一种药物组合物及其在制备治疗肝癌药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种药物组合物及其在制备治疗肝癌药物中的应用，该组合物由萝卜硫素和齐墩果酸组成，在体外培养的人肝癌细胞HepG2和大鼠肝癌细胞RH-35中，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合可以显著抑制两种肝癌细胞的活性，在利用HepG2细胞构建的小鼠转移瘤中，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合可以显著抑制肿瘤的生长，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合对肿瘤细胞生长的抑制具有一定特异性，在同样的浓度作用下，药物组合对正常大鼠肝细胞BRL-3A的生长无明显影响，因此，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合可用于治疗肝癌的药物中，即可以发挥萝卜硫素和齐墩果酸药物组合对肿瘤细胞的抑制作用，又可以发挥二者对正常肝细胞的保护作用。
【专利说明】一种药物组合物及其在制备治疗肝癌药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及萝卜硫素和齐墩果酸药物组合及其在制备治疗肝癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002]肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。目前我国发病人数约占全球的半数以上，占全球肝癌病人的55%，已经成为严重威胁我国人民健康和生命的一大杀手，其危险性不容小视。
[0003]目前国内外对晚期肝癌没有好的治疗方法。传统的放疗、化疗对晚期肝癌疗效差，而且价格昂贵，如国内外公认的晚期肝癌靶向药物索拉菲尼一年的单一药物费用就要10几万元，而对患者生命的延长时间只有几个月，同时可能会伴有腹泻、皮疹、高血压、手足综合征等较严重不良反应，效果还需进一步评价。且放疗、化疗对患者身体损伤很大，病人耐受性不好。对介入治疗肝癌和中医治疗肝癌的研究都没有取得满意的效果。
[0004]抗癌药物的 研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有超过70%是天然产物或其衍生物，如紫杉醇及其衍生物就是目前临床应用效果较好的抗肿瘤药物之一。因此，从天然植物中寻找抗癌化合物或前体化合物，并将其有效组合对于肿瘤的治疗具有重要的意义。
[0005]齐墩果酸(Oleanolic acid, 0A)是一种天然三職系化合物,并且是许多阜苷的苷配基。齐墩果酸大量存在于各种食物(菜子油)中，并且是许多植物叶子和根茎的成分，包括 Olea europaea、Viscum album L.、Aralia chinensis L 和其它超过 120 种天然植物。齐墩果酸作为中药的有效成分已经有20多年的使用历史，主要用于治疗病毒性肝炎。有研究发现齐墩果酸可以保护小鼠免受各种肝毒物和亲电子物，包括四氯化碳、对乙酰氨基酚、溴化苯和硫代乙酰胺等的损伤。给予齐墩果酸后，齐墩果酸主要分布于肝脏并在肝脏代谢。小鼠预先给予齐墩果酸，可以降低肝毒物引起的转氨酶的升高并抑制肝小叶中心坏死。此外，有大量的研究报道富含齐墩果酸的天然药物和齐墩果酸的合成衍生物表现出一系列的药理学功能，包括抗炎、抗肿瘤、促进凋亡等作用。
[0006]萝卜硫素(1-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷)(Sulforaphane)，又称“莱菔硫素”。在西兰花、芥蓝、北方圆红萝卜等十字花科植物中含量较丰富，是常见抗氧化剂，是蔬菜中所发现的抗癌效果最好的植物活性物质。其有独特的抗癌功效，它可以造成癌细胞的细胞凋亡和细胞阻滞，同时可以诱导人体内的II相解毒酶，同时抑制I型酶的产生，最终通过多种酶体系排出致癌物和自由基等有害成分，同时，该成分不会在人体内残留，对机体无副作用，是一种新型的抗癌成分。研究发现，萝卜硫素对肺癌、食管癌、前胃癌作用明显。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种药物组合物及其在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0008]为实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案:
[0009]一种药物组合物，该药物组合物由萝卜硫素和齐墩果酸组成。
[0010]所述萝卜硫素在药物组合物中的质量百分比为40-60%，齐墩果酸在药物组合物中的质量百分比为40-60%。
[0011]所述萝卜硫素以及齐墩果酸在药物组合物中的质量百分比均为50%。
[0012]上述药物组合物在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。
[0013]本发明的有益效果为采用了齐墩果酸和萝卜硫素的组合物作为治疗肝癌的药物，与现有肝癌治疗药物相比，本发明所述药物组合物既保证了抑制肿瘤生长的有效性，又可发挥保护正常肝细胞效用。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1是齐墩果酸结构式。
[0015]图2是萝卜硫素结构式。
[0016]图3是萝卜硫素和齐墩果酸联合抑制HepG2细胞活性的效果。
`[0017]图4是萝卜硫素和齐墩果酸联合抑制RH-35细胞活性的效果。
[0018]图5是萝卜硫素和齐墩果酸联合抑制小鼠肿瘤生长的效果。
[0019]图6是萝卜硫素和齐墩果酸联合对肿瘤细胞RH-35的选择性抑制效果。
【具体实施方式】
[0020]下面结合附图对本发明做进一步说明，其目的在于更好的理解本发明的内容，而非限制本发明的保护范围。
[0021]1.实验仪器
[0022]精密电子天平、ImL注射器、动物秤等。
[0023]2.实验动物与材料
[0024]2.1实验动物和细胞
[0025]BALB/c小鼠，清洁级，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。
[0026]HepG2和BRL-3A细胞系，购于中科院细胞库。
[0027]RH-35细胞系，购于上海复祥生物。
[0028]2.2实验材料
[0029]生理盐水、MTT (四甲基偶氮唑盐)、苦味酸、细胞培养液等。
[0030]3.实验方法
[0031]分别培养H印G2和RH-35细胞系，细胞生长至50_60%融合时，培养液中加入40 μ M齐墩果酸、40 μ M萝卜硫素或20 μ M齐墩果酸+20 μ M萝卜硫素，对照组加入溶解化合物所用溶剂DMSO(二甲基亚砜)，培养细胞24小时，使用MTT法测定细胞活力。方法如下:去上清，磷酸盐缓冲液(PBS)洗2遍，0.5mg/mL MTT、37°C孵育细胞4小时，PBS洗2遍，二甲基亚砜(DMSO)溶解结晶，492nm测定吸光度。
[0032]取45只雄性BALB/c小鼠，取0.2mL对数生长期的H印G2细胞(I X 107/mL)注射到小鼠的右前腋窝皮下。10天后，肿瘤体积长到足够测量的程度，将小鼠按肿瘤大小随机分为4组:对照组(注射等体积给药溶剂一含2%吐温80的生理盐水)、100mg/kg齐墩果酸组、100mg/kg萝卜硫素组、50mg/kg齐墩果酸+50mg/kg萝卜硫素组。小鼠腹腔注射给药4周，处死动物，测量肿瘤体积。
[0033]分别培养相同的细胞数接种BRL-3A和RH-35细胞系，细胞生长至50_60%融合时，培养液中加入20 μ M齐墩果酸+20 μ M萝卜硫素，培养细胞24小时，使用MTT法测定细胞活力。方法如下:去上清，磷酸盐缓冲液(PBS)洗2遍，0.5mg/mL MTT、37°C孵育细胞4小时，PBS洗2遍，二甲基亚砜(DMSO)溶解结晶，492nm测定吸光度。
[0034]4.实验结果
[0035]4.1如图3所示，齐墩果酸处理使H印G2细胞活力降低到对照的51.2%±5%，萝卜硫素使H印G2细胞活力降低到对照的57.0%±9%，齐墩果酸+萝卜硫素处理使H印G2细胞活力降低到对照的43.6%±3%。相比单独使用齐墩果酸或萝卜硫素，联合应用齐墩果酸和萝卜硫素使H印G2细胞活力降低地更为明显(与单独使用齐墩果酸或萝卜硫素相比，p〈0.05)。
[0036]4.2如图4所示，齐墩果酸处理使RH-35细胞活力降低到对照的55.2%±5%，萝卜硫素使RH-35细胞活力降低到对照的61.0%±10%，齐墩果酸+萝卜硫素处理使RH-35
细胞活力降低到对照的40.8%±3%。相比单独使用齐墩果酸或萝卜硫素，联合应用齐墩果酸和萝卜硫素使RH-35细胞活力降低地更为明显(与单独使用齐墩果酸或萝卜硫素相比，p〈0.05)。
[0037]4.3如图5所示,对照组瘤体重量为1.52±0.13g,齐墩果酸治疗组瘤体重量为
0.78 ±0.08g,萝卜硫素治疗组瘤体重量为0.86 ±0.09g,齐墩果酸+萝卜硫素治疗组瘤体重量为0.66±0.10g。相比单独使用齐墩果酸或萝卜硫素，联合应用齐墩果酸和萝卜硫素使瘤体重量降低地更为明显，(与单独使用齐墩果酸或萝卜硫素相比，p〈0.05)。
[0038]4.4如图6所示，齐墩果酸+萝卜硫素处理对大鼠正常肝细胞BRL-3A活性无显著影响，但使大鼠肝癌细胞RH-35细胞活性显著降低为对照的56%±8%。可见，联合应用齐墩果酸和萝卜硫素对肿瘤细胞的抑制具有特异性。即在不影响正常肝细胞活性的情况下，联合应用齐墩果酸和萝卜硫素可以有效地抑制肿瘤细胞活性(P〈0.05)。
[0039]本发明的实验测定结果表明:
[0040]体外培养的人肝癌细胞HepG2和大鼠肝癌细胞RH-35中，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合可以显著抑制两种肝癌细胞的活性。在利用HepG2细胞构建的小鼠转移瘤中，萝
卜硫素和齐墩果酸药物组合可以显著抑制肿瘤的生长。萝卜硫素和齐墩果酸药物组合对肿瘤细胞生长的抑制具有一定特异性，在同样的浓度作用下，药物组合对正常大鼠肝细胞BRL-3A的生长无明显影响。因此，萝卜硫素和齐墩果酸药物组合可用于治疗肝癌的药物中，即可以发挥萝卜硫素和齐墩果酸药物组合对肿瘤细胞的抑制作用，又可以发挥二者对正常肝细胞的保护作用。
[0041]由以上实验可见，本发明利用齐墩果酸+萝卜硫素联合用于治疗肝癌的药物中是可行的。
【权利要求】
1.一种药物组合物，其特征在于:该药物组合物由萝卜硫素和齐墩果酸组成。
2.根据权利要求1所述一种药物组合物，其特征在于:所述萝卜硫素的质量百分比为40-60%,齐墩果酸的质量百分比为40-60%。
3.根据权利要求1所述一种药物组合物，其特征在于:所述萝卜硫素以及齐墩果酸的质量百分比均为50%。
4.一种如权利要求1所述药物组合物在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK103585158SQ201310512174
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月25日 优先权日:2013年10月25日
【发明者】王欣, 海春旭 申请人:中国人民解放军第四军医大学