性搅拌12小时。反应结束后，将乳白色溶液进行离心分离，速率为5500转/分，去离子水与无水乙醇交替洗涤三次后，干燥备用。制得的S12微球扫描电镜图片如图UA) (a)所示。从图中可以得出制备的S12微球表面光滑，粒径在200?300纳米。
[0032](2)核壳结构S12OT12微球的制备:准确称取0.25g 二氧化硅微球，超声分散于250mL无水乙醇与2mL浓氨水(28wt % )的混合溶液中，搅拌均匀，置于60°C恒温水浴中，标记为溶液A ;另取SOmL无水乙醇、3.5mL钛酸四丁酯，磁力搅拌5min后，将上述溶液逐滴加入到溶液A中，之后维持在60°C继续反应3小时即可，所得反应溶液进行离心分离5分钟，转速为4500转/分，去离子水与无水乙醇交替洗涤三次后，干燥备用，即得到所需S12OT12核壳结构复合纳米微球。Φ幡的Si02@Ti0#球扫描电镜图片如图l(B)(b)所示。结果显示在S1jh面包覆T1 2表面之后微球粒径增加并且表面变得粗糙。
[0033](3)yolk-shell 结构 S12OSrT13微球的制备:准确称量 0.05g(2)制备的 S1 β打02核壳结构复合纳米微球加入到1M/L的Sr (OH) 2溶液中，超声分散均匀，然后转移至反应釜中，200°C反应4h所得反应溶液进行离心分离，转速为4500转/分，去离子水与无水乙醇交替洗涤三次后，即得到Si02@SrTi03Yoll-Shell结构复合纳米微球。制得的S12OSrT13微球扫描电镜图片如图1(C) (c)所示.结果显示经过水热后，微球表面的变得更加粗糙，从破损的微球可以看到微球出现空心的Yolk-shell结构。S12OSrT 103微球扫描电镜图片如图微球扫描电镜图片如图2 (B) (b)，可以看到比较明显的yo Ik-she 11结构，并且内部S12核有介孔，有利于药物负载。S12IiSrT1d^ EDS图谱如图3所示，可以看出该微球主要原由0、S1、T1、Sr四中元素组成，并且重要的是期中Sr和Ti的原子个数比接近1: US12OSrT1j^ XRD图谱如图4所示。
[0034]实施例2功能集成药物载体进行体外细胞实验测试。
[0035]下面对本发明功能集成药物载体进行体外细胞实验测试:
[0036](I)共培养培养基的配制。
[0037]将2mg实施例1制备的Si02@SrTi0#j球粉末用超纯水洗涤3次并干燥，然后放置于24孔培养板中放于紫外灯下消毒24小时，将该粉末加入到用于细胞培养的DMEM培养基中超声分散I小时，制得共培养的培养基。
[0038](2)细胞接种与培养。
[0039]将培养的细胞经过消化然后接种在24孔细胞培养板中，加入ImL (I)配制的共培养的培养基，置于培养箱中37°C 5% CO2培养3天。
[0040](3)细胞荧光显微与细胞计数。
[0041]3天后将培养板中的细胞用绿色微丝荧光染料染色，然后在荧光显微镜下观察细胞形态。将培养板中的细胞用胰酶消化后用台盼蓝染料染色后用细胞计数板计数，并绘制细胞活性曲线。图5为共培养3天后的细胞荧光显微照片，证明经过3天共培养后细胞在培养板上生长良好，细胞形态正常，说明细胞正常增殖分化，由此说明Si02@SrTi03具有与T12相似的细胞相容性。图6为细胞活性曲线，可以看到经过3天的共培养细胞，S12OSrT1j^细胞活性高于S1 2和T1 2。由此说明此药物载体集成药物释放和骨组织修复于一体。细胞生物实验表明，S12OSrT13的骨组织修复的能力较强。
[0042]实施例3功能集成药物载体的药物负载量测试。
[0043]我们考察了制备的功能集成药物载体的药物负载量。步骤如下:将0.1g实施例1制备的Si02@SrTi0#^$加入到10ml三孔烧瓶中，减压2h至真空。另使用注射器向三口烧瓶中加入30ml 40mg/ml的布洛芬乙醇溶液，室温下搅拌48h。反应完毕后，将溶液离心，所得产物在80°C下晾干。并称量其装载量。结果表明，我们制备的材料作为载体药物负载量达到lg/g的装载量。
【主权项】
1.一种功能集成药物载体，其特征在于，所述功能集成药物载体为介孔yolk-shell结构的3102-51*1103复合颗粒，粒径为400?600纳米，内核为可移动的介孔S12微球，外层为生物活性的SrT13，壳层厚度在10?30纳米可调。
2.权利要求1所述功能集成药物载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)利用共沉淀法制备单分散S12微球: (2)制备核壳结构S12-T12微球:准确称取0.2?0.3g步骤(I)制备的单分散S1 2微球，超声分散于200?250mL无水乙醇与2?3mL浓氨水的混合溶液中，搅拌均勾，置于55?60°C恒温水浴中，标记为溶液C ;另取70?80mL无水乙醇、3?4mL钛酸四丁醋，磁力搅拌5?8min后，标记为溶液D，将溶液D以0.1?5ml/min的滴速逐滴加入到溶液C中，之后维持在55?60°C继续反应3?4小时，将所得反应溶液进行离心分离，转速为4000?5000转/分，去离子水与无水乙醇交替洗涤3?4次后，干燥备用，即得到所需S12OTiC^S壳结构复合纳米微球； (3)制备yolk-shell结构S12-SrT13微球的:称量0.05?0.1g步骤⑵制备的Si02-Ti02核壳结构复合纳米微球加入到1M/L的Sr (OH)2溶液中，超声分散均匀，然后转移至反应釜中，200?250°C反应4?6h所得反应溶液进行离心分离5?8分钟，转速为4000?5000转/分，去离子水与无水乙醇交替洗涤3?4次后，即得到yolk-shell结构的5102-51*1103复合纳米微球。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(I)中，共沉淀法制备单分散S12微球的步骤为:将无水乙醇和正硅酸乙酯按照体积比8?10:1进行混合，标记为溶液A ;然后将去离子水、无水乙醇和28?1:%的浓氨水按照体积比为50?55: 90?100: 15?18超声混合均匀，标记为溶液B ;在室温下，将溶液B按照I?5ml/min的滴速逐滴加入到溶液A中，持续磁性搅拌10?12h，反应结束后将乳白色溶液进行离心分离5?8分钟，速率为5000?6000转/分，然后用去离子水和无水乙醇交替洗涤3?4次后，干燥得到单分散S12微球。
【专利摘要】本发明公开了一种功能集成药物载体及其制备方法，所述药物载体以空心的介孔SiO2球为核，生物活性的SrTiO3为壳，该复合纳米粒子呈现稳定性较高、生物活性高、药物负载量大、药物缓释时间长，载体本身可以促进骨组织修复。可以作为一种药物载体应用于生物医药领域。
【IPC分类】A61L27-54, A61L27-50, A61L27-02
【公开号】CN104826158
【申请号】CN201510227967
【发明人】董文钧
【申请人】南京文钧医疗科技有限公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月6日