作为p的制作方法

专利名称：作为p的制作方法
技术领域：
本发明涉及双环氮杂环类化合物。更具体地，本发明涉及一些杂烷基氨基-取代的二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶酮衍生物，含有它们的药物制剂，其用作治疗剂的方法，及其制备方法。
促分裂原活化的蛋白激酶(MAP)是通过双磷酸化活化其底物的针对脯氨酸的丝氨酸/苏氨酸激酶的家族。该激酶被包括营养和渗透应力，UV光，生长因子，内毒素和炎性因子在内的各种信号激活。一组MAP激酶是包括各种同工型(如p38α，p38β和p38γ)的p38激酶组。该p38激酶负责磷酸化和激活转录因子以及其它激酶，且其自身被物理和化学应力，促炎细胞因子和细菌脂多糖活化。
更重要地，已发现p38磷酸化产物介导炎性细胞因子，包括TNF和IL-1的产生。这些细胞因子的每一个均和很多疾病状态相关。例如，TNFα是主要由活化的单核细胞和巨噬细胞产生的细胞因子。已发现其过度或失控的产生在类风湿性关节炎的发病中起致病作用。最近，发现抑制TNF的产生在治疗炎症，炎性肠病，多发性硬化和哮喘中有着广泛的应用。
TNF与病毒感染有关，其中例如HIV，流感病毒，和疱疹病毒，包括单纯疱疹病毒1型(HSV-1)，单纯疱疹病毒2型(HSV-2)，举细胞病毒(CMV)，水痘-带状疱疹病毒(VZV)，EB病毒，人疱疹病毒-6(HHV-6)，人疱疹病毒-7(HHV-7)，人疱疹病毒-8(HHV-8)，假性狂犬病和鼻气管炎。
类似地，IL-1通过活化的单核细胞和巨噬细胞产生，并且在包括类风湿性关节炎，发烧和骨吸收减少的许多病理学反应中起着作用。
通过抑制p38激酶抑制这些细胞因子有益于控制，减少和缓解许多这些疾病。
在一个方面，本发明提供了下式代表的化合物 其中下标n代表0-3的整数；R1是酰基，杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂烯基，杂炔基，杂烷基羰基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂取代的环烷基烯基，杂取代的环烷基炔基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的杂环基螺环烷基，-(亚烷基)-C(O)-R11或-(亚杂烷基)-C(O)-R11；其中R11是烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，羟基，或烷氧基；R2在每次出现时各自独立地是烷基，卤代，杂烷基或烯基；R3是氢，烷基，杂烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，任选地取代的环烷基，环烯基，任选地取代的环烷基烷基，卤代烷基，氰基烷基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，-(亚烷基)-C(O)R31，或-(杂亚烷基)-C(O)R31；其中R31是烷基，卤代烷基，羟基，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，或任选地取代的杂芳烷基；和R4是氢，烷基，或-(亚烷基)-COR31；
各个异构体、各种异构体的外消旋或非外消旋混合物及其药用盐。
式I化合物及其前述的盐是蛋白酶抑制剂，和在体内表现出令人惊奇地有效的抗p38活性。有趣的是，式I化合物在低于大约10μM的水平并不表现出抗T-细胞酪氨酸激酶p561ck活性。该化合物可用于治疗促炎细胞因子如TNF和IL-1介导的疾病。
在本说明书中“烷基”是指1-6个碳原子的直链饱和单价烃基或3-6个碳原子的支链饱和单价烃基，例如甲基、乙基、正丙基、2-丙基、叔丁基，戊基等。
“亚烷基”是指1-6个碳原子的直链饱和二价烃基或3-6个碳原子的支链饱和二价烃基，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、2-甲基亚丙基、亚戊基等。
“亚烯基”是指2-10个碳原子和至少一个双键的直链或支链二价烃基，例如-CH＝CH-，-CH2CH＝CH-，-C(CH3)＝CH-，CH2CH＝CHCH2-等。
“烯基”是指2-6个碳原子的直链单价烃基或3-6个碳原子的支链单价烃基，它们含有至少一个双键，例如乙烯基、丙烯基等。
“炔基”是指2-6个碳原子的直链单价烃基或3-6个碳原子的支链单价烃基，它们含有至少一个叁键，如乙炔基、丙炔基等。
“任选地取代的环烷基”指3-7个环碳原子的饱和的单价环烃基。该环烷基可任选地被一个，两个或三个选自下列的取代基独立地取代烷基，任选地取代的苯基，或-C(O)R(其中R是氢，烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，羟基，烷氧基，或任选地取代的苯基)。更具体地，术语环烷基包括，例如，环丙基，环己基，苯基环己基，4-羧基环己基，2-羧酰氨环己基，2-二甲基氨基羰基环己基。
“任选地取代的环烷基烷基”指基团-RaRb，其中Ra是亚烷基，Rb如上定义的任选地取代的环烷基，如环丙基甲基，环己基丙基，3-环己基-2-甲基丙基。
“酰基”是指基团-C(O)R’，其中R’是氢、烷基、卤代烷基，杂烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的芳烷基，或任选地取代的杂芳烷基。
“烷氧基”，“芳氧基”，“芳烷氧基”，或“杂芳烷氧基”是指基团-OR，其中R分别是本文定义的烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，或任选地取代的杂芳烷基，如甲氧基，苯氧基，吡啶-2-基甲氧基，苄氧基。
“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选氟和氯。
“卤代烷基”是指被一个或多个相同或不同的卤素原子取代的烷基，例如-CH2CI、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3，并进一步包括其中所有的氢原子均被氟原子取代的烷基如全氟烷基等。
“羟基烷基”指被一个或多个，优选一个，两个或三个羟基取代的本文定义的烷基，条件是相同的碳原子带有不多于一个的羟基。实例是2-羟基乙基，2-羟基丙基，3-羟基丙基，1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基，2-羟基丁基，3-羟基丁基，4-羟基-丁基，2，3-二羟基丙基，1-(羟基甲基)-2-羟基乙基，2，3-二羟基丁基，3，4-二羟基丁基，2-(羟基甲基)-3-羟基丙基，1-(羟基甲基)-乙基，2-羟基-1，1-二甲基乙基，2-(羟基甲基)-丙基，1，1-(二羟基甲基)-乙基，1-甲基-2，3-二羟基丙基，1-(羟基甲基)-2羟基丙基，1-羟基甲基-2甲基丙基，1-羟基甲基-丁基，1-羟基甲基-戊基，1-羟基甲基3-甲基-丁基，1，1-二甲基-2-羟基乙基，1-(羟基甲基)乙基，2，3-(二羟基)-1-甲基丙基，2，3-(二羟基)-1，1-二甲基丙基，1-(羟基-甲基)-2-羟基丙基，和1-(羟基甲基)丙基，优选2-羟基乙基，2，3-二羟基丙基和1-(羟基甲基)-2-羟基乙基。
“单取代的氨基”指基团-NHR，其中R是烷基，杂烷基，卤代烷基或任选地取代的环烷基，环烷基烷基，芳基，芳烷基，芳烯基，杂芳基，杂芳烷基，杂芳烯基，杂环基，或杂环基烷基，如甲基氨基，乙基氨基，苯基氨基，苄基氨基。
“二取代的氨基”指基团-NRR′，其中R和R′各自独立地是烷基，杂烷基，卤代烷基，环烷基或任选地取代的环烷基烷基，芳基，芳烷基，芳烯基，杂芳基，杂芳烷基，杂芳烯基，杂环基，或杂环基烷基，或R和R′及其相连的氮原子一起形成杂环基环。实例包括二甲基氨基，甲基乙基氨基，二(1-甲基乙基)氨基，哌嗪-1-基。
“任选地取代的芳基”是6-10个环原子的一价单环或双环芳烃基，其独立地被一个或多个取代基，优选地一个，两个或三个取代基取代，该取代基选自烷基，卤代烷基，杂烷基，卤代，硝基，氰基，亚甲二氧基，亚乙二氧基，环烷基，任选地取代的苯基，任选地取代的杂芳基，卤代烷氧基，任选地取代的苯氧基，任选地取代的杂芳基氧基，-COR(其中R是烷基或任选地取代的苯基)，-(CR′R″)n-COOR(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和R是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基)或-(CR′R″)n-CONRaRb(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和Ra和Rb各自独立地是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基，或Ra和Rb及其连接的氮原子一起形成任选地取代的杂环基环)。实例包括苯基，1-萘基，和2-萘基，及其衍生物。
“任选地取代的芳烷基”是-RaRb，其中Ra是亚烷基和Rb是如上定义的任选地取代的芳基，如苄基，苯基乙基，3-(3-氯苯基)-2-甲基戊基。
“任选地取代的芳烯基”是-RaRb，其中Ra是亚烯基和Rb是如上定义的任选地取代的芳基，如3-苯基-2-丙烯基。
“任选地取代的芳基杂烷基”是-RaRb，其中Ra是亚杂烷基和Rb是如上定义的任选地取代的芳基，如2-羟基-2-苯基乙基，2-羟基-1-羟基甲基-2-苯基乙基。
“任选地取代的苯基”是苯基环，其独立地被一个或多个取代基，优选地一个，两个或三个取代基取代，该取代基选自烷基，烷氧基，羟基，卤代烷基，杂烷基，卤代，硝基，氰基，亚甲二氧基，亚乙二氧基，环烷基，环烷基烷基，-COR(其中R是烷基或任选地取代的苯基，-(CR′R″)n-COOR(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和R是氢，烷基，环烷基或环烷基烷基)，或-(CR′R″)n-CONRaRb(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和Ra和Rb各自独立地是氢，烷基，环烷基或环烷基烷基，或Ra和Rb及其相连的的氮原子一起形成杂环基环)。
“任选地取代的杂芳基”是5-12个环原子的单价单环或双环基团，其具有至少一个含有一个，两个或三个选自N，O，或S的环杂原子，而其余环原子是C的芳香环，需要理解杂芳基的连接点在芳香环上。该杂芳基环是独立地被一个或多个，优选地一个或两个选自如下的取代基任选地取代烷基，卤代烷基，杂烷基，卤代，硝基，氰基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，-COR(其中R是烷基或任选地取代的苯基，-(CR′R″)n-COOR(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和R是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基)，-NRaRb(其中Ra和Rb各自独立地是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基)，或-(CR′R″)n-CONRcRd(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和Rc和Rd各自独立地是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基，或Rc和Rd及其所连接的氮原子一起形成任选地取代的杂环基环)。实例包括，但不限于，吡啶基，呋喃基，噻吩基，噻唑基，异噻唑基，三唑基，咪唑基，异噁唑基、吡咯基、吡唑基、嘧啶基、苯并呋喃基、四氢苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基，苯并异噻唑基，苯并三唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基或、苯并噻吩基、及其衍生物。
“任选地取代的任选地取代的杂芳烷基”是-RaRb，其中Ra是亚烷基和Rb是本文定义的杂芳基，如吡啶-3-基甲基，3-(苯并呋喃-2-基)-丙基等。
“任选地取代的杂芳烯基”是-RaRb，其中Ra是亚烯基和Rb是本文定义的任选地取代的杂芳基，如3-(吡啶-3-基)丙烯-2-基等。
“任选地取代的杂环基”是3-8个环原子的饱和或不饱和的非芳香的环基，其中一个或两个环原子是选自N，O，或S(O)n(其中n是整数0-2)的环杂原子，而其余环原子是C，其中一个或两个碳原子任选地被羰基代替。该杂环基是独立地被一个，两个或三个选自如下的取代基任选地取代烷基，卤代烷基，杂烷基，卤代，硝基，氰基烷基，羟基，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的芳烷基，-(CR′R″)n-COR(其中n是整数0-5，和R是烷基或任选地取代的苯基)，-(CR′R″)n-COOR(其中是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和R是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基)，或-(CR′R″)n-CONRaRb(其中n是整数0-5，R′和R″独立地是氢或烷基，和Ra和Rb各自独立地是氢，烷基，任选地取代的环烷基或任选地取代的环烷基烷基，或Ra和Rb及其所连接的氮原子一起形成取代的杂环基环)，或-S(O)nRd(其中n是整数0-2，和Rd是氢(条件是n是0)，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，或羟基烷基)。更具体地，术语杂环基包括四氢吡喃基，哌啶子基，N-甲基哌啶-3-基，哌嗪子基，N-甲基吡咯烷-3-基，3-吡咯烷子基，2-氧代-吡咯烷-1-基，吗啉代，硫代吗啉代，硫代吗啉代-1-氧化物，硫代吗啉代-1，1-二氧化物，1，1-二-氧代-四氢噻吩-3-基，吡咯烷，咪唑啉基，2-氧代-咪唑烷基，和其取代的衍生物，如1-(苯基甲基)-哌啶-4-基，1-(氨基羰基甲基)-哌啶-4-基，1-(甲基磺酰基)-哌啶-4-基，1-(羟基乙基)-哌啶-4-基，1-(2，3二羟基丙基)-哌啶-4-基，1-(2-氰基乙基)-哌啶-4-基，1-(1-氰基-甲基)-哌啶-4-基，1-(氨基羰基甲基)-哌啶-4-基，1-(乙氧基-羰基)-哌啶-4-基，1-(2-三氟乙基)-哌啶-4-基，哌啶-4-基，1-甲基哌啶-3-基和1-甲基哌啶-4-基。
“任选地取代的杂环基烷基”是-RaRb，其中Ra是亚烷基和Rb是本文定义的杂环基，如四氢吡喃-2-基甲基，4-甲基哌嗪-1-基乙基，3-哌啶甲基，1-(二甲基氨基羰基甲基)-哌啶-4-基甲基，1-(2-甲氧基羰基-乙基)-哌啶-4-基甲基，1-(2-三氟乙基)-哌啶-4-基甲基，1-(氰基甲基)-哌啶-4基甲基，1-(氨基羰基甲基)-哌啶-4-基甲基，1-(羟基羰基甲基)-哌啶-4-基甲基，2-(哌啶-1-基)-乙基，3-(哌啶-1-基)-丙基，2-(吗啉-1-基)-乙基，3-(吗啉-1-基)-丙基，2-(2-氧代-咪唑啉酮-1-基)-乙基，2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-乙基，和吡咯烷-1-基-乙基。
“杂烷基”是具有一个，两个或三个独立地选自-ORa，-NRbRC，和-S(O)nRd(其中n是整数0-2)的取代基的本文定义的烷基。Ra是氢，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，烷氧基羰基，任选地取代的芳基氧基羰基，甲酰氨基，或单-或二-烷基氨基甲酰。Rb是氢，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基或任选地取代的杂芳烷基。Rc是氢，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，烷基磺酰基，烷基羰基，烷氧基羰基，任选地取代的芳基氧基羰基，甲酰氨基或单-或二-烷基氨基甲酰。Rd是氢(条件是n是0)，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，或羟基烷基。当Ra只是氢时，术语“杂烷基”包括在“羟基烷基”中进一步定义的亚组。实例包括2-甲氧基乙基，苄基氧基甲基，噻吩-2-基硫甲基，2-羟基乙基，2，3-二羟基丙基，3-氨基-2，2二甲基丙基，3-二甲基氨基丙基，3-甲基羰基氨基丙基，3-氨基2-羟基丙基，2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基，2-二乙基氨基乙基，2-甲基硫乙基，3-二甲基氨基乙基，3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基，和2-羟基乙基。
“亚杂烷基”是1-6个碳原子的直链饱和的二价烃基或3-6个碳原子的支链饱和的烃，具有一个，两个或三个独立地选自-ORa，-NRbRC，和-S(O)nRd(其中n是整数0-2)的取代基，其中Ra，Rb，RC，和Rd如本文定义。实例包括，但不限于，2-羟基乙-1，1-二基，2-羟基丙-1，1-二基等。
“杂取代的环烷基”任选地被一个，两个或三个选自羟基，羟基亚胺基(＝NOH)，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，氧代(＝O)，-OC(O)Ra(其中Ra是氢，烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，羟基，烷氧基，或任选地取代的苯基)，-ORb(其中Rb是羟基烷基，卤代烷基，烯基，或烷氧基烷基)，-S(O)nRc(其中n是整数0-2，和Rc是氢(条件是n是0)，烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，或羟基烷基)或-NS(O)2Rd(其中Rd是烷基，卤代烷基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，或羟基烷基)独立地取代。实例包括，但不限于，例如4-羟基环己基，2-氨基环己基，(2-甲氧基乙氧基)环己基，4-氧代环己基，4-(甲磺酰基氨基)环己基，烯丙基氧基环己基等。
“杂烷基取代的环烷基”指可任选地被一个，两个或三个本文定义的杂烷基取代的环烷基。实例包括1-羟基甲基-环戊-1-基，2-羟基甲基-环己-2-基。
“杂环基螺环烷基”指螺基，由各环有5-8个环原子并且两个环仅有一个共同的碳原子的环烷基环和杂环环组成，要理解的是，杂环基螺环烷基的连接点是通过环烷基环。当杂环基代替环烷基的相同碳原子上两个氢原子时，形成了螺基，并且其可任选地被烷基，羟基，羟基烷基，或氧代取代。实例包括1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基，1，3-二氮杂螺[4.5]癸-8-基，2，4-二酮-1，3-二氮杂-螺[4.5]癸-8-基，1，5-二氧杂-螺[5.5]十一烷-9-基，(3-羟基甲基-3-甲基)-1，5-二氧杂-螺[5.5]十一烷-9-基。
“离去基”具有合成有机化学中常规的含义，即能被亲核试剂置换的原子或基团，并且包括卤代(如氯，溴，碘)，烷基磺酰基氧基，芳基磺酰基氧基，烷基羰基氧基(如乙酰氧基)，芳基羰基氧基，甲磺酰氧基，对-甲苯磺酰氧基，三氟甲磺酰基氧基，芳基氧基(如2，4-二硝基苯氧基)，甲氧基，N，O-二甲基羟基氨基等。
“异构现象”指具有相同的分子式，但是其原子结合的性质和序列或其原子的空间排列上不同的化合物。其原子的空间排列上不同的异构体称为“立体异构体”。彼此非镜像的立体异构体称为“非对映体”，而是非叠加的镜像的立体异构体称为“对映体”，或有时的旋光异构体。结合了四个不同的取代基的碳原子称为“手性中心”“手性异构体”指具有至少一个受性中心的化合物。其具有相反的手性的两个对映体，并且可以各个对映体或对映体的混合物形式存在。含有相等量的相反的手性的各个对映体的混合物称为“外消旋混合物”。具有不止一个受性中心的化合物具有2n-1个对映体对，其中n是手性中心数。具有不止一个手性中心的化合物可以以各个非对映体或非对映体的混合物形式存在，称为“非对映体混合物”。当有一个手性中心时，可用该手性中心的绝对构型(R或S)表征该立体异构体。绝对构型是连接到该手性中心的取代基的空间排列。考虑连接到手性中心的取代基按照该Sequence Rule of Cahn，Ingold和Prelog.(Cahn等，Angew.Chem.Inter.编著.1966，5，385；errata 511；Cahn等Angew.Chem.1966，78，413；Cahn和Ingold J.Chem.Soc.London)1951，612；Cahn等Experientia 1956，12，81；Cahn，J.Chem.Educ.1964，41，116)排列。
“几何异构体”指由于其存在使得双键的旋转受阻的非对映体。这些构型在名称上通过前缀顺和反-或Z和E区分，该前缀根据Cahn-IngoldPrelog规则指出该基团位于在立体异构体中可鉴定为共同的参照平面的同侧或异侧，例如分子中的双键或命名取代基在环上的相互位置。
“药用赋形剂”是指可以有效制备药学组合物的通常是安全、无毒并且既无生物学活性也无不良作用的赋形剂，而且包括兽医以及人类药用可接受的赋形剂。说明书和权利要求书中使用的“药学可接受赋形剂”包括一种或一种以上的赋形剂。
化合物的“药用盐”是指药学可接受并具有母体化合物的预期药理学活性的化合物。此类盐包括(1)酸加成盐，与无机酸形成的酸加成盐，所述的无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与有机酸形成的酸加成盐，有机酸例如是乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯代苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、4，4′-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子代替时生成的盐，所述的金属离子例如是碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；或与有机碱配位时生成的盐，所述的有机碱例如是乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
“前药”是指任何当将此类前药施用给哺乳动物对象时可以释放出式(I)的活性母体药物的化合物。式(I)的化合物的前药是通过修饰式(I)的化合物中存在的官能团来制得，制备所采用的方式应使该修饰可以体内裂解释放出母体化合物。前药包括式(I)的化合物，其中式(I)的化合物中羟基、氨基或巯基分别与任何可以在体内裂解再生出游离羟基、氨基或巯基的基团结合。前药的实例包括但不限于式(I)的化合物中的羟基的酯(例如，醋酸酯、甲酸酯或苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如N，N-二甲基氨基羰基)，等等。
“保护基”是指那些在连接到分子中的反应性基团时，能掩蔽，降低或预防该反应性的原子团。保护基的实例参见T.W.Greene和P.G.Futs，Protective Groups in Organic Chemistry，(Wiley，2nd ed.1991)和Harrison和Harrison等，Compendium of Synthetic Organic Methods，Vols.1-8(JohnWiley和Sons.1971-1996).代表性的氨基保护基包括甲酰基，乙酰基，三氟乙酰基，苄基，苄基氧基羰基(CBZ)，叔丁氧基羰基(Boc)，三甲基甲硅烷(TMS)，2-三甲基甲硅烷-乙磺酰基(SES)，三苯甲游基和取代的三苯甲游基，烯丙基氧基羰基，9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)，硝基藜芦基氧基羰基(NVOC)等。代表性的羟基保护基包括那些其中的羟基被酰化或烷基化的基团，如苄基和三苯甲游基醚和烷基醚，四氢吡喃醚，三烷基甲硅烷基醚和烯丙基醚。
疾病的“治疗”或“疗法”包括(1)预防疾病，也就是使疾病的临床症状不会在哺乳动物中发展，所述的哺乳动物可能与该疾病接触或易患有该疾病但不曾经历或显现出疾病的该症状，(2)抑制疾病，也就是阻止或减轻该疾病或其临床症状的发展，或(3)缓解疾病，也就是引起疾病或其临床症状的退化。
“治疗有效量”是指当施用给哺乳动物治疗疾病时，足以治疗该疾病的化合物的量。“治疗有效量”应根据化合物、被治疗的疾病及其严重性、受治者的年龄和相对健康状况，给药途径，主治医师的判断以及其它因素来改变。
在一个方面，本发明提供了下式的化合物 在式(I)化合物的主要的实施方案中，R1代表酰基，杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂烯基，杂炔基，杂烷基羰基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂取代的环烷基烯基，杂取代的环烷基炔基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的杂环基螺环烷基，-(亚烷基)-C(O)-R11基或(亚杂烷基)-C(O)-R11；其中R11代表烷基，卤代烷基，羟基，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基或任选地取代的杂芳烷基。在优选的实施方案中，R1是酰基，杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂烯基，杂炔基，杂烷基羰基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂取代的环烷基烯基，杂取代的环烷基炔基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，-(亚烷基)-C(O)R11或-(亚杂烷)-C(O)-R11；其中R11是烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，羟基或烷氧基。
在上述主要的实施方案和优选的实施方案的更优选的实施方案中，R1是杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂烷基取代的环烷基，杂环基或杂环基烷基，更优选杂烷基或杂取代的环烷基。在R1是杂烷基的实施方案中，烷基优选地被一个或两个取代基取代，该取代基独立地选自ORa或-NRbRc其中Ra是氢，Rb是氢，烷基，Rc是氢，烷基和烷基羰基。特别的R1基是3-氨基-2，2-二甲基丙基，3-二甲基氨基丙基，3-甲基羰基氨基丙基，和3-氨基-2-羟基丙基。在杂烷基的优选的实施方案中，R1是羟基烷基。
在R1是羟基烷基(其中Ra是氢)的杂烷基的优选的实施方案中，该基团优选地选自2-羟基乙基，2-羟基丙基，3-羟基丙基，1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基，2-羟基丁基，3-羟基丁基，4-羟基-丁基，2，3-二羟基丙基，1-(羟基甲基)-2-羟基乙基，2，3-二羟基丁基，3，4-二羟基丁基，2-(羟基甲基)-3-羟基丙基，1-(羟基甲基)-乙基，2-羟基-1，1-二甲基乙基，2-(羟基甲基)-丙基，1，1-(二羟基甲基)-乙基)，1-甲基-2，3-二羟基丙基，1-(羟基甲基)-2-羟基丙基，1-羟基甲基-2-甲基丙基，1-羟基甲基-丁基，1-羟基甲基-戊基，1-羟基甲基-3-甲基-丁基，1，1-二甲基-2-羟基-乙基，1-(羟基甲基)乙基，2，3-(二羟基)-1-甲基丙基，2，3-(二羟基)-1，1-二甲基丙基，1-(羟基甲基)-2-羟基丙基，和1-(羟基甲基)丙基。在其它优选的实施方案中，R1是具有连接到该氮原子上的四面体碳的基团，更优选具有连接到该碳原子的低级烷基。更优选地，R1中的羟基烷基1-羟基-2-甲基-2-丙基和1-羟基-2-丙基。
在R1是“杂取代的环烷基”的实施方案中，环烷基优选地任选地被一个，两个或三个，优选地一个取代基独立地取代，该取代基选自羟基，羟基亚胺基(＝NOH)，烷氧基，氨基，单烷基取代的氨基，二烷基取代的氨基，氧代(＝O)，-OC(O)Ra(其Ra是氢，烷基，氨基，单烷基取代的氨基，二烷基取代的氨基，-ORb(其中Rb是羟基烷基，烯基，或烷氧基烷基)，-S(O)nRc(其中n是整数0-2，优选2，和Rc是氢(条件是n是0)或烷基)或-NS(O)2Rd(其中Rd是烷基，氨基，单烷基取代的氨基，或二烷基取代的氨基。更优选地，杂取代的环烷基是4-羟基环己基，2-氨基环己基，(2-甲氧基乙氧基)环己基，4-氧代环己基，4-(甲磺酰基氨基)环己基，烯丙基氧基环己基，2-羟基环己基，4-甲氧基环烷基，4-甲基羰基氧环己基，2，3-二羟基丙基氧基环己基，4-(羟基亚氨基)环己基，4-(甲基磺酰基氨基)环己基，4-(二甲基氨基磺酰基氨基)环己基，4-甲酰基氧基环己基，4-(甲氧基羰基氧基)环己基，4-(氨基羰基-氧基)环己基，或4-(N-甲基羰基氧基)环己基，最优选4-羟基环己基(包括顺或反-4-羟基环己基)。
当R1是“任选地取代的杂环基”时，杂环基环优选地任选地被一个，两个或三个，优选地一个取代基独立地取代，该取代基选自烷基，卤代烷基，杂烷基优选羟基烷基，氰基烷基，芳烷基优选苯基烷基，-CR′R″)n-COR(其中n是整数0-5，和R是烷基)，-(CR′R″)n-COOR(其中n是整数0-5，R′和R″是氢，和R是氢或烷基)，或-(CR′R″)n-CONRaRb(其中n是整数0-5，R′和R″是氢，和Ra和Rb各自独立地是氢或烷基)或-S(O)nRd(其中n是整数0-2，优选地2，和Rd是氢(条件是n是0)或烷基)。更具体地，“杂环基”是四氢吡喃基，哌啶子基，哌嗪子基，N-甲基吡咯烷-3-基，3-吡咯烷子基，2-氧代-吡咯烷-1-基，吗啉代，硫代吗啉代，硫代吗啉代-1-氧化物，硫代吗啉代-1，1-二氧化物，1，1-二氧代-四氢噻吩-3-基，吡咯啉基，咪唑啉基和2-氧代-咪唑烷基，其如上所述地被任选地取代；更优选哌啶子基衍生物如N-甲基哌啶-3-基，1-(苯基甲基)哌啶-4-基，1-(氨基羰基甲基)哌啶-4-基，1-(甲基-磺酰基)哌啶-4-基，1-(羟基乙基)哌啶-4-基，1-(2，3-二羟基丙基)-哌啶-4-基，1-(2-氰基乙基)哌啶-4-基，1-(1-氰基甲基)哌啶-4-基，1-(氨基羰基甲基)哌啶-4-基，1-(乙氧基羰基)哌啶-4-基，1-(2-三氟乙基)哌啶-4-基，1-(二甲基氨基羰基甲基)-哌啶-4-基，1-(2-甲氧基羰基乙基)-哌啶-4-基，和1-(羟基羰基甲基)哌啶-4-基。
当R1是“任选地取代的杂环基烷基“时，该杂环基优选地定义如下文的R1中所定义的“杂环基”。最优选地，杂环基烷基是1-(二甲基氨基羰基甲基)哌啶-4-基甲基，1-(2-甲氧基羰基乙基)-哌啶-4-基甲基，1-(2-三氟乙基)哌啶-4-基甲基，1-(氰基甲基)-哌啶-4-基甲基，1-(氨基-羰基甲基)-哌啶-4-基甲基，1-(羟基羰基甲基)-哌啶-4-基甲基，2-(哌啶-1-基)-乙基，3-(哌啶-1-基)-丙基，2-(吗啉-1-基)-乙基，3-(吗啉-1-基)-丙基，2-(2-氧代-咪唑啉-1-基)乙基，和2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)乙基。
当R1是“杂烷基取代的环烷基”时，环烷基任选地被一个，两个或三个，优选地一个杂烷基，优选羟基烷基，如前文定义的基团取代。优选地该基团是1-羟基甲基-环戊-1-基和2-羟基甲基-环己-2-基。
当R1是“任选地取代的杂环基螺环烷基”时，优选1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基，1，3-二氮杂螺[4.5]癸-8-基，2，4-二酮-1，3-二氮杂螺[4.5]癸-8-基，1，5-二氧杂-螺[5.5]十一烷-9-基和(3-羟基甲基-3-甲基)-1，5-二氧杂-螺[5.5]十一烷-9-基。
返回式I，R2代表烷基，卤代，杂烷基或烯基和除非被氢占据，其可连接到苯环上其余的五价的任何一处。下标n是整数0-3，表明该苯环可被0-3个R2取代。对于存在2或3个R2的实施方案，彼此独立。在式I化合物的优选的实施方案和上述R2的优选的实施方案中，n是1或2和各个R2是卤代或烷基，特别地甲基，更优选地R2是卤代。在此实施方案中更进一步优选的是，其中-(R2)n代表2-卤代或2，6二卤代，更优选2-氯代或2，6-二氯代或其中-(R2)n代表2-甲基的实施方案。
在式(I)化合物中，R3代表氢，烷基，杂烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，任选地取代的环烷基，环烯基，任选地取代的环烷基烷基，卤代烷基，氰基烷基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，-(亚烷基)-C(O)R31或-(亚杂烷基)-C(O)R31；其中R31代表烷基，卤代烷基，羟基，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基和任选地取代的杂芳烷基。
在优选的实施方案中，R3选自氢，烷基，杂烷基，芳基特别是苯基，芳烷基特别是苯基甲基，环烷基，卤代烷基，氰基烷基，杂取代的环烷基，杂环基，-(亚烷基-C(O)-R31；其中R31代表烷基，羟基，烷氧基，氨基，单烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基。
在更优选的实施方案中，R3选自氢，烷基，环烷基，卤代烷基，杂烷基，杂环基和杂取代的环烷基。更优选地，R3是氢，烷基，卤代烷基或杂烷基。在特别优选的实施方案中，R3是氢。在另一特别优选的实施方案中，R3是甲基。在另一特别优选的实施方案中，R3是卤代烷基，特别是2，2，2-三氟乙基，或R3是杂烷基，而2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基，2-二乙基氨基乙基，2-甲基硫乙基，3-二甲基氨基乙基，3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基，和2-羟基乙基是特别优选的杂烷基。
在式(I)化合物中，R4代表氢，烷基，和-亚烷基-COR31。在优选的实施方案中，特别地对于前述的主要和优选的R1实施方案，R4代表氢。如R4代表-亚烷基-COR31，其优选地是-CH2CONH2。
除了上述化合物外，本发明还包括这些化合物的所有的药用盐及其前药和所有的纯手性形式或外消旋混合物或其它形式的混合物形式的异构体。
而且，上述优选的基团的组合会形成其它优选的实施方案。在一组主要的，优选的，和更优选的R1实施方案中，R1是杂烷基，R2是卤代或甲基，R3是甲基，和n是1或2。
在另一组中，其中R1是杂取代的环烷基，R2是卤代或甲基，R3是甲基和n是1或2，特别地其中R1是羟基环烷基，包括顺式或反式-羟基环烷基，特别是顺式或反式-4-羟基-环己基。
在进一步的组中，其中R1是杂环基或杂环基烷基，R2是卤代或甲基，R3是甲基或氢，n是1或2，或其中R2是卤代或甲基，R3是杂烷基，n是1或2。
特别优选的化合物选自7-(反式-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，3-(2-氯代苯基)-7-(四氢吡喃-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，7-[1-(2-羟基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，3-(2-氯代苯基)-7-[(反式-4-甲氧基环己基)甲基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮，和3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮及其药用盐。
在另一方面，本发明提供了制备上述化合物的方法。
在一种方法中，式I化合物可通过包括如下步骤的方法制备(a)式II化合物 其中n，R2和R3具有上述式I化合物中的意义，条件是任何干扰性的反应基任选地呈被保护的形式，并且L是离去基，用式III的胺进行处理R1R4-NH (III)其中R1和R4具有上述式I化合物中的意义，条件是任何干扰性的反应基任选地呈被保护的形式，并且必要时，除去反应产物中存在的任何保护基，必要时，该化合物可转化成其药用盐。
在另一种方法中，式I化合物可通过包括如下步骤的方法制备(a)在碱存在下，处理式IV化合物 其中X是卤代，R是烷基，和R2和R3具有上述式I化合物中的意义，得到式V化合物 (b)用氧化剂，随后用式R1R4NH的胺(其中R1和R4具有上述式I化合物中的意义)处理式V化合物得到式(I)化合物。必要时，该化合物可转化成其药用盐。
本发明的化合物可使用本领域周知的工艺，通过各种方法制备。关于上述方法，如反应流程1和反应流程4更详细的描述制备本发明的化合物。
反应流程1
用伯胺(R3-NH2)处理式1a化合物(其中R是烷基，芳基或芳烷基)得到式Ib化合物。该反应方便地在在反应条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚(如四氢呋喃)，卤代脂族烃，特别是二氯代甲烷，任选地卤代的芳族烃，甲酰胺，低级链烷醇，或水中进行。合适地，反应在大约-20℃至大约120℃下进行。
还原式Ib化合物得到式Ic醇。该还原一般以本领域周知的方式用氢化铝锂进行(如在在该还原条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚，特别是四氢呋喃中在大约-20℃至大约70℃下，优选地在大约0℃至大约室温下进行)。
在接着的步骤中，氧化式Ic醇得到式Id甲醛。该氧化一般用二氧化锰进行，尽管也可使用许多的其它方法(参见，例如，ADVANCEDORGANIC CHEMISTRY，4THED.，March，John Wiley & Sons，New York(1992))。根据所用的氧化剂，反应在在该特定的氧化条件下是惰性的溶剂，优选卤代脂族烃，特别是二氯甲烷，或任选地卤代的芳族烃中进行。合适地，该氧化在大约0℃至大约60℃下进行。
式Id的甲醛与取代的苯胺(R2)n-C6H5-nNH2反应得到式Ie化合物。该反应可在酸，如芳族磺酸，优选地4-甲苯磺酸的存在下，用共沸除去反应中形成的水而进行。方便地，反应反应在在反应条件下是惰性的溶剂，优选芳族烃，特别是甲苯或二甲苯，或任选地卤代的芳族烃，和大约70℃至大约150℃下，特别地在有助于所述的共沸除去水的回流温度下进行。
还原式Ie化合物以得到式If化合物的反应可在本领域周知的条件下，用例如氢化物还原剂如硼氢化钠，氢化铝锂或三乙酰氧硼氢化钠进行。优选地，式Ie化合物是非纯化的，而是浓缩制备其的反应混合物，并将所得的浓缩物溶解在在还原条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚，特别是四氢呋喃，或任选地卤代芳族烃或低级链烷醇中，然后用前述还原剂处理。合适地，反应在大约-10℃至大约100℃，优选地在大约0℃下进行。
环化式If的化合物得到式Ig双环氮杂环。该环化可方便地在叔有机碱，优选三(低级烷基)胺，特别是三乙基胺的存在下与羰基化剂如光气或氯甲酸三氯甲酯(或另一光气等价物)反应而进行。更特别地，环化在在反应条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚，特别是四氢呋喃，任选地卤代的芳族烃或卤代脂族烃中进行。合适地，反应在大约-20℃至大约50℃下，优选地在大约-20℃至大约0℃下进行。
用过氧酸如3-氯代过苯甲酸或Oxone(单过硫酸三聚钾盐)在水性非质子传递溶剂如四氢呋喃中氧化Ig得到砜(Ih)(或者，必要时，通过控制氧化条件得到其相应的亚砜，其可转化成各种目的化合物。典型地，Ig的氧化在在氧化条件下是惰性的溶剂，优选卤代脂族烃，特别是氯仿或二氯甲烷中，在大约-20℃至大约50℃下，优选地在大约0℃至大约室温下进行。
最后，用胺(R1R4-NH)处理Ih得到式I的目标化合物。反应在有或无溶剂的存在下进行。可用的溶剂包括极性非质子溶剂，包括醚如二甲氧基乙烷，二甲氧基乙基醚和四氢呋喃和偶极非质子溶剂如二甲基甲酰胺和N，N-二甲基吡咯烷酮。方便地，反应在大约0℃至大约200℃下，优选地在大约室温至大约150℃下进行。
相应地，本发明提供了制备式I化合物的方法，其通过用胺(R1R4-NH)处理通式Ii化合物而进行。 在化合物Ii中，符号R2，R3，R4和下标n具有上述式I中的含义。字母L代表离去基，可为卤素，低级烷基磺酰基或烷基亚磺酰基(如甲磺酰基，甲亚磺酰基或三氟甲磺酰基)或芳族磺酰基或亚磺酰基(如苯磺酰基，苯亚磺酰基或4-甲苯磺酰基).其它合适的离去基本领域周知的那些，并且可参见，例如ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY，4THED.，March，John Wiley & Sons，New York(1992)。合适的胺(R1-NH2)其中的R1代表式I中的任一R1基的那些。
在另一实施方案中，可如反应流程2所示先构建双环氮杂环，而R3可在较晚的阶段引入。
反应流程2 反应流程2中的原料，化合物Iia可以通过市售的式Ia化合物的置换反应得到反应流程1中的式Ib化合物而制备。简单地说，用合适的胺处理巯基化合物得到式Ib化合物(R3＝H)。可按照反应流程1提供的步骤转化Ib(R3＝H)成IIa。
环化IIa得到式IIb的双环氮杂环。该环化可方便地在叔有机碱，优选三(低级烷基)胺，特别是三乙胺的存在下与光气或氯甲酸三氯甲酯(或另一光气等价物)反应而进行。更特别地，环化在反应条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚，特别是四氢呋喃，任选地卤代的芳族烃或卤代脂族烃中进行。方便地，反应在大约-20℃至大约50℃下，优选地在大约0℃至大约室温下进行。
引入R3以得到式IIc化合物可在各种条件下进行。例如，可用碱金属氢化物，特别是氢化钠处理IIb，随后与通式R3-L化合物反应，其中R3具有除了氢，芳基或杂芳基外的前文定义的任何含义和L代表离去基(如卤代，甲磺酸酯，三氟甲烷磺酸酯等)。该N-取代方便地在在反应条件下是惰性的溶剂，优选甲酰胺，特别是N-甲基吡咯烷酮或二甲基甲酰胺，开链或环醚或任选地卤代的芳族烃中进行。合适地，反应在大约50℃至大约200℃下，优选地在大约50℃至大约150℃下进行。备选地，烷基化可在甲酰胺溶剂如N-甲基吡咯烷酮于大约0℃至大约25℃下用无机碱如碳酸钾进行。
一个备选的，和优选的引入R3的方法涉及通过Mitsunobu反应烷基化嘧啶酮。在该方法中，通式R3-OH醇与通式IIb化合物在三苯膦，二乙基偶氮二羧酸酯或二苯基吡啶和叔-丁基偶氮二羧酸酯(参见，Tetrahedron Lett.，404497-4500(1999)存在下化合。烷基化方便地在在反应条件下是惰性的溶剂，优选开链或环醚在大约-20℃至大约100℃下，优选地在大约0℃至大约30℃下进行。作为其它烷基化方法，伯和仲醇最适合于这些条件下的反应。
引入R3后，可如反应流程1所描述的完成氧化和置换(引入R1R4N-)。
在另一实施方案中，该化合物可如反应流程3所示颠倒烷基化和置换步骤的顺序，从而颠倒-R3和-NR1R4引入的顺序制备。反应流程3 相应地，可环化式IIa化合物成IIb(如前面的反应流程2所示)。氧化IIb成IIIa得到随后的置换和烷基化步骤的模板。因此，在上述条件下用R1-NH2处理IIIa得到IIIb，其可用Mitsunobu反应用R3-L(其中L具有上述含义)或R3-OH如前文所述烷基化得到式I的目标化合物。反应流程4 反应流程4提供了制备式I化合物的另一种可选择的方法。
反应流程1和4的原料化合物1a是市售的。如反应流程1所述用合适的胺化剂或亲核试剂处理式Ia化合物提供了式Ib化合物。
用取代的或未取代的苯基异氰酸酯处理式Ib化合物提供了式IVa酰胺化合物。该反应在惰性有机溶剂，优选芳族烃如甲苯或二甲苯中，于大约0℃至大约150℃的温度下进行。
还原式IVa化合物提供了式IVb的醇。该还原是以本领域周知的方式用氢化铝锂进行(如在惰性有机溶剂如开链或环醚，特别是四氢呋喃中，在大约-60℃至大约90℃，优选地在大约-20℃至大约室温下进行。
式IVb醇和卤化剂反应提供了式IVc化合物，其中X是溴代，氯代，或碘代，优选地溴代。尽管可使用许多卤代方法(参见，例如，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY，4THED.，March，John Wiley & Sons，New York(1992))，但是可用三溴化磷或五氯化磷进行该反应分别得到相应的溴代或氯代化合物。方便地，该反应在反应条件下惰性的有机溶剂如开链或环醚，特别是四氢呋喃中，或卤代脂族烃中在大约0℃至大约60℃下进行。
环化式IVc化合物提供了式IVd环氮杂环。该环化可在碱，优选六甲基二硅氮烷存在下进行。一般地，该环化在反应条件下惰性的有机溶剂，优选偶极有机溶剂，如1-甲基-2-吡咯烷酮，N，N-二甲基甲酰胺，或N，N-二甲基-乙酰胺，或二甲基亚砜存在下，和在大约10℃至大约200℃下进行大约1-50小时。优选地，在大约60℃至大约150℃下加热该反应物大约1-10小时。
最后，用氧化剂如N-氯代-琥珀酰亚胺或氯气和水和胺(R1R4-NH)处理Id通过式A的亚砜中间体化合物提供了该式I目标化合物。该在原位氧化/置换反应在反应条件下惰性的溶剂，优选偶极有机溶剂，如1-甲基-2-吡咯烷酮，N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃存在下进行。方便地，该反应是在大约0℃至大约120℃下，更优选在大约室温下进行。
本领域技术人员会理解，可考虑对上述合成路线的某些改进，而这些改进在本发明的范围内。例如，某些步骤涉及与特定反应条件不相容的反应性官能团的保护和脱保护。
在另一方面，本发明涉及含有式I化合物的药物组合物。
该式I化合物和该式I的碱性化合物与酸的药用盐可用作药物，如以药物制剂的形式。这些药物制剂可例如以片剂，包衣片剂，糖锭剂，硬或软明胶胶囊剂，溶液剂，乳剂，或混悬剂的形式口服给药，例如以鼻喷雾剂的形式经鼻给药，或例如以栓剂的形式直肠给药。然而，本发明的化合物尤其适于例如以注射液的形式胃肠外给药。
可用药物惰性的，无机或有机载体配制式I化合物及其前述药用盐制备这些药物制剂。乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其盐可用作例如片剂，包衣片剂，糖锭剂，硬明胶胶囊剂的这种载体。软明胶胶囊剂的合适载体是例如植物油，蜡或脂肪，半固体和液态多元醇等；然而，根据活性物质的性质，在软明胶胶囊剂的情况下，通常不需要载体。制备溶液剂和糖浆的合适载体是例如，水，多元醇，蔗糖，惰性糖和葡萄糖等。栓剂的合适载体是天然或硬化油，蜡，脂肪，半液态或液体多元醇等。
该药物制剂还可含有防腐剂，增溶剂，稳定剂，湿润剂，乳化剂，甜味剂，着色剂，矫味剂，调整渗透压的盐，缓冲液，掩蔽剂或抗氧剂。它们也可含有除式I化合物及其前述药用盐以外的其它治疗上有价值的物质。
含有式I化合物或该式I的碱性化合物与酸形成的药用盐以及相容性药物载体材料的药物也是本发明的目的。另一方面是制备这些药物的方法，包括将一种或多种这些化合物与相容性药物载体一起制成格林(galenical)制剂给药形式。必要时，该药物可含有一种或多种可在制备所述的药物的工艺中加入的其它治疗上有价值的物质。
如上所述，按照本发明，式I化合物及其前述药用盐可用作治疗活性物质，特别是抗炎剂或用于预防移植手术后的移植物排斥。剂量可在宽的范围内变化并且当然在每个特定的病例中按个体的要求进行调整。一般地，在对成人给药的情况下，日剂量应该大约0.1mg/kg至大约100mg/kg，优选地大约0.5mg/kg至大约5mg/kg。日剂量可以单剂量或等份剂量给药，并且在需要时，可超越前述的上限。
最后，本发明的目的还在于式I化合物及其前述药用盐在制备药物，特别是在预防或预防炎症，免疫学，癌症学，支气管肺的，皮肤病学的和心血管疾病，在治疗哮喘，中枢神经系统疾病或糖尿病并发症或用于预防移植手术后的移植物排斥中的用途。
式I化合物用于，但不限于，治疗在人类或其它哺乳动物中的因过度或失控的TNF和/或IL-1或p38激酶的产生而加重或引起的任何疾病或疾病状态。相应地，本发明提供了治疗细胞因子介导的疾病的方法，包括给药干扰细胞因子有效量的式I化合物及其药用盐或互变异构体。
更具体地，式I化合物可用于治疗关节炎，局限性回肠炎，过敏性肠综合症，成人呼吸窘迫综合症，慢性阻塞性肺疾病，骨质疏松，或早老性痴呆。式I化合物用于，但不限于，治疗受治者的炎症，和用作治疗发烧的退烧药。本发明的化合物用于治疗关节炎，包括但不限于，类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎，骨关节炎、系统性红斑狼疮和青少年关节炎、关节炎和其它关节性疾病。该化合物用于治疗肺疾病或肺炎症，包括成人呼吸窘迫综合症、肺结节病，哮喘，矽肺，和慢性肺部炎性疾病。本发明的化合物还用于治疗病毒性和细菌性感染，包括脓毒病、脓毒性休克、革兰氏阴性菌，疟疾，脑膜炎，感染或恶性肿瘤继发性的恶病质，获得性免疫缺陷综合症(AIDS)继发性的恶病质，AIDS，ARC(AIDS相关性复症)，肺炎和疱疹病毒。本发明的化合物还用于治疗骨吸收病，骨质疏松，内毒素性休克、毒性休克综合症、再灌注损伤，自身免疫性疾病，包括移植体对宿主的反应和同种异体移植排斥，心血管疾病，包括动脉粥样硬化、血栓形成，充血性心力衰竭，和心再灌注损伤，肾再灌注损伤，肝脏疾病和肾炎，和由于感染的肌痛。
本发明化合物还用于治疗流感，多发性硬化，癌症，糖尿病，系统性红斑狼疮(SLE)，皮肤相关性疾病如牛皮癣，湿疹，烧伤，皮炎，疤痕疙瘩形成，和疤痕组织形成。本发明化合物还用于治疗胃肠疾病如炎性肠病，局限性回肠炎，胃炎，过敏性肠综合症和溃疡性结肠炎。本发明化合物还用于治疗眼疾病，如视网膜炎，视网膜病，眼色速层炎，眼恐光症，和眼组织的急性损伤。本发明化合物还用于治疗血管生成，包括瘤形成；转移；眼科疾病如角膜移植排斥，眼新血管化，视网膜新血管化，包括损伤或感染后的新血管化，糖尿病性视网膜病，晶状体后纤维组织形成和新血管青光眼；溃疡性疾病如胃溃疡；病理，但非恶性的状况如血管瘤，包括invantile血管瘤，鼻咽的血管纤维瘤和骨的无血管坏死；糖尿病性肾病和心肌病；以及雌性生殖系统疾病如子宫内膜异位。本发明化合物还用于预防环加氧酶-2的产生，并且本发明化合物还用于预防和治疗癌症，尤其是结肠癌。本发明化合物还用于预防和治疗早老性痴呆。
除了用于人类治疗，这些化合物也用于宠物动物，外来动物和农场动物，包括哺乳动物，龃齿类动物等的兽医治疗。更优选的动物包括马，狗和猫。
本发明还可用于共治疗，部分地或完全地代替其它常规的抗炎剂，如与甾类化合物，环加氧酶-2抑制剂，NSAIDs，DMARDS，免疫抑制剂，5-脂氧合酶抑制剂，LTB4拮抗剂和LTA4水解酶抑制剂。
在本文中，术语“TNF介导的疾病”指任何和所有的TNF在其中或者通过控制TNF本身，或者通过TNF引起另一monokine，例如但不限于IL-1，IL-6或IL-8释放而其作用的疾病或疾病状态。其中例如IL-1是主要组分，并且响应于TNF，其产生或作用被加剧或分泌的疾病状态被认为是TNF介导的疾病。
在本文中，术语“p38介导的疾病”指任何和所有的p38在其中或者通过控制p38本身，或者通过p38引起另一因子，例如但不限于IL-1，IL-6或IL-8释放而其作用的疾病或疾病状态。其中例如IL-1是主要组分，并且响应于p38，其产生或作用被加剧或分泌的疾病状态被认为是p38介导的疾病。
由于TNF-β与TNF-α(也称为cachectin)具有密切的结构同源性，并且各自诱导类似的生物反应和结合到相同的细胞受体，TNF-α与TNF-β的合成都被本发明的化合物所抑制，所以本文统称为“TNF”，除非另外具体说明。
实施例以下实施例用于举例说明，但不限制要求保护的本发明。
在以下实施例中，除非另外指明，温度以摄氏温度给出(℃)；操作在室温下(一般在18-25℃的范围内；溶剂蒸发在减压(一般地，4.5-30mmHg)下用旋转蒸发仪在水浴温度高达60℃下进行；一般地用TLC跟踪反应进程而提供反应时间仅是为了举例说明；熔点没有校正；产品表现出满意的1H-NMR和/或微量分析数据；提供产率仅是为了举例说明；并且使用以下常规缩写mp(熔点)，L(升)，mL(毫升)，mmol(毫摩尔)，g(克)，mg(毫克)，min(分钟)，和h(小时)。DEAD表示偶氮二羧酸二乙酯DIAD表示偶氮二羧酸二异丙酯DMPU表示1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮实施例1该实施例举例说明用4-氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯制备3-(2，6-二氯苯基)-7-甲磺酰基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 1.1制备4-甲基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯 冷却4-氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(20g，86mmol)(AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)的250mL二氯甲烷溶液到0℃和缓慢地用33％的甲胺的乙醇溶液(35mL，281mmol)处理。搅拌30分钟后，加入150mL水，进行相分离。硫酸镁干燥有机相并过滤。减压蒸发滤液得到19g(97％)白色固体4-甲基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯。1.2制备4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醇 在300mL无水四氢呋喃中搅拌氢化铝锂(9g，237mmol)和逐滴用4-甲基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(34g，143mmol)的300mL无水四氢呋喃溶液处理，并静置15分钟。冰中冷却该混合物并小心地逐滴用18mL水处理。滴加36mL 2M氢氧化钠，随后是48mL水。在室温下搅拌所得的混悬液17小时，然后过滤。用每次100mL乙酸乙酯洗涤过滤残渣两次，在减压下蒸发合并的滤液和洗涤液。将残留物混悬在200mL二氯甲烷/己烷(2∶1)并取出固体，干燥得到23.5g(86％)黄色固体4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醇。1.3制备4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛 搅拌合并4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醇(20g，108mmol)和1L二氯甲烷和用二氧化锰(87g，1mol)处理。搅拌所得的混悬液24小时，然后过滤垫过滤。用100mL二氯甲烷洗涤过滤残留物和在减压下蒸发合并的滤液和洗涤液得到15.8g(80％)白色固体4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛。1.4制备5-(2，6-二氯苯基)氨基甲基-4-甲基氨基-2-甲硫基-2-嘧啶 减压加热在70mL甲苯中的4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛(6g，32.8mmol)，2，6-二氯苯胺(5.5g，33.9mmol)和4-甲苯-磺酸(1g，5.3mmol)的混合物，共沸除去水17小时。减压下浓缩该混合物到大约10mL体积，然后用120mL乙醇处理。加热所得的混悬液到75℃，并用6.2g(160mmol)硼氢化钠颗粒处理15分钟。再搅拌该混合物15分钟并冷却至室温。减压蒸发溶剂并在200mL的2M氢氧化钠和200mL乙酸乙酯中搅拌该残留物1小时。分离相并用硫酸镁干燥有机相并过滤。减压蒸发滤液，并用3∶7二乙醚/己烷洗脱的快速色谱纯化该残留物得到5.2g(48％)的白色固体5-(2，6-二氯苯基)氨基甲基-4-甲基氨基-2-甲硫基-2-嘧啶。1.5制备3-(2，6-二氯苯基)-7-甲硫基-1-甲基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 逐滴用5-(2，6-二氯苯基)氨基甲基-4-甲基氨基-2-甲硫基嘧啶(5g，15.2mmol)和三乙胺(4mL，29mmol)的80mL四氢呋喃溶液处理搅拌的冰中冷却的12mL光气(20％的甲苯溶液；23mmol)的100mL四氢呋喃溶液。搅拌一小时后，用100mL饱和的氯化铵水溶液处理该混合物，并分离该相。用100mL四氢呋喃萃取该水相，硫酸镁干燥该合并的有机相并过滤。减压浓缩该滤液得到4.8g(89％)白色固体3-(2，6-二氯苯基)-7-甲硫基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(硫醚1.1)。1.6制备3-(2，6-二氯苯基)-7-甲磺酰基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 冰中冷却3-(2，6-二氯苯基)-7-甲硫基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.1)(5g，14.1mmol)的200mL二氯甲烷溶液，并用3-氯过苯甲酸(10g，28.9mmol)处理。在室温下搅拌该混合物17小时，然后用2mL二甲基亚砜处理，让其静置10分钟。然后，加入饱和的碳酸氢钠水溶液(100mL)，并分离该相。硫酸镁干燥该有机相并过滤。减压浓缩该滤液得到5g(92％)白色固体3-(2，6-二氯苯基)-7-甲磺酰基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(砜1.2)。
用2-氯苯胺代替上述步骤1.4中的2，6-二-氯苯胺制备相关的化合物，3-(2-二氯苯基)-7-甲磺酰基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮(砜1.3)。 砜1.3类似地，用邻-甲苯胺代替上述步骤1.4中的2，6-二-氯苯胺制备7-甲磺酰基-3-邻-甲苯基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮(砜1.4)。 砜1.4实施例2化合物1-7该实施例举例说明3-(2-氯苯基)-7-(2羟基-1，1-二甲基乙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备，其中在无溶剂下进行置换反应。 合并砜1.3(0.200g，0.57mmol)和2-氨基-2-甲基1-丙醇(0.11mL，1.2mmol)。加热该混合物到100-110℃1小时，此时冷却其到室温。用使用25∶15己烷/丙酮的硅胶色谱纯化该残留物。合并该含有产物的柱馏分，并真空浓缩成油，将其再溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤并干燥得到0.150g 3-(2-氯苯基)-7-(2羟基-1，1-二甲基乙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。
用所需的R1R4NH置换2-氨基-2-甲基-1-丙醇得到表1-3中所列出的本发明其它化合物。实施例3化合物1-13该实施例举例说明3-(2-氯苯基)-7-((1S，2R)-2羟基-1-羟基甲基-丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 合并砜1.3(0.800g，2.27mmol)和2-甲氧基乙基醚(3mL)和D-别苏氨醇(2R，3S)-2-氨基-3-羟基丁醇)(0.480g，4.56mmol)。加热该混合物到100℃1小时，此时由于反应不完全，升高温度到130℃。30分钟后，反应完成，将该化合物冷却到室温。真空浓缩该混合物，用使用70∶5∶1二氯甲烷/甲醇/异丙胺的硅胶色谱纯化该残留物。合并该含有产物的柱馏分并真空浓缩成油，将其再溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤并干燥得到0448g 3-(2-氯苯基)-7-((1S，2R)-2羟基-1羟基甲基-丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。
用所需的R1R4NH置换D-别苏氨醇得到表1-3中所列出的本发明其它化合物。实施例4化合物1-2此实施例说明3-(2-氯代苯基)-7-(2羟基-1-甲基乙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 砜1.3(0.200g，0.57mmol)与D，L-2-氨基-1-丙醇(0.09mL，1.13mmol)合并，并在100-110℃下加热30分钟。冷却该反应物至室温，并通过使用9∶1二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该混合物。合并含有产物的柱馏分，并真空浓缩成油，其在乙酸乙酯中重溶解。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤并干燥得到0.142g 3-(2-氯代苯基)-7-(2羟基-1-甲基乙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例5化合物1-3该实施例说明3-(2-氯代苯基)-7-(2-羟基丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 砜1.3(0.200g，0.57mmol)与1-氨基-2-丙醇(0.09mL，1.17mmol)合并，并在100-110℃下加热30分钟。冷却该反应物至室温，并通过使用9∶1二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该混合物。合并含有产物的柱馏分，并真空浓缩成油，其在乙酸乙酯中重溶解。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤并干燥得到0.165g 3-(2-氯代苯基)-7-(2-羟基丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮的盐酸盐。实施例6化合物3-28此实施例说明3-(2-氯代苯基)-7-(2，3-二羟基-1，1-二甲基丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2-(1H)-酮的制备。 制备3-氨基-3-甲基丁烷-1，2-二醇。
向3-甲基-2-丁烯-1-醇(20mL，0.2mol)的800mL水的溶液中加入碳酸氢钠(42.5g，0.5mol)。冷却溶液到5℃和在1小时内分批加入3-氯代过苯甲酸(54g，0.22mol)。在室温下搅拌该混合物12小时，然后用氯化钠饱和并用二氯甲烷萃取。分离各层，并用碳酸钾干燥，真空浓缩。用2∶1己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂的快速色谱纯化该残留物得到10.02g油(3，3-二甲基环氧乙烷基)甲醇。
将(3，3-二甲基环氧乙烷基)甲醇(10g，98mmol)的二氯代甲烷(735mL)溶液与异丙醇钛(50mL，169.4mmol)的二氯代甲烷(100mL)溶液，氨基二苯基-甲烷(40.6mL，235mmol)的二氯代甲烷(100mL)溶液合并，和在室温下搅拌该反应混合物48小时。加入10％的氢氧化钠的盐水溶液，另搅拌该混悬液12小时，过滤并用0.2M盐酸洗涤。分离各层，和硫酸镁干燥有机层，过滤，浓缩。用4∶1己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂的柱色谱纯化得到5.1g 3-(二苯甲基-氨基)-3甲基丁烷-1，2-二醇。
3-(二苯甲基氨基)-3-甲基丁烷-1，2-二醇(5.1g，17.9mmol)和氢氧化钯(1.2g)在甲醇(25mL)中于49psi的氢气下振摇18小时。过滤该混悬液，和真空浓缩该滤液。在己烷中混悬该残留物，搅拌2分钟，并滗析该己烷层。真空浓缩该残留物得到1.74g 3-氨基-3-甲基-1，2-丁烷二醇。制备3-(2-氯代苯基)-7-(2，3-二羟基-1，1-二甲基丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(IH)-酮。
砜1.3(700mg，1.7mmol)与3-氨基-3-甲基-1，2丁烷二醇(500mg，2.1mmol)合并。在100℃下加热6小时，此时冷却该反应物至室温并真空浓缩。通过使用99∶1二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该混合物。合并含有产物的柱馏分，并真空浓缩成题述化合物油，其在乙酸乙酯中重溶解。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤并干燥得到256mg 3-(2-氯代苯基)-7-(2，3二羟基-1，1-二甲基丙基氨基)-1-甲基-3，4-二氢-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例7化合物3-43该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)7-[(1-羟基甲基环己基)氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 砜1.3(500mg，1.2mmol)与1-氨基-1环己烷甲醇(602mg，4.6mmol)(制备如J.Med.Chem.，1966，9(6)，911-920所述)和1-甲基-2-吡咯烷酮(1mL)合并。在120℃下加热6小时，此时冷却该反应物至室温并真空浓缩。通过使用98∶2二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该混合物。合并含有产物的柱馏分，并真空浓缩成固体，其用水研制，过滤，干燥并混悬在乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤并干燥得到328mg 3-(2-氯代苯基)-7-[(1-羟基甲基环己基)氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例8化合物3-45该实施例说明3-(2-氯代苯基)-7-(1，4二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 制备1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺向1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(50.3g，322.1mmol)和羟基胺盐酸盐(89.5g，100.3mmol)在水(450mL)中的混合物中分批加入碳酸钠(102.4g，966.2mmol)。在室温下搅拌该反应混合物40分钟，然后用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤该有机层，硫酸镁干燥，过滤和真空得到68.2g粗制的1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮肟。
向1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮肟(68g，400mmol)的乙醇(200mL)加入阮内镍在乙醇(52mL)中的混悬液。该所得的混合物在50psi的氢气下振摇18小时。过滤该反应物并真空浓缩得到57.5g的1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺。制备3-(2-氯代苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(H)-酮砜1.3(3.6g，10mmol)与1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺(6.4g，41mmol)在20mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中合并和在100℃下加热5小时。然后，冷却该反应混合物至室温，用乙酸乙酯和水稀释。分离各层，用水和盐水洗涤有机层，硫酸钠干燥，真空浓缩，和用0.5％的氢氧化铵在乙酸乙酯中的溶液作为洗脱剂柱色谱纯化。合并该含有产物的柱馏分，减压浓缩得到1.3g灰白色固体3-(2-氯代苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-1-甲基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例9化合物3-47该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-(3-羟基甲基-3-甲基-1，5-二氧杂螺[5.5]十一-9-基氨基)-1-甲基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 加热3-(2-氯代苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.30g，0.70mmol)(制备参见实施例8)，对-甲苯磺酸一水合物(0.17g，0.91mmol)，和1，1，1-三(羟基甲基)乙烷(0.84g，7.0mmol)在40mL甲苯中的混合物至回流，并回流下搅拌过夜。冷却该反应混合物至室温，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液稀释。分离各层，用乙酸乙酯萃取水层。用盐水洗涤有机层，减压浓缩，和用50-60％的丙酮的己烷溶液作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化。合并该含有产物的柱馏分，浓缩得到0.32g白色泡沫状的题述化合物。加入1M盐酸的二乙醚溶液得到盐，过滤得到160mg 3-(2氯代苯基)-7-(3-羟基甲基-3-甲基-1，5-二氧杂螺[5.5]十一烷-9-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例10化合物3-46该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。 加热3-(2-氯代苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(6.0g，14mmol)(制备参见实施例8)在60mL 80％乙酸中的溶液到65℃过夜。冷却该反应混合物至室温，用水，乙酸乙酯和盐水稀释。分离各层，用乙酸乙酯萃取水层。用饱和的碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤有机层，减压浓缩。残留物在氯仿中溶解，并通过用4％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化得到2.2g白色泡沫状的该题述化合物。用乙酸乙酯溶解一部分的该题述化合物(0.30g，0.78mmol)，然后用1M盐酸的二乙醚溶液处理得到150mg的白色沉淀物3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2-(1H)-酮的盐酸盐，过滤，用乙酸乙酯洗涤，并减压浓缩。实施例11化合物3-50该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-(4-羟基亚氨基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-1H)-酮。 在65℃加热3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-酮(0.31g，0.80mmol)(制备参见实施例10)和羟基胺盐酸盐(0.22g，3.2mmol)在5mL吡啶中的混合物90分钟。然后，冷却该反应混合物至室温，用水和乙酸乙酯稀释，并分离各相。过滤有机相，减压干燥，并在甲醇中混悬。加入1M盐酸的二乙醚溶液得到黄色泡沫状的3-(2-氯代苯基)-7-(4-羟基亚氨基-环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐，减压下浓缩。实施例12化合物3-54该实施例说明制备8-[6-(2-氯代苯基)-8-甲基-7-氧代-5，6，7，8-四氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-基氨基]-1，3-二氮杂螺[4.5]癸烷-2，4-二酮。 在65℃下搅拌3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.33g，0.86mmol)(制备参见实施例10)，氰化钾(0.084g，1.3mmol)，和碳酸铵(0.25g，2.6mmol)在25mL 1∶1水/乙醇中的混合物过夜。用40mL水稀释该反应混合物和让其沸腾15分钟，然后冷却至室温并注入100mL的冰冷却的水中。过滤该混合物，并在甲醇中将该残留物制成淤浆。加入1M盐酸的二乙醚溶液得到39mg黄色粉末状的8-[6-(2-氯代苯基)-8-甲基-7-氧代-5，6，7，8-四氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-基氨基]-1，3-二氮杂螺[4.5]癸-2，4-二酮。实施例13化合物3-42该实施例说明制备7-(反式-4-烯丙基氧基环己基-氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶2(1H)-酮。 砜1.3(2.6g，7.48mmol)与反式-4-氨基环己醇(1.63g，14.2mmol)在10mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中合并，并在120℃下搅拌4小时，然后注入水中，用乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，并真空蒸发。用2-4％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化得到黄色1-甲基-2-吡咯烷酮-基的油。在乙酸乙酯中重溶解该油，硫酸镁干燥，真空蒸发得到灰白色泡沫状3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-羟基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢-嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(2.80g，7.21mmol)。
叔丁醇钾(0.119g，1.06mmol)的5mL四氢呋喃溶液溶解一部分7-(反式-4-羟基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.274g，0.706mmol)。加入烯丙基溴(0.061mL，0.706mmol)到该溶液中，在50℃加热过夜，然后冷却至室温，用10-25％丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩。将该浓缩物在甲醇中溶解，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙醚洗涤，过滤，并干燥得到7-(反式-4-烯丙基氧基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例14化合物3-38和3-39该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-甲氧基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-1H)-酮和3-(2-氯代苯基)-7-[(反式-4-甲氧基环己基)甲基氨基]-1-基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。 3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-羟基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.300g，0.773mmol)(制备参见实施例13)与叔丁醇钾(0.174g，1.55mmol)在5mL四氢呋喃中合并。向此溶液中加入碘化钾(0.053mL，0.851mmol)，在室温下搅拌3天。另加入碘化钾(0.053mL，0.851mmol)和叔丁醇钾(0.174g，1.55mmol)，4小时后加入另外的叔丁醇钾(0.350g，3.12mmol)。在60℃搅拌该反应物过夜，然后冷却至室温，用25-35％丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化得到两产品的混合物。各分离单独的柱馏分，并真空浓缩。各在甲醇中溶解单独的浓缩物，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙醚洗涤，过滤，并干燥得到0.049g 3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-甲氧基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮和0.217g 3-(2氯代苯基)-7-[(反式-4-甲氧基环己基)甲基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。实施例15化合物3-40该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-[反式-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮。
3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-羟基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.300g，0.773mmol)(制备参见实施例13)与叔丁醇钾(0.174g，1.55mmol)在2mL四氢呋喃中合并。向此溶液中加入2-溴代乙基甲基醚(0.15mL，1.55mmol)，在室温下加热3天。另加叔丁醇钾(0.174g，1.55mmol)，并将温度逐渐升高到80℃。在2mL N，N-二甲基-甲酰胺中在溶解该反应残留物，加入另外的叔丁醇钾(0.348g，3.10mmol)。在80℃搅拌该反应物过夜。加入氢化钠(60％，在油中；0.031g，0.773mmol)，在100℃搅拌该反应物一天，并次日在140℃搅拌该反应物一天，然后冷却至室温。将反应物注入水中，通过乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，并真空蒸发。残留物用25-50％丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩，将该浓缩物在甲醇中溶解，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙醚洗涤，过滤，并干燥得到0.040g 3-(2-氯代苯基)-7-[反式-4-(2-甲氧基乙氧基)环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例16化合物3-41该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-[(反式-4-甲基羰基氧基)环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2-(1H)-酮。 3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-羟基环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.200g，0.516mmol)(制备参见实施例13)在2mL二氯代甲烷中溶解，并与乙酰氯(0.074mL，1.03mmol)合并。反应物在室温下搅拌过夜，然后通过应用1-5％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩，将该浓缩物在甲醇中溶解，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙醚洗涤，过滤，并干燥得到0.200g 3-(2-氯代苯基)-7-[(反式-4-甲基羰基氧基)-环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例17化合物3-44该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-[反式-4-(2，3-二羟基丙氧基)环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2-(1H)-酮。 在4.9mL叔丁醇中溶解7-(反式-4-烯丙基氧基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.40g，0.935mmol)(制备参见实施例13)，向其中加入AD-mixβ(Adrich Chemicals)的水溶液(2.91g，在4.9mL中)，然后加热到100℃2天，然后在80℃3天。将反应混合物注入饱和盐水中，用乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，并真空蒸发。用3-5％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化该粗制残留物。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩。将该浓缩物在甲醇中溶解，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙醚洗涤，过滤，并干燥得到0.019g 3-(2-氯代-苯基)-7-[反式-4-(2，3-二羟基丙氧基)环己基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例18化合物3-59该实施例说明制备7-(反式-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 砜1.3(605mg，1.71mmol)与反式-1，4-二氨基环己烷(1.61g，14.1mmol)和5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮合并。在85℃下搅拌该反应混合物4小时。冷却后，用50mL乙酸乙酯稀释。用水和盐水顺序洗涤有机层，干燥，真空浓缩得到654mg(99％)浅黄色泡沫状物的产品的游离碱。在乙酸乙酯中溶解该游离碱，并用1M HCl/Et2O的溶液处理形成白色粉末状7-(反式-4-氨基环己基-氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例19化合物3-57该实施例说明制备7-(反式-4-甲基磺酰基酰胺基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。 向7-(反式-4-氨基环己基-氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(88mg，0.227mmol)(制备参见实施例18)的8mL二氯代甲烷溶液中加入三乙胺(0.40mL，0.29mmol)和甲磺酸酐(60mg，0.34mmol)。在室温下搅拌该反应混合物3小时。真空浓缩该反应混合物，并用5％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的色谱纯化得到86mg(81％)的白色粉末的产物的游离碱。在乙酸乙酯中溶解该游离碱，并用1M HCl/Et2O的溶液处理形成白色粉末7-(反式-4-甲基磺酰基酰胺基环己基-氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例20化合物3-58该实施例说明制备7-[反式-4-(N，N-二甲基氨磺酰酰胺基)环己基氨基]-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4二氢嘧啶并-[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。 向7-(反式-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(171mg，0.442mmol)(制备参见实施例18)在15mL二氯代甲烷的溶液中加入三乙胺(0.11mL，0.79mmol)和二甲基氨磺酰氯(0.31g，0.21mmol)的5mL二氯代甲烷溶液。在室温下搅拌该反应混合物19小时，真空浓缩。用5％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的色谱纯化得到143mg(65％)的白色粉末的产物的游离碱。在乙酸乙酯中溶解该游离碱，并用HCl/Et2O处理形成白色粉末7-[反式-4-(N，N-二甲基-氨磺酰酰胺基)环己基氨基]-3-(2-氯代苯基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例21化合物3-9该实施例说明制备7-(反式-4-羟基环己基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 砜1.4(300mg，0.903mmol)与反式-4-氨基环己醇(312mg，2.71mmol)在120℃下搅拌合并，并用TLC(5％甲醇/二氯代甲烷)监测。完成后，真空浓缩该反应混合物，和用5-10％甲醇/二氯代甲烷的色谱纯化得到题述化合物(263mg，0.716mmol，79％收率)，在乙酸乙酯中溶解，并用1当量的HCl/Et2O处理以沉淀7-(反式-4-羟基-环己基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例22化合物3-23该实施例说明制备7-((R，R)-2，3-二羟基-1-甲基丙基氨基)-3-邻甲苯基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。 砜1.4(455mg，1.37mmol)和(R，R)-3-氨基-1，2-丁二醇(180mg，1.71mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(1mL)中在氩气下加热到100℃2小时。冷却该反应物到室温，并用9∶1二氯代甲烷/甲醇稀释，用96∶4二氯代甲烷/甲醇和9∶1二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶色谱纯化，得到175mg题述化合物无色油，在乙酸乙酯中溶解，并用1当量的HCl/Et2O(1.0M，在醚中)处理。真空过滤收集沉淀，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥得到190mg白色固体7-((R，R)-2，3-二羟基-1-甲基丙基氨基)-3-邻甲苯基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。实施例23化合物3-33该实施例说明制备7-(2，3-二羟基-1，1-二甲基丙基氨基)-3-邻甲苯基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶2(1H)-酮。 砜1.4(400mg，1.2mmol)和3-氨基-3-甲基-1，2-丁二醇(305mg，2.1mmol)合并。加热该反应混合物到100℃，此时冷却该反应物到室温，真空浓缩。并用99∶1二氯代甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该残留物。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩得到该题述化合物油，其重新溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤干燥得到71mg7-(2，3-二羟基-1，1-二甲基丙基氨基)-3-邻-甲苯基-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5d]嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例24化合物2-9该实施例说明制备7-(1-苄基哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮。
砜1.4(1g，3mmol)和4-氨基-1-苄基哌啶(687mg，3.6mmol)和2-甲氧基乙基醚(1mL)合并。加热该反应混合物到120℃，此时冷却该反应物到室温，真空浓缩。并用97∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该残留物。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩得到该题述化合物油，其重新溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤干燥得到198mg 7-(1-苄基哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例25化合物2-8该实施例说明制备7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 通过注射器在氮气下的三颈瓶中填装10％钯碳(3.0g)，和7-(1-苄基哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(3.0g，6.78mmol)(制备参见实施例24)在60mL甲醇中的溶液。然后一次性加入甲酸铵(2.1g，34mmol)。加热该混合物到回流30分钟直至反应完成。硅藻土过滤催化剂，甲醇洗涤。减压浓缩该滤液得到1.937g(81％)白色固体7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。实施例26化合物2-14该实施例说明制备(R)-7-[1-(2，3-二羟基丙基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 在100℃下加热7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.2g，0.568mmol)(制备参见实施例25)，哌啶L-异丙二醇-γ-甲苯磺酸酯(0.264g，0.92mmol)和碳酸钾(0.12g，1.1mmol)在5mLN，N-二甲基甲酰胺中的混合物17小时。用75mL水稀释该反应混合物，并用1∶1甲苯/乙酸乙酯萃取，分离各相。用水和盐水洗涤有机相，干燥，过滤，减压浓缩，并用95∶5∶0.2乙酸乙酯/甲醇/异丙胺作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化。然后，在10mL异丙醇、1mL水和0.2mL浓盐酸中溶解该含有产物(0.157g，0.34mmol)的柱馏分，回流1小时直至水解完成。减压浓缩该混合物，并在甲醇中溶解该残留物，再浓缩。用18∶2∶0.5二氯代甲烷/甲醇/异丙作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该残留物得到113mg(72.5％)(R)-7-[1-(2，3-二羟基丙基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2-(1H)-酮盐酸盐。实施例27化合物2-13该实施例说明制备7-[1-(2-羟基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 在100℃下加热7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.1g，0.284mmol)(制备参见实施例25)、2-溴代乙醇(0.024mL，0.34mmol)和三乙胺(0.047mL，0.34mmol)在10mL甲苯和1.5mL DMPU的混合物17小时。减压蒸发溶剂，并用40∶10∶2乙酸乙酯/甲醇/异丙胺作为洗脱剂的色谱纯化该残留物，得到70mg(52％)7-[1-(2-羟基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例28化合物2-15该实施例说明制备7-[1-(2-氰基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)酮。 加热7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-o-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.184g，0.52mmol)(制备参见实施例25)、1.5mL丙烯腈、0.5mL三乙胺、0.5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮和5mL四氢呋喃的混合物到75℃ 1.5小时直至反应完成。减压浓缩该反应混合物，用10％甲醇的乙酸乙酯溶液作为洗脱剂的硅胶色谱纯化0.157g(75％)该产物。将1M盐酸加入到溶解在乙酸乙酯中的75mg of该产物中，室温搅拌该混合物1小时，在氮气下过滤该残留物得到7-[1-(2-氰基乙基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例29化合物2-16该实施例说明制备7-[1-(2-氰基乙基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 在带有碘代三甲基甲硅烷(0.88mL，6.18mmol)的5mL二氯甲烷中溶解7-[(1-乙氧基羰基哌啶-4-基)氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(52mg，1.28mmol)，并回流过夜，然后用1mL甲醇淬灭和真空蒸发。在甲醇中重新溶解该无水残留物，向其中加入1.28mL0.5M甲醇钠/甲醇，随后再次真空蒸发。用含有1％氢氧化铵的10-40％甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化。合并含有7-哌啶-4-基氨基-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的柱馏分，并真空浓缩。
合并7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.035g，0.099mmol)的1mL N，N-二甲基甲酰胺溶液与溴代乙腈(0.014mL，0.199mmol)，并在40℃搅拌过夜，然后用3-10％(1∶9氢氧化铵/甲醇)/二氯甲烷作为洗脱剂的柱色谱纯化。合并含有产物的柱馏分并真空浓缩。在甲醇中溶解该产物，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙酸乙酯洗涤，过滤，并干燥得到0.007g 7-[1-(2-氰基甲基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例30化合物2-20该实施例说明制备7-[1-(2-甲氧基羰基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 在75℃下加热7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.19g，0.54mmol)(制备参见实施例25)，1.0mL丙烯酸甲酯，0.5mL三乙胺，0.5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮，和5mL四氢呋喃哌啶的混合物17小时。减压蒸发该反应混合物，用5％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该残留物。将1M盐酸的醚溶液加入到该产物的乙酸乙酯溶液中，在室温下搅拌该混悬液1小时。减压蒸发该混合物得到7-[1-(2-甲氧基-羰基乙基)哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例31化合物2-18该实施例说明制备7-[(1-氨基甲酰甲基-哌啶-4-基)氨基甲酰甲基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。 在含有溴代乙酰胺(0.022g，0.161mmol)的1mL N，N-二甲基甲酰中溶解7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.030g，0.080mmol)(制备参见实施例25)并在50℃下加热过夜。加入另一部分溴代乙酰胺(0.022g)，然后使反应物回到50℃第二次过夜。用6-20％(1∶9氢氧化铵/甲醇)/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化该反应混合物。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩。在甲醇中溶解该终产物，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙酸乙酯洗涤，过滤，并干燥得到0.001g 7-[(1-氨基甲酰-甲基哌啶-4-基)氨基甲酰甲基-氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例32化合物2-12该实施例说明制备7-(1-甲磺酰基哌啶-4-基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。
在5mL吡啶中溶解7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.200g，0.567mmol)(制备参见实施例25)，并冷却该溶液至0℃，然后加入甲磺酰氯(0.046mL，0.596mmol)。在0℃搅拌该反应物小时，然后用冰水淬灭，用乙酸乙酯萃取。用水和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤该有机萃取物，然后用水再洗涤。用1∶15甲醇/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱纯化该残留物。合并该含产物的柱馏分，在最少量的乙酸乙酯和甲醇中溶解该终产物。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤，干燥得到0.124g 7-(1-甲磺酰基哌啶-4-基)-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例33化合物2-17该实施例说明制备3-(2-氯代苯基)-7-(1-氰基-甲基哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶2(1H)-酮。 在含有溴代乙腈(0.011mL，0.161mmol)的1mL N，N-二甲基甲酰胺中溶解3-(2-氯代苯基)-7-(哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.030g，0.080mmol)(制备类似实施例29)，并在50℃下加热过夜。加入另一0.011mL溴代乙腈，然后使反应物回到50℃第二次过夜。用1-20％(1∶9氢氧化铵/甲醇)/二氯代甲烷作为洗脱剂的硅胶快速色谱纯化纯化该反应混合物。合并含有产物的柱馏分，真空浓缩，在甲醇中溶解该终产物，用盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)处理，再蒸发至干，然后用乙酸乙酯洗涤，过滤，并干燥得到0.002g 3-(2-氯代-苯基)-7-(1-氰基甲基哌啶-4-基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例344-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醛 34.14-氨基-5-乙酯基-嘧啶-2-硫醇的制备在1L乙醇中搅拌乙氧基钠(272g，4.0mol)(Lancaster)，用硫脲(304g，4.0mol)(Avocado)处理。加入乙氧基亚甲基氰基乙酸乙酯(676g，4.0mol)(Avocado)，将该混合物加热回流8小时。冷却至室温后过夜，继续用2L水和400mL乙酸处理该混合物。将该混合物加热回流30分钟，冷却至室温，过滤混悬液。将该固体用水洗涤3次(每次500mL)，用丙酮洗涤2次(每次500mL)，然后用500mL二乙醚洗涤。干燥产物得到473.3g(60％)乳状固体4-氨基-5-乙酯基-嘧啶-2-硫醇，熔点＞250℃。34.24-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-羧酸酯的制备用碳酸钾(180.4g，1.307mol)和苄基溴化物(447.1g，2.615mol)处理4-氨基-5-乙酯基-嘧啶-2-硫醇(473g，2.377mol)在3.5L乙醇中的搅拌的混悬液。将该混合物加热回流2小时，然后将其冷却至室温过夜。过滤混悬液，将该固体用乙醇洗涤2次(每次500mL)，然后用2L水洗涤，再用水洗涤2次(每次500mL)。在50℃、真空下通过五氧化二磷干燥产物，得到416g(61％)乳状固体4-氨基-2苄基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯，熔点117-118℃。34.34-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醇的制备在冰冷却、氮气氛下，将4-氨基-2苄基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯在2.3L筛分-干燥(sieve-dried)的四氢呋喃的溶液在搅拌下缓慢加入到1M氢化铝锂(1.6L，1.6mol)在四氢呋喃的溶液中。调节加入溶液的速率，使温度维持在18-20℃。加热完成后，将该混合物加热至60℃，在1.5小时中小心地用60.8mL水处理。在30分钟中加入15％氢氧化钠水溶液(60.8mL)，随后在30分钟中加入182.5mL水。在60℃下搅拌该混悬液过夜，然后趁热通过Hyflo助滤器过滤，固体用1L四氢呋喃洗涤两次。蒸发滤液得到392.5g(99％)灰白色固体4-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醇，其不经过进一步纯化直接用于下一步反应。34.4制备4-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醛在氮气氛下用活化二氧化锰(1.382Kg，15.9mol)(Acros)处理4-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醇(392.5g，1.59mol)在7.75L二氯甲烷中的溶液。在环境温度下搅拌该混合物过夜，然后通过Hyflo助滤器过滤，固体用二氯甲烷洗涤三次(每次1L)，合并滤液，蒸发得到340.5g(88％)浅黄色固体4-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醛，熔点136-139℃。实施例353-(2-氯苯基)-7-苄基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 35.15-(2-氯苯基)氨基甲基-4-氨基-2-苄基硫基嘧啶的制备 将4-氨基-2-苄基硫基嘧啶-5-甲醛(5g，20.4mmol)、2-氯苯胺(2.25mL，21.4mmol)和4-甲苯-磺酸一水合物(0.1g，0.5mmol)在60mL甲苯中的混合物在恒沸点下加热回流3小时，除去水。将该混合物冷却至0℃，真空下过滤收集沉淀，用己烷洗涤，空气中干燥。然后将该固体溶解在100mL四氢呋喃中，将该溶液冷却至0℃。在45分钟内分次加入氢化铝锂(0.735g，18.8mmol)。一旦加入完成后，再将该混合物搅拌15分钟，随之用0.8mL水、15％氢氧化钠水溶液、然后用2.4mL水仔细处理。搅拌该混合物30分钟，通过硅藻土过滤，在真空下浓缩滤液。用二乙醚搅拌该固体，过滤，空气干燥得到6.1g白色固体5-(2-氯苯基)氨基甲基-4-氨基-2-苄基硫基嘧啶。35.23-(2-氯苯基)-7-苄基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 硫醚8.1向5-(2-氯苯基)氨基甲基4-氨基-2-苄基硫基嘧啶(4.3g，12.1mmol)在100mL四氢呋喃中的冷却到-10℃的搅拌溶液中，加入三乙胺(3.1mL，22.2mmol)。然后滴加光气溶液(6.15mL 20％在甲苯中的溶液；11.8mmol)处理该溶液。搅拌30分钟后，加入另外的三乙胺(1.0mL，7.1mmol)，然后加入光气(2.0mL 20％在甲苯中的溶液；3.8mmol)。将该反应升温至室温，用0.5mL水处理，搅拌30分钟。然后过滤该反应，浓缩该母液，用二氯甲烷搅拌。然后通过真空过滤收集产物，真空下干燥得到3.83g白色固体3-(2-氯苯基)-7-苄基硫基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(硫醚8.1)实施例363-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 砜9.1用冰冷却硫醚8.1(1g，2.61mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液，用70％3-氯过苯甲酸(1.29g，5.23mmol)处理。在室温下搅拌该混合物。2小时，然后用25mL 10％硫代硫酸钠水溶液处理，和搅拌30分钟。将得到的该混合物用100mL二氯甲烷稀释，并进行相分离。有机相用10％碳酸钾水溶液洗涤，然后用盐水洗涤，然后通过硫酸镁干燥并过滤。减压下浓缩滤液得到0.73g白色固体3-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(砜9.1)。
应用邻甲苯胺代替实施例35中的2-氯苯胺，制备得到相关化合物7-苄基磺酰基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(砜9.2)。 砜9.2实施例37化合物3-26该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备37.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 硫醚8.1将硫醚8.1(500mg，1.31mmol)置于2mL四氢呋喃中，加入1-(2-羟基乙基)吡咯烷(0.23mL，1.96mmol)、三苯膦(514mg，1.96mmol)和DEAD(0.31mL，1.96mmol)。在室温下搅拌该混合物3小时，这时加入另外的1-(2-羟基乙基)吡咯烷、三苯膦和DEAD(每个另外加入1.96mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜，通过应用2.5-10％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱进行半纯化，得到大于1g的产物7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮和残余起始原料的混合物。37.27-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(IH)-酮的制备 应用在二氯甲烷中的3-氯过氧苯甲酸(0.94g，3.92mmol)并在室温下搅拌1小时，完成7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的氧化。用饱和亚硫酸钠(水溶液，1mL)淬灭反应，并用二氯甲烷萃取。干燥合并的萃取液，在真空下浓缩，提供7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，其不经过纯化使用。37.3制备3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-I-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(H)-酮。 将粗制的7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于含有反-4-氨基环己醇(165mg，1.44mmol)的6mL二甘醇二甲醚中，并在120℃下搅拌3小时。用3-30％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该混合物，提供题述化合物(45mg，0.096mmol)。将该纯化的产物置于乙酸乙酯中，用1当量HCl/Et2O处理，沉淀3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-1-(2-吡咯烷-1-基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例38化合物3-27该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备38.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将硫醚8.1(500mg，1.31mmol)置于含有N，N-二乙基乙醇胺(0.26mL，1.96mmol)、三苯膦(514mg，1.96mmol)和DEAD(0.31mL，1.96mmol)的2mL四氢呋喃中，在室温下搅拌3小时，这时加入另外的二乙基乙醇胺、三苯膦和DEAD(每个另外加入1.96mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜，通过应用13.5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱进行半纯化，得到大于1g的产物7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮和残余起始原料的混合物。38.27-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮的制备。 应用在二氯甲烷中的3-氯过氧苯甲酸(0.339g，1.96mmol)并在室温下搅拌1小时，完成7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的氧化。用10％亚硫酸钠(水溶液，5mL)淬灭反应，倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥合并的萃取液，在真空下浓缩，提供7-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基-乙基)-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，其不经过纯化使用。38.33-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-7-(反-4-羟基-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(IH)-酮的制备。
将粗制的7-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于含有反-4-氨基环己醇(150mg，1.31mmol)的2mL二甘醇二甲醚中，并在120℃下搅拌4小时。用5-35％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该混合物，提供题述化合物(52mg，0.110mmol)。将该纯化的产物置于乙酸乙酯中，用1当量HCl/Et2O处理，沉淀3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-1-(2-二乙基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例39化合物3-30该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备39.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(3-二甲基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(IH)-酮的制备。 将在5mL四氢呋喃中的硫醚8.1与N，N-二甲基乙醇胺(0.39mL，3.92mmol)、三苯膦(1.04g，3.92mmol)和DEAD(0.62mL，3.92mmol)合并，在室温下搅拌1小时。将该混合物通过应用1-3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱进行半纯化，得到大于1g的产物7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮和残余三苯膦氧化物的混合物。39.27-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基-乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮的制备 应用在二氯甲烷中的3-氯过氧苯甲酸(1.35g，7.84mmol)并在室温下搅拌1小时，完成硫醚的氧化。用饱和亚硫酸钠(水溶液，1mL)淬灭反应，用二氯甲烷萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机萃取液，硫酸镁干燥，在真空下浓缩，提供7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮，其不经过纯化使用。39.33-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将粗制的7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于含有反-4-氨基环己醇(331mg，2.87mmol)的2mL二甘醇二甲醚中，并在120℃下搅拌4小时。用10-30％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化该混合物，提供题述化合物(180mg，0.405mmol)。将该纯化的产物置于乙酸乙酯中，用1当量HCl/Et2O处理，沉淀3-(2-氯苯基)-1-(2-二甲基氨基乙基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例40化合物3-22
该实施例举例说明了(S)-3-(2-氯苯基)-7-(2-羟基-1-甲基-乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。40.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向在四氢呋喃(10mL)中的硫醚8.1(850mg，2.22mmol)中，加入叔丁基-4-羟基-1-哌啶羧酸酯(411mg，2.22mmol)和二苯基-2-吡啶基膦(878mg，3.3mmol)。加入二叔丁基偶氮二羧酸酯(768mg，3.33mmol)5分钟后，在周末中(over the weekend)室温下搅拌该反应。将该反应直接置于应用3∶1-2∶1己烷乙酸乙酯和1∶1己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂的硅柱上快速层析，给出930mg 7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。40.27-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮的制备 向冷却至0℃的7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(920mg，1.62mmol)在二氯甲烷(16mL)的溶液中，加入3-氯过苯甲酸(403mg，1.64mmol)。1小时后在室温下加入5mL10％硫代硫酸钠。10分钟后，分离二氯甲烷层，用10％碳酸钾和盐水洗涤，通过硫酸镁干燥，真空下浓缩，给出650mg白色泡沫状3-(2-氯苯基)-7-苄基亚磺酰基-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。40.3(S)-3-(2-氯苯基)-7-(2-羟基-1-甲基乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向7-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(650mg，1.136mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(0.5mL)的混悬液中，加入(S)-(+)-2-氨基-1-丙醇(250mg，3.33mmol)。在氩气氛下将反应升温至100℃2小时。将该反应直接置于应用92∶8-90∶10二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅柱上快速层析，给出300mg(S)-3-(2-氯苯基)-7-(2-羟基-1-甲基乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮，其在溶解于5mL二氯甲烷和5mL三氟乙酸。5小时后在真空下除去溶剂，加入5mL乙酸乙酯和5mL 10％碳酸氢钠溶液。分离有机层，用盐水洗涤，通过硫酸镁干燥，真空下浓缩给出130mg白色泡沫状题述化合物，其溶于乙酸乙酯中，用在1.0M乙醚中的1当量盐酸处理。收集沉淀，用乙醚洗涤，真空下干燥给出115mg(S)-3-(2-氯-苯基)-7-(2-羟基-1-甲基乙基氨基)-1-(哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例41化合物3-21
该实施例举例说明了(R)-3-(2-氯苯基)-7-[(2-羟基-1-甲基乙基)氨基]-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。41.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 在氮气氛下，将硫醚8.1(600mg，2.4mmol)、二苯基-2-吡啶基膦(619mg，2.4mmol)和1，3-二乙氧基-2-丙醇(232mg，0.6mmol)的混合物溶解于四氢呋喃中。向该混合物中一次性加入二叔丁基偶氮二羧酸酯(542mg，2.4mmol)，将得到的混合物在室温下搅拌一天。加入在乙醚中的1M盐酸，将混合物搅拌1小时后蒸掉过量的溶剂。将残渣溶于乙醚中，用盐酸水溶液洗涤。用硫酸镁干燥有机层，浓缩，残渣通过应用30％乙酸乙酯(在己烷中)作为洗脱剂的柱色谱纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩，给出566mg 7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。41.27-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基-甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(566mg，1.1mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混悬液在冰浴中冷却，并加入3-氯过苯甲酸。将该反应混合物搅拌1小时，真空下浓缩，残渣通过应用98∶2二氯甲烷/甲醇的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩生成425mg 7-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。41.3(R)-3-(2-氯苯基)-7-[(2-羟基-1-甲基乙基)氨基]-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将在(R)-2-氨基1-丙醇(1mL)中的7-苄基亚磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(425mg，0.8mmol)加热至140℃ 18小时，将其冷却至室温，在真空下浓缩。残渣通过应用98∶2二氯甲烷/甲醇的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出油状物，再将其溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，经过滤、干燥得到156mg(R)-3-(2-氯苯基)-7-(2-羟基-1-甲基乙基氨基)-1-(2-乙氧基-1-乙氧基甲基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例42化合物3-60该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备42.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(IH)-酮的制备 在0℃下，向在无水N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中的硫醚8.1(0.563g，1.47mmol)中加入氢化钠(60％，0.1g，2.5mmol)。将该混合物在室温下搅拌30分钟后，加入2，2，2-三氟甲烷硫酸盐(1mL)，将混合物搅拌过夜。向该混合物中加入乙酸乙酯，将该溶液用盐水洗涤，硫酸钠干燥、过滤，并蒸发。最终的油状残渣用己烷研制，给出0.65g粗品7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，其不经过进一步纯化直接用于下一步反应。42.27-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
在0℃下，向在四氢呋喃(7mL)中的7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.67mg)中，加入过硫酸氢钾制剂(2.27g)在水(7mL)中的溶液。然后将该混合物在室温下搅拌1小时。另外加入在2mL水中的过硫酸氢钾制剂(0.8g)，再搅拌该混合物1小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释，盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸发给出0.65g白色固体7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮粗品，其不经过纯化直接用于下一步反应。42.33-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(300mg，0.604mmol)、反-4-氨基环己醇(208mg，3当量)和1-甲基-2-吡咯烷酮(pyrrolidinone)(0.3mL)在110℃、搅拌下加热20分钟，之后冷却至室温。将该残渣通过应用乙酸乙酯作为洗脱剂的制备薄层色谱进行纯化，给出155mg灰白色粉末3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例43化合物3-32该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备43.17-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(乙氧基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的硫醚8.1(2.0g，5.22mmol)与氢化钠(230mg，5.75mmol)化合，并将该反应混合物搅拌20分钟，然后加入溴代乙酸乙酯(1.16mL，10.45mmol)。3小时后，用水淬灭该反应，并在乙酸乙酯中萃取。将合并的有机萃取液用水洗涤，干燥、过滤，真空下浓缩，残渣通过应用30％丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩，给出1.438g 7-苄基硫基-3(2-氯苯基)-1-(乙氧基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。43.27-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(羟基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(乙氧基羰基甲基)3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.435g，3.36mmol)和氢氧化锂一水合物(481mg，11.5mmol)在甲醇(10mL)和水(30mL)中的混合物加热回流48小时。将该混合物冷却至室温，用乙酸乙酯/水稀释。将水层pH值调节至4，用乙酸乙酯萃取。干燥合并的有机萃取液，过滤，真空下浓缩给出1.2g 7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(羟基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。43.37-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(羟基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(500mg，1.13mmol)和苯丙三唑-1-基氧基三(吡咯烷)膦六氟乙酸盐)(885mg，1.70mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(15mL)的溶液中，鼓入二甲胺气体2分钟，然后在密封管中搅拌2小时。用水淬灭该反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。用水洗涤合并的有机萃取液，干燥、过滤，真空下浓缩，残渣通过应用36∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出490mg 7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基-甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。43.47-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向7-苄基硫基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(490mg，1.13mmol)在氯仿的溶液中，加入3-氯过氧苯甲酸(780mg，4.52mmol)。将该混合物搅拌2小时，用10％亚硫酸钠在水中的溶液和碳酸氢钠水溶液洗涤，过滤、浓缩给出550mg 7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。43.53-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环氧基氨基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(550mg，1.1mmol)与反-4-氨基环己醇(253mg，2.2mmol)合并。将该混合物加热至100-105℃ 3小时，这时将其冷却至室温。该残渣通过应用9∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩至固体，用甲醇研碎，过滤、干燥，并将其混悬于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，将其过滤、干燥，给出90mg 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环氧基氨基)-1-(二甲基氨基羰基甲基)-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例44化合物4-1该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基乙基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(0.500g，1.21mmol)与2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇(0.253g，2.41mmol)化合。将该混合物加热至120-130℃ 2小时，这时将其冷却至室温。该残渣用二氯甲烷/甲醇研制。过滤该稀浆，给出题述化合物的游离胺，然后将其在甲醇中成稀浆。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，将其溶解于甲醇中。过滤该溶液，在真空下浓缩滤液，生成吸湿固体，将其在乙醚中研制，过滤、干燥，给出0.195g 3-(2氯苯基)-7-(2-羟基-1-羟基甲基-1-甲基乙基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例45化合物4-6该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-((R，R)-2-羟基-1-羟基甲基丙基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(776mg，1.9mmol)与(R，R)-3-氨基-1，2-丁二醇(238mg，2.3mmol)和2-甲氧基乙基醚(5mL)化合。将该混合物加热至120℃ 3小时，这时将其冷却至室温，真空下浓缩。该残渣通过应用97∶3二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出油状物，将其再溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤、干燥，给出159mg 3-(2-氯苯基)-7-((R，R)-2-羟基-1-羟基-甲基丙基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例46化合物4-8该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜9.1(0.500g，1.21mmol)与在2mL N-甲基吡咯烷酮(pyrrolidinone)中的4-氨基环己醇(0.70g，6.0mmol；50％水溶液冻干(ICN))合并。将该混合物加热至120℃ 1.5小时，这时将其冷却至室温。该残渣通过应用1-5％二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出黄色颗粒状题述化合物，将其再溶解于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤、干燥，给出0.258g 3-(2-氯苯基)-7-[(4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例47化合物2-10该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(四氢吡喃-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 4-氨基四氢吡喃的制备将羟胺盐酸盐(4.19g，59.9mmol)置于室温下的13mL乙醇中，得到的稀浆用另外的15mL乙醇洗涤，加入四氢吡喃-4-酮(5g，59.9mmol)在30mL吡啶中的溶液。在室温下搅拌该反应过夜，然后在真空下蒸发基于吡啶的粘稠糊浆，将其倒入饱和硫酸铜水溶液中，用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥合并的萃取液，真空下蒸发，并用乙酸乙酯洗脱。真空下蒸发滤液，生成绿色固体的四氢吡喃-4-酮肟(5.05g，0.44mmol)。
将四氢吡喃-4-酮肟(2.8g，24.3mmol)置于50mL四氢呋喃中，在缓慢分次加入氢化铝锂(4.6g，122mmol)前将其冷冻至0℃。当完全加入后，从冰浴中取出该反应，回流下搅拌过夜，然后通过小心加入水和10％氢氧化钠水溶液淬灭反应。在用铝盐过滤和二氯甲烷漂洗前，在室温下搅拌该反应混合物1小时。在真空下蒸发滤液，生成暗褐色液体4-氨基四氢吡喃(1.74g，0.17mmol)。3-(2-氯苯基)-7-(四氢吡喃-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备将在5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的砜9.1(0.205g，0.494mmol)与4-氨基四氢吡喃(0.100g，0.988mmol)化合。将该反应在100℃下搅拌24小时，并通过应用3-7％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，在真空下浓缩给出棕色胶状题述化合物，再将其溶解于甲醇中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)，给出0.026g 3-(2-氯苯基)-7-(四氢吡喃-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例48化合物4-14该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-羟基甲基环戊基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(500mg，1.2mmol)与1-氨基-1-环戊基甲醇(550mg，4.8mmol)和1mL 1-甲基-2-吡咯烷酮化合。将该混合物加热至120℃ 3小时，这时将其冷却至室温。加入3mL甲醇，将该混悬液搅拌10分钟，过滤，残渣用甲醇洗涤，干燥，将其混悬于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，将其过滤、干燥，给出260mg 3-(2氯苯基)-7-[(1-羟基甲基环戊基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例49化合物4-16该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)7-[(1-羟基甲基环己基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(500mg，1.2mmol)与1-氨基-1-环己烷甲醇(623mg，4.8mmol)(如J.Med.Chem.，1966，9(6)，911-920所述制备)和1-甲基-2-吡咯烷酮(1mL)化合。将该混合物加热至120℃ 3小时，这时将其冷却至室温。加入甲醇(3mL)，将该混悬液搅拌10分钟，并过滤。用甲醇彻底洗涤该沉淀，干燥，并将其混悬于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，将其过滤、干燥，给出328mg 3-(2氯苯基)-7-[(1-羟基甲基环己基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮盐酸盐。实施例50化合物2-25该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜9.1(0.512g，1.2mmol)与在0.3mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的1-甲基-4-(甲基氨基)哌啶(2mL)(Aldrich Chemicals)化合。将该混合物在100℃下加热3小时，这时将其冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。其粗产物通过应用2％-10％甲醇/二氯甲烷、最后用在二氯甲烷中的1％三乙胺/10％甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。将得到的固体混悬于5mL甲醇中，鼓入氯化氢30秒，蒸发溶剂。将得到的固体在乙酸乙酯中搅拌，过滤给出190mg 3(2-氯苯基)-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的二氯盐。实施例51化合物4-18该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(顺-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜9.1(0.81g，1.95mmol)与在2.0mL 1甲基-2-吡咯烷酮中的顺-4-氨基环己醇(0.45g，3.9mmol)(如Aust.J.Chem.，1961，14，610所述制备)化合。将该反应混合物在120℃下搅拌24小时，这时将该反应混合物冷却至室温并过滤。将该滤液混悬于无水甲醇中，收集并干燥沉淀给出0.400g白色固体题述化合物(m.p.263.7-264.6℃)。将白色固体溶解于10∶1氯仿/甲醇中，加入在乙醚中的1M盐酸。将该反应混合物搅拌1小时，浓缩，真空下干燥，将该残渣在甲醇/乙醚中结晶，给出0.285g白色固体3-(2-氯苯基)-7-(顺-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例52化合物2-26该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-氨基甲酰基甲基哌啶-4-基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(1.0g，2.41mmol)置于5mL 4-氨基-1哌啶羧酸乙酯(29mmol)中，在150℃下搅拌。1小时后，将该稀浆反应物冷却至室温，倒入50mL甲醇中，过滤、收集白色固体。将该固体另外用50mL甲醇洗涤，真空下干燥给出0.569g 3-(2-氯苯基)-7-(1-乙氧基羰基哌啶-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。
将3-(2-氯苯基)-7-(1-乙氧基羰基哌啶-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于具有碘代三甲基硅烷(0.94mL，6.60mmol)的2mL二氯甲烷中，加热至60℃ 2小时，用甲醇淬灭，真空下蒸发。将无水残渣再次置于少量甲醇中，用甲醇钠(0.5当量，0.5M甲醇商业可购买溶液)处理，再次蒸发。将干燥残渣通过用5，10％(1∶9氢氧化铵/甲醇)/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩生成0.280g(7.80mmol)裂开的哌啶中间体，3-(2-氯苯基)-7-(哌啶-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。
将3-(2-氯苯基)-7-(哌啶-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.050g，0.139mmol)置于具有溴乙酰胺(0.029g，0.209mmol)的1mL N，N二甲基甲酰胺中，在室温下搅拌2.5小时，然后将温度升高至40℃ 1小时，80℃过夜。将反应通过应用5-40％甲醇/二氯甲烷+1％氢氧化铵作为洗脱剂的快速色谱纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩，将最终产品再溶于小体积甲醇中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，过滤、干燥给出0.007g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-氨基甲酰基甲基-哌啶-4-基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例53化合物2-27该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基胺的制备将哌啶-4-基-氨基甲酸叔丁基酯(从ASTATECH商业获得)(5g，24.96mmol)、2，2，2，-三氟乙基三氯甲烷硫酸酯(7.03g，1当量)，和碳酸钾(4.1g，1.2eq)置于丙酮(80mL)中，搅拌下加热回流17小时。在减压、40℃下除去溶剂，向残渣中加入乙酸乙酯和水。在各层中进行分配，然后分离。用水和盐水洗涤有机层，通过硫酸镁干燥、过滤、浓缩，给出暗色固体。通过应用15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化，给出灰白色粉末[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯(4.45g)，熔点99.2-99.8℃，(M+H)+＝283。
然后将[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基]-氨基甲酸叔丁基酯置于二噁烷(80mL)中，向溶液中鼓入氯化氢气体10分钟。将反应容器盖紧，搅拌1.5小时。在减压、40℃下除去溶剂。将该残渣置于42mL在甲醇中的0.5M甲醇钠中，在室温下搅拌3小时，过滤。浓缩滤液，将其置于乙酸乙酯，过滤，浓缩给出1.0g暗色油状1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基胺，(M+H)+＝183。3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)-哌啶基-4-基-氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备将砜9.1(200mg，0.482mmol)、1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基胺(263mg，3当量)与1-甲基-2-吡咯烷酮(0.3mL)合并，在搅拌、110℃下加热该反应混合物2小时，这时将其冷却至室温。通过应用60％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂的制备薄层色谱纯化，给出12mg灰白色粉末的3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶基-4-基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例54化合物4-17该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)7-[(4-羟基环己基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(400mg，0.96mmol)与4-氨基甲基环己醇(470mg，3.6mmol)和0.4mL 1-甲基-2-吡咯烷酮化合。将该混合物加热至120℃ 3小时，这时将其冷却至室温。加入甲醇(3mL)，搅拌该混悬液10分钟，过滤，用甲醇洗涤沉淀，干燥，混悬于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，将其过滤、干燥给出198mg 3-(2-氯苯基)-7-[(4-羟基-环己基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例55化合物2-21该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 4-氨基甲基-N-(2，2，2-三氟乙基)哌啶的制备将(4-苄基氧基羰基氨基甲基)哌啶(4g，16.1mmol)、2，2，2-三氟乙基三氯甲烷磺酸酯(5.58g，20mmol)和碳酸钾(2.67g，19mmol)在40mL丙酮中的混合物回流17小时。蒸发该混合物，用乙酸乙酯和盐水处理。分离有机相，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。通过应用10％-20％乙酸乙酯(在己烷中)作为洗脱剂硅胶柱色谱纯化，给出2.25g 4-苄基氧基氨基甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)-哌啶，m.p.93.8-95.1℃。
4-苄基氧基氨基甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶溶解于乙醇(50mL)中，用10％碳载钯(0.5g)氢化10小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，甲醇洗涤。蒸发滤液给出1.17g半固体4-氨基甲基-1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶。3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基-氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备将砜9.1(0.389g，1mmol)与在0.4mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的4-氨基甲基-1-(2，2，2三氟乙基)哌啶(0.50g，2.5mmol)合并，在100℃下加热4小时。然后将该混合物冷却至室温，用甲醇、乙酸乙酯和乙醚处理。过滤形成固体，用乙酸乙酯洗涤。将得到的固体(0.22g)溶解于5mL甲醇中，现该溶液中鼓入氯化氢气体1分钟。除去溶剂，残渣用2mL甲醇和40mL乙醚研制，给出210mg 3-(2-氯苯基)-7-[1-(2，2，2-三氟乙基)哌啶-4-基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的二盐酸盐。实施例56化合物2-22该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-氰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将砜9.1(2.24g，5.4mmol)与N-叔丁氧基羰基-4-氨基甲基哌啶(5.6g，16.2mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮(9mL)合并。将该混合物加热至100-110℃2小时，这时将其冷却至室温，加入乙酸乙酯。过滤最终的白色固体，用乙酸乙酯洗涤，给出2.3g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(MH+＝473)。将氯化氢气体鼓入混悬于1，4-二噁烷(22mL)中的2.1g保护的胺中，搅拌该混悬液1小时，真空下浓缩，干燥给出中间体3-(2-氯苯基)-7-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮白色固体。
将3-(2-氯苯基)-7-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.23g，0.52mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中。加入无水碳酸钠(0.175g，1.6mmol)和氯乙腈(0.036mL，0.57mmol)。将该混合物在室温下搅拌17小时，在乙酸乙酯和水中分配。相分离，水层用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机层，干燥，真空下浓缩残渣通过应用10％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱进行纯化。真空下浓缩含有产物的部分，溶解于40mL 1，4-二噁烷中。鼓入氯化氢气体，真空下浓缩该混合物。在乙醚中研制得到的残渣，过滤、干燥，给出0.107g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-氰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例57化合物2-19该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-二甲基氨基羰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备 将3-(2-氯苯基)-7-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(如实施例56所述制备)(0.3g，0.67mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(7mL)中。加入无水碳酸钠(0.26g，2.4mmol)和2-氯-N，N-二甲基甲酰胺(0.098g，0.81mmol)。在室温下搅拌该混合物17小时。将该混合物在乙酸乙酯和水中分配。进行相分离，水层用乙酸乙酯和10％异丙醇/氯仿萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，然后通过无水硫酸钠进行干燥。真空下蒸发后，将白色固体溶解于50％甲醇/1，2-二氯乙烷中。鼓入氯化氢气体，真空下蒸发溶液。在乙醚中研制得到的残渣，过滤、干燥，给出0.182g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-二甲基-氨基羰基甲基-哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例58化合物2-23
该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-氨基羰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(如实施例56制备)(0.3g，0.67mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(7mL)中。加入无水碳酸钠(0.26g，2.4mmol)和2-溴乙酰胺(0.111g，0.81mmol)。在室温下搅拌该混合物17小时。将该混合物在乙酸乙酯和水中分配。进行相分离，水层用乙酸乙酯和10％异丙醇/氯仿萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后通过无水硫酸钠进行干燥。真空下蒸发后，将白色固体混悬于1，4-二噁烷中。鼓入氯化氢气体，真空下蒸发溶液。在乙醚中研制得到的残渣，过滤、干燥，给出0.185g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-氨基羰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例59化合物2-24该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[(1-羟基羰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-[(哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(如实施例56制备)(0.3g，0.67mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(7mL)中。加入无水碳酸钠(0.26g，2.4mmol)和2-溴乙酸叔丁酯(0.12g，0.81mmol)。在室温下搅拌该混合物17小时。将该混合物在乙酸乙酯和水中分配。进行相分离，水层用乙酸乙酯和10％异丙醇/氯仿萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，然后通过无水硫酸钠进行干燥。真空下蒸发后，将合并的固体混悬于1，4-二噁烷中。鼓入氯化氢气体，真空下蒸发溶液。在乙醚中研制得到的残渣，过滤、干燥，给出0.195g 3-(2-氯苯基)-7-[(1-羟基羰基甲基哌啶-4-基甲基)氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例60化合物3-29该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2-甲基硫基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜9.1(500mg，1.21mmol)置于具有1-(2-甲基硫基)乙醇(0.16mL，1.81mmol)、三苯膦(474mg，1.81mmol)和DEAD(0.28mL，1.81mmol)的2mL四氢呋喃中，在室温下搅拌2天。真空下蒸发，得到粗产物3-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-1-(2-甲基-硫基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，其不经过纯化直接使用。
将粗制3-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-1-(2-甲基-硫基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于具有反-4-氨基环己醇(139mg，1.21mmol)的2mL二甘醇二甲醚中，120℃下搅拌4小时。将该混合物通过应用2.5-4.5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化，得到题述化合物(226mg，0.511mmol)。将该纯化的产物置于乙酸乙酯中，用1当量HCl/Et2O处理，沉淀3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2-甲基硫基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例61化合物3-31该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜9.1(500mg，1.21mmol)置于具有3-二甲基氨基-2，2-二甲基-1-丙醇(0.28mL，1.81mmol)、三苯膦(474mg，1.81mmol)和DEAD(0.28mL，1.81mmol)的2mL四氢呋喃中，在室温下搅拌过夜。混合物通过应用3-15％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱进行半纯化，提供大于1g的3-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-1-(3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基)3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮和残留三苯膦的氧化物的混合物。
将3-(2-氯苯基)-7-苄基磺酰基-1-(3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮置于具有反-4-氨基环己醇(139mg，1.21mmol)的3mL二甘醇二甲醚中，120℃下搅拌4小时。将该混合物通过应用4-25％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱纯化，得到题述化合物(52mg，0.107mmol)。将该纯化的产物置于乙酸乙酯中，用1当量HCl/Et2O处理，沉淀3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-1-(3-二甲基氨基-2，2-二甲基丙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例62化合物3-36该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(1-甲基哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备。 在氮气氛下，将砜9.1(1.0g，2.4mmol)、二苯基-2-吡啶基膦(1.9g，7.23mmol)和4-羟基-1-甲基哌啶(0.555g，4.8mmol)溶解于无水四氢呋喃中。向该溶液中加入二叔丁基偶氮二羧酸酯(1.67g，7.23mmol)，在室温下搅拌得到的混合物2小时，然后真空下浓缩。残渣通过应用9∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出354mg 7-苄基磺酰基-3-(2氯苯基)-1-(1-甲基哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。
将7-苄基磺酰基-3-(2-氯苯基)-1-(1-甲基哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(354mg，0.69mmol)与反-4-氨基环己醇(160mg，1.38mmol)和1mL 1-甲基-2-吡咯烷酮合并。将该混合物加热至110℃ 1小时，这时将其冷却至室温。残渣通过应用9∶1∶0.5二氯甲烷/甲醇/二异丙胺作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩，混悬于乙酸乙酯中。加入盐酸(1.0HCl/Et2O，1当量)，得到盐，过滤、干燥给出135mg 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(1-甲基哌啶-4-基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例63化合物4-4该实施例举例说明了(R，R)-7-(2，3-二羟基-1-甲基丙基氨基)-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 (R，R)-3-氨基丁烷-1，2-二醇的制备将3-氨基丁烷-1，2-二醇按照类似于TetrahedronAsymmetry，1995，6(9)，2329-2342描述进行制备。简要地，在氩气氛下，向(2S，3S)-反-3甲基环氧乙烷-2-甲基-4-硝基苯甲酸酯(10.0g，42.2mmol)(Fluka)在二氯甲烷(150mL)中的溶液中，合并入异丙氧基钛(25mL，84.3mmol)，在室温下搅拌10分钟。加入氨基二苯基-甲烷(14.5mL，84.4mmol)，该反应在室温下搅拌过夜。加入10％氢氧化钠在饱和盐水中的溶液，搅拌该混悬液2小时。过滤该混合物，用0.2M盐酸萃取。用二氯甲烷萃取酸层，弃去。该酸层用氢氧化钠小片碱化，直到pH9，然后在二氯甲烷中萃取。进行相分离，有机层通过硫酸镁干燥，真空下浓缩给出油状物，器通过应用2∶1至1∶1己烷∶乙酸乙酯和2∶1乙酸乙酯∶己烷作为洗脱剂的快速柱色谱进行纯化，给出2.6g(R，R)-3-(二苯甲基氨基)丁烷-1，2-二醇。
向(R，R)-3-(二苯甲基氨基)丁烷-1，2-二醇(2.6g，9.59mmol)在甲醇(20mL)中的脱气溶液中，加入碳载氢氧化钯(260mg)。抽空该反应，充入3次氢，然后在50psi下充入氢，在室温下氢化器振荡下过夜。过滤该反应混合物，浓缩给出922mg油状(R，R)-3-氨基丁烷-1，2-二醇，将其用己烷洗涤，真空下干燥。(R，R)-7-(2，3-二羟基-1-甲基丙基氨基)-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备将砜9.2(622mg，1.58mmol)与在1，2-二甲氧基乙烷(1mL)中的(R，R)-3-氨基-丁烷1，2-二醇(250mg，1.9mmol)合并，在氩气氛、100℃下加热2小时。将该反应冷却至室温，用9∶1二氯甲烷/甲醇稀释，直接置于应用96∶4二氯甲烷/甲醇和9∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的快速硅胶柱上，给出120mg无色油，将其溶解于乙酸乙酯(10mL)中，用1当量盐酸(1.0M在乙醚中)处理。通过真空过滤收集沉淀，用乙酸乙酯洗涤，真空下干燥给出118mg(R，R)-7-(2，3-二羟基-1-甲基丙基氨基)-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮白色固体。实施例643-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3.4-二氢嘧啶并[4.5-d]嘧啶-2(1H)-酮 64.15-(2-氯苯基)氨基甲基-4-氨基-2-甲基硫基嘧啶的制备 将4-氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醛(9.5g，56.1mmol)、2-氯苯胺(6.7mL，63.7mmol)和4-甲苯-磺酸一水合物(0.85g，4.5mmol)在350mL二甲苯中的混合物加热回流，共沸除去水6小时。将该混合物冷却至25℃，通过真空过滤收集沉淀，用己烷洗涤，空气干燥。然后将固体溶解于300mL四氢呋喃中，将反应冷却至0℃。在45分钟内分小批量加入氢化铝锂(2.3g，60.6mmol)。加入完成后，再将该混合物搅拌15分钟，依次用4.5mL水、4.5mL 15％氢氧化钠水溶液和然后用20mL水小心地处理。将该混合物搅拌30分钟，通过硅藻土过滤，真空下浓缩滤液。固体通过应用25％丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。减压下浓缩含有产物的馏份得到固体，将其在乙烷(ethyl)中重结晶，给出7.0g白色固体5-(2-氯苯基)氨基-甲基-4-氨基-2-甲基硫基嘧啶。64.23-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 硫醚10.1向5-(2-氯苯基)氨基甲基-4氨基-2-甲基硫基嘧啶(7.0g，24.9mmol)在200mL四氢呋喃中冷却至0℃的搅拌溶液中，加入三乙胺(10mL，71.7mmol)。然后将该溶液逐滴用光气溶液(14.2mL在甲苯中20％溶液，27.2mmol)处理。搅拌2小时后，再加入另外的5.0mL三乙胺(35.9mmol)，随后加入光气(6.5mL在甲苯中20％溶液；12.5mmol)。再另外搅拌2小时后，再加入另外的三乙胺(2mL，14.3mmol)，随后加入光气(3mL在甲苯中20％溶液；5.8mmol)。将该反应再另外搅拌1小时，然后升温至室温，倒入75mL水和150mL乙酸乙酯的非均相容液中。然后过滤该混合物，进行相分离。将水相用150mL乙酸乙酯再萃取两次。减压下浓缩合并的乙酸乙酯萃取液。用乙酸乙酯搅拌残渣。然后通过真空过滤收集产物，真空下干燥给出3.2g白色固体3-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮(硫醚10.1)。实施例653-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的一种可选的制备方法65.14-氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯的制备 将4-氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(1450g，6.23mole)(AldrichChemical Co.，Milwaukee，Wisconsin，USA)在2987mL四氢呋喃中的溶液冷却至5-10℃，用2407mL 37％氢氧化铵溶液在2978mL三乙胺中的混合物缓慢处理。搅拌16小时后，真空下浓缩反应混合物至大约5L，过滤。用己烷洗涤滤饼，在60-65℃下真空干燥。减压下蒸发滤液给出1314g(94％)白色固体4-氨基-2-甲基硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯，m.p.130.1-130.7℃。65.24-{[(2-氯苯基)氨基]羰基氨基}-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯的制备 向加热至100-105℃的4-氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(1215g，5.7moles)在2600mL二甲苯的混悬液中加入(956.5g，6.23moles)2-氯苯基异氰酸酯，以维持温度在大约100℃。将混合物的温度升高至120℃，搅拌14小时。停止加热，开始缓慢冷却至110℃。当开始结晶时，缓慢加入5256mL乙酸乙酯完成结晶。将该混合物冷却至20℃，过滤。滤饼用乙酸乙酯洗涤，置于真空烘箱中，在60-80℃下干燥10-12小时，给出1895g(90.7％)4-{[(2-氯苯基)氨基]羰基氨基}-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯，m.p.172.3-172.6℃。65.3[(2-氯苯基)氨基]-N-[5-(羟基甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基]甲酰胺的制备 在-25℃、氮气氛下，向4-{[(2-氯苯基)氨基]羰基氨基}-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(1,000g，2.73mole)在4.7L无水四氢呋喃的搅拌混悬液中，在3小时内加入1.0M氢化铝锂在四氢呋喃(2,730mL，3.19mole)中的溶液。将得到的黄色均相溶液再保持在-25℃ 45分钟，然后在以后的90分钟内升温至0℃。HPLC分析表明不含有起始的酯。然后将该溶液淬灭至搅拌的1.0M Rochelle盐溶液(8.0L)，用乙酸乙酯萃取。浓缩含有混悬的不溶黄色产物的合并的萃取液，过滤。用己烷洗涤黄色固体，然后在60℃、真空下干燥，给出69.3％(617g)黄色结晶[(2-氯苯基)氨基]-N-[5-(羟基甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基]甲酰胺，m.p.182.5-182.9℃。在1,168g底物上重复上述操作，给出717.8g题述化合物。65.4[(2-氯苯基)氨基]-N-[5-(溴甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基]甲酰胺的制备 将[(2-氯苯基)氨基]-N-5-(羟基甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基]甲酰胺(1363g)与8L四氢呋喃混合，在氮气氛下开始机械搅拌。然后在15分钟内向该混合物中加入中加入在800mL四氢呋喃的三溴化磷(135mL)。连续搅拌4小时，这时停止反应，过滤。用四氢呋喃洗涤滤饼一次，55℃、真空烘箱中干燥过夜，给出1360g(71％)[(2-氯苯基)氨基]-N-[5-(溴甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基]甲酰胺(M+1377)。65.53-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备 硫醚10.1向[(2-氯苯基)氨基]-N-[5-(溴甲基)-2-甲基硫基-嘧啶-4-基甲酰胺(1360g，3.62mole)在10L 1-甲基-2-吡咯烷酮的混悬液中，加入136mL六甲基二硅氮烷。将该混合物加热至105-115℃温度内1.5小时。然后将该混合物冷却至30℃，用20L水处理。然后在5-8℃将该混合物搅拌2小时，过滤。收集滤液，依次用水和己烷处理。将产物置于干燥箱中，真空下加热16小时，给出780g(70.1％)灰白色固体3-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮(硫醚10.1)。(M+1308)应用邻甲苯基异氰酸酯代替上述步骤65.2中的2-氯苯基异氰酸酯，制备相关化合物7-甲基硫基-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(硫醚10.2)(M+1＝287) 硫醚10.2实施例663-(2-氯苯基)-7-甲基磺酰基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 砜11.1
将3-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(4.1g，12.8mmol)在50mL氯仿中的混悬液在冰中冷却，用70％ 3-氯过苯甲酸(9.8g，39.8mmol)处理。在室温下搅拌该混合物2小时，然后用100mL 10％硫代硫酸钠水溶液处理，搅拌30分钟。用400mL二氯甲烷稀释该反应，进行相分离。有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后通过硫酸镁干燥并过滤。减压下浓缩滤液，得到固体，将其用乙酸乙酯搅拌，然后过滤，给出2.6g白色固体3-(2-氯-苯基)-7-甲基磺酰基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(砜11.1)。(MH+＝364)实施例67化合物4-19该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(4-羟基甲基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜11.1(350mg，1.04mmol)与具有0.3mL 1-甲基-2-吡咯烷酮的4-氨基环己基甲醇(1∶1顺/反)(400mg，3.3mmol)(如Chem.Ber.；GE；96；1963；2377-2386所述制备)合并。将该混合物在100℃下加热2小时，这时将其冷却至室温。向反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，干燥，真空下浓缩。残渣通过应用10∶90甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。浓缩含有产物的柱馏份至泡沫状，再将其混悬于甲醇中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)得到盐，将其过滤给出3-(2-氯苯基)-7-(4-羟基甲基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例68化合物2-28该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(1-乙氧基羰基哌啶-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜11.1(1.3g，3.75mmol)置于4-氨基-1哌啶羧酸乙酯(3.7mL，21mmol)中，加热至120℃，在该温度下起始的混悬液完全溶解，然后在10分钟后再次沉淀成混悬液。将第二次的混悬液在150℃下加热1小时，然后冷却至室温，倒入水中，形成胶质物。当用50mL乙醚搅拌时，该胶产生少量白色固体，将其放在一边。其余的胶用10-15mL甲醇处理，形成白色固体。合并白色固体总共0.685g(1.59mmol)，其中30mg为游离碱的形式。实施例69化合物4-25该实施例举例说明了7-(反-4-氨基环己基-氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜11.1(196mg，0.579mmol)和0.36g(3.2mmol)反-1，4-二氨基环己烷溶解于5mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中。将该反应混合物在80℃下搅拌3小时，冷却，然后加入30mL乙酸乙酯和30mL水。分离有机层，然后水相用30mL二氯甲烷再次萃取。真空下浓缩合并的有机层，直到粗液持续形成白色沉淀。过滤固体，用乙酸乙酯洗涤，给出28mg(13％)白色粉末状题述化合物，m.p.＞300℃。将该产物置于乙酸乙酯中，用HCl/Et2O处理，形成白色粉末7-(反-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例70化合物4-26该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(N，N-二甲基氨磺酰酰氨基)环己基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向在20mL二氯甲烷中的7-(反-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(318mg，0.632mmol)(如实施例87所述制备)中，加入三乙胺(0.10mL，0.72mmol)和二甲基氨磺酰氯(0.12g，0.84mmol)在5mL二氯甲烷中的溶液。回流该反应混合物18小时，冷却，然后真空下浓缩。通过应用5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的色谱进行纯化，给出271mg(70％)白色泡沫状3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(N，N-二甲基氨磺酰酰氨基)环己基氨基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。(MH+＝610，m.p.106.5-110.0℃)将3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(N，N-二甲基氨磺酰酰氨基)环己基氨基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(250mg，0.410mmol)溶解于10mL of甲醇中，用10mL 10％盐酸水溶液处理。将该反应混合物在50℃下搅拌，TLC(5％甲醇/二氯甲烷)监测。将反应温度升高至85℃ 3小时，然后在真空下浓缩该反应混合物。过滤得到的混悬液，给出白色固体，将其用乙酸乙酯洗涤，给出125mg(59％)白色粉末3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(N，N-二甲基-氨磺酰酰氨基)环己基-氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例71化合物4-24该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜11.1(4.6g，13mmol)与在40mL 1-甲基2-吡咯烷酮中的1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基胺(4.2g，27mmol)(如实施例8所述制备)合并。将该反应混合物加热至100℃过夜，这时将其冷却至室温，用乙酸乙酯和水稀释，过滤给出灰白色固体。将在二乙醚中的1M盐酸加入到该产物(0.12g，0.29mmol)在甲醇中的稀浆中，真空下浓缩得到的溶液。将残渣置于甲醇/二氯甲烷中，通过应用2％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的快速硅胶色谱进行纯化，给出游离碱型的纯化题述化合物。将在二乙醚中的1M盐酸加入到产物在甲醇的稀浆中。在氮气流下浓缩得到的溶液，在减压下抽吸给出80mg黄色固体3-(2-氯苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并-[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例72化合物4-23该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-(1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(0.17g，0.41mmol)(如实施例71所述制备)在1∶1四氢呋喃/3N盐酸水溶液中的混合物在室温下搅拌过夜。然后用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液进行处理。进行相分离，用乙酸乙酯萃取水层。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，减压下进行浓缩。将该残渣溶于甲醇中，通过应用2％氢氧化铵(在35％丙酮/己烷中)作为洗脱剂的快速硅胶色谱进行纯化。合并含有产物的馏份，减压下浓缩至白色固体，将其混悬于甲醇中。加入在二乙醚中的1M盐酸，给出盐，将其浓缩，减压下抽吸给出80mg黄色泡沫状纯的3-(2-氯苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例73化合物4-2该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的可供选择的制备方法。73.1制备
将砜11.1(0.400g，1.18mmol)与反-4-氨基环己醇(0.272g，2.36mmol)和2-甲氧基乙基醚(0.4mL)合并。混合物加热至100-105℃ 1小时，这时将其冷却至室温，真空下浓缩。残渣通过应用9∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩至油状物，将其再溶解于乙酸乙酯和甲醇中。加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)，给出盐，将其溶解于溶剂中。真空下浓缩该溶液至固体，将其在乙醚中研制，过滤，干燥给出0.220g 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。73.2可供选择的制备方法 硫醚10.1将硫醚10.1(700g)在1-甲基-2-吡咯烷酮(3000mL)中的溶液与在500mL 1-甲基-2-吡咯烷酮和40g水中的N-氯琥珀酰亚胺(350g)合并，将该混合物在25℃下搅拌1.5小时。向该溶液中加入反-4-氨基环己醇(865g)。将该混合物加热至60℃12-26小时，冷却至20-25℃，用10500mL水处理。将该混合物冷却至5-8℃，搅拌2小时。通过过滤收集固体，用水、己烷洗涤，真空烘箱中、65℃下干燥，提供3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。通过乙醇盐酸/水对游离碱的作用，形成盐酸盐。实施例74化合物4-5该实施例举例说明了7-(反-4-羟基-环己基氨基)-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的可供选择的制备方法。 硫醚10.2将硫醚10.2(2g)在4mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的溶液与在4mL 1-甲基-2-吡咯烷酮和0.125g水中的N-氯琥珀酰亚胺(1.03g)合并，将该混合物在25℃下搅拌1.5小时。向该溶液中加入反-4-氨基环己醇(2.65g)。将该混合物加热至60℃48小时，冷却至20-25℃，用10mL水处理。将该混合物冷却至5℃，搅拌2小时。通过过滤收集固体，用水、己烷洗涤，真空下干燥。固体通过应用95/5-90/10二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的快速柱色谱进行纯化，给出614mg 7-(反-4-羟基-环己基氨基)-3-邻-甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。通过醚盐酸/水对游离碱的作用，形成盐酸盐。实施例75化合物4-15该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲酰氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的可供选择的制备方法。 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(300mg，0.8mal)(如实施例73所述制备)和96％甲酸(2mL)的混合物在60℃下搅拌3小时，然后在减压下浓缩。将该残渣在乙醚中研制，过滤，干燥给出250mg 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲酰氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。实施例76化合物4-13该实施例举例说明了7-(反-4-乙酰氧基-环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(400mg，1.07mmol)(如实施例73所述制备)、醋酸酐(0.3mL，3.2mmol)和吡啶(0.34mL，4.3mmol)在5mL二氯甲烷中的混悬液在25℃下搅拌18小时。过滤该反应混合物，用二氯甲烷洗涤沉淀，干燥，混悬于乙酸乙酯中，加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)得到盐，过滤并干燥，给出200mg 7-(反-4-乙酰氧基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例77化合物4-20该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲氧基羰基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。
将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(200mg，0.5mmol)(如实施例73所描述制备)和4-二甲基氨基吡啶(6.5mg，0.05mmol)在四氢呋喃中的混悬液在冰浴中冷却。加入二甲基焦碳酸酯(pyrocarbonate)(0.6mL，5.35mmol)，将该混合物在25℃下搅拌18小时。过滤该反应，沉淀通过应用98∶2二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化，得到30mg题述化合物。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)，得到盐，将其过滤、干燥给出34mg 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲氧基羰基氧环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例78化合物4-21该实施例举例说明了7-(反-4-氨基甲酰基氧基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(285mg，0.77mmol)(如实施例73所述制备)在3mL二氯甲烷中的混悬液在冰浴中冷却，加入氯磺酰基-异氰酸酯(0.09mL，1.01mmol)。将该反应混合物在25℃下搅拌18小时，然后用0.5m水处理。将该两相混合物搅拌8小时，过滤，沉淀通过应用97∶3二氯甲烷/甲醇的硅胶柱色谱进行纯化，得到110mg题述化合物。加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)，给出盐，将其过滤、干燥给出94mg 7-(反-4-氨基甲酰基氧基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例79化合物4-22该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲基氨基羰基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(350mg，0.94mmol)(如实施例73所述制备)在3mL二氯甲烷中的混悬液用1mL(过量)甲基异氰酸酯和1mL三乙胺处理。在氮气氛下搅拌该混合物1周。过滤该反应，用二氯甲烷洗涤沉淀，干燥，混悬于乙酸乙酯中，加入盐酸(1.0M/Et2O，2.0当量)，给出盐，将其过滤、干燥给出250mg 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-甲基氨基羰基氧基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例80化合物4-3该实施例举例说明了7-(3-羧基-异丙基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将砜11.1(1.0g，2.97mmol)与3-氨基丁酸乙酯(0.87mL，5.94mmol)合并。将该混合物加热至110-115℃ 1小时，这时将其冷却至室温。残渣通过应用10∶1二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有酯7-(3-乙酯基-异丙基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的柱馏份，真空下浓缩至固态(1.10g)。将该酯(0.500g，1.24mmol)溶解于甲醇中。加入氢氧化钠(0.05g，1.24mmol)和水(1mL)，给出钠盐。真空下浓缩该溶液至固态，在乙酸乙酯中研制1小时，过滤、干燥给出0.41g7-(3-羧基-异丙基氨基)-3-(2-氯苯基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮.(MH+＝376，m.p.170.0-185.5℃)。实施例81化合物3-48该实施例举例说明了1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备81.1 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(1.86g，5mmol)(如实施例73所述制备)与在二甲基甲酰胺(35mL)中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(1.05g，7mmol)和咪唑(0.75g，11mmol)合并。在50℃下加热该反应混合物24小时，冷却至室温，加入水，搅拌30分钟，过滤、干燥给出1.88g 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基-二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，m.p.289-294℃。81.2 1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将氢化钠(44mg，1.1mmol(60％油混悬液))加入到3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(486mg，1mmol)在1-甲基-2-吡咯烷酮的混悬液中，在室温下搅拌25分钟。向该溶液中加入苄基溴(0.12mL 1mmol)，在室温下搅拌4小时。将该反应混合物加入到水中，用乙酸乙酯萃取。进行相分离，有机层用水洗涤，硫酸镁干燥，真空下浓缩。残渣通过应用25∶75丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化，给出油状1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。81.3 1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮溶解于四氢呋喃中，加入氟化四丁基铵(1.0M/四氢呋喃，1.0当量)。将该反应混合物在室温下搅拌24小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，真空下浓缩。残渣通过应用90∶10二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，真空下浓缩给出题述化合物。将产物混悬于甲醇中，加入盐酸(1.0M/Et2O，1.0当量)，搅拌30分钟，然后蒸发给出泡沫状物。用甲醇/二乙醚搅拌该泡沫状物，过滤、干燥给出130mg 1-苄基-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例82化合物3-55该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-氰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(486mg，1.0mmol)(如实施例81所述制备)混悬于1-甲基-2-吡咯烷酮(7mL)中，向其中加入氢化钠(44mg，1.1mmol(60％油混悬液))。将该反应混合物在室温下搅拌25分钟。向该溶液中加入碘代乙腈(0.167mg，1.0mmol)，在室温下搅拌4小时。向该反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，通过硫酸镁干燥，减压下蒸发给出油状物。该油通过应用25∶75丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的柱馏份，减压下蒸发给出510mg白色固体3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基环己基氨基)-1-氰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。(M+H)+527，m.p.100.2-148.7℃。
将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基环己基氨基)-1-氰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(510mg，0.97mmol)溶解于四氢呋喃中，加入氟化四丁基铵(1.0M在THF中，1.0当量)。将该反应混合物在室温下搅拌12小时，加入水，用乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，减压下浓缩给出油状题述化合物。残渣通过应用90∶10二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。真空下蒸发含有产物的馏份，给出249mg泡沫状3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-1-氰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮。实施例83化合物3-49该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-甲氧基羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备。 3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(972mg，2mmol)(如实施例81所述制备)混悬于1-甲基-2-吡咯烷酮(15mL)中，向其中加入氢化钠(88mg，2.2mmol(60％油混悬液))。将该反应混合物在室温下搅拌30分钟。向该溶液中加入溴代乙酸甲酯(0.190mL，2mmol)，在室温下搅拌6小时。向该反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，通过硫酸镁干燥，减压下蒸发。残渣通过应用70∶30己烷/丙酮作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的馏份，减压下蒸发给出425mg白色固体3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基环己基氨基)-1-甲氧基羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。((M+H)+560，m.p.165.7-167.4℃。
将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基-甲硅烷基氧基环己基氨基)-1-甲氧基羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮溶解于四氢呋喃中，加入氟化四丁基铵(1.0M，1.0当量)。将该反应混合物在室温下搅拌12小时。向该反应混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取，硫酸镁干燥，减压下蒸发。残渣通过应用90∶10二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化。合并含有产物的馏份，减压下蒸发给出泡沫状题述化合物。将该产物溶解于甲醇中，加入盐酸(1.0M，1.0当量)，搅拌30分钟，减压下蒸发。用甲醇/乙醚搅拌该残渣4小时，过滤、干燥给出294mg白色固体3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-甲氧基羰基-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例84化合物3-53该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-羟基羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-甲氧基-羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]-嘧啶-2(1H)-酮(395mg，0.88mmol)(如实施例83所述制备)混悬于乙醇(5mL)中，向其中加入氢氧化钠水溶液(0.85mL 1.037N，0.88mmol)。在室温下搅拌该反应混合物72小时，然后在减压下蒸发，给出泡沫状题述化合物。将该残渣在甲醇/二乙醚的混合物中搅拌2小时，过滤、干燥给出327mg白色固体3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-羟基羰基甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例85化合物3-56该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-(2-羟基乙基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。85.1 1-(2-三异丙基甲硅烷基氧基乙基)-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。 将氢化钠(44mg 1.1mmol(60％油混悬液))加入到3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(486mg，1.0mmol)(如实施例81所述制备)在1-甲基-2-吡咯烷酮(7mL)的混悬液中，在室温下搅拌25分钟。加入2-(碘代乙氧基)三异丙基硅烷(328mg，1.0mmol)，然后在室温下搅拌该反应混合物4小时。向该溶液中加入水，用乙酸乙酯萃取，水洗涤，通过硫酸镁干燥，减压下蒸发给出油状的甲硅烷基保护的中间体。残渣通过应用25∶75丙酮/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱进行纯化，减压下蒸发含有产物的馏份，给出604mg油状1-(2-三异丙基甲硅烷基氧基乙基)-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，(M+H)+688。85.21-(2-羟基乙基)-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基-环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将1-(2-三异丙基甲硅烷基氧基乙基)-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮(604mg，0.88mmol)溶解于四氢呋喃中。向该混合物中加入氟化四丁基胺(1.0M在四氢呋喃中)，在室温下搅拌12小时。将该溶液加入到水中，用乙酸乙酯萃取，通过硫酸镁干燥，减压下蒸发给出油状题述化合物。残渣通过应用90∶10二氯甲烷的硅胶柱色谱进行纯化，真空下浓缩含有产物的馏份，给出145mg泡沫状1-(2-羟基乙基)-3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基-氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。实施例86化合物3-52该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备。86.14-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯的制备 将4-氯-2-甲基硫基嘧啶-5-羧酸乙酯(15g，64.5mmol)和苯胺(12mL，132mmol)在200mL乙腈中的混合物在室温下搅拌24小时。然后蒸发该混合物，向残渣中加入乙酸乙酯和2M盐酸水溶液。进行相分离，有机相用盐酸水溶液洗涤，硫酸钠干燥，过滤、蒸发。通过应用1∶3乙醚/己烷研制纯化得到的固体，给出14.2g(64％)白色固体4-苯基氨基-2-甲基硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯，mp 88.2-88.7℃。86.24-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醇的制备 在0℃下，将4-苯基氨基-2-甲基硫基-嘧啶-5-羧酸乙酯(14.2g，49mmol)在100mL四氢呋喃的溶液逐滴加入到在50mL四氢呋喃中的氢化铝锂(1.9g)，此时在室温下搅拌该混合物9小时。然后在冰中冷却该混合物，小心地逐滴用3.3mL水、3.3mL 2M氢氧化钠水溶液、4.4mL水和500mL乙酸乙酯处理。通过助滤剂过滤得到的混悬液，浓缩滤液。过滤产物，用乙醚洗涤，给出7g略有颜色的固体4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醇，m.p.142.2-143.2℃。86.34-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醛的制备 将4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醇(7g，28.3mmol)在130mL二氯甲烷中搅拌，用二氧化锰(25g，289mmol)处理。搅拌该混悬液7小时，然后过滤，蒸发滤液。残渣用1∶3乙醚/己烷研制，给出6.4g白色固体4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醛，m.p.105.6-106.2℃。86.4 5-(2-氯苯基)氨基甲基-4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶的制备 将4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶-5-甲醛(6.4g，26.5mmol)、3mL 2-氯苯胺和4-甲苯磺酸(300mg)在150mL甲苯中的混合物加热回流，共沸除去水2.5小时。冷却该混合物，并过滤，给出6.6g固体。向在50mL四氢呋喃中的该固体中，加入20mL氢化铝锂在1M四氢呋喃中的溶液。搅拌1.5小时后，向该混合物中加入1.2mL水、1.2mL 15％氢氧化钠水溶液和3.8mL水。搅拌该混合物15分钟，过滤，用乙酸乙酯洗涤。用1∶1乙醚/己烷研制滤液，给出6g白色固体5-(2-氯苯基)氨基甲基-4-苯基氨基-2-甲基硫基嘧啶，m.p.131.1-131.5℃。86.53-(2-氯苯基)-1-甲基-7-苯基硫基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 将5-(2-氯苯基)氨基甲基-4-苯基氨基-2甲基硫基嘧啶(6g)和5.2mL三乙胺在75mL四氢呋喃中的冷却溶液逐滴加入到在35mL四氢呋喃中的8.5mL光气(在甲苯中20％)。在室温下搅拌该混合物过夜。向混合物中加入另外3mL光气(在甲苯中20％)。搅拌15分钟后，该混合物用水和乙酸乙酯处理。进行相分离，用盐水洗涤有机相，硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗产物通过应用10∶45乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂的柱色谱进行纯化，给出2.1g白色固体3-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，m.p.79.5-82.4℃。86.63-(2-氯苯基)-7-甲烷磺酰基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 在0℃下，向在20mL四氢呋喃中的3-(2-氯苯基)-7-甲基硫基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(2g)中，加入在24mL水中的8.1gOxone。将该混合物在室温下搅拌5小时，用乙酸乙酯稀释，盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸发给出2g 3-(2-氯苯基)-7-甲烷磺酰基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，m.p.185.8-186.3℃。86.73-(2-氯苯基)-7-甲烷磺酰基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮 将3-(2-氯苯基)-7-甲烷磺酰基-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2-(1H)-酮(0.212g)和1-氨基-4环己醇(0.19g)在0.3mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的混悬液在100℃下加热2小时。冷却该混合物，用1∶2乙醚/己烷处理，并过滤。残渣通过应用在二氯甲烷中的10％甲醇进行纯化，给出149mg题述化合物，将其置于10mL乙醇中。向溶液中鼓入氯化氢气体5分钟，浓缩，用甲醇和乙醚处理。过滤得到的固体，用乙醚洗涤，给出100mg3-(2-氯苯基)-7-(反-4-羟基环己基氨基)-1-苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的盐酸盐。实施例87化合物4-28
该实施例举例说明了3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)环己基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备87.17-(反-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向砜11.1(3.0g，8.87mmol)在10mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的溶液中，加入60％氢化钠(390mg，9.76mmol，矿物油)。在室温下搅拌该混合物15分钟，然后加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基-甲基氯(1.57mL，8.87mmol)。在室温下搅拌该反应4小时。然后向该溶液中加入预先溶解于15mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中的5.06g反-1，4-二氨基-环己烷。然后将该反应升温至60℃ 24小时。将该反应倒入盐水中，用乙酸乙酯萃取该产物。用饱和碳酸氢钠和水洗涤合并的有机萃取物，通过硫酸镁干燥，，真空下浓缩给出淡棕色油。通过应用2％甲醇/二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的色谱进行纯化，给出2.8g浅黄色泡沫7-(反-4-氨基环己基-氨基)-3-(2-氯苯基)-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。(MH+＝502)87.23-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)-环己基氨基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备
向7-(反-4-氨基环己基氨基)-3-(2-氯苯基)-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(500mg，1.04mmol)在5mL二氯甲烷中的溶液中，加入三乙胺(0.29mL，0.207mmol)和甲烷磺酸酐(0.2g，1.14mmol)在5mL二氯甲烷中的溶液。将该反应混合物在室温下搅拌24小时，用乙酸乙酯稀释，10％碳酸氢钠水溶液洗涤。真空下浓缩有机萃取物，通过应用2％甲醇/二氯甲烷至3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的色谱进行纯化，给出292mg白色泡沫状3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)环己基氨基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮。(MH+＝581)87.33-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)环己基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮的制备 向3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)环己基氨基]-1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮(290mg，0.5mmol)在5mL甲醇的溶液中加入4.0mL 10％盐酸水溶液。将该反应混合物在40℃下搅拌24小时，真空下浓缩。用乙酸乙酯反复研制无色油，通过真空过滤收集，给出3-(2-氯苯基)-7-[反-4-(甲烷磺酰基氨基)环己基氨基]-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮白色固体。
表17-羟基烷基氨基-和7-羟基环烷基氨基-取代的1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮衍生物 化合物1-1至1-23在体外P38检测中的IC50低于10μm
表27-杂环氨基-和7-杂环基烷基氨基-取代的3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮衍生物 化合物2-1至2-11、2-13至2-24和2-28在体外p38检测中的IC50小于10μM。
表37-杂烷基氨基-和7-杂原子取代的环烷基氨基-取代的3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮衍生物 化合物3-1，3-3，3-5至3-10，3-12，3-14至3-23，3-27至3-36，3-38，3-39，3-41，至3-58，3-60在体外P38检测中的IC50低于10μm
表47-杂烷基氨基-和7-杂取代的环烷基氨基-取代的3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮衍生物 化合物4-1至4-8、4-10至4-28在体外p38检测中的IC50小于10μM。实施例88体外p38MAP激酶抑制检测本实施例举例说明p38(MAP)激酶体外检测，用于评价本发明的化合物。
对Ahn，等，J.BioL Chem.2664220-4227(1991)中描述的方法进行少许改进，通过检测p-38激酶使γ-33p-ATP中的γ-磷酸对髓磷脂碱性蛋白(MBP)的转移测定本发明化合物在体外的p-38MAP激酶抑制活性。
重组p38MAP激酶的磷酸化形式用SEK-1和MEKK在大肠杆菌中共表达(参见，Khokhlatchev，等.，J.Biol.Chem.27211057-11062(1997))，然后应用Nickel柱通过亲合色谱纯化。
磷酸化p38MAP激酶在激酶缓冲液中稀释，激酶缓冲液为20mM 3(N-吗啉代)丙基磺酸，pH7.2，25mM β-甘油磷酸，5mM乙二醇-双(β-氨基乙醚)-N，N，N′，N′-四乙酸，1mM原钒酸钠，1mM二硫苏糖醇，40mM氯化镁。向其中加入溶解于DMSO的实验化合物或单纯DMSO(对照)，样品在30℃保温10分钟。加入含有MBP和γ-33P-ATP的底物混合物起始激酶反应。再次于30℃保温20分钟，之后加入0.75％磷酸终止反应。然后用磷酸纤维素膜(Millipore，Bedfrod，MA)从残存的γ-33P-ATP中分离磷酸化MBP，然后用闪烁记数仪(Packard，Meriden，CT)定量。实施例89体外TNF-α抑制检测本实施例举例说明评价THP1细胞中LPS诱导的TNF-α产生的抑制的体外检测。
对Blifeld，等.Transplantation，51498-503(1991)描述的方法作少许改动，以测定本发明化合物抑制TNF-α释放的能力。(a)TNF生物合成的诱导将THP-1细胞悬浮于培养基[含有15％胎牛血清，0.02mM 2-巯基乙醇的RPMI(Gibco-BRL，Gailthersburg，MD)]中，细胞浓度为2.5×106个细胞/mL，然后在96孔平板上铺板(每孔含0.2mL等份)。实验化合物在DMSO中溶解，然后用培养基稀释，使DMSO的终浓度为5％。向每孔加入25μL实验化合物溶液或仅有DMSO的培养基(对照)。在37℃培养细胞30分钟。向孔中加入LPS(Sigma，St.Louis，MO)至终浓度为0.5ug/mL，再次保温细胞2小时。培养末期，收集培养上清液，应用下面描述的ELISA检测测定TNF-α的存在量。(b)ELISA检测应用Reimund，J.M.，等.GUT.Vol.39(5)，684-689(1996)描述的双抗-TNF-α抗体(2TNF-H12和2TNF-H34)，通过特异性捕获ELISA检测测定人TNF-α的存在量。
用每孔50μl抗体2TNF-H12的PBS(10μg/mL)液涂布聚苯乙烯96孔平板，并在潮湿的培养箱中于4℃保温过夜。用PBS清洗平板，然后用5％脱脂奶粉的PBS液在室温下封闭1小时，然后用0.1％BSA(牛血清白蛋白)的PBS液清洗。
用人重组TNF-α(R & D Systems，Minneapolis，MN)的储备液制备TNF标准品。检测中标准品的浓度从10ng/mL开始，然后进行6次半对数连续稀释。
将25μL上述培养物上清液或TNF标准品或仅培养基(对照)与25μL生物素化单克隆抗体2TNF-H34(2ug/mL在含0.1％BSA的PBS中)混合，然后加入各孔。样品在室温下保温2小时，伴随轻微振荡，然后用0.1％BSA的PBS液清洗3次。向各孔加入50μl含有0.416μg/mL过氧化物酶-抗生物素蛋白链菌素(Zymed，S.San Francisco，CA)的过氧化物酶-抗生物素蛋白链菌素溶液和0.1％BSA的PBS液。将样品在室温下再次保温1小时，然后用0.1％BSA的PBS液清洗4次。向各孔加入50μl O-苯二胺溶液(1μg/mL O-苯二胺和0.03％过氧化氢的0.2M柠檬酸缓冲液pH4.5)，样品在室温下黑暗中保温30分钟。分别记录样品和参照在450nm和650nm的光密度。从450nm光密度相对使用浓度的曲线测定TNF-α水平。
相应于450nm吸收值的半数最大减少的实验化合物的浓度作为IC50值。实施例90本实施例举例说明一个体内检测实验，以评价小鼠(或大鼠)中LPS-诱导的TNF-α产生的抑制。
对Zanetti，等，J.Immunol.，1481890(1992)和Sekut，等，J.Lab.Clin.Med.，124813(1994)描述的方法进行少量改动，来测定本发明化合物在体内抑制TNF-α释放的能力。
使重量为18-21克的雌性BALB/c小鼠(Charles River，Hollister，CA)适应环境一周。使各含8只小鼠的每组小鼠口服悬浮或溶解于含0.9％氯化钠、0.5％羧甲基纤维素、0.4％聚山梨醇酯80、0.9％苯甲醇(CMC载体)的水性载体中的实验化合物或单独的载体(对照组)。30分钟后，给小鼠腹膜内注射20μg LPS(Sigma，St.Louis，MO)。1.5小时后，吸入CO2处死小鼠，通过心脏穿刺术收集血液。在15600Xg离心5分钟分离血液，将血清转移到干净试管中，于-20℃冷冻直到按照生产商的方案通过ELISA方法(Biosource International，Camarillo，CA)检测TNF-α。
应当理解本发明所述的实施例和实施方案仅起到说明目的，基于本发明的各种改动或变化对于本领域技术人员将是可以预见的，当然它们也包括在本申请的实质和范围以及所附权利要求的范围内。
权利要求
1.一种化合物，选自式I所代表的化合物组 其中该下标n是整数0-3；R1是酰基，杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂烯基，杂炔基，杂烷基羰基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂取代的环烷基烯基，杂取代的环烷基炔基，杂烷基取代的环烷基，任选取代的杂环基，任选取代的杂环基烷基，任选取代的杂环基螺环烷基，-(亚烷基)-C(O)-R11或-(亚杂烷基)-C(O)-R11；其中R11是烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，羟基，或烷氧基；R2在每次出现时各自独立地是烷基，卤代，杂烷基或烯基；R3是氢，烷基，杂烷基，任选地取代的芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，任选地取代的环烷基，环烯基，任选地取代的环烷基烷基，卤代烷基，氰基烷基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，-(亚烷基)-C(O)R31，或-(杂亚烷基)-C(O)R31；其中R31是烷基，卤代烷基，羟基，烷氧基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选取代的环烷基，任选取代的环烷基烷基，任选取代的芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的杂芳基，或任选取代的杂芳烷基；和R4是氢，烷基，或-(亚烷基)-COR31；各个异构体，各种异构体的外消旋或非外消旋混合物及其药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中R1是酰基，杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂烯基，杂炔基，杂烷基羰基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂取代的环烷基烯基，杂取代的环烷基炔基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，任选地取代的杂环基烷基，任选地取代的杂环基螺环烷基，-(亚烷基)-C(O)-R11或-(亚杂烷基)-C(O)-R11；其中R11是烷基，卤代烷基，氨基，单取代的氨基，二取代的氨基，任选地取代的环烷基，任选地取代的环烷基烷基，芳基，任选地取代的芳烷基，任选地取代的杂芳基，任选地取代的杂芳烷基，羟基，或烷氧基。
3.权利要求1或2的化合物，其中R4是氢。
4.权利要求1或2的化合物，其中n是整数1-2，和各个R独立地是卤代或烷基。
5.权利要求4的化合物，其中-(R2)n代表2-卤代或2，6-二卤代。
6.权利要求4的化合物，其中-(R2)n代表2-甲基。
7.权利要求1或2的化合物，其中R3是氢，烷基，卤代烷基或杂烷基。
8.权利要求7的化合物，其中R3是氢，烷基或杂烷基。
9.权利要求7或8的化合物，其中R3是氢或甲基。
10.权利要求7的化合物，其中R3是2，2，2-三氟乙基。
11.权利要求7或8的化合物，其中R3是杂烷基。
12.权利要求1或2的化合物，其中R1是杂烷基，任选地取代的芳基杂烷基，杂取代的环烷基，杂取代的环烷基烷基，杂烷基取代的环烷基，任选地取代的杂环基，或任选地取代的杂环基烷基。
13.权利要求12的化合物，其中R1是任选地取代的杂烷基。
14.权利要求13的化合物，其中R1是羟基烷基。
15.权利要求14的化合物，其中R2是卤代或甲基，R3是甲基和n是1或2。
16.权利要求12的化合物，其中R1是杂取代的环烷基。
17.权利要求16的化合物，其中R2是卤代或甲基，R3是甲基和n是1或2。
18.权利要求17的化合物，其中R1是羟基环烷基。
19.权利要求12的化合物，其中R1是任选地取代的杂环基或任选地取代的杂环基烷基。
20.权利要求19的化合物，其中R2是卤代或甲基，R3是甲基或氢，n是1或2。
21.权利要求18的化合物，其中R2是卤代或甲基，R3是杂烷基，n是1或2。
22.权利要求1的化合物，其为3-(2-氯代苯基)-7-(反式-4-羟基环己基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，及其药用盐。
23.权利要求1的化合物，其选自3-(2-氯代苯基)-7-(四氢吡喃-4-基氨基)-3，4-二氢嘧啶并[4，5d]嘧啶-2(1H)-酮，7-[1-(2-羟基乙基)-哌啶-4-基氨基]-1-甲基-3-邻甲苯基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，3-(2-氯代苯基)-7-[(反式-4-甲氧基环己基)甲基氨基]-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮，和3-(2-氯代苯基)-7-(4-氧代-环己基氨基)-1-甲基-3，4-二氢嘧啶并[4，5-d]嘧啶-2(1H)-酮；及其药用盐。
24.一种制备按照权利要求1的式I化合物的方法，其中R1-R4如权利要求1所定义，所述方法包括(a)用式III的胺R1R4-NH (III)其中R1和R4具有权利要求1中的意义，条件是存在的任何干扰性的反应基任选地呈被保护的形式，处理式II化合物 其中n，R2和R3具有权利要求1中的意义，条件是存在的任何干扰性的反应基任选地呈被保护的形式，并且L是离去基，并且必要时，除去反应产物中存在的任何保护基，和，必要时，任选地将该化合物转化成其药用盐。
25.一种制备按照权利要求1的式I化合物的方法，其中R1-R4如权利要求1所定义，所述方法包括(a)在碱存在下，处理式IV化合物 其中X是卤代，R是烷基，和R2和R3具有权利要求1中的意义，得到式V化合物 (b)用氧化剂，随后用式R1R4NH的胺(其中R1和R4具有权利要求1中的意义)处理式V化合物，得到式(I)化合物，和必要时，任选地将该化合物转化成其药用盐。
26.权利要求1-23中任一项的化合物，其用作药物。
27.一种药物组合物，含有与至少一种药用载体混合的权利要求1-23中任一项的化合物，或其一种异构体，各种异构体的外消旋或非外消旋混合物或其药用盐。
28.权利要求1-23中任一项的化合物，其用于治疗关节炎，局限性回肠炎，过敏性肠综合症，成人呼吸窘迫综合症，慢性阻塞性肺疾病，骨质疏松，或早老性痴呆。
29.权利要求1-23中任一项的化合物用于治疗关节炎，局限性回肠炎，过敏性肠综合症，成人呼吸窘迫综合症，慢性阻塞性肺疾病，骨质疏松，或早老性痴呆的用途。
30.一种制备药物方法，包括将权利要求1-23中任一项的化合物或其药用盐与相容性药物载体一起制成格林制剂给药形式。
31.权利要求1-23中任一项的化合物在制备用于治疗关节炎，局限性回肠炎，过敏性肠综合症，成人呼吸窘迫综合症，慢性阻塞性肺疾病，骨质疏松，或早老性痴呆的药物中的用途。
32.权利要求1-23中任一项的化合物，其由权利要求24或 25的方法制备。
33.如前所述的新的化合物，中间体，方法和药物组合物。
全文摘要
本发明提供了式(I)的化合物,其中R
文档编号A61P1/00GK1382144SQ00814662
公开日2002年11月27日 申请日期2000年10月13日 优先权日1999年10月21日
发明者詹姆斯·帕特里克·邓恩, 劳伦斯·埃默森·菲舍尔, 戴维·迈克尔·戈尔茨坦, 威廉·哈里斯, 克里斯托弗·胡韦·希尔, 伊恩·爱德华·戴维·史密斯, 特蕾莎·罗莎·韦尔奇 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司