专利名称：一种黄豆苷元药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种黄豆苷元药物组合物，更具体指一种以黄豆苷元为活性成分，含环糊精和水溶性辅剂的药物组合物。本发明还涉及该组合物的制备方法。
背景技术：
中药葛根的主要有效成分黄豆苷元是异黄酮类的主要组成之一，可通过化学合成或中药提取和分离技术制备。黄豆苷元具有扩张冠、股、脑动脉，增加脑血流量，明显改善头痛、头晕、颈项强痛等高血压病症、降压、显著缓解心绞痛、改善心功能、减少心肌耗氧量、抗心律失常、改善心率、抗氧化、增强机体免疫力、加强四肢血流循环、微循环和末梢血流量，降低TXA2/PGI2和血液黏度、抑制血小板聚集、减弱血管阻力、解除血管痉挛、改变血液流变学、改善更年期症候群、强化钙质吸收等功效。它主要用于治疗高血压、冠心病及脑神经性疾病，还可用于防治突发性耳聋、治疗妇女更年期综合症、预防心绞痛、心肌梗塞、形成脑血栓的及老年痴呆、骨质疏松等症。黄豆苷元毒性较低，适合长期用药。
黄豆苷元属异黄酮结构，水溶性差，脂溶性也不理想，黄豆苷元在水中的溶解度仅为56μg/ml，目前市售的黄豆苷元药剂仅限于口服的片剂和胶囊，体内吸收缓慢，生物利用度很低，从而影响了黄豆苷元的疗效发挥，限制了其广泛使用。因此增加黄豆苷元的水溶性，改善其剂型和给药途径，提高其疗效成为目前研究的难题。为了改善黄豆苷元的溶解度，提高其水溶性和生物利用度，石朝周等通过对黄豆苷元进行结构改造来改善黄豆苷元溶解度，即以甲氧基、羟基、氨基、乙酰氨基、酯基、醚基等基团对异黄酮的4位或7位进行取代，但所得到的黄豆苷元衍生物的生物活性均受到不同程度的影响(同济医科大学学报1990，19(3)188-203)。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术所存在的缺陷，提供一种水溶性良好且质量稳定、毒副作用小的黄豆苷元药物组合物，该药物组合物可以配制成口服液、注射液等溶液制剂。
本发明的另一个目的在于提供该药物组合物的制备方法。
本发明药物组合物的特点在于通过使用环糊精和水溶性辅剂来增加黄豆苷元类物质在水中的溶解度，改善其水溶性，从而提高其生物利用度和疗效。
以重量计，本发明所述的黄豆苷元药物组合物，包括
黄豆苷元 1份环糊精25～500份水溶性辅剂50～1000份。
本发明所说的环糊精为α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精或乙酰-γ-环糊精；所说的水溶性辅剂为乙醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、聚乙二醇、特戊醇、苯甲醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚枫、乳酸羟基酰胺、三醋酸甘油酯、乳酸乙酯、油酸乙酯、吐温-80、肉豆蔻酸异丙酯、苯甲酸苄酯或聚氧乙烯氢化蓖麻油。根据实际需要上述配方中还可以包括适量的水和/或防腐剂，防腐剂可选用苯甲酸钠、三氯叔丁醇、苯甲醇或对羟基苯甲酸苄酯等。
本发明所述的黄豆苷元药物组合物指液态药物组合物或其干燥后的固态组合物。所说的干燥指喷雾干燥或冷冻干燥。本发明药物组合物的制备方法的特点是黄豆苷元必须先溶解于水溶性辅剂后再与其它组分混合，具体包括如下步骤(1)根据配方比例称取各组分，将环糊精溶解于水溶性辅剂或水中；(2)在环糊精的水溶性辅剂溶液中加入黄豆苷元或将黄豆苷元溶于水溶性辅剂后加至环糊精水溶液中；(3)超声或搅拌至溶液澄清透明得到液态组合物，或(4)将液态组合物进行喷雾干燥或冷冻干燥得到固态组合物。
上述方法中，以重量计，水的用量为10～1000份，制备冻干品时还可以使用支架剂，支架剂可选用甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、右旋糖苷或其混合物。
本发明药物组合物适合于制成口服液、片剂、胶囊等口服制剂以及注射剂，通过口服、静脉注射或肌肉注射方式给药，本发明药物组合物口服制剂的有效使用剂量为0.35mg/kg体重，注射给药的有效使用剂量为0.05mg/kg体重。
图1为受试者的血药浓度经时曲线，其中 表示试验组， 表示对照组；图2为SHR鼠的动脉收缩压变化曲线，其中 表示试验组， 表示对照组。
有益效果1、本发明药物组合物以环糊精和水溶性辅剂为必需辅剂，明显增加黄豆苷在水中的溶解度，改善其水溶性，从而有效提高其生物利用度和疗效。
2、本发明药物组合物毒副作用低，稳定性良好，可以制成溶液制剂，实现了注射给药，拓展了黄豆苷类物质的药用范围，可作为急救药用于临床。
3、本发明药物组合物的制备工艺简单、易控，适合工业化大生产。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
下述实施例中，采用HPLC法测定黄豆苷类物质含量，色谱条件流动相为甲醇-5％醋酸溶液(60∶40，v/v)，流速为1.0ml/min，进样量为20μl，柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长为249nm，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱。
下述实施例中，冷冻干燥液态组合物得到冻干品的方法为分装液态组合物后，未封口放入冻干箱的金属盘内，并将温度降低至-30℃，迅速将装有制剂的金属盘放入冻干箱内，维持4小时，然后使箱内的真空度为0.2Pa，再将搁板升温，并控制在共熔点-3℃以下，保持20小时，最后升温至4℃，并保持8小时，使制剂温度与搁板温度重合，放入无菌的过滤气体，控制制剂的含水量在3％，迅速封口即可得到冻干品。喷雾干燥液态组合物得到固体粉末的方法为用高压泵将液态组合物加压送入雾化器，雾化器利用压缩空气(表压0.4Pa)，以250m/s的高速经喷嘴内部的通道喷出，使液态组合物在喷嘴出口处产生液膜并分裂雾滴喷出，并使热气流与雾滴逆流进入干燥室，收集即可得到固体粉末。
实施例1精密称取15g β-环糊精溶于30ml水中，得到β-环糊精的水溶液。另精密称取250mg黄豆苷元溶于5ml乙醇后缓慢注入到环糊精水溶液中，搅拌6小时得澄清透明溶液，喷雾干燥后，常规方法装入胶囊，每粒25mg，得黄豆苷元药物组合物胶囊剂。
实施例2精密称取40g羟丙基-β-环糊精，加80ml水溶解后于磁力加热搅拌器上，60℃水浴恒温。另精密称取黄豆苷元500mg，以5ml二甲基亚枫溶解后缓慢加到羟丙基-β-环糊精水溶液中，1小时后撤去恒温水浴，室温下继续搅拌5h，得澄清透明溶液，向该液态组合物中，加水至200ml，混匀，分装(25mg/支)，灭菌，得黄豆苷元药物组合物口服液。
实施例3精密称取200g α-环糊精溶于400ml水中。另精密称取2.5g黄豆苷元溶于50ml乙醇后，缓慢注入到α-环糊精水溶液中，搅拌12小时，喷雾干燥，得粉末状的到固态组合物。
实施例4将200g羟丙基-β-环糊精溶于200ml乙醇，得羟丙基-β-环糊精的乙醇溶液，将2.5g黄豆苷元粉末加入到羟丙基-β-环糊精的乙醇溶液中，搅拌6小时得澄清透明溶液，向该液态组合物中，加入注射用水至500ml，常法过滤，按5ml/支灌封、灭菌，即得黄豆苷元药物组合物注射液。
实施例5称取400g羟丙基-β-环糊精溶于400ml水中，另称取5g黄豆苷元溶于100ml乙醇中，缓慢注入到上述羟丙基-β-环糊精水溶液中，搅拌6小时，得到液态组合物。
实施例6将400g乙酰-γ-环糊精溶于400ml乙醇中，得乙酰-γ-环糊精的乙醇溶液，将5g黄豆苷元粉末加到乙酰-γ-环糊精的乙醇溶液中，超声处理1.5小时，得到液态组合物。
实施例7精密称取18gγ-环糊精溶于30ml水中，得到γ-环糊精的水溶液。另精密称取250mg黄豆苷元溶于5ml乙醇后缓慢注入到环糊精水溶液中，搅拌6小时得澄清透明溶液，喷雾干燥后，常规方法装入胶囊，每粒25mg，得黄豆苷元药物组合物胶囊剂。
实施例8精密称取40gγ-环糊精，加80ml水溶解后于磁力加热搅拌器上，60℃水浴恒温。另精密称取黄豆苷元500mg，以5ml二甲基亚枫溶解后缓慢加到γ-环糊精水溶液中，1小时后撤去恒温水浴，室温下继续搅拌5h，得澄清透明溶液，向该液态组合物中，加水至200ml，混匀，分装(25mg/支)，灭菌，得黄豆苷元药物组合物口服液。
实施例9精密称取200gγ-环糊精溶于400ml水中。另精密称取2.5g黄豆苷元溶于50ml乙醇后，缓慢注入到γ-环糊精水溶液中，搅拌12小时，喷雾干燥，得粉末状的到固态组合物。
实施例10将200gγ-环糊精溶于200ml乙醇，得γ-环糊精的乙醇溶液，将2.5g黄豆苷元粉末加入到γ-环糊精的乙醇溶液中，搅拌6小时得澄清透明溶液，向该液态组合物中，加入注射用水至500ml，常法过滤，按5ml/支灌封、灭菌，即得黄豆苷元药物组合物注射液。
实施例11称取400gγ-环糊精溶于400ml水中，另称取5g黄豆苷元溶于100ml乙醇中，缓慢注入到上述γ-环糊精水溶液中，搅拌6小时，得到液态组合物。
实施例12将400gγ-环糊精溶于400ml乙醇中，得γ-环糊精的乙醇溶液，将5g黄豆苷元粉末加到γ-环糊精的乙醇溶液中，超声处理1.5小时，得到液态组合物。
实施例13固态组合物的饱和溶解度的测定称取25g羟丙基-β-环糊精溶于50ml乙醇中，得β-环糊精的乙醇溶液，将250mg黄豆苷元粉末加到上述β-环糊精的乙醇溶液中，搅拌6小时得澄清透明溶液，喷雾干燥得固态组合物，进行饱和溶解度的测定取1000mg的黄豆苷粉末和上述黄豆苷元组合物固体粉末分别置于容量瓶中，加入10ml水，置量瓶中于恒温振荡器中振荡，温度为25±1℃，在10小时后取样，并用微孔滤膜(0.22μm)过滤，取滤液2ml，加入8ml无水乙醇后测定含量，计算达到平衡时的浓度即溶解度。结果见表1。
表1
实验结果显示在水中，黄豆苷元环糊精组合物的平衡溶解度为11.48mg/ml，是黄豆苷元粉末的205倍。表明环糊精对黄豆苷元具有较强的增溶作用。
实施例14黄豆苷元药物组合物注射液的稳定性试验精密称取400g羟丙基-β-环糊精溶于300ml乙醇中，加入5g黄豆苷元，超声30min，搅拌得澄清透明溶液，即为本发明液态组合物，在该液态组合物中加入注射用水至1000ml，常法过滤，按5ml/支灌封、灭菌，即得黄豆苷元药物组合物注射液。
上述所制得的黄豆苷元组合物注射液在4℃、25℃和40℃放置，分别于1、2、3和6月取样，HPLC法测定黄豆苷元含量(相对于标示量％)，结果见表2。
表2
结果表明，黄豆苷元组合物注射液在4℃放置6个月，含量几乎无变化，在25℃放置6个月，该组合物注射液的含量下降不超过2％，在40℃的情况下，该组合物注射液的含量下降不超过5％，表明黄豆苷元组合物注射液稳定性良好。
实施例15固态组合物的稳定性试验精密称取300g乙酰-γ-环糊精溶于200ml水中，加入加入50ml含5g黄豆苷元的乙醇溶液，50℃搅拌5h，得到澄清透明溶液，再加入10％甘露醇水溶液(重量体积比)，至1000ml，混匀、常法过滤，按5ml/支灌封后，冷冻干燥即得冻干品。从外观上看，冻干品为类白色块状物。
取上述制得的冻干品适量，密封，于40℃放置6月进行加速试验，于0、1、2、3、6月重新对外观、有关物质、含量等指标进行测定，评价冻干品的稳定性。结果见表3。表中有关物质系按HPLC法测定所得(色谱条件同含量测定方法)，含量为相当于标示量。
表3
结果表明，黄豆苷元组合物冻干品在40℃放置6个月，其外观和含量无明显变化，有关药物略有增加，但仍符合规定，表明黄豆苷元组合物冻干品的稳定性良好。
实施例16黄豆苷元组合物注射液的安全性试验取实施例14方法制备的黄豆苷元组合物注射液，按新药临床前特殊安全性试验方法进行刺激性和溶血性实验家兔股四头肌注射黄豆苷元组合物注射液(25mg/kg)，放血处死后，观察注射部位组织变化情况。配制2％的兔红细胞悬液，加入黄豆苷元组合物注射液，观察其对红细胞的影响。
试验结果表明，黄豆苷元组合物注射液的家兔肌肉刺激性反应在2级以下。黄豆苷元组合物注射液在观察时间内无溶血现象，说明黄豆苷元组合物注射液适宜静脉注射给药。
实施例17固态组合物的生物利用度试验试验药物按实施例3方法制备的固态黄豆苷元组合物；对照品市售黄豆苷元口服片剂(陕西海天制药厂生产)；受试者健康志愿者，年龄18～38岁，体重50～75kg。
设立试验组和对照组，每组设健康志愿者6人，男女各半，试验组志愿者早起按300mg黄豆苷元的剂量口服试验药物，对照组志愿者早起按300mg黄豆苷元的剂量口服对照品。两组人员分别在给药后0、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和24.0h取血，HPLC测定各实验时间的血药浓度，交叉实验间隔一周。结果见表4。
表4
由表4可见，试验药物和对照品的生物利用度参数存在显著性差异，本发明的黄豆苷元环糊精组合物较市售胶囊血药浓度高，吸收快，相对生物利用度F平均值为501.31％，说明黄豆苷元环糊精组合物可显著提高黄豆苷元的生物利用度。
实施例18黄豆苷元组合物注射液的人体药物动力学试验试验药物按实施例4方法制备的黄豆苷元组合物注射液，使用时取12支注射液，用5％葡萄糖注射液稀释至250mL；对照品市售黄豆苷元口服片剂(陕西海天制药厂生产)；受试者10名健康志愿者包括2名女性，8名男性，平均年龄为20.60±1.17岁，平均体重为64.50±10.34kg，平均身高为170.8±9.5cm。
试验方案受试者于给药前12h内禁食。当日早晨7:00静脉滴注试验药物，并于1小时内静脉滴注完毕。一周后口服对照品，口服剂量相当于黄豆苷元300mg。
血样采集受试者于另一手臂肘静脉处埋入留置针，分别于滴注前及滴注完成后0，0.5，1，2，4，6，8，10，24h采血3mL，置于肝素化的试管中，3000r/min。离心10min，分取血浆，存于一20℃冰箱中待测。口服对照品后，也定时取血，HPLC测定各时间的血药浓度。测定结果见图1。
由图1可看出，黄豆苷元组合物的血药浓度曲线下面积远大于市售片剂，即本发明组合物可以显著提高黄豆苷元的疗效。
实施例19液态组合物的降压试验试验药物按实施例5方法制备的液态黄豆苷元组合物，使用时用注射用水稀释。
试验动物自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats SHR)
将自发性高血压大鼠(SHR)随机分为三组，每组12只，按文献(徐淑云主编，药理实验方法学(第二版)952)方法，用SY-I型大鼠血压测压仪测定各组SHR鼠给药前的动脉收缩压(systoec blood pressure SBP)，间隔2min，测定3次，取其三次平均值。然后以100mg/kg体重的剂量分别各组SHR鼠注射黄豆苷元组合物。于给药后0.5、1、2、3、4和5h测其动脉收缩压的变化。测定结果见图2。
从图2中可以看出，注射黄豆苷元组合物100mg/kg可使SHR鼠的SBP下降，2h达高峰，然后逐渐回升，4～5h接近正常。其SBP的最高下降率为14.6％，而市售黄豆苷元片可使SBP略有下降，但变化不明显。表明本发明黄豆苷元组合物较市售制剂降压效果好。
实施例20液态组合物对血管紧张素II的影响试验药物按实施例5方法制备的液态黄豆苷元组合物，使用时用注射用水稀释；对照品市售黄豆苷元口服片剂(陕西海天制药厂生产)；试验动物自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats SHR)将12只自发性高血压大鼠(SHR)随机分成两组，对照组以300mg黄豆苷元/kg体重的剂量口服对照品，试验组静脉注射相同剂量的试验药物。各组SHR鼠服药1.5h后断头取血，于冰浴中经EDTA一2Na抗凝及酶抑制剂8一羟基喹啉，二巯基丙醇作用，迅速离心，以1000rpm/min离心5min，取其上清液，-20℃保存，按常规的放免方法测定血浆中血管紧张素II(AII)的含量，结果见表5。
表5
表5结果表明，SHR鼠口服300mg/kg剂量的市售黄豆苷元片，其血浆中AII仅下降6.79％；而等剂量静脉注射本发明组合物后，其血浆中AII下降了51.67％，AII的下降率远高于对照组。
实施例21液态组合物对肾素活性(PRA)的影响试验药物按实施例6方法制备的液态黄豆苷元组合物，使用时用注射用水稀释；对照品市售黄豆苷元口服片剂(陕西海天制药厂生产)；试验动物Wistar大白鼠，体重170-270g将16只Wistar大白鼠随机分成两组，试验组以300mg黄豆苷元/kg体重的剂量口服对照品，对照组静脉注射相同剂量的试验药物。各组Wistar大白鼠服药1.5h后常规方法测定PRA，结果见表6。
表6
表6结果表明，静脉注射本发明组合物使Wistar大鼠的PRA下降27.79％，下降率高于市售片剂。
实施例22液态组合物对血压的影响试验药物按实施例6方法制备的液态黄豆苷元组合物，使用时用注射用水稀释；对照品市售黄豆苷元口服片剂(陕西海天制药厂生产)；试验动物体重为1.7～2.5kg的猫，雌雄兼用。
将猫随机分成两组，分别用25％乌拉坦麻醉(1g/kg)。常规方法测定颈动脉血压。将动脉插管与颈总动脉相连，待血压平稳后，对照组以25mg黄豆苷元/kg体重的剂量口服对照品，试验组静脉注射相同剂量的试验药物。荧光屏观察并记录各组猫在用药后30min的血压变化，结果见表7。
表7
表7结果表明，静脉注射本发明组合物25mg/kg，使猫血压下降，收缩压和舒张压均下降，但舒张压下降明显高于收缩压，作用维持时间是9～15min，而口服等剂量的黄豆苷元片后，猫血压下降不明显。
权利要求
1.一种黄豆苷元药物组合物，以重量计，包括黄豆苷元 1份环糊精 25～500份水溶性辅剂 50～1000份。
2.根据权利要求1所述的黄豆苷元药物组合物，其特征在于所说的环糊精为α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-β-环糊精或乙酰-γ-环糊精，所说的水溶性辅剂为乙醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、聚乙二醇、特戊醇、苯甲醇、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚枫、乳酸羟基酰胺、三醋酸甘油酯、乳酸乙酯、油酸乙酯、吐温-80、肉豆蔻酸异丙酯、苯甲酸苄酯或聚氧乙烯氢化蓖麻油。
3.根据权利要求1所述的黄豆苷元药物组合物，其特征在于所说的药物组合物为液态药物组合物或其干燥后的固态组合物。
4.权利要求1或3所述的黄豆苷元药物组合物的制备方法，其特征在于黄豆苷元先溶解于水溶性辅剂后再与其它组分混合，包括如下步骤(1)根据配方比例称取各组分，将环糊精溶解于水溶性辅剂或水中；(2)在环糊精的水溶性辅剂溶液中加入黄豆苷元或将黄豆苷元溶于水溶性辅剂后加至环糊精水溶液中；(3)超声或搅拌至溶液澄清透明得到液态组合物，或(4)将液态组合物进行喷雾干燥或冷冻干燥得到固态组合物。
5.权利要求1或4所述的黄豆苷元药物组合物在制备口服制剂或注射剂中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种适合于制成溶液制剂的黄豆苷元药物组合物及其制备方法，该药物组合物以黄豆苷元为活性成分，包含环糊精和水溶性辅剂。利用本发明药物组合物制成的注射剂具有水溶性良好，毒副作用低等优点。
文档编号A61P9/10GK101045045SQ20061002530
公开日2007年10月3日 申请日期2006年3月30日 优先权日2006年3月30日
发明者李亚平, 陈伶俐, 顾王文 申请人:中国科学院上海药物研究所