SAMHD1-pLNCX2制备抗肿瘤药物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及SAMHDl-pLNCX2制备抗肿瘤药物的用途。
【背景技术】
[0002] CRL4泛素连接酶作为Cullin泛素系统中重要的成员之一，在个体发育与体内稳 态调节中起到关键作用。CRL4蛋白复合体主要由支架蛋白Cullin4A/4B、连接蛋白DDBl和 识别体蛋白 DCAFs 蛋白家族组成。DCAFs (DDBl_CUL4associated factor proteins)是一类 含有保守的WD40功能域的蛋白，通过与DDBl结合，将所识别的靶蛋白传递给泛素系统进行 修饰调控。
[0003] 近年的研究热点SAMHDl蛋白被鉴定为一种在人体髓系细胞和⑶4+T细胞中能够 特异性抑制艾滋病病毒HIV-I复制的天然抗病毒因子，SAMHDl通过自身的脱氧核苷酸水解 酶活性降低了处于静息期的髓系细胞内dNTPs的浓度抑制了病毒DNA的合成。然而，HIV-2 和一些SIV所编码的辅助蛋白Vpx能够通过篡夺宿主泛素化系统CRL4 (DCAFl) E3连接酶诱 导SAMHDl蛋白泛素化后被体内蛋白酶体所降解，从而破坏了宿主天然免疫防线，促进病毒 在髓系细胞中的感染能力。
[0004] 除了作为一个天然的抗病毒因子，SAMHDl还被证明在人体内调控中具有重要的作 用：SAMHDl是目前为止唯一被发现的哺乳动物脱氧核糖核酸水解酶，对于细胞内dNTPs浓 度的精准调控起到了重要作用；SAMHDl体细胞突变已被证实与罕见自身免疫遗传疾病AGS 和慢性淋巴细胞白血病的发生有关；同时科学家们已经发现SAMHDl对于细胞基因组的完 整性具有重要的稳定作用。
[0005] 国际上对SAMHDl的关注于主要集中Vpx-CRL4 (DCAFl) E3连接酶诱导SAMHDl泛素 化降解机制等研究上。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供SAMHDl-pLNCX2制备抗肿瘤药物的用途。
[0007] 本发明的技术方案概述如下：
[0008] SAMHDl-pLNCX2制备抗肿瘤药物的用途。
[0009] 本发明的优点：
[0010] 实验证明，SAMHD1-PLNCX2表达的SAMHDl蛋白能够对肿瘤细胞系具有明显的抑制 增长作用。
【附图说明】
[0011] 图1为细胞内过量表达SAMHDl基因后细胞的增值动力学曲线。
【具体实施方式】
[0012] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0013] 实施例1
[0014] SAMHDl基因的表达载体SAMHDl-pLNCX2的构建：
[0015] SAMHDl基因的表达载体通过提取人胚胎肾细胞HEK293T (2010年购自 ATCC:http://www. atcc. org/Products/All/CRL-3216· aspx)的 RNA 进行反转录，得到 cDNA，利用PCR扩增目的基因 SAMHDl构建进入逆转录病毒表达载体pLNCX2(Retr〇-X? system，Clontech)中，得到 SAMHDl_pLNCX2。
[0016] SAMHDl的基因序列用SEQ ID NO. 1所示。
[0017] 实施例2
[0018] SAMHDl-pLNCX2对人组织细胞淋巴瘤细胞系的抑制作用：
[0019] 将表达载体SAMHDl-pLNCX2、包装质粒pVPack-GP和包装质粒pVPack-VSVG利用 脂质法转染至人胚胎肾细胞HEK293T中；将表达载体pLNCX2、包装质粒pVPack-GP和包装 质粒pVPack-VSVG利用脂质法转染至人胚胎肾细胞HEK293T中为阴性对照；48小时后，分 别收取病毒上清，分别感染人组织细胞淋巴瘤细胞系U937 (2010年购自ATCC:httD://Ww. atcc. org/Products/All/CRL-1593. 2. aspx),感染 48 小时后，用 G418 (lmg/mL)进行筛选，7 天后得到U937-SAMHDl-pLNCX2细胞系以及U937-pLNCX2细胞系。
[0020] 对构建好的U937-pLNCX2细胞系以及U937-SAMHDl-pLNCX2细胞系在0小时，24小 时，48小时，72小时和96小时分别进行活细胞计数，并统计计数结果，对细胞的增值能力进 行分析，结果显示，稳定表达SAMHDl蛋白的U937细胞系相比对照细胞增长情况呈抑制细胞 增长的趋势（见图1)。
【主权项】
I. SAMHD1-PLNCX2制备抗肿瘤药物的用途。
【专利摘要】本发明公开了SAMHD1-pLNCX2制备抗肿瘤药物的用途。实验证明，SAMHD1-pLNCX2表达的SAMHD1蛋白能够对肿瘤细胞系具有明显的抑制增长作用。
【IPC分类】A61P35-00, A61K48-00
【公开号】CN104587491
【申请号】CN201410848583
【发明人】郭浩然, 于晓方, 魏伟
【申请人】天津大学
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月30日