专利名称：：一种用于抗肿瘤的砷组合药物的制作方法
技术领域：
：本发明为一种用于抗肿瘤的砷组合药物，涉及一种由不同种类、不同比例的三价砷化合物和五价砷化合物组合而成的具有抗肿瘤功能的药物组合物。属于抗肿瘤药物领域。
背景技术：
：砷在人体内的化学形式可以分为三价砷和五价砷。三价无机砷酸(盐)毒性较大，易在体内蓄积，主要经胃肠道缓慢排泄。五价无机砷酸(盐)相对毒性较低，不易在体内蓄积，主要经肾脏快速排泄[1]。他们在体内的甲基化和代谢决定着砷的毒性作用。细胞内蛋白的相邻巯基是三价砷的主要化学受体。三价砷与巯基结合可致毒。如与酶分子内的巯基作用后可抑制其活性，干扰酶的生理功能、结构与代谢，继而引起一系列生理、生化改变，影响细胞的代谢过程[2]。五价砷对机体的影响表现在它可以模拟无机磷酸盐，不仅能在细胞转运系统和酶促反应过程中替代无机磷酸盐，产生细胞毒性，而且能在DNA合成过程中取代磷插入DNA结构，生成不稳定键造成DNA复制和转录错误，继而产生癌变[3]。近年来，砷剂已被广泛用于治疗牛皮癣、梅毒、类风湿性关节炎、肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌、食道癌和淋巴瘤等，随着质控技术的发展和对砷化合物研究的深入，砷化合物的临床应用价值越来越突显出来。三价无机砷酸(盐)制成的Flower液(亚砷酸钾)和亚砷酸氯化钠已相继被用于被用于急性、慢性粒细胞性白血病的治疗；但五价无机砷酸(盐)的药用价值暂无报道。我们通过研究发现，把三价砷化合物与五价砷化合物组合使用，其药用效果要远远高于它们单独使用的效果，本发明即是这方面这个成果的体现。参考文献(1)蔡明，王国斌，陶凯雄，蔡昌学。三氧化二砷治疗肿瘤作用机制的研究现状及进展。重庆医学，2007，36(15):1534-1536。(2)孙捷豪，张逸婧。三氧化二砷抗肿瘤机制的研究进展。辽宁医学杂志，2007，21(3):217-219。(3)王顺昌，赵烨，裴蓓，吴李君。砷酸钠对秀丽线虫生殖细胞周期停滞和细胞凋亡的作用研究，癌变.畸变.突变，2008，20(2):131-134。
发明内容本发明是一种用于抗肿瘤的砷组合药物，该组合药物在抗肿瘤方面显示出良好的作用效果。组成砷组合药物的两类物质为三价无机砷酸(盐)主要包括亚砷酸，亚砷酸纳、亚砷酸钾和五价无机砷酸(盐)主要包括砷酸，砷酸纳、砷酸钾。三价无机砷酸(盐)和五价无机砷酸(盐)可通过水飞、酸奶飞、球磨、醋淬、锻、炙等传统方法炮制雄黄获得，或参照中国发明专利申请2006102000676对雄黄进行微生物处理获得，也可利用化学方法或其它相关方法获得。三价无机砷酸(盐)五价无机砷酸(盐)的比例分别为8:1;4:1;2:1;1:1;1:2;1:4;1:8。另外，本发明的砷组合药物可以单独或与其它药物配伍及添加药学上可以接受的辅料，制备成常规的药物剂型，如栓剂、片剂、膜剂、胶囊剂、气雾剂、糖浆剂、口服液、注射液等，这是本领域的研究人员可以理解的。具体实施例方式实施例l:砷组合药物的制备三价无机砷酸(盐)主要包括亚砷酸，亚砷酸纳、亚砷酸钾和五价无机砷酸(盐)主要包括砷酸，砷酸纳、砷酸钾可通过水飞、酸奶飞、球磨、醋淬、锻、炎等传统方法炮制雄黄获得，或参照中国发明专利申请2006102000676对雄黄进行微生物处理获得，也可利用化学方法或其它相关方法获得。然后按照表l中的比例配制成组合物。具体步骤为三价无机砷酸(盐)用碱溶液溶解后调中性，五价无机砷酸(盐)直接水溶，最后按比例混合即可。三价无机砷酸(盐)五价无机砷酸(盐)的比例分别为8:1;4:1;2:1;1:1;1:2;1:4;1:8实施例2:砷组合药物对癌细胞的生长抑制作用细胞培养用RPM1640培养基，加10%牛血清、青霉素100U/ml，置37。C、5%C02条件下培养肝癌细胞株H印G-2、胃癌细胞株MGC-803、肺癌细胞株Lewiw和白血病细胞株K562。每23天换一次培养液。MTT试验将细胞以约1X105个/ml的细胞密度接种于96孔板上，每孔IOO微升，培养12小时后按预设的浓度梯度加入砷组合药物，每一梯度至少3个重复。继续培养48小时后，每孔加入5mg/ml的MTT20微升，继续置于37°C温育4小时，快速翻板法弃去上清液，每孔加入100微升DMSO或三联液，在酶标仪上检测，根据测得OD值计算半数抑制浓度IC5Q，砷组合药物抗肿瘤效果如表l:表l.砷组合药物对癌细胞的生长抑制作用(IC5o(yg/ml))试验组时间(h)肝癌细胞株H印G-2肺癌细胞株Lewiw胃癌细胞株MGC-803白血病细胞株K562三价无机砷酸(盐)对照(亚砷酸氯化钠注射液)481.13±0.231.53±0.131.03±0.281.27±0.84五价无机砷酸(盐)对照(砷酸二氢钾)481.43±0.521.63±0.371.68±0.131.45±0.2亚砷酸砷酸=8:1480.66±0.320.73±0.270.69±0.630.75±0.3亚砷酸砷酸=4:1480.78±0.260.75±0.240.76±0.380.81±0.2亚砷酸砷酸=2:1480.89±0.140.83±0.310.78±0.590.86±0.28亚砷酸砷酸=1:1480.92±0.370.89±0.290.98±0.160.94±0.2亚砷酸砷酸=1:2481.08±0.220.98±0.361.04±0.321.19±0.08亚砷酸砷酸=1:4481.13±0.141.12±0.541.38±0.211.24±0.2亚砷酸砷酸=1:8481.33±0.061.54±0.081.42±0.091.47±0.49亚砷酸砷酸钠=8:1480.69±0.120.77±0.170.74±0.230.75±0.2亚砷酸砷酸钠=4:1480.79±0.160.78±0.340.78±0.380.81±0.2亚砷酸砷酸钠=2:1480.89±0.240.84±0.150.77±0.240.84±0.2亚砷酸砷酸钠=1:1480.93±0.190.88±0.310.98±0.320.96±0.2亚砷酸砷酸钠=1:2481.12±0.150.98±0.141.06±0.281.18±0.3亚砷酸砷酸钠=1:4481.14±0.171.12±0.281.37±0.191.28±0.3亚砷酸砷酸钠=1:8481.34±0.231.57±0.411.48±0.261.51±0.3亚砷酸砷酸钾=8:1480.65±0.180.72±0.090.74±0.250.74±0.2亚砷酸砷酸钾=4:1480.79±0.320.79±0.350.80±0.380.85±0.3亚砷酸砷酸钾=2:1480.91±0.050.82±0.180.80±0.420.91±0.1亚砷酸砷酸钾=1:1480.93±0.260.91±0.171.02±0.360.96±0.2亚砷酸砷酸钾=1:2481.ll士O.160.97±0.171.04±0.131.17±0.1亚砷酸砷酸钾=1:4481.ll士O.221.10±0.341.36±0.191.26±0.1亚砷酸砷酸钠=1:8481.37±0.251.49±0.311.39±0.261.46±0.2亚砷酸钠砷酸=8:1480.64±0.170.72±0.150.74±0.240.78±0.295<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>亚砷酸钾砷酸钠=1:1480.96±0.240.91±0.150.98±0.170.99±0.38亚砷酸钾砷酸钠=1:2481.13±0.380.99±0.291.06±0.351.24±0.2亚砷酸钾砷酸钠=1:4481.17±0.221.14±0.171.39±0.261.34±0.2亚砷酸钾砷酸钠=1:8481.32±0.151.60±0.321.47±0.241.50±0.28亚砷酸钾砷酸钾=8:1480.64±0.240.73±0.150.76±0.270.78±0.1亚砷酸钾砷酸钾=4:1480.82±0.260.83±0.190.81±0.290.88±0.2亚砷酸钾砷酸钾=2:1480.92±0.350.84±0.270.87±0.150.92±0.1亚砷酸钾砷酸钾=1:1480.94±0.140.92±0.251.04±0.160.96±0.4亚砷酸钾砷酸钾=1:2481.11±0.130.95±0.371.07±0.251.24±0.1亚砷酸钾砷酸钾=1:4481.12±0.241.08±0.261.43±0.241.37±0.4亚砷酸钾砷酸钠=1:8481.35±0.091.48±0.261.44±0.341.52±0.18表1表明，本发明砷组合药物对肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、白血病细胞有较好的抑制作用。实施例3:砷组合药物的急性毒性取昆明种小鼠650只，雌雄各半，体重18-20g，随机分为65组，每组IO只，组间剂量比为l:0.8，实验前小鼠禁食(不禁水)14小时后，腹腔注射(ip)，给药体积均为每20g体重0.2ml。各组给药均用等体积，给药后于常温下观察动物行为活动，记录死亡情况从给药后0.5h开始，观察至7天，对死亡动物解剖肉眼检査未发现异常情况，结果见表2:表2:砷组合药物急性毒性(n=10)试验组LD5o(mg/kg)三价无机砷酸(盐)对照(亚砷酸氯化钠注射液)4.21五价无机砷酸(盐)对照(砷酸二氢钾)50.28亚砷酸砷酸=8:17.4亚砷酸砷酸=4:19.7亚砷酸砷酸=2:111.3亚砷酸砷酸=1:119.2亚砷酸砷酸=1:221.38亚砷酸砷酸=1:429.2亚砷酸砷酸=1:837.49<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>亚砷酸钠砷酸钾=2:114.3亚砷酸钠砷酸钾=1:121.2亚砷酸钠砷酸钾=1:223.6亚砷酸钠砷酸钾=1:431.1亚砷酸钠砷酸钠=1:839.8亚砷酸钾砷酸=8:17.6亚砷酸钾砷酸=4:18.8亚砷酸钾砷酸=2:112.3亚砷酸钾砷酸=1:120.08亚砷酸钾砷酸=1:221.59亚砷酸钾砷酸=1:430.0亚砷酸钾砷酸=1:839.5亚砷酸钾砷酸钠=8:16.4亚砷酸钾砷酸钠=4:19.8亚砷酸钾砷酸钠=2:111.1亚砷酸钾砷酸钠=1:121.3亚砷酸钾砷酸钠=1:222.7亚砷酸钾砷酸钠=1:429.4亚砷酸钾砷酸钠=1:841.28亚砷酸钾砷酸钾=8:18.08亚砷酸钾砷酸钾=4:112.5亚砷酸钾砷酸钾=2:114.7亚砷酸钾砷酸钾=1:121.59亚砷酸钾砷酸钾=1:224.6亚砷酸钾砷酸钾=1:431.48亚砷酸钾砷酸钠=1:839.86表2表明，本发明的药物组合物明显降低了三价砷的毒性。实验例4:砷组合药物对S180实体瘤小鼠的瘤体生长抑制作用选取昆明种小鼠100只，右腋皮下接种S180肉瘤细胞。随机分成10组，即生理盐水组(阴9性对照)，溶媒组，亚砷酸氯化钠注射液(阳性对照)，砷组合药物组(实验组)。接种第二天后开始腹腔注射给药，阳性对照组隔天给药，其余各组每天给药l次，连续给药10天。于最后一次给药后次日处死小鼠，剥离瘤块，称重，计算抑瘤率。表3.砷组合药物对S180实体瘤小鼠的瘤体生长抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3显示砷组合药物在明显降低三价砷毒性的同时，保持或提高了抑瘤效果。实验例4:砷组合药物对小鼠肝癌细胞H22的抑制瘤体生长作用选取昆明种小鼠100只，右腋皮下接种H22细胞，随机分成10组，即生理盐水组(阴性对照)，溶媒组，亚砷酸氯化钠注射液(阳性对照)，砷组合药物(实验组)。接种第二天后开始腹腔注射给药，阳性对照组隔天给药，其余各组每天给药l次，连续给药7天。于最后一次给药后次日处死小鼠，剥离瘤块，称重，计算抑瘤率。表4.砷组合药物对小鼠肝癌细胞H22的抑制瘤体生长作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4同样显示砷组合药物在明显降低三价砷毒性的同时，保持或提高了抑瘤效果。权利要求1.本发明为一种用于抗肿瘤的砷组合药物，其特征在于它是由一系列不同配比的三价无机砷酸(盐)和五价无机砷酸(盐)组成的砷组合药物。本发明所提供的这种砷组合药物在降低药物毒性的同时，不但在体外对包括肝癌，胃癌，肺癌，白血病等在内的多种癌细胞有明显的抑制作用，而且体内试验也显示本发明所提供的砷组合药物对多种癌细胞也有明显的抑制作用，而且毒性明显降低，可用来制备抗肿瘤药物。2.根据权利要求1所述的一种用于抗肿瘤的砷组合药物，其特征在于该砷组合药物由三价无机砷酸(盐)与五价无机砷酸(盐)组成，其中三价无机砷酸(盐)与五价无机砷酸(盐)的比例(浓度比)可以是l:l，1:2，1:4，1:8，2:1，4:1，8:1。3.根据权利要求l所述的一种用于抗肿瘤的砷组合药物，其特征在于三价无机砷酸(盐)和五价无机砷酸(盐)可通过水飞、酸奶飞、球磨、醋淬、锻、炙等传统方法炮制雄黄获得，或参照中国发明专利申请2006102000676对雄黄进行微生物处理以获得，也可利用化学方法或其它相关方法获得。4.根据权利要求l所述的一种用于抗肿瘤的砷组合药物，其特征在于该组合药物可以单独或与其它药物配伍及添加药学上可以接受的辅料制备成栓剂、片剂、膜剂、胶囊剂、气雾剂、糖浆剂、口服液、注射液等。全文摘要本发明为一种用于抗肿瘤的砷组合药物，它包括一系列不同配比的三价无机砷酸(盐)和五价无机砷酸(盐)组合物。本发明所提供的砷组合药物在降低药物毒性的同时，不但在体外对包括肝癌，胃癌，肺癌，白血病等在内的多种癌细胞有明显的抑制作用，而且在体内也对多种癌细胞也有明显的抑制作用。本发明的砷组合药物可以按照普通方法制备成常规的药物剂型，栓剂、片剂、膜剂、胶囊剂、气雾剂、糖浆剂、口服液、注射液等。文档编号A61P35/00GK101537014SQ20091030059公开日2009年9月23日申请日期2009年2月27日优先权日2009年2月27日发明者伟代,史彦斌,旭张,爽张,李红玉申请人:李红玉;兰州大学