剂。尤其是，所述缓冲剂为包 含氨基酸，任选包含组氨酸，特别是L-组氨酸、组氨酸氯化物、组氨酸盐酸盐一水合物、组 氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐或组氨酸硫酸盐或其混合物的缓冲剂。尤其是，所述制剂缓冲溶 液包含组氨酸和/或组氨酸盐酸盐一水合物。
[0119] 在本发明的一个实施方案中，所述制剂缓冲溶液包含30-60 mM组氨酸，尤其是 35-45 mM组氨酸。在本发明的另一个实施方案中，所述制剂缓冲溶液包含约30 mM组氨酸、 约35 mM组氨酸、约40 mM组氨酸、约45 mM组氨酸、约50 mM组氨酸、约55 mM组氨酸或约 60 mM组氨酸，尤其是所述制剂缓冲溶液包含30 mM组氨酸。在另一个实施方案中，所述制 剂缓冲溶液包含至少50 mM组氨酸。
[0120] 此外，步骤c)中使用的制剂缓冲溶液的pH值可以在4. 8至7. 0的范围内，尤其 是在5至6的范围内。任选地，所述缓冲溶液的pH值为5. 5±2. 0、5. 5±1. 0、5. 5±0. 5、 5. 5±0. 3或5. 5±0. 2。在一个实施方案中，所述缓冲溶液的pH值为5. 5±0. 3。在另一个 实施方案中，所述缓冲溶液的pH值为5. 5 ±0. 2。
[0121] 在室温下进行如本文所述的方法，上文提供了所述术语的定义。特别地，在18 °C 至25 °C下，任选在19 °C至22 °C下进行如本文所述的所有方法步骤。
[0122] 根据本发明方法获得的HCLF具有如上文对HCLF定义的抗体浓度或其片段浓度。
[0123] 根据本发明方法获得的HCLF的pH值可以在4. 8至7. 0的范围内，尤其是5. 0至 6. 0的范围内。在一个实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF具有5. 5±2. 0、5. 5±1. 0、 5. 5 ±0. 5、5. 5 ±0. 3或5. 5 ±0. 2的pH。在一个具体实施方案中，本发明的液体药物制剂的 pH值为5. 5 ±0. 3。在另一个具体实施方案中，本发明的液体药物制剂的pH值为5. 5 ±0. 2。
[0124] 根据本发明方法获得的HCLF包含如本文所定义的缓冲剂。尤其是，所述缓冲剂为 包含氨基酸的缓冲剂，任选包含组氨酸，特别是L-组氨酸、组氨酸氯化物、组氨酸盐酸盐一 水合物、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐或组氨酸硫酸盐或其混合物的缓冲剂。尤其是，根据 本发明方法获得的HCLF包含组氨酸和/或组氨酸盐酸盐一水合物。
[0125] 在本发明的一个实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF包含30-60 mM组氨酸， 尤其是35-45 mM组氨酸。在本发明的另一个实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF包 含约30 mM组氨酸、约35 mM组氨酸、约40 mM组氨酸、约45 mM组氨酸、约50 mM组氨酸、 约55 mM组氨酸或约60 mM组氨酸，尤其是根据本发明方法获得的HCLF包含30 mM组氨酸。 在另一个实施方案中，所述HCLF包含至少50 mM组氨酸。
[0126] 根据本发明方法获得的HCLF可包含如本文所定义的表面活性剂。在一个实施方 案中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，尤其是聚山梨酯。在一个具体实施方案中，所 述表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80,尤其是聚山梨酯20。根据本发明方法获得的 HCLF中表面活性剂的浓度为至少0.01 g/L、至少0.02 g/L、至少0.03 g/L、至少0.04 g/L、 至少 0.05 g/L、至少 0.06 g/L、至少 0.07 g/L、至少 0.08 g/L、至少 0.09 g/L、至少 0.1 g/ L、至少 0.2 g/L、至少 0.3 g/L、至少 0.4 g/L、至少 0.5 g/L、至少 0.6 g/L、至少 0.7 g/L、 至少0. 8 g/L、至少0. 9 g/L或至少1. 0 g/L表面活性剂浓度。
[0127] 在一个实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF中表面活性剂的浓度在 0.01-0. 1 g/L，尤其是0.03 g/L至0.1 g/L的范围内。在该实施方案中，所述表面活性剂 尤其是聚山梨酯80。
[0128] 在另一个实施方案中，稀释后组合物中表面活性剂的浓度在0. 1-1. 0 g/L，尤其是 0. 1-0.3 g/L的范围内。在该实施方案中，所述表面活性剂尤其是聚山梨酯20。
[0129] 根据本发明方法获得的HCLF可进一步包含张力改性剂。所述张力改性剂可选自 NaCl、氯化钾、甘氨酸、甘油、盐、氨基酸、糖醇和糖。任选地，所述张力改性剂为糖或糖醇，例 如选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和葡萄糖。尤其是，所述张力改性剂为山梨醇 和/或甘露醇。在一个实施方案中，所述张力改性剂为山梨醇。所述缓冲液中张力改性剂 的浓度可以是本领域技术人员认为适合的任何浓度。尤其是，根据本发明方法获得的HCLF 可包含至少100 mM、至少150 mM、至少200 mM、至少220 mM、至少240 mM、至少260 mM、至 少280 mM、至少300 mM张力改性剂。任选地，根据本发明方法获得的HCLF中张力改性剂 的浓度在5.5 mM-550禮，尤其是100-300禮，更尤其是200-250 mM的范围内。在一个具 体实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF中张力改性剂的浓度为220 mM。在本发明的另 一个实施方案中，本发明的张力改性剂的浓度为至少270 mM。
[0130] 应理解，根据本发明方法获得的HCLF可进一步包含本领域技术人员认为有用的 任何其它药学上可接受的化合物。其它药学上可接受的化合物的实例包括药学上可接受的 赋形剂、添加剂、稀释剂、螯合剂、冻干保护剂、佐剂、递送溶媒和抗微生物防腐剂，可将其加 入以为最终制剂提供所需性质。此类额外化合物是本领域技术人员已知的并且可根据所需 性质进行选择。可在本领域技术人员认为适合的上述方法过程中在任何步骤加入它们。尤 其是，可在步骤c)的第一稀释步骤过程中加入其它药学上可接受的化合物。
[0131] 在一个实施方案中，根据本发明方法获得的HCLF进一步包含本领域技术人员认 为适合的浓度的精氨酸。加入精氨酸允许抗体进一步稳定和熔点升高。
[0132] 根据本发明的用于提供HCLF的方法的示例性实施方案示于图1至3中并详细描 述于【附图说明】中。
[0133] 在储存过程中，抗体制剂可能经历化学和/或物理降解，从而导致不想要的降解 产物例如聚集体。该降解可导致抗体的效力降低和增加不想要的副作用（例如不想要的免 疫应答）的风险，这可导致对监管部门批准药物产生显著影响。尤其是，在较高浓度的抗体 下，形成聚集体的倾向可显著增加。然而，现已发现，通过使用包含氨基酸的水溶液，抗-CD 20抗体或其片段可在高浓度下稳定和溶解于液体药物制剂中。氨基酸包括本领域技术人员 认为适合的任何氨基酸，例如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨 酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏 氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。尤其是，所述氨基酸应充当缓冲剂。在本发明的一个实施 方案中，水溶液包含组氨酸，任选L-组氨酸。应注意，对于组氨酸而言本文所提供的任何详 细说明也适用于L-组氨酸。
[0134] 在另一个方面，本发明因此涉及一种用于稳定液体药物制剂中至少155 mg/mL浓 度的抗-CD 20抗体或其片段的方法，所述方法通过将所述抗体或其片段（其事先不经受冻 干或冷冻干燥）与包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液混合进行。
[0135] 在一个其实施方案中，所述液体药物制剂包含至少160 mg/mL、至少175 mg/mL、至 少 180 mg/mL、至少 185 mg/mL、至少 190 mg/mL、至少 195 mg/mL、至少 200 mg/mL、至少 220 mg/mL、至少 240 mg/mL、至少 260 mg/mL、至少 280 mg/mL、至少 285 mg/mL 或至少 290 mg/ mL的维妥珠单抗抗体或其片段。在一个具体实施方案中，所述液体药物制剂包含至少160 mg/mL的维妥珠单抗抗体或其片段。在另一个具体实施方案中，所述液体药物制剂包含至少 175 mg/mL的维妥珠单抗抗体或其片段。在另一个具体实施方案中，所述液体药物制剂包含 至少200 mg/mL的维妥珠单抗抗体或其片段。在本发明的另一个实施方案中，本发明的液体 药物制剂包含 160-290 mg/mL、160-250 mg/mL、160-220 mg/mL、160-200 mg/mL 或 160-175 mg/mL的维妥珠单抗抗体或其片段。
[0136] 根据本发明的方法，所述抗体或其片段事先未经受冻干或冷冻干燥。如本文所用 的"冻干"涉及任何脱水方法，其中将制剂冷冻，随后减少环境压力以允许从冷冻的制剂中 升华冻结的水。此类方法可通过本领域已知的任何冻干方法进行。
[0137] 在根据本发明的方法中，将所述抗体或其片段与包含氨基酸（任选组氨酸）的水 溶液混合。如本文所用的，水溶液涉及溶剂为水的任何溶液。
[0138] 包含组氨酸的水溶液可包含仅组氨酸作为缓冲剂、组氨酸氯化物、组氨酸盐酸盐 一水合物、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐或组氨酸硫酸盐或其组合。尤其是，在本发明方法 中使用的包含组氨酸的水溶液包含仅组氨酸作为缓冲剂或组氨酸与组氨酸盐酸盐一水合 物的组合作为缓冲剂。
[0139] 除氨基酸之外，任选除上文提到的组氨酸之外或除上文提到的含有组氨酸的缓冲 剂的组合之外，包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液可包含至少一种其它治疗学上可接受 的缓冲剂。此类其它缓冲剂包括磷酸盐、乙酸盐（例如，乙酸钠）、琥珀酸盐（例如琥珀酸 钠）、葡糖酸盐、谷氨酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、本文提到的充当缓冲剂的其它氨基酸和其它 有机酸缓冲剂。
[0140] 包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液的pH值可以在4. 8至7. 0的范围内，尤其 是5. 0至6. 0的范围内。在一个实施方案中，包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液的pH值 可以是5. 5±2. 0、5. 5±1. 0、5. 5±0. 5、5. 5±0. 3或5. 5±0. 2。在一个具体实施方案中，在 本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液的pH值为5. 5±0. 3。在另一个 具体实施方案中，在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液的pH值为 5. 5±0. 2〇
[0141] 在本发明的一个实施方案中，在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸） 的水溶液包含30-60 mM氨基酸，任选组氨酸，尤其是30-45 mM氨基酸，任选组氨酸。在本发 明的另一个实施方案中，在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液包含 30 mM氨基酸，任选组氨酸，35 mM氨基酸，任选组氨酸，40 mM氨基酸，任选组氨酸，45 mM氨 基酸，任选组氨酸，50 mM氨基酸，任选组氨酸，55 mM氨基酸，任选组氨酸或60 mM氨基酸， 任选组氨酸。尤其是，在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液包含30 mM氨基酸，任选组氨酸。在另一个实施方案中，包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液包含至 少50 mM氨基酸，任选组氨酸。
[0142] 在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液可进一步包含张力改 性剂。所述张力改性剂可选自NaCl、氯化钾、甘氨酸、甘油、盐、氨基酸、糖醇和糖。任选地， 所述张力改性剂为糖或糖醇，例如选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和葡萄糖。尤 其是，所述张力改性剂为山梨醇、蔗糖和/或甘露醇。在一个实施方案中，所述张力改性剂 为山梨醇。在另一个实施方案中，所述张力改性剂为蔗糖。在另一个实施方案中，所述张力 改性剂为甘露醇。所述缓冲液中张力改性剂的浓度可以是本领域技术人员认为适合的任何 浓度。在本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液可包含至少4%、至少5%、 至少6%、至少7%、至少8%、至少9%或至少10%张力改性剂。在本发明的一个实施方案中，包 含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液包含5-8%张力改性剂。
[0143] 加入表面活性剂导致进一步减少形成降解产物，尤其是减少形成聚集体，从而有 助于稳定所述抗体制剂。因此，本发明方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液可 包含如本文所定义的表面活性剂。在一个实施方案中，所述表面活性剂为非离子表面活性 剂，尤其是聚山梨酯。在一个具体实施方案中，所述表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯 80,尤其是聚山梨酯20。在根据本发明的方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液 可包含本领域技术人员认为有用的任何量的表面活性剂，尤其是至少0. 01%、至少0. 02%、 至少0. 03%、至少0. 04%、至少0. 05%、至少0. 1%或至少1. 0 %表面活性剂。任选地，在根据 本发明的方法中使用的包含氨基酸（任选组氨酸）的水溶液包含至少〇. 01%表面活性剂。
[0144] 可根据上述方法进行稳定的抗-CD 20抗体的实例为维妥珠单抗、利妥昔单抗、 Ocrelizumab、奥法木单抗、Y9°替伊莫单抗、I 131托西莫单抗、TRU-015、AME_133v、人源化 PR0131921、GA101、1F5 IgG2a、HI47 IgG3、2C6 IgGl、2H7 IgGl、AT80 IgGl、llB8 IgGl、人 源化B-Lyl抗体IgGl和Aftuzumab(HuMab〈CD20>)或其片段。尤其是，用上述方法稳定的 抗-CD20抗体为维妥珠单抗或其片段。
[0145] 如本文所用的，与本发明抗体制剂有关的"稳定的"或"稳定化的"涉及在储存过 程中保持其化学稳定性和/或物理稳定性的抗体制剂。用于测定抗体制剂的稳定性的方法 是本领域已知的。尤其是，稳定的/稳定化的抗体制剂在室温下储存时保持其化学和/或 物理稳定性至少一个月，任选在25 °C下储存时保持至少三个月和/或在2-8°C下储存时保 持至少一年。
[0146] 在一个具体实施方案中，通过上述任一方法提供的抗-CD20抗体或其片段的液体 制剂包含 a) 至少160 mg/mL抗-CD20抗体或其片段，任选维妥珠单抗抗体或其片段； b) 220 mM山梨醇； c) 30 mM组氨酸； d) 0. 2 g/L聚山梨酯20 ;和 并具有在4. 8至7. 0的范围内，尤其是在5. 0至6. 0的范围内的pH值。在一个具体实 施方案中，上述液体制剂具有5. 5±0. 3的pH值。在另一个具体实施方案中，上述液体制剂 具有5. 5±0. 2的pH值。
[0147] 通过上述方法提供的抗-⑶20抗体或其片段的液体制剂适于长期储存并且为了 甚至提高储存期也可进行冻干。
[0148] 用于稳定抗-⑶20抗体的示例性方法示于下面实例中。
[0149] 进一步发现，可提供形成聚集体的趋势有所减小的包含至少155 mg/mL的维妥珠 单抗抗体或其片段的液体药物制剂。
[0150] 在一个方面，本发明因此涉及一种维妥珠单抗抗体或其片段的液体药物制剂，所 述液体药物制剂包含至少155 mg/mL维妥珠单抗抗体或其片段和氨基酸。氨基酸包括本领 域技术人员认为适合的任何氨基酸，例如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、 谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨 酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。尤其是，所述氨基酸应充当缓冲剂。在本发 明的一个实施方案中，所述液体药物制剂包含组氨酸，任选L-组氨酸。应注意，对于组氨酸 而言本文所提供的任何详细说明也适用于L-组氨酸。
[0151] 在一个其实施方案中，所述液体药物制剂包含至少160 mg/mL、至少175 mg/mL、至 少 180 mg/mL、至少 185 mg/mL、至少 190 mg/mL、