用于制备抗体的高浓度液体制剂的方法
【专利说明】用于制备抗体的高浓度液体制剂的方法
[0001] 本发明提供一种用于制备抗体的高浓度液体制剂（HCLF)的方法。本发明还涉及 一种用于稳定液体药物制剂中的抗-CD20抗体或其片段的方法。此外，本发明涉及一种维 妥珠单抗抗体或其片段的液体药物制剂和所述药物制剂作为药剂的用途。
[0002] 引言 治疗性蛋白质必须满足许多不同的标准，例如关于稳定性、给药和浓度，以满足监管部 门批准作为药物的要求。在制造过程中，可发生治疗性蛋白质例如抗体的储存和运输的化 学和/或物理降解，这可导致它们药物效力的损失和副作用（例如不想要的免疫应答）风 险的增加。
[0003] 许多治疗性蛋白质需要以高剂量施用以达到其所需的治疗效果。此外，治疗性蛋 白质的高浓度制剂是有利的，因为它们可允许向患者施用治疗性蛋白质的更方便模式。
[0004] 高浓度（例如至少100 mg/mL)的治疗性蛋白质是希望的，因为随着浓度增加，施 用治疗剂量所需的体积减少。较小的体积提供如下优点：它们可经由较少的侵入性途径 注射，例如皮下注射代替静脉内输注，这对于患者而言更方便并且潜在地与较少的副作用 (如输注反应）风险有关。高浓度制剂所提供的另一优点是它们可允许减少向患者施用治 疗性蛋白质的频率。
[0005] 然后，提供治疗性蛋白质（例如单克隆抗体）的高度浓缩的液体制剂是具有挑战 性的，因为液体制剂的粘度以及蛋白质形成聚集体的倾向在较高浓度下可显著增加。聚集 体可能含有蛋白质的降解产物并可导致不想要的副作用，例如触发不想要的免疫应答。为 了避免稳定性问题例如形成聚集体，可使用冷冻干燥。因此，许多批准的浓度高于100 mg/ mL的产品是冻干产物（lyophilisate)，其必须在施用前重构。然而，冷冻干燥是耗时和昂 贵的过程。此外，冻干产物的重构对于患者和药用个人而言较不方便以及容易出错。
[0006] 许多文件论述了高度浓缩的抗体制剂和/或用于提供其的方法： TO 03/039485描述了具有50 mg/mL或更大的抗体浓度的抗体的稳定液体药物制剂， 特别是达利珠单抗（抗-IL2受体抗体）、HAIL-12 (人源化抗-IL12抗体）、HuEP5C7 (人源 化抗-选择素单克隆抗体）和Flintozumab (人源化抗-y干扰素单克隆抗体）。然后，其 中没有公开根据本发明的维妥珠单抗抗体的高浓度液体制剂也没有公开用于提供抗体的 高浓度液体制剂的方法。
[0007] US 2012/0064086也描述了高度浓缩的抗体制剂，尤其是IgE抗体的HCLF，所述 HCLF具有降低的粘度。然而，所述文件没有公开如本文所述的包含维妥珠单抗抗体的抗体 制剂或用于制备抗体的高浓度液体制剂的方法。
[0008] W0 2011/029892涉及高度浓缩的、稳定的抗-⑶20抗体制剂。然后，它没有描述 如本文所公开的维妥珠单抗抗体的高度浓缩制剂或用于制备HCLF的方法。
[0009] W0 2004/001007描述了一种用于提供抗体的组合物的方法，所述抗体的组合物基 本上由抗体和组氨酸或乙酸盐缓冲液的水溶液组成，在2 mM至48 mM范围下。然而，其中 公开的方法不包括超滤至多达约280 mg/mL的步骤。
[0010] US 2012/0064086也公开了一种用于生产具有降低的粘度的高度浓缩抗体制剂的 方法，所述方法包括三个高温下进行的过滤步骤（即第一超滤步骤、渗滤步骤和第二超滤 步骤）。
[0011] 关于开发蛋白药物制剂的更常规考虑描述于微型综述"Challenges in the development of high protein concentration formulations" （Steven J. Shire，Zahra Shahrokh, Jun Liu Journal of Pharmaceutical Sciences，第 93 卷，第 6 期，2004 年 6 月， 1390-1402)中。
[0012] 因此，存在抗体的高浓度液体制剂以及提供此类抗体的高浓度液体制剂的方法的 需求。
[0013] 发明概沐 本发明的一方面涉及一种用于制备具有抗体浓度CH的抗体的高浓度液体制剂的方法， 包括步骤： a) 提供含有起始浓度Cs的抗体的溶液； b) 超滤步骤（a)的溶液以获得具有抗体中间浓度C1的溶液，其中C1为至少约260 mg/ mL ;和 c) 将步骤（b)的溶液稀释至抗体浓度CH以获得高浓度液体制剂。
[0014] 本发明的一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中步骤（a)的 溶液进一步含有缓冲剂，所述缓冲剂任选为氨基酸，例如组氨酸，特别是L-组氨酸。
[0015] 本发明的另一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，所述方法进 一步包括在步骤（a)与步骤（b)之间用缓冲溶液渗滤步骤（a)的溶液的步骤，其中缓冲剂 任选为氨基酸，例如组氨酸，特别是L-组氨酸。
[0016] 本发明的另一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中在步骤 (b)中经受超滤的溶液含有40 mM组氨酸并且具有5. 45的pH值。
[0017] 本发明的一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中在步骤（b) 中经受超滤的溶液基本上不含或不含有张力改性剂，例如蔗糖。
[0018] 本发明的另一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中在步骤 (b)中经受超滤的溶液基本上不含或不含有表面活性剂，例如聚山梨酯。
[0019] 本发明的另一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中所述抗 体为抗-CD20抗体和/或IgG抗体，任选所述抗体为维妥珠单抗抗体。
[0020] 本发明的一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中所述高浓 度液体制剂具有至少155 mg/mL的抗体浓度CH。
[0021] 本发明的一个实施方案涉及用于制备根据本发明的HCLF的方法，其中步骤（b)在 超滤装置中进行并且进一步包括在步骤（b)与步骤（c)之间用缓冲溶液冲洗超滤装置的步 骤，其中缓冲剂任选为氨基酸，例如组氨酸，特别是L-组氨酸。
[0022] 本发明的另一个方面涉及一种通过将未冷冻干燥的抗体或其片段与包含氨基酸 的水溶液混合来稳定液体药物制剂中浓度为至少155 mg/mL的抗-CD20抗体或其片段的方 法，所述氨基酸任选为组氨酸，特别是L-组氨酸。
[0023] 本发明的一个实施方案涉及一种用于稳定抗-CD 20抗体或其片段的方法，其中 所述抗-CD20抗体为维妥珠单抗抗体。
[0024] 本发明的另一个方面涉及一种维妥珠单抗抗体或其片段的液体药物制剂，所述液 体药物制剂包含至少155 mg/mL维妥珠单抗抗体或其片段和氨基酸，所述氨基酸任选为组 氨酸，特别是L-组氨酸。
[0025] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，其中维妥珠单抗抗体或其片段的浓度 为至少175 mg/mL，优选至少190 mg/mL。
[0026] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中维妥珠单抗抗体或其片段的浓 度为至少200 mg/mL，优选至少220 mg/mL。
[0027] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中氨基酸（任选为组氨酸，特别 是L-组氨酸）的浓度在1 mM至100 mM的范围内。
[0028] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中氨基酸（任选为组氨酸，特别 是L-组氨酸）的浓度在10 mM至60 mM的范围内，任选在20 mM至50 mM的范围内。
[0029] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，所述液体药物制剂进一步包含表面活 性剂，任选为非离子表面活性剂。
[0030] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，其中所述表面活性剂（任选为非离子 表面活性剂）为聚山梨酯，任选为聚山梨酯20或聚山梨酯80。
[0031] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中所述表面活性剂（任选为非离 子表面活性剂）以至少0. 01 mg/mL的浓度存在，任选在0. 1 mg/mL至1 mg/mL的范围内。
[0032] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，所述液体药物制剂进一步包含张力改 性剂。
[0033] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中所述张力改性剂为山梨醇和/ 或甘露醇，任选所述张力改性剂的浓度在5. 5 mM至550 mM的范围内。
[0034] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，所述液体药物制剂具有4. 8至7. 0范 围内的pH值，任选5.5 ± 0.3的pH值。
[0035] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，所述液体药物制剂包含 a) 至少160 mg/mL维妥珠单抗抗体或其片段； b) 220 mM山梨醇； c) 30 mM组氨酸； d) 0? 2 mg/mL聚山梨酯20 ;并且 具有5. 0至6. 0范围内的pH值，任选5. 5±0. 3。
[0036] 本发明的另一个实施方案涉及用作药剂的液体药物制剂。
[0037] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其中药剂用于皮下施用。
[0038] 本发明的一个实施方案涉及液体药物制剂，其用于治疗癌症或非恶性疾病，任选 为炎性或自身免疫性疾病，包括III类自身免疫性疾病。
[0039] 本发明的另一个实施方案涉及液体药物制剂，其用于治疗选自以下的疾病：伯基 特淋巴瘤、EB病毒感染、B细胞白血病、慢性淋巴细胞性B细胞白血病、急性淋巴细胞性白 血病、淋巴白血病、幼淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、边缘 区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、免疫母细胞型大细胞淋巴瘤、套 细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿、浆细胞瘤、前体细胞淋巴细胞白血病-淋 巴瘤、肿瘤病毒感染、华氏巨球蛋白血症、免疫增生性障碍、幼淋巴细胞淋巴瘤、弥漫性大B 细胞淋巴瘤、免疫母细胞型大细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿、淋巴增生性障 碍、异型蛋白血症、前体细胞淋巴细胞白血病-淋巴瘤、血小板减少性紫癜、特发性血小板 减少性紫癜、血液凝固障碍、血小板疾病、血蛋白病、血液病、出血性障碍、凝血障碍、淋巴疾 病、紫癜、血小板减少、血栓性微血管病、凝血障碍、血管疾病、系统性红斑狼疮（SLE)、狼疮 (例如狼疮性肾炎、非肾狼疮、盘状狼疮、狼疮脱发）（Lupus (e.g. nephritis, non-renal, discoid, alopecia))、青少年发作型糖尿病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、风湿性疾 病、结缔组织疾病、疱瘆病毒感染和/或DNA病毒感染。
[0040] 附图简要说明 图1显示根据本发明用于提供HCLF而无上游渗滤（DF)步骤的示例性方法。该实例中 的最终产品具有5. 5的pH值且包含30 mM组氨酸（His)。为抵消超滤（UF)期间的唐南效 应，可在起始材料中调节较高的组氨酸浓度和较低的pH值。由于所谓的唐南效应，能够通 过UF膜的带电分子在溶液中耗尽（例如在本实例中）或集中，这取决于与不能穿过膜的蛋 白质的电荷有关的电荷符号。带正电荷的组氨酸的耗尽伴随着溶液pH变化。包含5 g/L 维妥珠单抗和40 mM组氨酸且具有5. 45的pH值的药物物质整体（bulk drug substance) 可用作起始材料。起始材料经受超滤步骤。在超滤步骤中，将维妥珠单抗浓缩至多达大约 285 g/L的浓度。达到该浓度后，可用包含40 mM组氨酸且具有5. 45的pH的渗滤缓冲液冲 洗超滤装置。这可使通过本文所述的方法获得的抗体的收率最大化。该实例中由此获得的 药物产品混合物（drug product pool)具有195 g/L维妥珠单抗的浓度、5. 5的pH值且包 含大约30 mM组氨酸。随后，可用包含30 mM组氨酸、2.2 M山梨醇、2 g/L聚山梨酯且具有 5. 5的pH值的所谓的10倍聚山梨酯-山梨醇掺料（spike)缓冲溶液进行进一步的稀释步 骤。聚山梨酯-山梨醇掺料缓冲溶液包含最终产品中聚山梨酯和山梨醇的所需浓度的10倍 浓度。该实例中所得到的药物产品混合物包含175 g/L维妥珠单抗、30 mM组氨酸、220 mM 山梨醇、0.2 g/L聚山梨酯20且具有5. 5的pH值。然后，可通过用包含30 mM组氨酸、220 mM山梨醇和0. 2 g/L聚山梨酯20且具有5. 5的pH值的所谓的1倍制剂缓冲溶液稀释将药 物产品最终调整至所需浓度。所述制剂缓冲溶液包含与最终药物产品混合物相似的聚山梨 酯和山梨醇浓度（即1倍浓度）。该实例中的最终药物产品混合物包含160 g/L维妥珠单 抗、30 mM组氨酸、220 mM山梨醇和0. 2 g/L聚山梨酯20且具有5. 5的pH值。
[0041] 图2中公开的本发明的另一个示例性方法与图1中公开的方法的不同之处在于， 起始材料包含5 g/L维妥珠单抗和10 mM组氨酸且具有5. 5的pH值。在超滤之前进行渗 滤步骤，其中通过使用包含40 mM组氨酸且具有5. 45的pH的渗滤缓冲溶液交换缓冲液8 倍体积，从而通过除去前缓冲组合物平衡最终溶液。随后进行的步骤与图1所示的示例性 方法中进行的步骤一致。
[0042] 图3中公开的本发明的示例性方法与图1中公开的方法的不同之处在于，起始材 料包含60 g/L维妥珠单抗、120 mM蔗糖和10 mM组氨酸且具有5. 5的pH值。在超滤之前 进行渗滤步骤。由此除去蔗糖。然后，通过使用包含40 mM组氨酸且具有5. 45的pH的渗 滤缓冲溶液交换缓冲液8倍。随后进行的步骤与图1所示的方法中进行的步骤一致。
[0043] 图4显示制剂优化的响应等值线图（Response Contour Plot) ;2_8°C下六个月后 的聚集（以绝对抗体量％表示）。
[0044] 定义 如果术语"包含（comprise或comprising) "在本说明书和权利要求书中使用，它不排 除其它元素或步骤。对于本发明的目的，术语"由…组成"被认为是术语"包括"的任选实 施方案。如果在下文中组被定义为包含至少某种数量的实施方案，这也被理解为公开了任 选仅由这些实施方案组成的组。
[0045] 如果使用不定冠词或定冠词，当提及单数名词例如"一（a)"或"一（an)"、"所述 (the) "时，这包括该名词的复数形式，除非特别说明。
[0046] 反之亦然，当使用名词的复数形式时，它也指单数形式。例如，当提到抗-⑶20抗 体（anti-⑶20 antibodies)时，这也被理解为单个抗-⑶20抗体。
[0047] 此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三或（a)、（b)、（c)等用于区分 相似元素而不一定用于描述相继或时间次序。应理解，如此使用的术语在适当的情况下可 互换并且本文描述的本发明的实施方案能够以不同于本文描述或说明的其它顺序进行操 作。然而，在本发明的一个具体实施方案中，方法步骤（a)、（b)和（c)(任选包括本文限定 的任何中间步骤）以时间次序进行。
[0048] 在本发明的上下文中，所指出的任何数值通常与准确度的间隔相关，其中本领域 技术人员将理解其仍确保所讨论特征的技术效果。如本文所用的，所指出的数值偏差在土 10%的范围内，且优选在± 5%的范围内。所指出的数字间隔的± 10%且优选± 5%的前 述偏差也由关于数值本文所用的术语"约"和"大约"表示。
[0049] 如本文所用的"基本上不含"表示所标识的组分不以在用于其检测的典型条件下 可检测到的量存在。此外，"基本上不含"也包括所述组分不以对组合物或制剂的所需性质 产生不利影响的量存在，即所标识的化合物以可忽略的量存在。<