专利名称：调节植物胁迫抗性的cbf转录因子及其编码基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及与植物抗逆性相关的CBF转录因子及其编码基因，尤其涉及从沙冬青 (Ammopiptanthus mongolicus)中所分离到的调节植物胁迫抗性的CBF转录因子基因及其编码蛋白，本发明还涉及它们在提高植物胁迫抗性中的应用，属于与植物耐逆性相关的转录因子领域。
背景技术：
低温和干旱是全球性的影响植物生长、限制作物产量的非生物胁迫因子。低温寒害是农业生产中的一种严重自然灾害，世界每年因此造成的损失十分巨大，据估计达2000 亿美元。植物抗寒性机理研究不仅在理论上有重要意义，在生产上也有广泛的应用价值。 通过低温寒害的研究不仅可以知道植物是如何感受环境因子的变化并产生相对应的抗性， 而且对于农业生产实践具有重要的指导作用。因此，培育具有抗寒能力的作物成为农业上的一个重要课题。传统的植物育种方法培育出了许多的抗寒品种，以化学调控的方法来提高植物的抗寒力也有一定的效果，而植物基因工程的发展则为培养抗寒作物提供了一条崭新的途径。在植物抗寒分子生物学研究中，人们鉴定和分离了一些抗寒基因和蛋白， 如拟南芥中的C0R15a，苜蓿的casl5，小麦的wcal20，大麦的HVAl (Thomashow MF. Plant cold acclimation :Freezing tolerance genes and regulation mechanisms. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology 1999,50 :571 599.), 以及从北极海域鱼类分离的抗冻基因AFP(Chakrabartty A, et al. Structure-function relationships in a winter flounder antifreeze polypeptide. J Biol Chem 1989, 264(18) :11307 1131 。人们将这些基因转入植物中希望能提高作物的抗寒能力，但单个基因的转入往往结果不理想，仅能部分改善抗寒能力。作物的抗寒性状是由多基因控制的，只有成簇抗性相关基因的转录激活，才能有效提高作物的抗寒能力，因此克隆并鉴定调控抗寒功能基因表达的转录因子成为这一研究领域的热点。转录因子，也称反式作用因子，是能够与真核基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性相互作用的DNA结合蛋白，通过它们之间以及与其他相关蛋白之间的相互作用，激活或抑制其他基因转录。转录因子有两种不同的类型。一种叫做普遍性转录因子 (general transcription factor)，能激活所有启动子的转录活性，另一种叫做特异性转录因子(specific transcription factor)，只能激活特定基因启动子的转录活性。植物许多诱导型基因定时、定量及定位表达，都由特定的转录因子与特定的顺式作用元件相互作调控。近年来，相继从高等植物中分离出一系列调控低温、干旱、高盐、激素、病原反应及发育等相关基因表达的转录因子。从蛋白质结构分析，转录因子一般由DNA结合区 (DNA-binding domain)、转录调控区(transcription regulation domain)、寡聚化位点 (oligomerization site)以及核定位信号(nuclear localization signal, NLS)四个功能区组成(吴乃虎.基因工程原理(下册)(第二版).北京科学出版社.2002)。这些功能区决定转录因子的功能、特性、核定位以及调控作用等，通过这些功能区与启动子顺式作用元件结合或与其它蛋白的相互作用来激活或抑制基因的表达。CBFs(C-r印eat Binding Factors)就是这样的一类转录因子，通过在植物冷驯化过程中的表达来提高植物的抗寒能力。CBF转录因子能够识别CRT/DRE元件，调控多个与同类性状有关的基因表达，在提高植物对环境胁迫耐性的分子育种中，改良或增强一个关键转录因子的调控能力，可以使植物的耐逆性得到较为综合的改良。许多热带起源的植物，如西红柿、玉米、水稻、棉花，都不能忍受冷环境，0°C 12°C就能造成伤害，这些植物中也相继证实有CBF基因存在。CBF 是一个基因家族，其成员的表达机制不同。CBF/DREB转录因子特异识别结合CRT/DRE元件， 调控一系列干旱低温应答基因表达，这些基因所编码的产物使植物适应或抵御逆境。另外， 超表达CBF3的拟南芥耐旱耐寒，而耐性的提高，不仅与CRT/DRE基因的表达增强有关，还与脯氨酸和糖含量的升高有关。植物在长期的进化过程中，在低温、干旱等环境胁迫下，会诱导多种基因表达并发生一系列的生理生化变化，从而对胁迫作出积极反应。逆境胁迫诱导表达的基因产物，按其作用可分成两大类。作物的抗寒和耐旱性状由多基因控制，只有成簇抗性相关基因的转录激活，才能有效提高作物的抗寒和耐旱能力。CBF转录因子在逆境胁迫下激活，调控一系列低温干旱应答基因表达，使植物适应或抵御逆境。有研究证明，CBF冷反应途径的组成因子在开花植物中高度保守，转CBF的转基因植株对低温、干旱和盐胁迫的抗性明显增强。中国北方寒冷地区主要的粮食作物(如水稻、小麦)、经济作物(如棉花、烟草) 在生长发育期都存在低温寒害问题，而这些作物的抗寒机制的研究非常有限。研究CBF在这些作物中家族成员数量，不同CBF基因问如何相互作用以及与冷、干旱等逆境的关系， CBF启动子区域有哪些基元和核心序列等方面开展研究将对实际生产有很重要的现实指导
眉、ο沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是一种国家重点保护的珍稀濒危豆科植物，也是迄今为止中国温带荒漠的唯一珍贵常绿灌木。沙冬青是优良的固沙植物，具有抗热、抗旱、抗寒、耐盐碱、耐贫瘠、耐沙埋、抗风蚀等特性，适应性很强，能在地表温度高达 70°C，气温在-20 -30°C，年降雨量不足200mm的环境中正常生长，因此是珍贵的抗旱耐冻遗传资源，是进行抗寒/抗旱研究的理想材料。目前关于沙冬青的研究主要在生理生化层面上，还没有关于基因调控的报道。针对它开展CBFs基因的研究，并与喜温作物棉花的 CBFs基因相比较，预计有可能解析和发现一些新的基因、调控元件和调控机理，对了解不同植物的CBFs基因及其调控网络以及通过基因工程改良作物的抗逆能力有重要的理论和实践意义。
发明内容
本发明目的之一是提供一种来源于沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)能够识别CRT/DRE元件、提高植物对环境胁迫抗性的CBF转录因子及其编码基因。本发明目的之二是提供含有上述编码基因的表达载体以及含有该表达载体的宿主细胞。本发明目的之三是将所述的转录因子及其编码基因应用于提高或改善植物的抗逆性。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的一种从沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)中所分离的CBF转录因子基因，其核苷酸为(a)、(b)或(c)所示(a)、SEQ ID No. 1 所示的核苷酸；(b)、编码SEQ ID No. 2所示氨基酸的核苷酸；(c)、与SEQ ID NO 1的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的核苷酸，该核苷酸所编码蛋白质的氨基酸为SEQ ID N0:2所示。所述“严谨杂交条件”意指在所属领域中已知的低离子强度和高温的条件。通常，在严谨条件下，探针与其靶序列杂交的可检测程度比与其它序列杂交的可检测程度更高(例如超过本底至少2倍。严谨杂交条件是序列依赖性的，在不同的环境条件下将会不同，较长的序列在较高温度下特异性杂交。通过控制杂交的严谨性或洗涤条件可鉴定与探针100%互补的靶序列。对于核酸杂交的详尽指导可参考有关文献(Tijssen， Techniques in Biochemistry and Moolecular Biology Hybridization with Nucleic Probes, “ Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays. 1993)。更具体的，所述严谨条件通常被选择为低于特异序列在规定离子强度 PH下的热熔点(Tm)约5-10°C。Tm为在平衡状态下50%与目标互补的探针杂交到目标序列时所处的温度(在指定离子强度、PH和核酸浓度下)(因为目标序列过量存在，所以在1下在平衡状态下50%的探针被占据)。严谨条件可为以下条件其中在pH 7.0到8.3下盐浓度低于约1. OM钠离子浓度，通常为约0. 01到1. OM钠离子浓度(或其它盐)，并且温度对于短探针(包括(但不限于)10到50个核苷酸)而言为至少约30°C，而对于长探针(包括 (但不限于)大于50个核苷酸)而言为至少约60°C。严谨条件也可通过加入诸如甲酰胺的去稳定剂来实现。对于选择性或特异性杂交而言，正信号可为至少两倍的背景杂交，视情况为10倍背景杂交。例示性严谨杂交条件可如下50%甲酰胺，5乂33(和SDS，在42°C 下培养；或5XSSC，1% SDS，在65°C下培养，在0. 2 X SSC中洗涤和在65°C下于0. SDS中洗涤。所述洗涤可进行5、15、30、60、120分钟或更长时间。优选的，本发明所述的从沙冬青中所分离的CBF转录因子基因为SEQ ID No. 1所示的核苷酸。本发明目的之二是提供由上述转录因子基因所编码的能够识别CRT/DRE元件、提高植物对环境胁迫抗性的CBF转录因子，其氨基酸为(a)或(b)所示(a)、SEQ ID No. 2 所示的氨基酸；(b) JfSEQ ID No. 2所示的氨基酸通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或/ 和插入而衍生得到的仍具有SEQ ID No. 2所示CBF转录因子功能或活性的蛋白变体；优选的，本发明所述的CBF转录因子为SEQ ID No. 2所示的氨基酸。所述的“多个”通常意味着28个，优选为M个，这取决于CBF转录因子三维结构中氨基酸残基的位置或氨基酸的种类；所述的“替换”是指分别用不同的氨基酸残基取代一个或多个氨基酸残基；所述的“缺失”是指氨基酸残基数量的减少，也即是分别缺少其中的一个或多个氨基酸残基；所述的“插入”是指氨基酸残基序列的改变，相对天然分子而言，所述改变导致添加一个或多个氨基酸残基。本发明所述的蛋白变体可由遗传多态性或人为操作产生，这些操作方法通常为本领域所了解。例如，可通过DNA的突变来制备CBF转录因子的氨基酸序列变体或片段，其中由于诱变或改变多核苷酸的方法为本领域所习知。其中，保守的取代是将一种氨基酸残基替换成具有相似性质的另一种氨基酸。因此，本发明所述的CBF转录因子及其编码基因包括天然存在的序列和变体两种形式。“变体”意指基本相似的序列，对于多核苷酸，变体包含天然多核苷酸中一个或多个位点处一个或多个核苷酸的缺失、插入或/和替换。对于多核苷酸，保守的变体包括由于遗传密码的简并性而不改变编码的氨基酸序列的那些变体。诸如此类天然存在的变体可通过现有的分子生物学技术来鉴定。变体多核苷酸还包括合成来源的多核苷酸，例如采用定点诱变所得到的仍编码SEQ ID No. 2所示的氨基酸的多核苷酸变体，或者是通过重组的方法 (例如DNA改组)。本领域技术人员可通过以下分子生物技术手段来筛选或评价变体多核苷酸所编码蛋白的功能或活性DNA结合活性，蛋白之间的相互作用，瞬时研究中基因表达的激活情况或转基因植物中表达的效应等。本发明提供了一种提高植物对环境胁迫抗性的方法，包括将本发明CBF转录因子基因引入到植物或植物细胞中，能够有效提高目标植物对环境胁迫的抗性；例如。可以将本发明CBF转录因子基因引入到目标植物细胞中，培育筛选得到对环境胁迫的抗性提高的转基因植物，其中，所述的环境胁包括干旱、低温等逆境。本发明还提供了含有所述CBF转录因子基因的植物表达载体以及含有该表达载体的宿主细胞。将所述CBF转录因子基因可操作的与表达调控元件相连接，得到可以在植物中表达该基因的植物表达载体。“可操作的连接”指两个或更多个元件之间功能性的连接，可操作的连接的元件可为邻接或非邻接的。该植物表达载体可以由5'端非编码区，SEQ ID No. 1所示的核苷酸和3‘非编码区组成，其中，所述的5'端非编码区可以包括启动子序列、增强子序列或/和翻译增强序列；所述的启动子可以是组成性启动子、诱导型启动子、组织或器官特异性启动子；所述的 3'非编码区可以包含终止子序列、mRNA切割序列等。合适的终止子序列可取自根癌农杆菌的Ti-质粒，例如章鱼碱合成酶和胭脂碱合成酶终止区。另外，本领域技术人员可以将SEQ ID No. 1所示的核苷酸进行优化以增强在植物中的表达。例如。可采用目标植物的偏爱密码子进行优化来合成多核苷酸以增强在目标植物中的表达。该植物表达载体还可含有用于选择转化细胞的选择性标记基因。选择性标记基因用于选择经转化的细胞或组织。标记基因包括编码抗生素抗性的基因以及赋予除草化合物抗性的基因等。此外，所述的标记基因还包括表型标记，例如半乳糖苷酶和荧光蛋白寸。本发明还涉及将所述的CBF转录因子基因引入到植物中以提高植物的胁迫抗性； 所述的“引入”指将CBF转录因子基因导入到植物细胞内部这样的方式将多核苷酸或多肽遗传转化到植物中。将所述多核苷酸或多肽引入到植物中的方法为本领域所习知，包括但不限于稳定转化法、瞬时转化法和病毒介导法等。“稳定转化”指被引入的多核苷酸构建体整合至植物细胞的基因组中并能通过其子代遗传；“瞬时转化”指多核苷酸被引入到植物中但只能在植物中暂时性表达或存在。
转化方案以及将所述多核苷酸或多肽引入植物的方案可视用于转化的植物(单子叶植物或双子叶植物)或植物细胞的类型而变化。将所述多核苷酸或多肽引入植物细胞的合适方法包括显微注射、电穿孔、农杆菌介导的转化、直接基因转移以及高速弹道轰击等。在特定的实施方案中，可利用多种瞬时转化法将本发明的CBF转录因子基因提供给植物。在其它实施方案中，本发明的CBF转录因子基因可通过将植物与病毒或病毒核酸接触来引入到植物中，通常，这样的方法涉及将本发明的CBF转录因子基因构建体引入病毒DNA 或RNA分子中。利用常规方法可使已转化的细胞再生稳定转化植株(McCormick et al. Plant Cell Reports. 1986. 5 :81-84)。本发明可用于转化任何植物种类，包括但不限于单子叶植物或双子叶植物。更优选的，所述的目标植物包括农作物、蔬菜或观赏植物、果树等，例如， 可以是玉米、水稻、高梁、小麦、大豆、马铃薯、大麦、番茄、菜豆、花生、甘蔗或棉花等。本发明一个最优选的整体技术方案的详述本发明采用RACE策略，克隆并鉴定了一个沙冬青CBF全长基因(AmCBF) (SEQ ID NO. 3)，半定量RT-PCR实验证明该基因受低温诱导，在冷处理Ih开始有表达，2h后表达量达最高。经过生物信息学分析，AmCBF基因编码蛋白(SEQ ID NO. 2)具有AP2结构域和CBF 家族中保守特征多肽序列，属于AP2/EREBP类转录因子家族中的CBF基因家族。根据蛋白比对和蛋白二级和三级结构预测结果，AmCBF与CBF在AP2结构域存在个别氨基酸位点的差异，推测可能会影响CBF转录因子与DNA结合能力。将AmCBF基因构建到CaMV35S启动子驱动的植物表达载体，以叶盘法转化烟草，并进行转基因分子鉴定。在冷处理后，转AmCBF基因烟草的脯氨酸和可溶性糖含量都比野生型有明显的提高。这说明AmCBF的表达促进COR等基因的转录，进而引起脯氨酸和可溶性糖这样的渗透调节物质的合成。脯氨酸和可溶性糖都是渗透调节剂，可以提高原生质的渗透压，防止水分散失，防止细胞内各种酶蛋白在渗透胁迫下脱水，维持细胞膜和蛋白质正常功能和活性，进而增强植物耐逆性。实验结果表明，转基因烟草电解质渗漏率在0 -6°C — 直低于野生型烟草，在_8°C大幅度上升，表明在_8°C转基因烟草细胞膜开始受到破坏，细胞内溶物释放，胞外溶液电导率大幅提高。而野生型烟草在_6°C电导率就已经很高，细胞膜已经受破坏。说明转AmCBF烟草耐冷性有明显提高。转AmCBF基因烟草的耐旱性试验表明，转基因植株的干旱耐受性明显比野生型强。在PEG模拟的干旱条件，无论是强启动子还是弱启动子的转基因烟草都表现出比野生型更强的耐干旱能力。业已证明低温和脱水反应的信号传导途径具有许多共同之处，形成复杂的相互联系的信号网络(Yang Tff, Zhang LJ, Zhang TG, Zhang H，Xu SJ, An LZ. Transcriptional regulation network of cold-responsive genes in higher plants. Plant Science 2005,196(6) :987 995.)。因此，在转基因烟草植株中 AmCBF 超表达综合地激活了低温驯化反应中的多个组分的表达，脯氨酸等渗透调节物质含量也明显上升，使转基因植株的耐旱性有明显的提高。本发明所涉及到的术语定义除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然在本发明的实践或测试中可使用与本文所述者类似或等效的任何方法、装置和材料，但现在描述优选方法、装置和材料。
术语“重组宿主细胞株”或“宿主细胞”意指包含本发明多核苷酸的细胞，而不管使用何种方法进行插入以产生重组宿主细胞，例如直接摄取、转导、f配对或所属领域中已知的其它方法。外源性多核苷酸可保持为例如质粒的非整合载体或者可整合入宿主基因组中。宿主细胞可为原核细胞或真核细胞，宿主细胞还可为单子叶或双子叶植物细胞。术语“多核苷酸”意指单股或双股形式的脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特定限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有类似于参考核酸的结合特性并以类似于天然产生的核苷酸的方式进行代谢。除非另外特定限制，否则所述术语也意指寡核苷酸类似物，其包括 PNA(肽核酸)、在反义技术中所用的DNA类似物(硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等等)。除非另外指定，否则特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变异体(包括(但不限于)简并密码子取代)和互补序列以及明确指定的序列。特定而言，可通过产生其中一个或一个以上所选(或所有)密码子的第3位经混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现简并密码子取代(Batzer 等人，Nucleic Acid Res. 19 :5081(1991) ；Ohtsuka 等人，J. Biol. Chem. 260 :2605-2608(1985)；和 Cassol 等人，(1992) ；Rossolini 等人，Mol Cell. Probes 8 :91-98(1994))。术语“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文中互换使用以意指氨基酸残基的聚合物。艮口， 针对多肽的描述同样适用于描述肽和描述蛋白，且反之亦然。所述术语适用于天然产生氨基酸聚合物以及其中一个或一个以上氨基酸残基为非天然编码氨基酸的氨基酸聚合物。如本文中所使用，所述术语涵盖任何长度的氨基酸链，其包括全长蛋白(即抗原)，其中氨基酸残基经由共价肽键连接。
图 1 3，race 的片段 M IOObp Ladder，1 :3，race 第一轮扩增片段，2 :3，race 第二轮扩增片段。图 2 5，race 的片段 M IOObp Ladder, 1 :5，race 第一轮扩增片段，2 :5，race 第二轮扩增片段。图3沙冬青CBF全长基因序列及DNAMAN分析得到的蛋白质序列。图4CBF蛋白保守序列比对结果；黑点所示为CBF保守特征序列，直线所示为AP2 结构域。图5沙冬青CBF系统发育树。图6沙冬青CBF低温诱导下半定量RT-PCR结果；㈧AmCBF基因3’端片段扩增结果(B) β-actin扩增结果。图7植物表达载体的构建示意图。图8⑶S组织化学染色；1-4 :35S: AmCBF转基因烟草；5 野生型对照。图9转基因烟草的PCR鉴定；1-8 :35S:AmCBF转基因植株；9 质粒对照；10 野生型烟草对照；11 水对照。图10转基因烟草的半定量RT-PCR鉴定；1_5 :35S:AmCBF转基因植株；6 野生型对照。图11相对电导率法检测转基因植株的耐寒性。
图12游离脯氨酸含量检测结果。图13可溶性糖含量检测结果。图14转基因烟草的耐旱性检测结果。
具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1. 1实验材料1. 1. 1植物材料植物材料为蒙古沙冬青幼苗，种子由中国农业科学院生物技术研究所裴新梧研究员提供。种子经50 60°C温水浸种Mh，去除秕粒，冷水浸泡1昼夜，期间换清水2 3 次。吸胀后种子捞至0. 5% KMn04溶液浸泡消毒30min，清水洗净，放入育苗培养箱，上覆纱布。每天向纱布喷水2 3次，经常翻动种子，使之出芽均勻，保持温度20 25°C，4 6 天全部出芽完毕。挑选种子播种于育苗容器，每盆2 3粒，上覆蛭石1 1. 5cm，适量补水，7 10天后出苗完成。将沙冬青幼苗放置于低温光照培养箱，在温室中生长14d的沙冬青幼苗，放入低温培养箱，光照强度3001ux，分别在4°C处理0，15min, 30min, lh，2h，4h，8h， 16h，Mh，各提取总RNA进行反转录，所得cDNA为模板，在3’端附近片段设计特异引物进行 RT-PCR扩增实验，内参基因为β-actin。由实验室保存的栽培型烟草NC89作为植物转化材料。1.1. 2引物和测序引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(1)，测序工作由三博远志生物技术有限公司和中国农业科学院重大科学工程楼开放实验室完成。表1合成引物列表
权利要求
1.分离的CBF转录因子基因，其特征在于，其核苷酸为(a)、(b)或(c)所示(a)、SEQID No. 1所示的核苷酸；(b)、编码SEQID No. 2所示氨基酸的核苷酸；(C)、与SEQ ID NO: 1的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的核苷酸，该核苷酸所编码蛋白具有CBF转录因子功能或活性。
2.分离的CBF转录因子全基因，其特征在于其为SEQID No. 3所示的核苷酸。
3.权利要求1所述CBF转录因子基因所编码蛋白，其特征在于，其氨基酸为(a)或(b) 所示(a)、SEQID No. 2所示的氨基酸;(b)JfSEQ ID No. 2所示的氨基酸通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或/ 和插入而衍生得到的仍具有SEQ ID No. 2所示CBF转录因子功能或活性的蛋白变体。
4.含有权利要求1或2所述基因或全基因的表达载体。
5.按照权利要求4所述的表达载体，其特征在于所述表达载体是植物表达载体。
6.含有权利要求4或5所述表达载体的宿主细胞。
7.权利要求1所述的基因或权利要求2所述全基因在提高植物对环境胁迫抗性中的应用。
8.按照权利要求7所述的应用，包括构建含有权利要求1所述基因或权利要求2所述全基因的植物表达载体；将所构建的植物表达载体引入到植物或植物细胞中，培育筛选得到对环境胁迫抗性提高的转基因植物。
9.权利要求3所述的蛋白在提高植物对环境胁迫抗性中的应用。
10.按照权利要求7、8或9所述的应用，其特征在于所述的环境胁迫包括干旱或低
全文摘要
本发明公开了调节植物胁迫抗性的CBF转录因子及其编码基因和应用。本发明采用 RACE策略从沙冬青中克隆并鉴定了一个CBF全长基因，半定量RT-PCR实验证明该基因受低温诱导在冷处理1h开始有表达，2h后表达量达最高。经生物信息学分析，AmCBF基因编码蛋白具有AP2结构域和CBF家族中保守特征多肽序列，属于AP2/EREBP类转录因子家族中的CBF基因家族。与野生型烟草相比，在冷处理后转AmCBF基因烟草叶片的电解质渗漏率明显降低，脯氨酸含量、可溶性糖含量都有明显提高，证明耐寒性增强。耐旱性实验表明,转基因烟草的干旱耐受能力也有很大提高。实验结果表明AmCBF能够响应逆境信号并发挥作用。
文档编号C12N1/15GK102191254SQ201110095268
公开日2011年9月21日 申请日期2011年4月15日 优先权日2011年4月15日
发明者张晗, 程红梅, 郭惠明 申请人:中国农业科学院生物技术研究所