专利名称：环己烷乙酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及到环己烷衍生物，它们的制备方法，含该类化合物的药物组合物以及它们在医学上的用途。
人们普遍认为糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa为血小板上的血纤维蛋白原的接合点，它的间接粘合作用决定着血小板的聚集和血栓的形成。现在，我们发现一组非肽化合物，它可通过阻断血纤维蛋白原与公认的血纤维蛋白原受体GpⅡb/Ⅲa配合物的接合来抑制依赖于血纤维蛋白原的血小板聚集。
本发明提供了式(Ⅰ)所示的化合物
及其盐和溶剂化物，其中X1、X2和Y1可以相同也可以不同，表示CH或N;
Y2表示N，或当Y1表示N时，Y2也可以表示CH;
R1表示氢原子或羟基、C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基;
R2表示氢原子，或当X1和X2都为CH时，也可以为氟、氯或溴原子或苯基或C1-4烷基;
R3表示氢原子，或当Y1和Y2都为N时，也可以为C1-4烷基或羟甲基。
在下式中，术语“环-A-”和“环-B-”用来描述式(Ⅰ)中的某个环
可以理解的是，对药学上的应用，上述盐为生理学上可接受的盐，但是，其它盐也具有用途，例如在式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受盐的制备中的用途。
合适的式(Ⅰ)化合物生理学上可接受的盐包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐(例如盐酸盐，氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，苯甲酸盐，萘甲酸盐，羟基萘甲酸盐，对甲苯磺酸盐，甲磺酸盐，氨基磺酸盐，抗坏血酸盐，酒石酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐，乳酸盐，戊二酸盐，戊烯二酸盐，乙酸盐，丙三酸盐，柠檬酸盐，反丁烯二酸盐和苹果酸盐)以及无机碱盐如碱金属盐(例如钠盐)。
式(Ⅰ)化合物的其他盐包括与三氟乙酸形成的盐。
当然，本发明包括式(Ⅰ)化合物的所有异构体和它们的盐和溶剂化物，包括所有的互变形式和旋光形式，以及它们的混合物(例如外消旋混合物)。
作为基团或基团的一部分，术语“烷基”表示直链或支链烷基，例如甲基，乙基，n-丙基，i-丙基，n-丁基，s-丁基或t-丁基。
优选的一组本发明化合物是式(Ⅰa)所示的化合物
及其盐和溶剂化物，其中X1、X2、Y1、Y2、R1、R2和R3如上述式(Ⅰ)中所定义。
特别优选的本发明化合物为顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸及其生理学可接受的盐和溶剂化物。
其它优选的本发明化合物有顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)-2-溴苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;
顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-嘧啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;
顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-吡啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;
顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;
顺-4-〔4-〔5-(氨基亚氨基甲基)〔1，1′-联苯〕-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;
及它们生理学上可接受的盐和溶剂化物。
利用Born-type光学集料称量计(Born，G.V.，1962，Nature，194，927-929)研究人体凝胶过滤血小板(GFP)可证明式(Ⅰ)化合物能抑制血小板的聚集。
由于其纤维蛋白原拮抗活性，有价值的是本发明化合物可用于人或兽用药物，特别是用于血栓病的治疗和预防。具体的血栓病实例为现有技术中已知的，包括闭合性血管病如心肌梗塞、心死(cardiac fatalities)心绞痛、瞬时局部缺血性发作和血栓发作、动脉硬化、血管壁疾病、外周血管疾病、肾病、视网膜病、手术后血栓、肺栓塞、深静脉血栓和视网膜静脉血栓。有价值的还有本发明化合物可用于预防由于器官移植(特别是心脏和肾脏)，冠状动脉分流术、外周动脉分流术、血管形成术、血栓溶解和动脉内膜切除术引起的手术中和手术后的并发症。
本发明化合物也可用于与糖蛋白配合物GpⅡb/Ⅲa或其他integrin受体有关的其他疾病的治疗和预防。例如，本发明化合物可以增强伤口愈合和用于治疗骨质疏松症。
本发明化合物也可用于某些癌症的治疗。例如，本发明化合物可用于防止和延缓癌的转移。
根据本发明的其它方面，我们还提供了式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化物，它们可用于人或兽用药，特别是可用于血栓疾病的治疗和预防。
根据本发明的另一方面，我们提供式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化物的用途，它们可用于制造治疗或预防血栓疾病的药剂。
根据本发明的另一方面，我们提供一种治疗或预防人或动物患者血栓疾病的方法，它包括对患者施用有效量的式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化物。
可以理解的是，式(Ⅰ)化合物可以有利地与一种或多种其它治疗药剂联合使用。合适的辅助治疗药剂的实例包括血栓溶解剂或任何其他促进血栓溶解或纤维蛋白溶解的化合物和细胞毒素药剂。当然，本发明包括式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化合物与一种或多种其他药剂的联合使用。
式(Ⅰ)化合物及其生理学上可接受的盐和溶剂化物可方便地以药物组合物的形式给药。因此，作为本发明的另一方面，我们提供一种含有式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化物的，适于用作人或兽用药的药物组合物。这样的组合物可方便地以常规方式与一种生理学上可接受的载体或赋形剂混合而得到。
本发明的化合物可以任何合适的方式给药。例如，本发明化合物可以被局部给药、吸入给药，更优选地是口服或非肠道给药。
对于口服给药，药物组合物可以为用常规手段，使用可接受的赋形剂制备的剂型，如片剂、胶囊、粉剂、溶液、糖浆或悬浮剂。
对于非肠道给药，药物组合物可以为注射剂或连续输液(如静脉、血管或皮下的)。组合物可以为油或水介质中的悬浮剂、溶液或乳液，并可含配方试剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。对于注射给药，药物组合物可被制成单位剂量形式，或最好是加入防腐剂制成多剂量形式。
另外，对于非肠道给药，活性组分可以是粉状，以便与适当的载体再制剂。
本发明化合物也可作为储存制剂(depot preparation)，这样的长效制剂可通过植入法(如皮下或肌内)或肌内注射来给药。如本发明化合物可以与聚合物或疏水物质(如在合适的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或作为微溶衍生物，例如，作成一种微溶盐。
如上所述，本发明化合物也可用来与其他治疗剂结合使用。在另一方面，本发明提供了一种结合，它包括式(Ⅰ)化合物或其生理学上可接受的盐或溶剂化物与另一种治疗剂，特别是溶解血栓剂的结合。
上述结合可方便地采用所用药物制剂的形式，而药物制剂包括了上文定义的和药学上接受的载体或赋形剂的结合，它为本发明的另一方面。这种结合中的单个组分既可顺序地又可同时地，单独的或以结合形式的药物制剂被施用。
当式(Ⅰ)化合物或其生理学上接受的盐或溶剂化物与另一种具有抗上述相同疾病活性的治疗剂联合使用时，每个化合物的剂量可不同于其单独使用时的剂量。合适的剂量对本专业技术人员很容易确定。
对人的治疗而言式(Ⅰ)化合物合适的日剂量为0.01mg/kg到30mg/kg，可方便分1到4次使用。所用的实际剂量可视病人的年龄和状况以及用药方式来决定，例如，对全身用药每天合适的剂量为0.1mg/kg到10mg/kg。
下面描述的是制备式(Ⅰ)化合物及其盐和溶剂化物的适宜方法。
在以后的化学式中，X1、X2、Y1、Y2、R1、R2和R3，除非另有描述，都如上述式(Ⅰ)中所限定;Rp表示一种保护基团而Hal表示卤素，如溴。
按照第一种方法(A)，R1为氢原子的式(Ⅰ)化合物可由式(Ⅱ)化合物制得
用适当的烷基化试剂处理，然后在醇溶剂(如甲醇)中，在升温(如回流)条件下与氨源(如乙酸铵)反应，而后除去羧基保护基。室温下，在合适的溶剂(如二氯甲烷)中使用合适的三烷基氧鎓盐(如，三乙基氧鎓四氟硼酸盐)可方便地实现烷基化(如，乙基化)反应。另外，在升温状况下(如回流)，在合适的溶剂如酮(如丙酮)中使用烷基卤化物(如碘代甲烷)可方便地实现烷基化(如甲基化)作用。
按照另一种方法(B)，在合适的碱，如碱金属或碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐(如碳酸钾)的存在下，在如醇(如甲醇)溶剂中用羟胺或其酸加成盐(如盐酸羟胺)处理式(Ⅲ)化合物
接着，如果必要，可以除去带有的保护基团，用此方法可制得R1表示羟基的式(Ⅰ)化合物。与羟胺或其酸加成盐的反应在升温(如回流)时很容易实现。
按照另一方法(C)，R1表示C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基的式(Ⅰ)化合物可用胺R1NH2(其中R1表示C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基)处理式(Ⅳ)化合物
(其中R4中表示烷基，例如C1-4烷基，如乙基)，随后除去羧酸保护基而制得。在室温左右，在适当的溶剂如醇(如甲醇)，或醚(如四氢呋喃)中这种与R1NH2的反应可很方便的完成。
另一种制备式(Ⅰ)化合物的方法(D)包括使被保护的式(Ⅰ)化合物的衍生物脱保护，这种方法的一个具体实施方案是由式(Ⅰ)化合物的羧基保护衍生物制备式(Ⅰ)化合物。
合适的羧基保护基包括如Theodora W.Green在“Protective Groups in Organic Synthesis”第二版(John Wiley and Sons，1991)中所描述的那些保护基，该书也描述了除去这些基团的方法。具体的羧基保护基包括，例如，羧酸酯基如羧酸烷基酯和羧酸芳烷基酯，例如，其中酯基官能团的烷基和芳烷基部分为甲基、乙基、叔丁基、甲氧甲基、苄基、二苯甲基、三苯甲基或对硝基苄基。当酯为非支链烷基(如甲基)酯时，去保护基反应可在酸水解条件下进行，例如使用盐酸。叔丁基和三苯甲基酯基可在中等酸水解条件下除去，例如，在室温下使用甲酸或三氟乙酸或者在乙酸中加盐酸。苄基、二苯甲基和硝基苄基酯基可在金属催化剂(如钯)存在下氢解而被除去。
按照另一种方法(E)，可利用其它式(Ⅰ)化合物作为前体，通过互相转化而制备式(Ⅰ)化合物。例如，R1表示氢原子的式(Ⅰ)化合物可由R1表示羟基的相关的式(Ⅰ)化合物在如醇类(如乙醇)的溶剂中通过催化氢化而制备。合适的催化剂包括阮内镍或常用的钯或铂催化剂。
当需要特定的式(Ⅰ)化合物异构体时，如式(Ⅰa)化合物，所需的异构体可以用上述(A)-(E)方法的最终产物或在上述方法中最后脱保护基步骤之前的产品用制备高效液相色谱(HPLC)方便地被分离出来。
通过用硫化氢处理式(Ⅴ)化合物
可制备式(Ⅱ)化合物。该反应可在如二甲基甲酰胺或吡啶的溶剂中，在如胺(如三乙胺)的有机碱存在下方便地进行。
按照上述方法(D)所述的方法通过除去羧酸保护基Rp可由式(Ⅴ)化合物制备式(Ⅲ)化合物。
也可在酸性条件下，例如在如盐酸的无机酸的存在下用一种醇R4OH(其中R4如前限定)处理式(Ⅴ)化合物而由其制备式(Ⅳ)化合物。
B环表示
的式(Ⅴ)化合物可在还原性条件下通过式(Ⅵ)化合物
与式(Ⅶ)化合物
反应而制得。
例如，将式(Ⅵ)化合物和式(Ⅶ)化合物在芳香烃溶剂(如甲苯)中，优选地含有分子筛，在有酸，如链烷-或芳基磺酸(如对甲苯磺酸)的存在下加热(如回流)，其产物可在室温左右，在醇溶剂中(如乙醇)，在合适的过渡金属催化剂，如钯(如钯-碳)的存在下氢化。另外，也可以在溶剂，如醇(如甲醇)中，在有酸，如盐酸存在下用还原剂，如硼氢化物还原剂处理式(Ⅵ)和式(Ⅶ)化合物，并且优选使用分子筛。
通过用乙酸衍生物CH3CO2Rp阴离子处理两个氧基之一被保护(如成为环状缩酮)的环己烷-1，4-二酮衍生物，随后除去氧基保护基可以制备式(Ⅶ)化合物。阴离子可在惰性溶剂如烃类(如正己烷)或醚(如四氢呋喃)，或这些溶剂的混合物中，在低温下，选择性地在有机碱如胺(如环己基异丙基胺)的存在下，使用烷基锂试剂(如正丁基锂)中形成。氧基保护基可在通常条件下除去。例如，通过用在室温左右，在溶剂如酮(如丙酮)中，用钯试剂，如双(乙腈)钯(Ⅱ)氯化物处理，或用一种酸如盐酸水溶液或盐酸水溶液和乙酸的混合物处理，可除去环状缩酮。
B环为
的式(Ⅴ)化合物可通过式(Ⅷ)化合物
和式(Ⅸ)化合物
在碱如碱金属或碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐(如碳酸氢钠)的存在下，在合适的溶剂如非质子极性溶剂(如二甲基甲酰胺、乙腈或二甲亚砜)中，在升高的温度下反应来制备。
通过用哌嗪衍生物或被保护的(如N-苄基保护的)哌嗪衍生物在还原性条件下，例如在上述式(Ⅵ)化合物与式(Ⅶ)化合物反应的条件下，与式(Ⅶ)化合物反应，随后，如果需要，在常规条件下，除去存在的N-保护基，可制备式(Ⅸ)化合物。
B环表示
的式(Ⅴ)化合物可通过将式(Ⅹ)化合物
用乙酸衍生物CH3CO2Rp的阴离子在上述制备式(Ⅶ)化合物的条件下进行处理来制备。
式(Ⅹ)化合物可由式(Ⅺ)化合物
被常规的温和的氧化剂如吡啶鎓重铬酸盐在溶剂如卤代烃(如二氯甲烷)中氧化而制得。
式(Ⅺ)化合物可通过式(Ⅷ)化合物与式(Ⅻ)化合物
按照上述从式(Ⅷ)化合物和式(Ⅸ)化合物制备式(Ⅴ)化合物的条件反应而制得。
式(Ⅻ)化合物可通过氢化式(ⅩⅢ)化合物
而制备。
氢化可在合适的过渡金属催化剂如铑，优选在还有铝存在下，在溶剂如醇，例如乙醇中，优选地在升压的状况下方便地进行。
式(ⅩⅢ)化合物为C.Alvarez等在Synth.Commun.1991，21，619中描述过的已知化合物。
B-表示
的式(Ⅵ)化合物可通过哌嗪
与式(Ⅷ)化合物在碱性条件下反应而制得。合适的碱包括碱金属或碱土金属碳酸盐，如碳酸钠或碳酸钾，反应可在溶剂如二甲基甲酰胺或二甲亚砜中，在升温的条件(如100°-200℃)下方便地进行。
B环为
的式(Ⅵ)化合物可由式(ⅩⅣ)化合物
在合适的还原条件下制备。
通常，将式(ⅩⅣ)化合物在醇溶剂(如乙醇)中，在升高的温度下用苄基溴处理而得到式(ⅩⅤ)所示的盐
将其还原，如使用一种硼氢化物还原剂如硼氢化钠在一种合适的溶剂，如醇(如乙醇)或二甲基甲酰胺或它们的混合物中将其还原成式(ⅩⅥ)化合物
从式(ⅩⅥ)化合物中除去苄基和双键得到所需的式(Ⅵ)化合物。在钯催化剂如Pd(OH)2一碳的存在下进行氢解，或在一种如“质子海绵”的碱的存在下与1-氯乙基氯甲酸酯反应，并随后用甲醇处理可方便地除去苄基。在铂催化剂如铂-碳或氧化铂和酸(如盐酸)存在下通过氢化可方便地除去双键。
通过将式(Ⅷ)化合物在常规条件下转化成式(ⅩⅦ)所示的相应硼酸，
随后式(ⅩⅦ)化合物再与4-卤代吡啶如4-溴代吡啶反应可制得式(ⅩⅣ)化合物，优选的条件是有过渡金属催化剂如钯催化剂〔如四(三苯膦)钯(O)〕和合适的碱如碱金属碳酸盐(如碳酸钠)存在。反应可在溶剂如含水的醚(如含水的1，2-乙二醇二甲醚)中方便地进行。
通过Hal为溴的合适的式(Ⅷ)化合物与式(ⅩⅧ)化合物
在上述硼酸偶联反应的条件下反应可方便地制备A环为氟、氯或溴代1，4-亚苯基的式(ⅩⅣ)化合物。
在低温下(如大约-78℃)，在四氢呋喃中，通过4-溴吡啶与烷基锂试剂(如正丁基锂)反应，随后在酸(如盐酸)的存在下再与合适的硼试剂如三异丙基硼酸酯反应可从4-溴吡啶制备式(ⅩⅧ)化合物。
式(Ⅷ)化合物为已知化合物或可用常规化学方法由已知的式(Ⅷ)化合物制备。
A环为苯基或C1-4烷基取代的1，4-亚苯基的式(Ⅰ)化合物或其中间体可通过变化A环为溴代1，4-亚苯基的相应的化合物而方便地制得。例如，在钯催化剂如四(三苯膦)钯(O)的存在下，可用锌试剂R2ZnBr(其中R2为C1-4烷基或苯基)处理溴取代的中间体。另外，可以在钯催化剂如四(三苯膦)钯(O)的存在下用PhB(OH)2进行苯基化，也可以在钯催化剂如双(三苯膦)苄基钯氯化物的存在下使用锡试剂(R2)4Sn(其中R2为C1-4烷基)进行烷基化。
本领域技术人员可以理解的是对上述某些方法来说，所需的立体化学产物既可通过由光学纯的起始原料开始制备也可在合成中任何方便的步骤拆分外消旋混合物得到。
最终产物、中间体或起始物的拆分可用现有技术中已知的适当方法进行，例如参见E.L.Eliel(McGraw Hill，1962)的“Stereochemistry of Carbon Compounds”和S.H.Wilen的“Tables of Resolving Agents”。
上述某些中间体为新化合物，所有这些新中间体当然构成了本发明的一个方面，式(Ⅴ)化合物是关键的中间体，并且是本发明的一个特定部分。
方便地，按照制备方法，式(Ⅰ)化合物在处理后可被离析成酸加成盐，如三氟乙酸盐。利用常规方法，如加入合适的有机或无机酸，通过变换离子可从相应的三氟乙酸盐制备式(Ⅰ)化合物的生理学上接受的酸加成盐。也可通过加入合适的强碱如氢化钠，从相应的三氟乙酸盐制备式(Ⅰ)化合物的无机碱盐。
式(Ⅰ)化合物的溶剂化物(如水合物)可在上述方法的某一步骤的操作过程中产生。
下面的制备和实施例仅说明本发明，而不以任何方式限制本发明。所有温度为℃。系统(A)为二氯甲烷-乙醇-0.880氨。制备高效液相色谱使用Dynamax60A C18 8μM25cm×41.4mm i.d.柱，用(A)0.1%三氟乙酸水溶液和(B)0.05%三氟乙酸的乙腈溶液的混合溶剂洗脱。分析HPLC，使用Dynamax 60A C18 8μM25cm×4.6mm i.d.柱，用与制备HPLC相同的洗脱液洗脱。
中间体18-羟基-1，4-二氧杂螺〔4，5〕癸烷-8-乙酸-1，1-二甲基乙酯在-76°，氮气中，将正丁基锂(1.64M己烷溶液，16.1ml)加入被搅拌的N-异丙基环己基胺(4.11ml)的无水四氢呋喃(50ml)溶液，并在-76°继续搅拌20分钟。加入乙酸叔丁酯(3.37ml)的四氢呋喃(12ml)溶液，并在-76°再搅拌1.25h。然后加入1，4-二氧杂螺〔4，5〕癸烷-8-酮(3.02g)的四氢呋喃(10ml)溶液，将混合物加热到室温并搅拌过夜。将此混合物在饱和氯化铵水溶液(75ml)和乙醚(3×50ml)之间分配，有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发得到一种淡黄色的油，通过硅胶(Merck 7736)干柱，快速色谱，以己烷-乙醚(4∶1-1∶1)洗脱得到无色液体标题化合物(4.23g)。
T.l.c.SiO2(己烷-乙醚1∶1)，Rf0.4。
中间体21-羟基-4-氧代环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯用双(乙腈)氯化钯(Ⅱ)(10mg)处理中间体1(0.547g)的丙酮(20ml)溶液，并在氮气中避光搅拌26h。真空除去溶剂，残余物用硅胶(Merck 60)快速色谱法纯化，以己烷-乙醚(4∶1-1∶1)和乙醚洗脱，得到无色固体标题化合物(0.248g)。
T.l.c.SiO2(己烷-乙醚1∶1)，Rf0.2。
中间体31-羟基-4-〔4-(苯甲基)-1-哌嗪基〕环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将中间体2(10.0g)和1-(苯甲基)哌嗪(9.0g)溶于甲醇(250ml)中，并加入1M氯化氢乙醇溶液(15ml)，然后加入3分子筛(5g)和氰基硼氢化钠(2.8g)，将此混合物在22°搅拌65h，过滤并真空蒸发。将残留物悬浮在8%碳酸氢钠(100ml)-盐水(100ml)中并用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。合并有机萃取液，使之干燥(Na2SO4)并真空蒸发。残余油通过硅胶(Merck 9385)快速色谱法纯化，用乙醚-三乙胺(98∶2)洗脱，首先得到反式异构体(2.70g)，接着是顺式和反式异构体的混合物(6.06g)，然后是纯的顺式异构体(1.02g)。
T.l.c.SiO2(乙醚-三乙胺98∶2)，Rf0.13(顺式和0.18(反式)。
中间体41-羟基-4-(1-哌嗪基)环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将中间体3的顺和反式异构体的混合物(1∶1，6.05g)溶解在乙醇(100ml)中，然后用1M氯化氢乙醇溶液(20ml)处理，并将其加入预氢化的Pearlmans催化剂(2.0g)的乙醇溶液(100ml)中。常温常压下使混合物氢化16h，通过hyflo过滤，并真空蒸发。用2M碳酸钠处理残留物水溶液(100ml)直到PH为12，然后真空蒸发溶液至干。用氯仿(100ml)研制所得固体，滤除残渣，真空蒸发滤液得到无色粘胶状标题化合物(4.55g)。
T.l.c.SiO2(系统A29∶10∶1)，Rf0.56(顺)和0.67(反)。
中间体54-〔4-(2-氰基-5-嘧啶基)-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯用碳酸氢钠(2.52g)处理5-溴-2-氰基嘧啶1(2.62g)和中间体4(4.47g)乙腈(100ml)溶液，氮气中加热回流22h，冷却并真空蒸发。将残留物分配在水(80ml)和乙酸乙酯(2×100ml)中，干燥有机萃取液并真空蒸发。用二氯甲烷-甲醇-三乙胺(93∶5∶2-88∶10∶2)作为洗脱液，通过硅胶(Merck 9385)快速色谱法纯化残留物得到标题化合物(0.890g)。
T.l.c.SiO2(系统A89∶10∶1)，Rf0.6。
1.Coll.Czech.Chem.Comm.，1972，37，1721。
中间体64-(1-哌嗪基)苄腈氮气中将4-氯苄腈(16.5g)与哌嗪(31g)和碳酸钠(26.1g)的二甲亚砜(300ml)溶液加热到180°并搅拌20h。将此混合物倒入水(1.2l)中并用氯仿(3×500ml)萃取。将有机层用水洗涤、干燥(MgSO4)并蒸发得到黄色油状标题化合物(23.6g)。
T.l.c.SiO2(系统A83.5∶15∶1.5)，Rf0.55。
用同样的方法制备中间体7。
中间体73-溴-4-(1-哌嗪基)苄腈(26.6g)，黄色固体。
从3-溴-4-氟苄腈(20.0g)制备。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.15。
中间体84-氰基苯基硼酸在约-100°，氮气中，在搅拌下将正丁基锂的己烷溶液(1.58M，383ml)滴加入4-溴苄腈(100g)于新蒸馏的四氢呋喃(1.9L)中的溶液，50分钟滴完。温度在约-100°保持15分钟后，在-97°到-96°之间将三异丙基硼酸酯(140ml)滴入，用1h滴完，并在大约-97°搅拌2.5h。将此混合物加热到-10°，并在10分钟内滴加盐酸(2M;352ml)。将反应混合物倒入水(1l)中并分层。将有机层用水(1l)、饱和盐水(1l)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到白色固体标题化合物(60.0g)。
NMR(δ，D6-DMSO)7.82，7.96(4H，AA′BB′，芳香氢)，8.45(2H，br.s，OH)。
中间体94-(4-吡啶基)苄腈氮气中将中间体8(6g)、4-溴吡啶盐酸盐(9.93g)、碳酸钠(18g)和四(三苯膦)钯(O)(2.36g)在水(70ml)和1，2-乙二醇、二甲基醚(140ml)的混合物中形成的混合物加热回流20h，将反应混合物冷却至室温并真空浓缩。残留物在水(300ml)和乙酸乙酯(300ml)中分配。用乙酸乙酯(300ml)萃取含水部分后，合并的有机馏份用水(300ml)和饱和盐水(300ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩得到灰白色固体。用硅胶(Merck 7736)干柱快速色谱纯化，先用二氯甲烷，再用系统A(96∶4∶0.4)洗脱得到无色固体状标题化合物(3.47g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.5。
中间体104-(4-氰基苯基)-1-(苯甲基)吡啶鎓溴化物氮气中，将中间体9(7.62g)和苄基溴(5.6ml)在无水乙醇(200ml)中的混合液加热回流4天，再加入苄基溴(1.4ml)，并将反应物再加热回流20h。使反应混合物冷却到室温并真空除去溶剂。用己烷和乙酸乙酯(3∶1;200ml)研制残留物得到浅棕色固体标题化合物(12.5g)。
NMR(δ，D6-DMSO)5.9(2H，s，CH2Ph)，7.4-7.7(5H，m，CH2Ph)，8.16、8.27、8.64、9.38(8H，2×AA′BB′，芳香氢)。
中间体11
4-〔1-(苯甲基)-4-哌啶基〕苄腈氮气中，将中间体10(12.4g)于无水乙醇(250ml)和干燥的二甲基甲酰胺(50ml)的混合液中的混合物冷却到大约0°，10分钟内分批加入硼氢化钠(2.68g)。温度在约0°再保持15分钟，将反应混合物加热到室温并在氮气中连续搅拌18h。真空除去溶剂，将黑色残留物预吸附在硅胶(Merck 7734)上，通过硅胶(Merck 9385)柱过滤，用系统A(98∶2∶0.2)洗脱，蒸发溶剂得到一种棕色油。在常温常压下。在无水乙醇(250ml)中用20%氢氧化钯-碳(1∶1水糊;2g)氢化该油36h。用hyflo过滤反应混合物，真空除去溶剂得一种棕色油。用硅胶(Merck 7736)干柱快速色谱纯化，用己烷∶二氯甲烷∶乙醇∶0.880氨(100∶50∶1∶0.1和50∶50∶1∶0.1)洗脱得到黄色油状的标题化合物(4.5g)。T.l.c.SiO2(系统A98∶2∶0.2)，Rf0.75。
中间体124-(4-哌啶基)苄腈将中间体11(1.13g)和2M盐酸溶液(2ml)的无水乙醇(150ml)溶液在常温常压下用20%的氢氧化钯-碳(1∶1水糊;285mg)氢化21h，用hyflo过滤该混合物，真空除去溶剂，将固体残留物分配在乙酸乙酯(100ml)和碳酸钠(2N;100ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取水馏份，合并有机馏份，用盐水(50ml)将其洗涤后，干燥(MgSO4)，过滤并真空浓缩得到无色油状标题化合物(547mg)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.1。
中间体134-〔4-(4-氰基苯基)-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯氮气中将中间体6(1.31g)与中间体2(1.59g)和对甲苯磺酸(50mg)在含分子筛(2g)的干燥甲苯中搅拌加热回流16h。将此混合物过滤，用乙醇(70ml)稀释并在常温常压下用5%铂-碳(250mg)氢化5天。滤出催化剂，蒸除溶剂，得到一种淡绿色油。用硅胶(Merck 9385)柱快速色谱法纯化，用系统A(96∶4∶0.4)洗脱得到浅黄色油状标题化合物(1.09g)。
T.l.c.SiO2(系统A89∶10∶1)，Rf0.4(异构体的混合物)。
中间体144-〔4-(2-溴-4-氰苯基)-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯氮气中，边搅拌边用中间体7(11.7g)和1M盐酸(11ml)处理中间体2(10.0g)的甲醇(130ml)溶液。然后加入3分子筛(3.5g)和氰基硼氢化钠(2.76g)，将此混合物在室温下搅拌44h。蒸发溶剂，将残留物分配在8%碳酸氢钠水溶液(250ml)和乙酸乙酯(3×100ml)中。用盐水洗涤有机层。干燥(MgSO4)，蒸发溶剂得到一种黄色油(23.0g)。用硅胶(Merck 9385)柱快速色谱纯化，用系统A(95∶5∶0.5)洗脱得到浅黄色油状标题化合物(9.47g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.3。
中间体15顺-4-〔4-(4-氰苯基)-1-哌啶基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯用氯化氢的乙醇溶液(1M;0.4ml)和3分子筛(0.260g)处理中间体12(0.590g)和中间体2(0.880g)的甲醇(20ml)溶液。室温下氮气中将此混合物搅拌25分钟。一次加入氰基硼氢化钠(0.206g)，在室温下氮气中将反应混合物搅拌66h。一次加入更多量的中间体2(0.440g)，接着加入氰基硼氢化钠(0.103g)，3分子筛(0.260g)和氯化氢乙醇液(1M;0.2ml)。室温下氮气中将反应物搅拌48h。悬浮液用hyflo过滤，残留物用甲醇(40ml)洗涤，真空蒸发滤液和洗涤液。残留物在8%碳酸氢钠(50ml)和乙酸乙酯(50ml)之间分配，用乙酸乙酯(50ml)萃取含水馏分，将合并后的有机部分用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发得到一种无色油。用制备高效液相色谱(HPLC梯度范围30-50%(B)以45ml/min进行15分钟;RT12.83min)纯化得到白色固体标题化合物(0.19g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.45。
中间体164-〔4-〔4-(氨基硫代甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将中间体13(1.0g)溶于无水二甲基甲酰胺(30ml)并用三乙胺(3.7ml)处理。将硫化氢鼓泡通过该混合物20分钟，并将该混合物在室温下搅拌24h并将其在室温下放置4 1/2 天。将此混合物倒入2N碳酸钠水溶液(150ml)中，并用乙酸乙酯(3×120ml)萃取，将有机层用50∶50盐水∶水(4×125ml)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发得到浅黄色固体标题化合物(1.06g)。
T.l.c.SiO2(系统A89∶10∶1)，Rf0.5(异构体混合物)以相似方法制备中间体17。
中间体174-〔4-〔4-(氨基硫代甲基)-2-溴苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯(0.478g)，为黄色胶状物由中间体14(0.5g)的二甲基甲酰胺(15ml)溶液和三乙胺(1.55ml)开始制备。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.17，0.2(异构体混合物，大约50∶50)。
中间体184-〔4-〔2-(氨基硫代甲基)-5-嘧啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将中间体5(0.885g)溶解在无水二甲基甲酰胺(50ml)中并加入三乙胺(3ml)。将该溶液用硫化氢气体饱和0.5h，然后在21°搅拌16h。加入乙酸乙酯(300ml)并用2M碳酸钠(100ml)洗涤，然后用水(3×50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)并真空蒸发。将残留物用己烷-乙醚(1∶1，50ml)研制得到标题化合物(0.355g)异构体的混合物。
T.l.c.SiO2(系统A89∶10∶1)，Rf0.38，0.44。
中间体19顺-4-〔4-〔4-(氨基硫代甲基)苯基〕-1-哌啶基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将硫化氢气体鼓泡通过中间体15(0.190g)和无水三乙胺(2ml)的无水二甲基甲酰胺(20ml)溶液20分钟。在室温下将此绿色溶液搅拌16h。真空蒸发溶剂，将残留物分配在碳酸钠(2N;50ml)和甲乙酮(50ml)中。用甲乙酮(50ml)和乙酸乙酯(25ml)萃取水部分，合并的有机馏分用盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)过滤，真空浓缩得到一种棕色胶体，用己烷∶二乙醚(3∶1，20ml)研制得棕色固体标题化合物(0.208g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.15。
中间体20顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯三氟乙酸盐氮气中将中间体16(1.0g)与碘代甲烷(0.16ml)在丙酮(50ml)中搅拌加热回流2.5h。再加一些碘代甲烷(0.016ml)并继续加热回流1h。蒸发溶剂，将得到的浅棕色固体物质溶解在甲醇(50ml)中，并在氮气下，将其与乙酸铵(0.712g)搅拌加热回流6h。蒸发溶剂得到一种黄色固体物质。通过制备HPLC(梯度范围10-60%(B)，17分钟;RT13min)纯化得到浅黄色固体状标题化合物(0.335g)。
NMR(δ，D6-DMSO)1.43(9H，s，tBu)，1.52，1.74-2.04(8H，m，环己烷)，2.34(2H，s，CH2CO2tBu)，3.08，3.30(5H，m，哌嗪+环己烷C-H)，3.62(2H，m)&4.16(2H，m)(哌嗪)，7.19(2H)和7.8(2H)(芳香基)，8.82，9.02(4H，m，脒)。
中间体21顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)-2-溴苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯，三氟乙酸盐氮气中将中间体17(0.470g)与碘代甲烷(0.07ml)在丙酮(30ml)中搅拌加热回流4h。再加入一些碘代甲烷(0.035ml)，继续加热回流3h。蒸发溶剂，将残留物溶解在甲醇(20ml)中，在氮气中与乙酸铵(0.284g)搅拌加热回流8h。蒸发溶剂，将残留物通过制备HPLC(梯度10-70%(B)，进行18分钟;RT13.2min)纯化得到浅黄色固体状标题化合物(0.137g)。
MS〔MH+〕495，497。
中间体22顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-嘧啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯，三氟乙酸盐将中间体18(0.355g)在丙酮(40ml)中用碘代甲烷(70μl)处理并在氮气中加热回流2.5h。再加一些碘代甲烷(20μl)并将此溶液再加热回流0.5h。真空除去溶剂，将残留物用甲醇(30ml)溶解，加入乙酸铵(0.6g)并将该溶液在氮气中加热回流3h。将此混合物真空蒸发，通过制备HPLC(isochratic洗脱液35%(B);RT10.5min)纯化残留物得到灰白色固体标题化合物(0.251g)。
NMR(δ，D6-DMSO)1.36-1.60(11H，s+m，t-Bu+环己烷)，1.72-1.94(6H，m，环己烷)，3.14-3.40(5H，m，环己烷CH+哌嗪)3.63和4.37(4H，2×m，哌嗪)，4.62(1H，br.s，OH)，8.75(2H，s，嘧啶)，9.26-9.44(4H，m，脒)，9.8(1H，br.s，NH+)。
中间体23顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯氮气中，将中间体19(0.206g)和碘甲烷(78μl)在无水丙酮(5ml)中的混合物加热回流2.25h。将反应混合物冷却到室温并真空除去溶剂。氮气中，将固体残留物与乙酸铵(0.147g)在甲醇(5ml)中加热回流8h。冷却后，真空蒸发溶剂得到棕色残留物，将其通过制备HPLC(梯度10-70%(B)，18分钟;RT12.9min)纯化得到浅黄色标题化合物(0.108g)固体。
NMR(δ，D6-DMSO)1.43(9H，s，t-Bu)，1.54，1.76-2.02，2.08，3.58(14H，m，环己烷和哌啶)，2.34(2H，s，CH2CO2tBu)，3.01(1H，tt，哌啶CH)，3.06-3.26(3H，m，环己烷CH和哌啶)，7.5，7.82(4H，AA′BB′，芳基)8.96-9.34(5H，3×m，脒和哌啶NH+)。
中间体244-〔4-(2-氰基-5-吡啶基)-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯用碳酸氢钠(950mg)处理二甲亚砜(50ml)中的5-溴-2-氰基吡啶1(1.03g)和中间体4(1.52g)并在120°加热16h，冷却后，将此混合物倒入水(150ml)中并用氯仿(2×220ml，1×50ml)萃取，将合并后的氯仿萃取液用水(200ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空蒸发。将黑色残留物通过硅胶(Merck 9385)快速色谱纯化，用二氯甲烷-甲醇-0.880氨(95∶5∶0.5)洗脱，得到淡黄色固体标题化合物(0.755g)。
T.l.c.SiO2(二氯甲烷-甲醇-0.880氨89∶10∶1)，Rf0.5。
1.T.SaKamoto，S.Kaneda，S.Nishimura和H.YamonaKa，Chem.Pharm.Bull.，1985，565中间体254-〔4-〔2-(氨基硫代甲基)-5-吡啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷基乙酸-1，1-二甲基乙酯用三乙胺(5ml)处理二甲基甲酰胺(120ml)中的中间体24(0.745g)，并通硫化氢30分钟。将混合物放置3天，然后真空浓缩。将残留物倒入2M碳酸钠(250ml)中并用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。将萃取液用水(3×100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空蒸发。用己烷-乙醚(1∶1，30ml)研制残留物得到黄色固体标题化合物(0.702g)。
T.l.c.SiO2(添加三乙胺，乙酸乙酯-乙醇19∶1)，Rf0.45。
中间体264-〔4-〔2-〔(氨基)亚氨基甲基〕-5-吡啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯，三氟乙酸盐用碘代甲烷(0.15ml)处理丙酮(80ml)中的中间体25(0.694g)并加热回流1.5h，然后再用碘代甲烷(0.15ml)处理并再加热回流1.5h。将混合物冷却后真空蒸发，将残留物溶在甲醇(80ml)中并加入乙酸铵(1g)，将此溶液加热回流6h并真空蒸发溶剂。通过制备HPLC(梯度10-70%(B)，18分钟;RT11.5-12.0min)纯化残留物，得到无色固体标题化合物(0.504g)。
HPLC分析保留时间10.7min;25min内梯度范围10-90%(B)。
中间体274-〔4-(5-氰基〔1，1′-联苯)-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯将中间体14(0.700g)与苯基硼酸(0.214g)，四(三苯膦)钯(O)(0.089g)，碳酸钠(0.53g)和水(3ml)在1，2-二甲氧乙烷(15ml)中在氮气氛下搅拌加热回流16h。将此混合物分配在水(40ml)和乙酸乙酯(3×25ml)中并将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，蒸发得到一种棕色油。通过硅胶(Merck 9385)快速色谱法纯化，用系统A(96∶3.5∶0.35)洗脱得到浅棕色泡沫状标题化合物(0.647g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0.5。
中间体284-〔4-(5-(氨基硫代甲基)〔1，1′-联苯〕-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯室温下，氮气中，将硫化氢鼓泡通过中间体27(0.63g)和三乙胺(1.96ml)的无水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液10min，室温下搅拌21h。将此混合物倒入2N碳酸钠水溶液(80ml)并用乙酸乙酯(3×60ml)萃取。将有机层用盐水-水(50∶50;4×50ml)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发得到黄色胶状标题化合物(0.598g)。
T.l.c.SiO2(系统A95∶5∶0.5)，Rf0，15，0.2(异构体)。
中间体294-〔4-〔5-(氨基亚氨基甲基)〔1，1′-联苯〕-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸-1，1-二甲基乙酯，三氟乙酸盐氮气中，将中间体28(0.588g)与碘代甲烷(0.086ml)在丙酮(20ml)中搅拌加热回流1.75h。然后再加碘代甲烷(0.014ml)继续加热回流1.5h。蒸发溶剂得到一种黄色泡沫状物，将其溶解在甲醇(25ml)中并在氮气中与乙酸铵(0.355g)一起搅拌加热回流2h。蒸发溶剂得到一种黄色胶体，通过制备HPLC(梯度10-70%(B)，18分钟;RT15min)纯化，得到淡黄色胶状标题化合物(0.241g)。MS〔NH+〕493。
实施例1顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸，三氟乙酸盐室温下将中间体20(0.330g)，与水(0.5ml)和三氟乙酸(5ml)搅拌10分钟。蒸发溶剂得到一种黄色胶状物，将其用无水乙醚研制得到淡黄色固体标题化合物(0.209g)。
NMR(δ，D6-DMSO)1.48-2.08(8H，m，环己烷)，2.37(2H，s，CH2CO2H)，3.08-3.3(5H，m，哌嗪+环己烷C-H)，3.62(2H，dd)，4.15(2H，dd)(哌嗪)，4.62(1H，br，OH)，7.18(2H)，7.8(2H)，(芳基)，8.82，9.05(4H，m，脒)。
元素分析 C19H28N4O3·2CF3CO2H·0.5H2O测定值 C，46.1;H，5.1;N，9.2;
理论值 C，46.2;H，5.2;N，9.4%。
实施例2顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)-2-溴苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸，三氟乙酸盐将中间体21(0.135g)溶解在三氟乙酸(3ml)和水(0.3ml)中，并将混合物在室温下搅拌8分钟。蒸发溶剂并通过制备HPLC(梯度10-70%(B)，18分钟;RT9.3min)纯化残留物得到白色固体标题化合物(0.31g)。
元素分析 C19H27BrN4O3·2.5CF3COOH测定值 C，39.8;H，4.4;N，7.75;
理论值 C，39.8;H，4.1;N，7.73%。
NMR(δ，D6-DMSO)1.44-2.01(8H，m，环己烷)，2.38(2H，s，CH2CO2H)2.96-3.40(5H，m，哌嗪+环己烷CH)，3.56-3.80(4H，m，哌嗪)，4.65(1H，br，s，OH)，7.42(1H，d)7.85(1H，dd)和8.14(1H，d)(芳香基)，9.06和9.3(4H，2×br.s，脒)，9.6和12.2(2H，2×br.s，CO2H和NH+)。
实施例3顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-嘧啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷基乙酸，三氟乙酸盐将中间体22(0.250g)溶解在三氟乙酸(9ml)-水(1ml)中并在22°放置0.5h。真空蒸发溶液至干，用无水乙醚(2×10ml)研制残留物得到灰白色固体标题化合物(0.212g)。
元素分析 C17H26N6O3·2.4CF3COOH.
测定值 C，41.1;H，4.6;N，13.3;
理论值 C，41.2;H，4.5;N，13.2%MS〔NH+〕363.2
实施例4顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌啶〕-1-羟基环己烷乙酸，三氟乙酸盐室温下氮气中将中间体23(0.106g)在三氟乙酸(9ml)和水(1ml)的混合物中的溶液搅拌2h。真空除去溶剂得到一种浅棕色残留物。用二乙醚(20ml)研制，过滤并真空干燥得到黄褐色固体标题化合物(0.058g)。
MS〔NH+〕360。
NMR(δ，D6-DMSO)1.57，1.75-2.05，2.09(12H，m，环己烷和哌啶)，2.37(2H，s，CH2CO2H)，3.01(1H，tt，哌啶CH)，3.07-3.28(3H，m，环己烷CH和哌啶)，3.58(2H，ddd哌啶)，4.62(1H，br.s，OH)，7.5，7.81(2H，AA′BB′芳基)，8.96-9.34(5H，3×brm脒和哌啶NH+)。
实施例5顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-吡啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸，三氟乙酸盐将中间体26(0.498g)在三氟乙酸-水(9∶1，15ml)中放置2h，然后真空蒸干。用无水乙醚(×2)研制残留物得到灰白色标题化合物(0.347g)固体。
元素分析 C18H27N5O3·2.5CF3COOH测定值 C，42.9;H，4.7;N，10.7;
理论值 C，42.7;H，4.6;N，10.8%。
MS〔NH+〕362.4实施例6顺-4-〔4-〔5-(氨基亚氨基甲基)〔1，1′-联苯〕-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸，三氟乙酸盐室温下将中间体29(0.237g)与三氟乙酸(5ml)和水(0.5ml)搅拌10分钟。蒸干混合物并用无水乙醚研制残留物得到白色固体标题化合物(0.126g)元素分析 C25H32N4O3·2.35CF3COOH测定值 C，50.8;H，5.3;N，7.7;
理论值 C，50.6;H，4.9;N，7.95%。
NMR(δ，D6-DMSO)9.4(1H，br.s，CO2H)，9.2和8.95(4H，2×br.s，NH′s)，7.84(1H，dd)，7.78-7.70(3H，m)，7.54(2H，t)，7.44(1H，t)和7.3(1H，d)(芳基)，3.1-3.5(5H，m，N-CH′2s和N-CH)，2.88-3.02(4H，m，N-CH2)，2.35(2H，s，CH2CO2H)，1.9-1.64(6H，m，环己基CH′2s)，1.50(2H，br.t，环己基CH2)。
实施例7生物实验数据按照下列方法可测定本发明化合物的血小板聚集抑制作用。将至少在取血前10天内不用药的志愿者的全血柠檬酸化(1份3.8%柠檬酸三钠∶9份血液)。将血样与0.1mM阿斯匹林和0.05μM前列环素一起培育，然后在1000g离心4分钟(20℃)。将富血小板血浆上清液(PRP)在1300g进一步离心10分钟(20℃)以沉淀血小板。弃掉上清液，用生理盐水(HEPES 5mM，NaHCO312mM，NaCl140mM，KH2PO40.74mM，D-葡萄糖5.6mM，KCl2.82mM和BSA20g/l，PH7.4)洗涤沉淀以除去残留的血浆。洗完后，沉淀物再悬浮在生理盐水溶液中，然后加到琼脂糖CL-2B柱中，该柱在室温下用生理盐水溶液预平衡。把血小板(GFP)洗进空柱并在缓冲液中稀释到大约300，000血小板/μl。将纯的人体血纤维蛋白原(KnightL.C.等，1981 Thromb.Haemosta-sis，46(3)，593-596)加至与Ca2+和Mg2+的最终总浓度为0.5mg/ml，而Ca2+和Mg2+的浓度分别为1mM和0.5mM。将试验化合物在GFP中于37℃培育5分钟并将血小板聚集剂腺苷二磷酸(ADP)加至最终浓度为1×10-5M。试验化合物的药效可由IC50值表达，IC50为产生抑制50%血小板聚集所需受试化合物的浓度。
下列是得到的本发明化合物的IC50值化合物实施例编号 IC50(nM)1 452 9453 5434 135 2206 1549
实施例8药物实施例-片剂a)本发明化合物 5.0mg乳糖 95.0mg微晶纤维素 90.0mg交联聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg硬脂酸镁 2.0mg压重 200.0mg将本发明化合物，微晶纤维素，乳糖和交联聚乙烯吡咯烷酮过500微米筛并在合适的混合器中混合。将硬脂酸镁过250微米筛，与有效配料混合。使用合适的压片机将该混合物压制成片。
b)本发明化合物 5.0mg乳糖 165.0mg预凝胶化淀粉 20.0mg交联聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg硬脂酸镁 2.0mg压重 200.0mg将本发明化合物，乳糖和预凝胶化淀粉混合在一起用水制粒。将湿粒干燥并研磨。将硬脂酸镁和交联聚乙烯吡咯烷酮过250微米筛并与上述颗粒混合。用合适的压片机将该混合物压制成片。
实施例9药物实施例-胶囊a)本发明化合物 5.0mg预凝胶化淀粉 193.0mg
硬脂酸镁 2.0mg填充重量 200.0mg将本发明化合物和预凝胶化淀粉过500微米筛目的筛子，一起混合并用硬脂酸镁润滑，(过250微米筛)。将此混合物装入大小合适的硬明胶胶囊。
b)本发明化合物 5.0mg乳糖 177.0mg聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg交联聚乙烯吡咯烷酮 8.0mg硬脂酸镁 2.0mg填充重量 200.0mg将本发明化合物和乳糖一起混合并和聚乙烯吡咯烷酮溶液一起制粒。将湿粒干燥并研磨。将硬脂酸镁和交联聚乙烯吡咯烷酮过250微米筛并与上述颗粒混合。将所得混合物装入大小合适的硬明胶胶囊。
实施例10药物实施例-糖浆a)本发明化合物 5.0mg羟丙基甲基纤维素 45.0mg羟基苯甲酸丙酯 1.5mg羟基苯甲酸丁酯 0.75mg糖精钠 5.0mg山梨糖醇溶液 1.0mg合适的缓冲剂 适量合适的香味剂 适量加纯 水到 10ml将羟丙基甲基纤维素与羟基苯甲酸酯一起分散在一部分热的纯水中并将此溶液冷却到室温。将糖精钠、香味剂和山梨糖醇溶液加入此主体溶液。将本发明化合物溶解在其余部分水中后加到本体溶液中。加入合适的缓冲剂控制PH在最大稳定范围内。调整溶液体积，过滤并装入合适容器。
实施例11药物实施例-注射剂%W/V本发明化合物 1.00加注射用水B.P.至 100.00可加入氯化钠调节溶液的渗透压，并可使用稀酸或碱或通过加入合适的缓冲剂盐调节PH值使之成为最稳定和/或最方便的本发明化合物溶液。也可加入抗氧化剂和金属螯合盐。
将溶液配制，澄清并装入大小合适的安瓿瓶，通过熔化玻璃封口。使用一种可接受的周期通过在高压灭菌器中加热将注射剂消毒。另外，也可通过过滤将溶液消毒并在灭菌条件下将其装入消毒的安瓿。溶液可在氮气惰性气氛中装填。
权利要求
1.制备式(Ⅰ)化合物及其盐和溶剂化物的方法，
其中X1、X2和Y1可以相同或不同，表示CH或N；Y2表示N，或当Y1表示N时，也可表示CH；R1表示氢原子或羟基、C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基；R2表示氢原子，或当X1和X2都为CH时，也可表示氟、氯或溴原子或苯基或C1-4烷基；R3表示氢原子，或当Y1和Y2都为N时，也可表示C1-4烷基或羟甲基；该方法包括(A)将式(Ⅱ)化合物
烷基化，接着与氨源反应，随后除去羧基保护基可制备R1表示氢原子的式(Ⅰ)化合物；或(B)在碱存在下，用羟胺或其酸加成盐处理式(Ⅲ)化合物
或其被保护的衍生物，随后除去存在的保护基可制备R1表示羟基的式(Ⅰ)化合物；或(C)用胺R1NH2(其中R1表示C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基)处理式(Ⅳ)化合物
(其中R4表示烷基)，随后除去羧酸保护基可制备R1表示C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基的式(Ⅰ)化合物；或(D)把被保护的式(Ⅰ)化合物脱去保护基；或(E)一种式(Ⅰ)化合物互相转换成另一种式(Ⅰ)化合物；以及当得到的是式(Ⅰ)化合物对映体的混合物时，选择性地将该混合物拆分得到所需对映体；和/或当式(Ⅰ)化合物为游离碱时，选择性地将其转化成盐。
2.按照权利要求1的方法，其中式(Ⅰ)化合物为式(Ⅰa)化合物
X1、X2和Y1可以相同或不同，表示CH或N;Y2表示N，或当Y1表示N时，也可表示CH;R1表示氢原子或羟基、C1-4烷基或2，2，2-三氟乙基;R2表示氢原子，或当X1和X2都为CH时，也可表示氟、氯或溴原子或苯基或C1-4烷基;R3表示氢原子，或当Y1和Y2都为N时，也可表示C1-4烷基或羟甲基。
3.按照权利要求1或2的方法，其中X1和X2之一或两者为CH。
4.按照权利要求1到3任何一项的方法，基中Y1和Y2之一或两者为N。
5.按照权利要求1到4任何一项的方法，其中R1表示氢原子。
6.按照权利要求1到5任何一项的方法，其中R3表示氢原子。
7.按照权利要求1的方法，所制备的化合物选自顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)-2-溴苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-嘧啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;顺-4-〔4-〔2-(氨基亚氨基甲基)-5-吡啶基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;顺-4-〔4-〔4-(氨基亚氨基甲基)苯基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸;顺-4-〔4-〔5-(氨基亚氨基甲基)〔1，1′-联苯〕-2-基〕-1-哌嗪基〕-1-羟基环己烷乙酸，及其生理上可接受的盐和溶剂化物。
8.按照权利要求1到7中任何一项的方法，其中式(Ⅰ)化合物的形式为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、苯甲酸盐、萘甲酸盐、羟基萘甲酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、氨基磺酸盐、抗坏血酸盐、酒石酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、戊二酸盐、戊烯二酸盐、乙酸盐、丙三酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐或钠盐。
9.药物组合物的制备方法，该组合物含有权利要求1-8任意一项所定义的式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与至少一种药学上可接受的载体的混合物。
全文摘要
本发明涉及到式(I)所示环己烷乙酸衍生物及其盐和溶剂化物，其中X该化合物抑制依赖于血纤维蛋白原血小板聚集。
文档编号A61K31/451GK1073433SQ92113088
公开日1993年6月23日 申请日期1992年10月15日 优先权日1991年10月16日
发明者B·波特, C·D·埃尔德雷德, H·A·凯利 申请人:格拉克索公司