGTGCTTCCACTACACCACTTT3960CTAGTAMGTCAGCTMTTAAGCTTTTGGGCCCATACCCCAAATATGTTGGTTMAATCC4020TTCCTTTACTMTGAACCCCTATGTACTCACTATTTTACTTTCCAGCCTAGGTCTAGGCA4080CAGTCCTCACCTTTGCCAGCTCCCACTGACTTCTTGCATGAATAGGCCTAGAAATTAATA4140CCCTTGCTATTATTCCAATCATAGCACGACAGCACCACCCCCGAGCAATTGAAGCTACM4200CCAAGTACTTTTTAACACAAGCAACTGCCGCAGCMTGATCCTCTTTGCCAGCACTACCA4260ATGCTTGACTGGTTGGGGAATGAGAMTCCACCAACTATCCCACCCCTTAGCAACTACM4320CTGTAATACTGGCCTTAGCACTTAAGCTCGGGCTAGCCCCCGTTCATTTCTGATTACCAG4380AAGTCCTTCAAGGGATTGAACTCACCACAGGGTTMTCCTTTCAACCTGACAAMACTCG4440CACCCTTTGCACTTATAATTCAAGTAGCCCCAACTATCAACTCTTCTCTACTTATTACAC4500TAGGTCTTCTATCAACTCTAGTGGGGGGTTGAGGAGGACTTAACCAAACCCAGCTACGTA4560AMTTTTAGCATACTCTTCAATTGCCCACCTGG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AGGAATTATCAATTAAAACAAACCTAAACTAAGTGTTAATTAAAGCTACCTACCCATGAACGTATACACCAGCAGCCAAACAGTACCAAATGCTACAACCACCTCCTCCTTTCTTTTCCACTCACACTTATTCGTCTCCATCCGTTATTAACCTCAAACTGCCGCTCTCCAACAAGCAATTTCTTCCCTGATCGCCAGCCTCCGCTCACCTACCTCACTCGCTCGAAGAGAAAAGCACCCCCGCTCGTGTGTTTCATACCACCACATACCGCTGCTGAATGACAAAAAAGAACCCCAAGG1422014280143401440014460145201458014640147001476014820148801494015000150601512015180152401530015360CAGCAAAATAGAAATAAAGATGAAAAACCACCCCCTCCTAAGTTTGATGAACTTTTCCTATATCTGCCGGTttCttcttTATATAAGGAGTGTAGGCTATCCTCCTATCCCTCTGTAGACTATCGCAGCTAGCAGGAATTCCTGCTCGGGTCTCCTTGGATAAACCCGAGGGGTGGAGTACACCTCTAAAAGGAGCAGGACACAAGATAACCGTTGTTATAAAATTGCTAAATTTTGGGTGCCATACATTGATGTTAGTTATCTGTATTTACTTGAAATAGTCCTTCCATGCTGTCCCCTAATGCTACTCGCTACAGTCCAACTCCGACGTTTGTGGCCAGATCCAGACATGGTACTTCTCTCGCCCTCTCAACGTGGACTTAGATGCAAGTCATAATTCTCAACTACAAATGACGCACTCTCTCCTAGGACACCTCTGAACGGCTGACTATATACATATTTGGAGTAGTGAGGACAAATATGTTGGGGGTAACACGATTTCCACCTTCTCTGATAAAATTACTATTAGGATTTTACACCTGTTTGCCTATGTTCTCCATTAACCTTCCGCAGCCACAAGCTGCTCGGACGAACCTAATGAGTTGACCTTCTTATGTCTACATTTCAACAAATTCGTAATCGCCCGAGGAACTATTACTTATCCTTCTGACGCCCTAGTATTTCGCCTTCATTTTTACACCTCATTTCACCCTAACATCTCGCCAACCCGTGCAATTCTACCTCGTCCTTACCACTGACCCCCTAAAACCTTTAACCGAAGCTAACCTCCCCAGCACCCTGCCACCCAAAGCCTTTTCCTATCCACGCTACTTTACTACGCTCACCATGAGGAGCCACTGCAGTGAATTTCACTTCCTATGAAACCGGGTCCCTACTTCTCTAGCTCTTTCTAGTTACCCCGCTCTATCCATAGTTGTCCCAATTCTTATAACCCTAAAAACTAATGACTGAAAAACCCACTAATATCTCTTCTCACCGGCCGTCTGCCAACGGAGCATCGGTCCTACTTTAACTGCCTTTAATCACCAAGAGGCGGATTTCCCGTTTGTCAAACAATCCCATATAAAGATTGCACCCAACACCTCACATCCAATAAACTCCATCCTCCATCTGAACCCT2115420154801554015600156601572015780158401590015960160201608016140162001626016320163801644016500AGTAGCAGACTATCATTGGCAGCCGGCTGGGCGCCGGTCTAGATTTTAACCCGCCGATGTATTATATTACTGTATTATCATTAAGCAAAACAAACCTTCATCATGTAGTAGCAGAAATCGGGGCTATCCTCAATCTTATTrprprprprprprprprprpATAGAATGATCATCCTCACAACGCTGAACGATTTTTGTTACAACACTGTCATACTGATCCCAAGTCGCCTGCCGAGAATATGTAATCCGGTCCTACCCTTACAATAATAAACACTATGTAACATAAGTGGCACGGATAACGCTAACACGAAGAACCGACCTATTAGGTAGTAAGAAACCAGCCCGTTACCTCCGGGGTTCATTTTATAAAGATATCTAATATCCTTGTGTAAGTATACATATCGGACCCCTCACCTGGATCCGTAATTTAAAGCCCTTGAAGGCCGGAGGAACTCCCAAAATGTTATATCTTTACCCATGTTTTAACCCCCACCAACTAAGCTCCGTCTTAACGATTTATCATCTCGTGAGCCCCTGAAACACCAAGCCGCGAAACTAGAGAATCACATAAGATCCCCGGTCCTGTCAAATAATAAACTTCTTTCATAAT22TGGAGGTATACTTCGCCATCATGAGCCTGCTTAAAACCCTGCTAAGATTCTTACAAGTCATACAATATTGTCATACATCAGATGTTTTAATACCCACCAACAGTAGGCATATTATTCCTGGCCGAATGTAGGCGTTCTCTTCTTGAATTCCTTGGATATCCTTCTGCGCGCCCCTAAACCTTTAACACACTAAAGTATACCCTGTAGAACTTCCTAGTCCCCTAGTAGCTCCCTAGTGCTTAAATTAAACGTACGATATACGCATGAGTAGCACAAATCCCCCGATTAATCTTTCAGCATACTCTTATTGGCATTTGGTTATGCATCTGGTATATGCATACCGAGGACTAAAGTGCATAAACAAACCCCCAGGAAGTCTCTTTATGACATATTAATAAACACCCATTTATTCGCCCCCCTCAGCGCCAGACAGAGAAAGGTACCCTCTGAACACTTATGTGTACATTATAAAGGTTTACATGCTACACCACAGTCCTGCTATGGTCAGGGCCTATATCAATTAATGGTGTGGGTTCTCTTATGTATCATTGGTCCAATTCCTACCCCCCTAACAGCGCTATTGGCACCGATTTTTAACAC16560ACTTTATGACATTTGGCACCGACAACACTGTCATCGGACCCCCTTTCATAATTAAAGTAT16621ACATTAATAAACTTTTTAACACACTTTATGACATTTGGCACCGACAACACTGTCATCGGA16680CCCCCTTTCATAATTAAAGTATACATTAATAAACTTTTTAACACACTTTATGACATTTGG16740CACCGACAACACTGTCATCGGACCCCCTTTCGTAATTAAATGTATTCAAGACCCATT16797〈210>2〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第1对的正向引物序列。〈400>2AGAGCGCCGGTCTTGTAATC20〈210>3〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第1对的反向引物序列。〈400>3GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC22〈210>4〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第2对的正向引物序列。〈400>4TGAATTCCAGAGAACCCATGT21〈210>5〈211>20〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第2对的反向引物序列。〈400>5TAAAACAAGGGGTGGTGAGG20〈210>6〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第3对的正向引物序列。〈400>6CAAAGGCTTGGTCCTGACTT20〈210>7〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第3对的反向引物序列。〈400>7TAAAACAAGGGGTGGTGAGG20〈210>8〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第4对的正向引物序列。〈400>8TGATATCCGCCAGGGAACTA20〈210>9〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第4对的反向引物序列。〈400>9CCCTTGCGGTACTTTTTCTG20〈210>10〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第5对的正向引物序列。〈400〉10GGGTCACCCTGAGCTGACTA20〈210>11〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第5对的反向引物序列。〈400〉11GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG20〈210>12〈211>24〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第6对的正向引物序列。〈400>12AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA24〈210>13〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第6对的反向引物序列。〈400>13CCCTCGTGATGCCATTCAT19〈210>14〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第7对的正向引物序列。〈400>14AACACAAGCCTCGCCTGTT19〈210>15〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉25〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第7对的反向引物序列。〈400>15CGTTGAACAAACGAACCCTTA21〈210>16〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第8对的正向引物序列。〈400>16CTCTCCCAGAGTCCCTATCG20〈210>17〈211>21〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第8对的反向引物序列。〈400>17GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA21〈210>18〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第9对的正向引物序列。〈400〉18TGCTTTCCTCACCCTACTTGA21〈210>19〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第9对的反向引物序列。〈400>19GTGGGATGCGCCTAAAAATA20〈210>20〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第10对的正向引物序列。〈400>20CCCTTTGACCTCACAGAAGG20〈210>21〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第10对的反向引物序列。〈400>21CTGGCAAAGGTGAGGACTGT20〈210>22〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第11对的正向引物序列。〈400>22TTGGTGCTTCCACTACACCA20〈210>23〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第11对的反向引物序列。〈400>23GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT20〈210>24〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第12对的正向引物序列。〈400>24TTGGTGCTTCCACTACACCA20〈210>25〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第12对的反向引物序列。〈400>25TGTGGGATAAAGTCCTGCAA20〈210>26〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第13对的正向引物序列。〈400>26CACCAGCTGTGACTGCGATA20〈210>27〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第13对的反向引物序列。〈400>27TCAGGGGCTCCGATTATTAG20〈210>28〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第14对的正向引物序列。〈400>28CCCATGCCTTCGTTATGATT20〈210>29〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第14对的反向引物序列。〈400>29TGGGCTCAAACGATAAATCC20〈210>30〈211>2028〈212>DNA〈213>人工序列〈220>〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第15对的正向引物序列。〈400>30TGGCAGCAGGCATTACTATG20〈210>31〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第15对的反向引物序列。〈400>31CCTGCGAGGCCTAGGAAAT19〈210>32〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第16对的正向引物序列。〈400>32TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT23〈210>33〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第16对的反向引物序列。〈400>33GGATAACTGCTGGGAGGACA20〈210>34〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第17对的正向引物序列。〈400>34AATGGCACATCCCTCACAAC20〈210>35〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第17对的反向引物序列。〈400>35CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA23〈210>36〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第18对的正向引物序列。〈400>36GACGTCCTTCACTCCTGAGC20〈210>37〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第18对的反向引物序列。〈400>37TGCTGGGTAAATCGGTTGAT20〈210>38〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第19对的正向引物序列。〈400>38CCTCCCATGAATTCTTTTCC20〈210>39〈211>27〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第19对的反向引物序列。〈400>39CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG2728/33页〈210>40〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第20对的正向引物序列,〈400>40CCTCCCATGAATTCTTTTCC20〈210>41〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第20对的反向引物序列,〈400>41GATTGTAAATGGGGCTTCGT20〈210>42〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第21对的正向引物序列,〈400>42CCCTTTGAGGTACCCCTTCT20〈210>43〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第21对的反向引物序列,〈400>43TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA20〈210>44〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第22对的正向引物序列,〈400>44GCCCTTCTCCTTACGCTTCT20〈210>45〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第22对的反向引物序列。〈400>45TGGAAAAAGCATGAGTGTGG20〈210>46〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第23对的正向引物序列。〈400>46GCCCTTCTCCTTACGCTTCT20〈210>47〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第23对的反向引物序列。〈400>47GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA20〈210>48〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第24对的正向引物序列。〈400>48ACATCTCCCTCCTGGTCTCC20〈210>49〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第24对的反向引物序列。〈400>49TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG21〈210>50〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第25对的正向引物序列。〈400>50GCAATTATTCTCATAATCGCACA23〈210>51〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第25对的反向引物序列。〈400>51TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA21〈210>52〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第26对的正向引物序列。〈400>52CTCTTATCCACCGAGAGAAATC22〈210>53〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第26对的反向引物序列。〈400>53CAGCCGATAAATAGTTGGAACA22〈210>54〈211>24〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉33〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第27对的正向引物序列。〈400>54AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC24〈210>55〈211>21〈212>DNA〈213>人工序列〈220>〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第27对的反向引物序列。〈400>55TGGATGTAGAGAATGCGACAA21〈210>56〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第28对的正向引物序列。〈400>56GCGATAGAGGGTCCTACGC19〈210>57〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第28对的反向引物序列。〈400>57AACCTCATGGGTAGCAGTGG20〈210>58〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第29对的正向引物序列。〈400>58GCCATTTATAGCCTCCGAGT20〈210>59〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列34〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第29对的反向引物序列。〈400>59GATACAAGTGGGGTGGCATT20〈210>60〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第30对的正向引物序列。〈400>60CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA22〈210>61〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第30对的反向引物序列。〈400>61GGTTGGCCATTAGGTTCTTG20〈210>62〈211>26〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第31对的正向引物序列。〈400>62CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC26〈210>63〈211>18〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第31对的反向引物序列。〈400>63GGAGAAGCCCCCTCAAAT18〈210>64〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第32对的正向引物序列。〈400>64ATTCTGAGGGGCCACTGTAA20〈210>65〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第32对的反向引物序列。〈400>65CCGATTCAGGTGAGGATGAG20〈210>66〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第33对的正向引物序列。〈400>66CATGGTTGTCCCCATCCTAC20〈210>67〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第33对的反向引物序列。〈400>67AACCTTGGATTTGTGCTGATG2权利要求哲罗鲑线粒体全基因组序列，其特征在于哲罗鲑线粒体全基因组序列如SEQIDNO1所示。2.哲罗鲑线粒体全基因组序列的扩增引物，其特征在于哲罗鲑线粒体全基因组序列的扩增引物为33对；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第1对的正向引物为5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物为5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第2对的正向引物为5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第3对的正向引物为5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物为5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第4对的正向引物为5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物为5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第5对的正向引物为5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物为5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第6对的正向引物为5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物为5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第7对的正向引物为5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物为5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第8对的正向引物为5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物为5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第9对的正向引物为5，-TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-3，，反向引物为5，-GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第10对的正向引物`5，-CCCTTTGACCTCACAGAAGG--3，，反向引物为5''-CTGGCAAAGGTGAGGACTGT-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第11对的正向引物`5，-TTGGTGCTTCCACTACACCA--3，，反向引物为5''-GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第12对的正向引物`5，-TTGGTGCTTCCACTACACCA--3，，反向引物为5''-TGTGGGATAAAGTCCTGCAA-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第13对的正向引物`5，-CACCAGCTGTGACTGCGATA--3，，反向引物为5''-TCAGGGGCTCCGATTATTAG-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第14对的正向引物`5，-CCCATGCCTTCGTTATGATT--3，，反向引物为5''-TGGGCTCAAACGATAAATCC-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第15对的正向引物`5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG--3，，反向引物为5''-CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第16对的正向引物`5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-3'，反向引物为5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第17对的正向引物为5'-AATGGCACATCCCTCACAAC-3'，反向引物为5'-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第18对的正向引物为5'-GACGTCCTTCACTCCTGAGC-3'，反向引物为5'-TGCIGGGTAAATCGGTTGAT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第19对的正向引物为5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-3'，反向引物为5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第20对的正向引物为5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-3'，反向引物为5'-GATTGTAAATGGGGCTTCGT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第21对的正向引物为5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT-3'，反向引物为5'-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第22对的正向引物为5'-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-3'，反向引物为5'-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第23对的正向引物为5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-3，，反向引物为5，-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第24对的正向引物为5'-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC-3'，反向引物为5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第25对的正向引物为5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物为5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第26对的正向引物为5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物为5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第27对的正向引物为5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物为5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第28对的正向引物为5，-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物为5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第29对的正向引物为5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物为5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第30对的正向引物为5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物为5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第31对的正向引物为5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物为5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT-3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第32对的正向引物为5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物为5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲罗鲑线粒体全基因组序列扩增引物第33对的正向引物为5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物为5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。全文摘要哲罗鲑线粒体全基因组序列及其扩增引物，它涉及一种线粒体全基因组序列及其扩增引物。本发明确定哲罗鲑线粒体全基因组序列，为哲罗鲑的保护遗传学、进化遗传学及优良养殖品种的分子标记辅助选择提供物质基础。哲罗鲑线粒体全基因组序列如SEQIDNO1所示。哲罗鲑线粒体全基因组序列的扩增引物为33对。本发明为哲罗鲑的保护遗传学、进化遗传学及优良养殖品种的分子标记辅助选择提供物质基础。文档编号C12N15/12GK101736007SQ20091007311公开日2010年6月16日申请日期2009年10月29日优先权日2009年10月29日发明者佟广香,匡友谊,孙效文,尹家胜申请人:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所