专利名称：利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白gdi2的方法
技术领域：
本发明涉及一种肿瘤转移抑制蛋白GDI2的发酵生产方法，尤其是涉及一种利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法。
背景技术：
Rho-⑶P 解离抑制因子 2 (Rho-⑶P dissociation inhibitor 2，GDI2)，最早由 Leffers等人发现，由201个氨基酸构成，是I^ho⑶P解离抑制因子0 ho⑶I)家族的成员之一。近年来大量的研究证明RhoGDI2蛋白在人体中担负着阻止癌细胞在整个机体内扩散的任务，该蛋白能够非常有效的抑制肿瘤细胞的侵袭及转移，且内皮素I(ET-I)和神经介素 U(NmU)可能为其作用靶点。⑶12在人体内经caspase-Ι酶切后21kDa的⑶12短肽通过失巢凋亡机制(Anoikis)能够大幅度增加癌细胞的凋亡，从而抑制了细胞的转移。作为一种具有良好应用前景的的抗癌药物蛋白，提高⑶12蛋白的工业化水平对于生产企业至关重要。目前，在利用大肠杆菌表达重组蛋白方面，重组蛋白胞内积累量取决于发酵最终细胞浓度及细胞总蛋白比例。因此，实现工程菌高密度培养，对提高目标产物有着很大的意义。但是在重组大肠杆菌的高密度培养过程中，常常遇见的是高密度低表达现象。导致该问题出现的原因有很多。围绕高密度培养时提高外源基因表达的方法及有关机理的研究已做了一些研究。一、添加复合氮源，菌体生长至高密度时，营养成分逐步耗尽。营养的缺乏也是限制高密度培养下实现高表达的因素。二、降低代谢副产物积累，乙酸的积累不仅对菌体的生长有抑制作用而且也抑制了外源蛋白的表达。降低代谢副产物的积累也必将提高外源蛋白表达水平。三、增强供氧能力。四、营养物的流加策略，菌体在发酵过程中的不同阶段，营养物质种类及需求量都不尽相同，所以设计一种良好适应菌体不同生长阶段的流加策略，对解决该问题具有很好的帮助。目前，大肠杆菌生产重组蛋白的发酵模型中，分批补料流加策略现已成为提高菌体浓度及蛋白产物的常用策略，但是在应用该策略的大肠杆菌发酵过程中，却不能从根本上解决代谢副产物积累(乙酸)等问题，最终导致发酵产量的下降。因此，发酵过程中如何建立更好的发酵流加策略，从而解决代谢副产物积累以及营养物质充分供给等问题，是提高大肠杆菌发酵产量的关键因素。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种操作简单、发酵产量较高的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤将大肠杆菌工程菌经一级种子培养基培养及二级种子培养基培养后，按接种量 3wt%将二级种子培养液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中的培养基采用优化过的LB培养基，控制发酵温度为37°C、pH为7. 0，待发酵液中溶氧出现明显上升时开始流加生长阶段补料培养基，菌浓OD达到116时开始流加诱导阶段补料培养基，调节诱导阶段补料培养基流加速率降低比生长速率，最后经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导，获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。所述的一级种子培养基为含氨苄青霉素50 μ g/ml的LB培养基，LB培养基包括以下组分及含量蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L, pH7. 0，培养温度为37°C，转速 200rpm/min，培养 1 2_14h。所述的二级种子培养基包括以下组成成分蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖 (C6H12O6 · H2O) 2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、MgSO4 · 7H20 lg/L, pH 为 7. 0，培养温度为 37°C，转速 200rpm/min,
培养8h。所述的发酵培养分为发酵初期、发酵中期与发酵后期三个阶段，发酵前期为间歇发酵，发酵中期及发酵后期采用反馈流加，向发酵罐中补加补料培养基，使发酵罐中的碳源浓度保持在l-2g/L。所述的发酵中期从发酵液中的溶氧开始出现明显上升时开始，到菌体浓度达到基本恒定；所述的发酵后期是从加入IPTG开始诱导到诱导结束。所述的发酵中期的菌体生长恒定的比生长速率为0. 1-0. 21Γ1，发酵后期的菌体生长比生长速率为0. 05-0. ItT1。所述的优化过的LB培养基组成包括以下组分及含量蛋白胨10_15g/L、酵母粉 5-10g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H2O) 2-5g/L、NaCl 1-2g/L、NaH2PO4 · 12H20 2_4g/L、Na2HPO4 · 3H20 7-9g/L、K2HP04 ·3Η20 4_6g/L、ZnSO4 · 7H20 0. 1-0. 2g/L、MgS04 · 7H201_2g/L，溶剂为蒸馏水， 利用3mol/L盐酸溶液和3mol/L NaOH溶液调整pH值至7. 0。所述的生长阶段补料培养基包括以下组分及含量葡萄糖 (C6H12O6 · H20)500_700g/L、蛋白胨 l50_l75g/L、酵母粉 I5O-I75g/!^ MgSO4 · 7H205-7g/L, pH 值为7.0。所述的诱导阶段补料培养基包括以下组分及含量甘油200_300g/L、蛋白胨 130-150g/L、酵母粉 130-150g/L、MgSO4 · 7H20 3_5g/L，pH 值为 7. 0。与现有技术相比，本发明具有以下优点(1)发酵中期，采用指数-C/N联合流加策略，从而实现高细胞密度发酵，菌体浓度 OD可达到116 ；(2)发酵后期，采用甘油作为碳源，能够有效的减少乙酸等代谢副产物在发酵液中的积累量；(3)发酵时间短，整个发酵过程在28小时内完成；(4)肿瘤转移抑制蛋白⑶12产量较高，最高可达3. Og/L，本发明为实现肿瘤转移抑制蛋白GDI2的商业化生产提供了一种有效的方法。
图1为实施例2中产品的发酵曲线。
具体实施例方式下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，包括以下步骤挑取大肠杆菌工程菌单克隆于LB培养基(含氨苄青霉素50yg/ml)中，37°C，转速200rpm/min条件下培养12_14h，作为一级种子。然后，按照3%接种量接种于二级种子药瓶培养基中(g/L)蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H20)2g/L、NaCl lg/ L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L, Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、 MgSO4 ·7Η20 lg/L，pH 7.0。37°C、转速200r/min条件下培养8小时按接种量3%按培养基体积计接种到3. 7L发酵罐中。发酵初期采用优化的发酵培养基(g/L):蛋白胨10g/L、酵母粉10g/L、葡萄糖 (C6H12O6 · H2O) 2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L, Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、MgSO4 · 7H20 lg/L，溶剂为蒸馏水，利用 3mol/L 盐酸溶液和 3mol/L NaOH溶液调整至7.0。加入适量泡敌。控制发酵温度为37°C、溶氧25%以上进行发酵，发酵初期不补料。当发酵液中溶氧明显上升时，开始补料。生长阶段补料培养基配方组成葡萄糖(C6H12O6* H2O) 500g/L、蛋白胨150g/L、酵母粉150-g/L、MgSO4 · 7H20 5g/L，pH值为7. 0。通过调控补料速率，使发酵液中的葡萄糖浓度保持在lg/L，从而使比生长速率保持在0. 11Γ1。发酵中期补料发酵22小时后，残糖(残留葡萄糖)下降到0. 5g/L，此时开始诱导阶段补料流加，诱导阶段补料培养基配方组成为甘油 200-300g/L、蛋白胨 130-150g/L、酵母粉 130_150g/L、MgSO4 · 7H20 3-5g/L，pH 值为 7.0。经IPTG诱导后，继续发酵到沈小时放罐。最终肿瘤转移抑制蛋白⑶12产量达到 1. 9. Og/L,比分批发酵产量提高约30%。发酵过程中，其他的发酵参数为温度37°C、溶氧 25%以上。实施例2利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，包括以下步骤挑取大肠杆菌工程菌单克隆于LB培养基(含氨苄青霉素50yg/ml)中，37°C，转速200rpm/min条件下培养12_14h，作为一级种子。然后，按照3%接种量接种于二级种子药瓶培养基中(g/L)蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H20)2g/L、NaCl lg/ L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L, Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、 MgSO4 ·7Η20 lg/L，pH 7.0。37°C、转速200r/min条件下培养8小时按接种量3%按培养基体积计接种到3. 7L发酵罐中。发酵初期采用优化的发酵培养基(g/L):蛋白胨15g/L、酵母粉10g/L、葡萄糖 (C6H12O6 · H2O) 4g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L, Na2HPO4 · 3H207g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、MgSO4 · 7H20 2g/L，溶剂为蒸馏水，利用 3mol/L 盐酸溶液和 3mol/L NaOH溶液调整至7.0。加入适量泡敌。控制发酵温度为37°C、溶氧25%以上进行发酵，发酵初期不补料。当发酵液中溶氧明显上升时，开始补料。生长阶段补料培养基配方组成葡萄糖C6H12O6 · H20)700g/L、蛋白胨170g/L、酵母粉150-g/L、MgSO4 · 7H20 5g/L，pH值为7. 0。通过调控补料速率，使发酵液中的葡萄糖浓度保持在lg/L，从而使比生长速率保持在0. 21Γ1。发酵中期补料发酵20时后，残糖(残留葡萄糖)下降到lg/L，此时开始诱导阶段补料流加，诱导阶段补料培养基配方组成为甘油 300g/L、蛋白胨 150g/L、酵母粉 130g/L、MgSO4 · 7H20 3g/L，pH 值为 7. 0。经IPTG诱导后，继续发酵到24时放罐。最终肿瘤转移抑制蛋白⑶12产量达到 3g/L，如发酵曲线图1所示。发酵过程中，其他的发酵参数为温度37°C、溶氧25%以上。实施例3 利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，包括以下步骤挑取大肠杆菌工程菌单克隆于LB培养基(含氨苄青霉素50yg/ml)中，37°C，转速200rpm/min条件下培养12_14h，作为一级种子。然后，按照3%接种量接种于二级种子药瓶培养基中(g/L)蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H20)2g/L、NaCl lg/ L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L, Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、 MgSO4 · 7H20 lg/L，pH 7.0。37°C、转速200r/min条件下培养8小时按接种量3%按培养基体积计接种到3. 7L发酵罐中。发酵初期采用优化的发酵培养基(g/L):蛋白胨15g/L、酵母粉10g/L、葡萄糖 (C6H12O6 · H2O) 2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、Na2HPO4 · 3H207g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、MgSO4 · 7H20 2g/L，溶剂为蒸馏水，利用 3mol/L 盐酸溶液和 3mol/L NaOH溶液调整至7.0。加入适量泡敌。控制发酵温度为37°C、溶氧25%以上进行发酵，发酵初期不补料。当发酵液中溶氧明显上升时，开始补料。生长阶段补料培养基配方组成葡萄糖(C6H12O6* H2O)600g/L、蛋白胨170g/L、酵母粉150-g/L、MgSO4 · 7H20 5g/L，pH值为7. 0。通过调控补料速率，使发酵液中的葡萄糖浓度保持在lg/L，从而使比生长速率保持在0. 151。发酵中期补料发酵22小时后，残糖(残留葡萄糖)下降到lg/L，此时开始诱导阶段补料流加，诱导阶段补料培养基配方组成为甘油250g/L、蛋白胨150g/L、酵母粉130g/L、MgS04 ·7Η20 3g/L，pH值为7. 0。经IPTG诱导后，继续发酵到26小时放罐。最终肿瘤转移抑制蛋白⑶12产量达到 2.4g/L。发酵过程中，其他的发酵参数为温度37°C、溶氧25%以上。实施例4利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，包括以下步骤将大肠杆菌工程菌经一级种子培养及二级种子培养后，按接种量3wt%将二级种子培养液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中的培养基采用优化过的LB培养基，控制发酵温度为37°C、 PH为7. 0，待发酵液中溶氧出现明显上升时开始流加生长阶段补料培养基，最终菌浓OD达到116时开始流加诱导阶段补料培养基，调节诱导阶段补料培养基流加速率降低比生长速率，最后经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导，获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。其中，使用的一级种子培养的培养基为含氨苄青霉素50μ g/ml的LB培养基， LB培养基包括以下组分及含量蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L, pH7. 0，培养温度为37°C，转速200rpm/min，培养12_14h ；二级种子培养的培养基包括以下组成成分蛋白胨 10g/L、酵母粉 5g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H20)2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、 Na2HPO4 · 3H20 7g/L,K2HPO4 · 3H20 4g/L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L,MgSO4 · 7H20 lg/L, pH 为 7. 0， 培养温度为37°C，转速200rpm/min，培养8h ；优化过的LB培养基组成包括以下组分及含量蛋白胨 10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖(C6H12O6 -H20)2g/L,NaCl 1 g/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、Na2HPO4 ·3Η20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/L, ZnSO4 · 7Η20 0. lg/L、MgS04 · 7H20 lg/L，溶剂为蒸馏水，利用3mol/L盐酸溶液和3mol/L NaOH溶液调整pH值至7. 0，生长阶段补料培养基包括以下组分及含量葡萄糖(C6H12O6 · H2O) 500g/L、蛋白胨150g/L、酵母粉150g/L、MgS04 · 7H20 5g/L, pH值为7. 0 ；诱导阶段补料培养基包括以下组分及含量甘油200g/L、蛋白胨130g/ L、酵母粉 130g/L、MgSO4 · 7H20 3g/L，pH 值为 7. 0。发酵培养分为发酵初期、发酵中期与发酵后期三个阶段，发酵中期从发酵液中的溶氧开始出现明显上升时开始，到菌体浓度达到基本恒定，所述的发酵后期是从加入IPTG 开始诱导到诱导结束。发酵前期为间歇发酵，发酵液中溶氧出现明显上升时为发酵中期，最终菌浓OD达到116时为发酵后期，发酵中期及发酵后期采用反馈流加，向发酵罐中补加补料培养基，使发酵罐中的碳源浓度保持在lg/L，发酵中期的菌体生长恒定的比生长速率为 0. lh—1，发酵后期的菌体生长比生长速率为ο. OSh-10实施例5利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，包括以下步骤将大肠杆菌工程菌经一级种子培养及二级种子培养后，按接种量3wt%将二级种子培养液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中的培养基采用优化过的LB培养基，控制发酵温度为37°C、 PH为7. 0，待发酵液中溶氧出现明显上升时开始流加生长阶段补料培养基，最终菌浓OD达到116时开始流加诱导阶段补料培养基，调节诱导阶段补料培养基流加速率降低比生长速率，最后经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导，获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。其中，一级种子培养的培养基为含氨苄青霉素50 μ g/ml的LB培养基，LB培养基包括以下组分及含量蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L，pH7. 0，培养温度为37°C，转速 200rpm/min，培养12_14h ；二级种子培养的培养基包括以下组成成分蛋白胨10g/L、酵母粉 5g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H2O) 2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、Na2HPO4 · 3H20 7g/L、 K2HPO4 · 3H20 4g/L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L,MgSO4 · 7H20 lg/L, pH 为 7. 0，培养温度为 37°C，转速200rpm/min，培养他；优化过的LB培养基组成包括以下组分及含量蛋白胨15g/L、酵母粉 10g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H20)5g/L、NaCl 2g/L、NaH2PO4 · 12H20 4g/L、Na2HPO4 · 3H20 9g/ L、K2HPO4 · 3H20 6g/L、ZnSO4 · 7H20 0. 2g/L、MgSO4 · 7H20 2g/L，溶剂为蒸馏水，利用 3mol/ L盐酸溶液和3mol/L NaOH溶液调整pH值至7. 0 ；生长阶段补料培养基包括以下组分及含量葡萄糖(C6H12O6 ·Η20)70(^/1、蛋白胨 175g/L、酵母粉 175g/L、MgS04 ·7Η20 7g/L，pH 值为 7. 0 ；诱导阶段补料培养基包括以下组分及含量甘油300g/L、蛋白胨150g/L、酵母粉150g/ L、MgSO4 · 7H20 5g/L，pH 值为 7· 0。发酵培养分为发酵初期、发酵中期与发酵后期三个阶段，发酵中期从发酵液中的溶氧开始出现明显上升时开始，到菌体浓度达到基本恒定，所述的发酵后期是从加入IPTG 开始诱导到诱导结束。发酵前期为间歇发酵，发酵液中溶氧出现明显上升时为发酵中期，最终菌浓OD达到116时为发酵后期，发酵中期及发酵后期采用反馈流加，向发酵罐中补加补料培养基，使发酵罐中的碳源浓度保持在2g/L，发酵中期的菌体生长恒定的比生长速率为 ο. ar1，发酵后期的菌体生长比生长速率为o. ltr1。
权利要求
1.利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤将大肠杆菌工程菌经一级种子培养基培养及二级种子培养基培养后，按接种量 3wt%将二级种子培养液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵罐中的培养基采用优化过的 LB培养基，控制发酵温度为37°C、pH为7. 0，待发酵液中溶氧出现明显上升时开始流加生长阶段补料培养基，菌浓OD达到116时开始流加诱导阶段补料培养基，调节诱导阶段补料培养基流加速率降低比生长速率，最后经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导，获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。
2.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的一级种子培养基为含氨苄青霉素50 μ g/ml的LB培养基，LB培养基包括以下组分及含量蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L，pH7. 0，培养温度为及含量37°C，转速 200rpm/min，培养 12_14h。
3.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的二级种子培养基包括以下组成成分蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖 (C6H12O6 · H2O) 2g/L、NaCl lg/L、NaH2PO4 · 12H20 2g/L、Na2HPO4 · 3H20 7g/L、K2HPO4 · 3H20 4g/ L、ZnSO4 · 7H20 0. lg/L、MgSO4 · 7H20 lg/L, pH 为 7. 0，培养温度为 37°C，转速 200rpm/min, 培养8h。
4.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的发酵培养分为发酵初期、发酵中期与发酵后期三个阶段，发酵前期为间歇发酵，发酵中期及发酵后期采用反馈流加，向发酵罐中补加补料培养基，使发酵罐中的碳源浓度保持在l_2g/L。
5.根据权利要求4所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的发酵中期从发酵液中的溶氧开始出现明显上升时开始，到菌体浓度达到基本恒定；所述的发酵后期是从加入IPTG开始诱导到诱导结束，即22-26h。
6.根据权利要求4所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的发酵中期的菌体生长恒定的比生长速率为0. 1-0. 21Γ1，发酵后期的菌体生长比生长速率为0. 05-0. ItT1。
7.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的优化过的LB培养基组成包括以下组分及含量蛋白胨10-15g/L、酵母粉 5-10g/L、葡萄糖(C6H12O6 · H2O) 2-5g/L、NaCl 1-2g/L、NaH2PO4 · 12H20 2_4g/L、Na2HPO4 · 3H20 7-9g/L,K2HPO4 · 3H20 4_6g/L、ZnS04 · 7H200. 1-0. 2g/L、MgS04 · 7H20 l_2g/L，溶剂为蒸馏水， 利用3mol/L盐酸溶液和3mOl/LNa0H溶液调整pH值至7. 0。
8.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，其特征在于，所述的生长阶段补料培养基包括以下组分及含量葡萄糖(C6H12O6 · H20)500-700g/ L、蛋白胨 150-175g/L、酵母粉 150-175g/L、MgSO4 · 7H205_7g/L，pH 值为 7. 0。
9.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法， 其特征在于，所述的诱导阶段补料培养基包括以下组分及含量甘油200-300g/L、蛋白胨 130-150g/L、酵母粉 130-150g/L、MgSO4 · 7H20 3_5g/L，pH 值为 7. 0。
全文摘要
本发明涉及利用大肠杆菌累积生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的方法，将已完成构建大肠杆菌经一级、二级种子培养后，按接种量3wt％将二级种子培养液接种到发酵罐中，控制发酵温度为37℃、pH为7.0，待发酵液中溶氧出现明显上升时开始流加补料培养基，使菌体在恒定的比生长速率条件下进行生长，最终实现高细胞密度发酵，最终菌浓OD可达到116，经0.2mM IPTG诱导4h后，获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。与现有技术相比，本发明可有效的减少发酵过程中的非最有经济阶段，且发酵策略控制简单、目的蛋白产量较高，具有较大的工业化应用前景。
文档编号C12P21/02GK102286580SQ20111018501
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月4日 优先权日2011年7月4日
发明者孙爱友, 张星, 徐瑞, 王丽华, 王学东, 董玉国, 魏东芝 申请人:华东理工大学