一种抗肿瘤药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗肿瘤药物组合物，特别涉及一种含有黄花夹竹桃次苷甲和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand;TRAIL）的抗肿瘤药物组合物，提供了上述组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明首次发现花夹竹桃次苷甲或其药用盐和TRAIL联用能够起到协同抗肿瘤的效果，为开发抗肿瘤药物提供了新的思路。
【专利说明】一种抗肿瘤药物组合物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗肿瘤药物组合物，特别涉及一种含有黄花夹竹桃次苷甲和肿瘤 坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-relatedapoptosis-inducingligand;TRAIL)的抗肿瘤 药物组合物。
【背景技术】
[0002] 黄花夹竹桃（Thevetiaperuviana)是一种种植很广的观赏灌木。曾经被用作 毒药或者堕胎药。其种子被人或者动物误食以后，会表现出明显的心脏毒性，甚至可以引 起死亡。其症状表现为数小时内出现恶心，呕吐，眼花，腹痛，腹泻，瞳孔放大及抽搐等。其 毒性成分主要包含在黄花夹竹桃的种子里，经研究发现，这些毒性成分包括黄花夹竹桃 次苷甲、洋地黄苷、黄夹次苷丁以及脑素等[Kohlsetal.，2012，Phytochemistry75:ll 4~27;LangandSun, 1964,YaoXueXueBaoll:464-72;Miyagawaetal. , 2009,JNat Prod72:1507-11;Wangetal.， 1981，YaoXueXueBaol6:379-84]。
[0003] 黄花夹竹桃次苷甲（peruvoside;encordin;cannogenin)又称黄夹次苷甲，针叶 状结晶（甲醇-乙醇中），旋光度-71.7° (c=l. 54,甲醇），熔点为161?164°C，易溶于 丙酮、氯仿，微溶于乙醇、甲醇，难溶于水。黄花夹竹桃次苷甲起初是作为强心苷而使用。 近年来，一些研究发现黄花夹竹桃次苷甲还具有抗肿瘤方面的活性，例如Li等设计了一 种高通量筛选策略，通过高通量测序，筛选到一种中药单体-黄花夹竹桃次苷甲，它可以 同时有效抑制雄激素敏感和抗性的两种前列腺癌细胞，而不引发严重的细胞毒性[Liet al.，2012,ProcNatlAcadSciUSA109:4609-14]。
[0004] 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（以下简称TRAIL)属肿瘤坏死因子超家族成员， TRAIL最大的优点是它可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞没有毒副作用；但 是，在很多情况下，细胞会产生对TRAIL的抗性。
[0005] 发明人在研究过程中惊奇地发现，黄花夹竹桃次苷甲和TRAIL在联用时，具有协 同抗肿瘤效果作用。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是：提供一种抗肿瘤药物组合物。
[0007] 本发明的第一方面提供了一种抗肿瘤药物组合物，其含有黄花夹竹桃次苷甲或其 药用盐和TRAIL。
[0008] 优选的，所述的药物组合物仅含有黄花夹竹桃次苷甲或其药用盐和肿瘤坏死因子 相关凋亡诱导配体作为有效成分；其他的成分可以选用药学上常用的各种辅料，辅料的种 类和数量可以根据所需制备的药物剂型而决定，本领域技术人员无需经过创造性的劳动即 可得到。
[0009] 在本发明的另一方面提供了上述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0010] 优选的，本发明提供的是上述药物组合物在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应 用。
[0011] 优选的，本发明提供的是上述药物组合物在制备治疗具有细胞凋亡抗性的肿瘤的 药物中的应用。
[0012] 本发明所述的药用盐，具体的可列举上述化合物与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸 等无机酸的盐，与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒 石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、对甲基苯磺酸等有机酸和天门氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸的 酸形成的盐。
[0013] 本发明的有益效果：首次发现花夹竹桃次苷甲或其药用盐和TRAIL联用能够起到 协同抗肿瘤的效果，详细考察了黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用对肿瘤细胞形态的影 响、抑制肿瘤细胞活力、促进肿瘤细胞凋亡。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1为黄花夹竹桃次苷甲、黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联用对A549细胞形态的影 响对比图。A549细胞用溶剂对照或者不同浓度的TRAIL(5,10,20,40,80ng/ml)，以及25nM 黄花夹竹桃次苷甲与不同浓度的TRAIL(5，10，20，40，80ng/ml)联合使用，处理24h后在显 微镜（1X71，Olympus,Tokyo,Japan)下用20X物镜观察并拍照。
[0015] 图2为不同浓度的黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用时CI指数曲线图。
[0016] 图3为黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用处理后A549细胞的DNAladder结 果。A549细胞分别用溶解对照或者不同浓度的黄花夹竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5nM)以 及联合使用40ng/ml的TRAIL和不同浓度的黄花夹竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5nM)处理 24h后进行DNAladder实验。10iig/ml的顺钼处理组作为阳性对照，所获得DNA样品使用 2%的琼脂糖凝胶电泳，然后使用伯乐GelDocXR+凝胶系统（USA)进行拍照。
[0017] 图4-A为不同浓度的黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用处理后A549细胞的流 式细胞实验结果图。使用溶剂对照或者不同浓度的黄花夹竹桃次苷甲（3. 125,6. 25,12. 5， 25, 50nM)与40ng/ml的TRAIL联合处理A549细胞，染色后避光孵育20min，然后用流式细 胞仪（BectonDickinson,USA)进行分析，每个样品收集细胞数为10000个。
[0018] 图4-B为凋亡细胞比例柱形图，数据表示方法为平均数土标准差，并进行T检验。 *表示资料在P〈〇. 05的条件下，显著低于对照，**表示资料在p〈0. 01的条件下，显著低于 对照。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用对A549细胞形态的影响
[0020] 发明人首先考察了黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用对A549细胞形态的影响。 A549肿瘤细胞是一种对细胞凋亡抵抗的肿瘤细胞株。将对数期的A549细胞给以溶剂对照， 不同浓度TRAIL(5,10, 20,40,80ng/ml)或者不同浓度的TRAIL与25nM的黄花夹竹桃次苷 甲联合使用。给药24h后拍照观察。实验结果如图1所示。随着TRAIL浓度逐渐升高，发 明人可以看到悬浮变圆的细胞逐渐增多；对数期的A549细胞给以25nM的黄花夹竹桃次苷 甲处理后，只有少量的细胞悬浮变圆。当将25nM的黄花夹竹桃次苷甲与不同浓度的黄花夹 竹桃次苷甲联合使用后，发现悬浮变圆的细胞明显增多。由此可见，黄花夹竹桃次苷甲可以 显著增强TRAIL对A549细胞的抑制作用。
[0021] 实施例2黄花夹竹桃次苷甲与TRAIL联合使用协抑制A549细胞活力
[0022] 为了进一步评价两药联合使用是否具有协同作用，发明人将不同浓度的黄花夹 竹桃次苷甲（〇,3. 13,6.25，12.5,25,50，100nM)和不同浓度的TRAIL(0? 15,0.31，0.62， 1. 23nM)单用及联合使用后，使用MTT法检测A549细胞活力的变化，结果如表1.两种药物 均表现出良好的剂量依赖性地抑制A549细胞增殖的效应；合用时抑制效应明显增强。
[0023] 发明人利用中效原理进行了分析，对表1结果进行回归分析，得出各实验组的线 性方程式（Y=a+bX)和相关系数（R)，计算两药单用及合用时的中效浓度Dm(表2)。结果表 明黄花夹竹桃次苷甲的中效浓度为22. 72nM，TRAIL的中效浓度为116. 2nM，两药合用时中 效浓度为10. 87nM。根据计算公式得出两药合用指数CI。，结果如图2。两药联用的CI指数 小于1，表明，两药联合使用，对A549细胞的活力具有协同作用。
[0024] 表1黄花夹竹桃次苷甲和TRAIL单用及合用对A549细胞增殖抑制作用
[0025] TablellnhibitioneffectsofperuvosideandTRAILonA549cells(n=3)
【权利要求】
1. 一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，它含有黄花夹竹桃次苷甲或其药用盐和肿瘤 坏死因子相关凋亡诱导配体。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，仅含有黄花夹竹桃次苷甲或其药用 盐和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作为有效成分。
3. 如权利要求1或2所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
4. 如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用。
5. 如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗具有细胞凋亡抗性的肿瘤的药物中 的应用。
【文档编号】A61K38/17GK104383520SQ201310360139
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年8月19日 优先权日:2013年8月19日
【发明者】华子春, 张鹏, 黄启来 申请人:江苏靶标生物医药研究所有限公司, 镇江菩提生物医药有限公司