5-5:1，向其中加入多酚分子和金属离子，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
[0053]制备实施例1-1
[0054]I)将5mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为100 μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0055]2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在0.5Bar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
[0056]3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
[0057]4)取含有100 μ g溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.8mg儿茶酚和1.0mg氯化妈，剧烈祸旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
[0058]扫描电子显微镜可以直观地反映纳米粒子的形貌特点，图1为实施例1所制备的PTX-C纳米颗粒的扫描电子显微镜(SEM)照片。从图中可以看出，制备得到的PTX-C纳米颗粒为100?300nm大小的颗粒状纳米药物。图1的插图为单个PTX-C的放大图像，反映了纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
[0059]动态光散射可以反映溶液中粒子的粒径大小，如图2所示，PTX-C纳米颗粒的粒径分布在100?300nm之间。
[0060]制备实施例1-2
[0061]I)将500mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为10000 μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0062]2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在IBar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
[0063]3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
[0064]4)取含有100 μ g溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入3.0Omg鞣花酸和0.25mg氯化锰，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
[0065]扫描电子显微镜观察，制备得到的PTX-C为100?300nm大小的颗粒状纳米药物，纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
[0066]动态光散射反映出PTX-C纳米颗粒的粒径分布在100?300nm之间。
[0067]制备实施例1-3
[0068]I)将0.05mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为I μ g/mL的PTX乙醇溶液；
[0069]2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在1.5Bar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
[0070]3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
[0071]4)取含有10yg溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.06mg没食子酸和0.5mg七水硫酸锌，剧烈祸旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
[0072]扫描电子显微镜观察，制备得到的PTX-C纳米颗粒为100?300nm大小的颗粒状纳米药物，纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
[0073]动态光散射反映出PTX-C的粒径分布在100?300nm之间。
[0074]下面使用制备实施例1-1制备的药物进行如下实验。
[0075]实施例2:紫杉醇纳米颗粒对SK-BR-3细胞增殖毒性的检测实验
[0076]以SK-BR-3细胞作为研宄乳腺癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的SK-BR-3细胞，将细胞重悬至RPM1-1640完全培养基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、10yg/mL链霉素)中，终浓度为4X104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200 μ L上述细胞悬液(8 X 13个细胞/孔)，置37°C、5 % CO 2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200 μ L含有不同浓度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C纳米颗粒，使PTX的最终浓度分别为 0.00098 μg/mL,0.00195 μg/mL,0.0039 μg/mL、0.0078 μg/mL、0.0156 μg/mL 和0.0312 μ g/mL,以RPM1-1640完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37°C、5% CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150 μ L DMS0，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％ ) = ODgjft /OD5iffi X 100% ) ?
[0077]实验中，向51^1?-3细胞中加入 0.0078 48/11^、0.0156 48/11^和0.0312 48/11^的PTX-C分别与加入相同浓度的PTX、AB1-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312 μ g/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为19.3%，如图3所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、AB1-007和PTX-C对SK-BR-3细胞的半数抑制浓度分别为0.0175 μ g/mL,0.0140 μ g/mL和0.0099 μ g/mL,说明络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物以及AB1-007的肿瘤抑制效果都要好。
[0078]实施例3:紫杉醇纳米颗粒对HepG2细胞增殖毒性的检测实验
[0079]以!fePG2细胞作为研宄肝癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的!fepG2细胞，将细胞重悬至MEM完全培养基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100^8/1^链霉素)中，终浓度为4X 14个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200 μ L上述细胞悬液(8 X 10 3个细胞/孔)，置37°C、5% CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200 μ L含有不同浓度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098 μ g/mL,0.00195 μ g/mL、0.0039 μ g/mL、0.0078 μ g/mL、0.0156 μ g/mL 和 0.0312 μ g/mL,以 MEM 完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37°C、5% CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150 yL DMS0，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECANJ^i )测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率) = OD药物/OD对照 X 100% )。
[0080]实验中，向H印G2 细胞中加入 0.0039 μ g/mL,0.0078 μ g/mL 和 0.0156 μ g/mLΡΤΧ-c,分别与加入相同浓度的PTX、AB1-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312 μ g/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为20.9 %，如图4所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、AB1-007和PTX-C对!fepG2细胞的半数抑制浓度分别为0.0138 μ g/mL,0.0210 μ g/mL和0.0066 μ g/mL,说明络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物以及AB1-007
的肿瘤抑制效果都要好。
[0081]实施例4:紫杉醇纳米颗粒对MCF-7细胞增殖毒性的检测实验
[0082]以MCF-7细胞作为研宄乳腺癌细胞系的另一模型体系。收集对数生长期的MCF-7细胞，将细胞重悬至DMEM完全培养基(含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素)中，终浓度为4X 14个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200 μ L上述细胞悬液(8 X 13个细胞/孔)，置37°C、5% CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200 μ L含有不同浓度的ΡΤΧ、ΑΒΙ-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098 μ g/mL,0.00195 μ g/mL,0.0039 μ g/mL、0.0078 μ g/mL、0.0156 μ g/mL 和 0.0312 μ g/mL,以 DMEM 完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37°C、5% CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20 μ L，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150 μ L DMS0，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecaninfinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)
=ODgj物 /OD对照 X 100% )。
[0083]实验中，向MCF-7 细胞中加入 0.0039 μ g/mL,0.0078 μ g/mL 和 0.0156 μ g/mLΡΤΧ-c,分别与加入相同浓度的PTX、AB1-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312 μ g/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为27.2 %，如图5所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、AB1-007、PTX-C对MCF-7细胞的半数抑制浓度分别为0.0079 μ g/mL,0.0167 μ g/mL和0.0077 μ g/mL,说明对于MCF-7细胞，络合物膜包被的PTX比AB1-007的肿瘤抑制效果要好，与单纯的PTX药物肿瘤抑制效果基本相当。
[0084]实施例5:紫杉醇纳米颗粒对HeLa细胞增殖毒性的检测实验
[0085]以HeLa细胞作为研宄宫颈癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的HeLa细胞，将细胞