A。在运些或其它实施方案中，寡核巧酸可W 包含与miR-145种子区基本上或完全互补的区域或序列，其中该区域或序列包含至少1、2、 3、4、5、或6个锁定核酸（LNA)。
[0069]寡核巧酸一般含有至少5、至少7、或至少9个LNA。在多个实施方案中，寡核巧酸 不是完全由LNA构成。在一些实施方案中，寡核巧酸包含LNA和非锁定核巧酸的混合物。例 如，寡核巧酸可化含有至少5或至少7或至少9个锁定核巧酸，和至少一个非锁定核巧酸。 在多个实施方案中，寡核巧酸含有至少9个锁定核巧酸。例如，寡核巧酸可化含有至少9个 锁定核巧酸和至少7个非锁定核巧酸。
[0070] 本发明的寡核巧酸可W包含至少5个LNA、在序列的5'端的LNA、在序列的3'端 的LNA、或其任何组合。在一个实施方案中，寡核巧酸包含至少5个LNA、在序列的5'端的 LNA、在序列的3'端的LNA、或其任何组合，其中3个或更少的核巧酸是连续的LNA。例如，寡 核巧酸包含不超过3个连续的LNA。寡核巧酸可W包含具有至少5个LNA、在5'端的LNA、 在3'端的LNA、且不超过3个连续LNA的序列。寡核巧酸可W包含具有至少5个LNA、在5' 端的LNA、在3'端的LNA、且不超过3个连续LNA的序列，其中该序列的长度是至少16个核 巧酸。
[0071] 在一些实施方案中，寡核巧酸包含16聚体，其中16聚体由16个核巧酸组成。在一 些实施方案中，16聚体包含与miR-145种子区互补的序列。16聚体可W包含至少9个LNA。 在一些实施方案中，16聚体含有9个LNA和7个非锁定核巧酸。在一些实施方案中，从16 聚体的5'端至3'端，16聚体的1、5、6、9、10、11、13、15、和16位；1、2、6、8、10、11、13、15、和 16位；1、5、6、8、10、11、13、14、和16位；1、3、4、5、6、8、10、13、和16位；1、3、4、7、8、10、12、 14、和16位；1、2、6、7、10、11、12、14、和16位；1、3、5、7、9、11、13、15、和16位；1、4、5、7、9、 10、12、14、和16位；orl、5、6、8、10、ll、13、15、和16位是LNA。16聚体可W与miR-145基 本上或完全互补，其中基本上互补的序列可W具有1至4个错配（例如1或2个错配）。在 一些实施方案中，寡核巧酸选自表1，诸如M-10934、M-11239、M-11241、M-11242、M-11244、 M-11318、M-11319、M-11320、或M-11321。
[0072] 对于非锁定核巧酸，就2'径基而言，核巧酸可化含有2'修饰。例如，2'修饰可W 是2'脱氧基。在反义寡核巧酸中渗入2'-修饰的核巧酸可W提高寡核巧酸对核酸酶的抗 性及其与互补RNA的热稳定性两者。在2'位的各种修饰可W独立选自如下那些修饰，该修 饰提供升高的核酸酶敏感性，而不损害与RNA祀物或细胞机器的分子相互作用。此类修饰 可W基于其在升高的体外或体内效力选择。本文中描述了用于测定升高的miR-145抑制的 效力（例如IC50)的例示性方法，包括双重蛋光素酶测定法和体内miR-145表达或祀物去 阻抑。
[0073] 在一些实施方案中，2'修饰可W独立选自0-烷基（其可W是取代的）、面素、和 脱氧基（H)。在某些实施方案中，非锁定核巧酸的基本上所有或所有核巧酸2'位可W是修 饰的，例如如独立选自0-烷基（例如0-甲基）、面素（例如氣）、脱氧基（H)、和氨基。例 如，2'修饰可W各自独立选自0-甲基和氣。在例示性的实施方案中，嚷岭核巧酸各自具有 2'OMe,而喀晚核巧酸各自具有2' -F。在某些实施方案中，1至约5个2'位，或约1至约3 个2'位保持未修饰（例如作为2'径基）。
[0074] 根据本发明的2'修饰还包括小碳氨化合物取代基。碳氨化合物取代基包括烷基、 締基、烘基、和烷氧基烷基，其中烷基（包括烷氧基的烷基部分）、締基和烘基可W是取代的 或未取代的。烷基、締基和烘基可W是Cl至ClO烷基、締基或烘基，诸如CUC2、或C3。碳 氨化合物取代基可W包含1或2或3个非碳原子，其可W独立选自N、0、和/或S。2'修饰 可W进一步包含烷基、締基、和烘基，如0-烷基、0-締基、和0-烘基。
[007引根据本发明的例示性2'修饰包括2' -0-烷基（C1-3烷基，诸如2'OMe或2'OEt)、 2' -0-甲氧基乙基（2' -O-M犯）、2' -0-氨基丙基（2' -0-AP)、2' -0-二甲基氨基乙基 (2' -0-DMA0E)、2' -O-二甲基氨基丙基（2' -0-DMAP)、2' -O-二甲基氨基乙基氧基乙基 (2' -0-DMAE0E)、或 2' -O-N-甲基乙酷氨基（2' -0-NMA)取代。
[0076]在某些实施方案中，寡核巧酸含有至少一个2'-面素修饰（例如替换2'径基）， 诸如2'-氣、2'-氯、2'-漠、和2'-舰。在一些实施方案中，2'面素修饰是氣。寡核巧酸 可化含有1至约5个2'-面素修饰（例如氣），或1至约3个2'-面素修饰（例如氣）。在 一些实施方案中，寡核巧酸含有非锁定位置处的所有2'-氣核巧酸，或在所有非锁定喀晚 核巧酸上的2'-氣。在某些实施方案中，2'-氣基团独立是二甲基化、=甲基化、或未甲基 化的。
[0077]寡核巧酸可W具有一个或多个2'-脱氧基修饰（例如对于2'径基为H)，并且在 一些实施方案中，含有非锁定位置处的2至约10个2'-脱氧基修饰，或者含有所有非锁定 位置处的2'脱氧基。
[0078]在例示性的实施方案中，寡核巧酸含有在非锁定位置处修饰为2'OMe的2'位。或 者，非锁定嚷岭核巧酸在2'位修饰为2'OMe,非锁定喀晚核巧酸在2'位修饰为2'-氣。
[0079]某些实施方案中，寡核巧酸进一步包含至少一个末端修饰或"帽"。帽可W是5'和 /或3'帽结构。术语"帽"或"帽端"包括在寡核巧酸任一末端（就末端核糖核巧酸而言） 的化学修饰，并且包括在5'端上最后两个核巧酸与3'端上最后两个核巧酸之间连接处的 修饰。如本文中描述的帽结构可W增加寡核巧酸对外切核酸酶的抗性，而不损害与miRNA 祀物（即miR-145)或细胞机器的分子相互作用。运类修饰可W基于其升高的体外或体内 效力来选择。帽可W存在于5'端（5'帽）或3'端（3'帽），或者可W存在于运两端上。在 某些实施方案中，5'和/或3'帽独立选自单憐酸硫代憐酸醋、无碱基残基（模块）、硫代憐 酸醋连接、4'-硫基核巧酸、碳环核巧酸、二硫代憐酸醋连接、反向核巧酸或反向无碱基模块 (2' -3'或3' -3')、单憐酸二硫代憐酸醋及麟酸甲醋模块。当硫代憐酸醋或二硫代憐酸醋 连接为帽结构的一部分时，其通常定位于5'端上的两个末端核巧酸与3'端上两个末端核 巧酸之间。
[0080]在某些实施方案中，寡核巧酸具有至少一个末端单憐酸硫代憐酸醋。单憐酸硫代 憐酸醋可W通过抑制外切核酸酶的作用来支持较高的效力。单憐酸硫代憐酸醋可W在寡核 巧酸的5'和/或3'端处。单憐酸硫代憐酸醋通过W下结构定义，其中B为碱基，并且R为 如上文所描述的2'修饰：
[0082] 5'单憐酸硫代憐酸醋
[0083]
[0084] 3'单憐酸硫代憐酸醋
[0085] 在帽结构可W支持锁定核巧酸化学的情况中，帽结构可W渗入LNA中，如本文中 描述的。
[0086] 在一些实施方案中，硫代憐酸醋连接可W在诸如5'和3'端上的最后两个核巧酸 之间（例如，作为帽子结构的一部分），或作为与憐酸二醋键交替存在。在运些或其它实施 方案中，寡核巧酸可W在5'和3'端的任一或两者处含有至少一个末端无碱基残基。无碱基 模块不含公认的嚷岭或喀晚核巧酸碱基，诸如腺巧、鸟嚷岭、胞喀晚、尿喀晚或胸腺喀晚。如 此，运类无碱基部分在1'位处缺乏核巧酸碱基或具有其它非核巧酸碱基化学基团。例如， 无碱基核巧酸可W是反向无碱基核巧酸，例如，其中反向无碱基亚憐酷胺是经由5'亚酷胺 (amidite)(替代3'亚酷胺）偶联，产生5'-5'憐酸醋键。W下显示了多核巧酸的5'和3' 端的反向无碱基核巧的结构。
[0088] 寡核巧酸可W含有一个或多个硫代憐酸醋连接。硫代憐酸醋连接已经用于使寡核 巧酸对核酸酶切割更有抗性。例如，多核巧酸可W是部分硫代憐酸醋连接的，例如，硫代憐 酸醋连接可W与憐酸二醋连接交替。然而，在某些实施方案中，寡核巧酸是完全硫代憐酸醋 连接的。在其它实施方案中，寡核巧酸具有约1个至5个或约1个至约3个憐酸醋连接。
[0089] 在一些实施方案中，核巧酸具有一个或多个经簇酷氨基（carboxamido)修饰的碱 基，如PCT/US11/59588 (其通过提及在此收录）中描述，包含关于用杂环取代基进行的其中 所公开的所有例示性喀晚簇酷氨基修饰。
[0090] 通过固相合成的寡核巧酸（包括经修饰的多核巧酸）合成是公知的，并且综述于 New Chemical Methodsfor SynthesizingPolynucleotides〇Caruthers MH, Beaucage SL, Efcavitch JW, Fisher EF,Matteucci MD, Stabinsky Y. Nucleic Acids Symp. Ser.1980;(7):215-23。
[0091] 可W将寡核巧酸渗入多种大分子装配体或组合物中。此类供投递用的复合物可 W包含经配制用于投递至患者的多种脂质体、纳米粒子和胶束。复合物可W包括一个或多 个促融性（化SOgeniC)或亲脂性分子W起始细胞膜穿透。运些分子记载于例如美国专利 No. 7, 404, 969和美国专利No. 7, 202, 227,其通过全文引用的方式并入本文中。或者，寡核 巧酸可W进一步包含悬垂的亲油基团W辅助细胞投递，诸如WO2010/129672 (其通过提及 并入本文）中记载的基团。
[0092] 本发明还提供了用于将本文中公开的寡核巧酸投递至细胞（例如作为本文中描 述的组合物或配制剂的部分）W降低或抑制细胞中的miR-145活性的方法。细胞可W是平 滑肌细胞。本文中还提供了用于抑制平滑肌细胞增殖的方法，其包括使平滑肌细胞与本文 中公开的寡核巧酸接触。细胞可W是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，细胞是肺或屯、脏 细胞。细胞可W是体内或离体的。
[0093] 本文中还提供了用于在受试者中治疗状况、减缓状况或预防状况进展的方法，其 包括施用包含本文中公开的寡核巧酸的药物组合物。方法一般包括对受试者施用寡核巧酸 或包含寡核巧酸的组合物。术语"受试者"或"患者"指任何脊椎动物，包括但不限于人和其 它灵长类（例如黑猩猩和其它猿和猴物种）、耕作动物（farmanimals)(例如牛、绵羊、猪、 山羊和马）、家养哺乳动物（例如犬和猫）、实验室动物（例如晒齿类，诸如小鼠、大鼠、和豚 鼠）、禽类（例如家养、野生和游戏禽类，诸如鸡、火鸡和其它譜鸡类禽类、鸭、碟等）。在一 些实施方案中，受试者是哺乳动物。在其它实施方案中，受试者是人。
[0094] 受试者可W具有与/由miR-145表达有关、介导、或导致的状况，诸如新血管内膜 形成或再狭窄。miR-145是平滑肌组织中富含的，并且可W调节平滑肌增殖。在一个实施方 案中，用于抑制或降低新血管内膜形成或再狭窄（诸如在血管损伤后）的方法包括对有此 需要的受试者施用寡核巧酸或包含寡核巧酸的组合物。
[0095] 在另一个实施方案中，状况是肺动脉高血压（PAH)。在一个实施方案中，本发明提 供了在有此需要的受试者中治疗或预防肺高血压（特别是PAH)的方法，其包括对受试者施 用miR-145表达和/或活性抑制剂。在肺中的肺动脉变得狭窄、阻塞或损伤，引起动脉压升 高时产生肺高血压。右屯、室上增强的工作负荷对屯、肌引起张力，并且可W导致屯、力衰竭。 PAH的症状包括但不限于呼吸短促（最初在锻炼时并且最终在休息时）、疲劳、头晕或昏厥 发作（faintingspells)、胸部压力（chestpressure)或疼痛、下肢（踩和腿）及腹部肿 胀、皮肤和嘴唇青色化Iuishcolortoskinandlips)、和空转脉冲（racingpulse)或屯、 惇化eartpalpitation)。优选地，与不接受治疗的受试者相比，在施用miR-145抑制剂后 的患有PAH的受试者中，一种或多种前述症状是改善或消除的，或者PAH的形成是延迟的。 在一些实施方案中，受试者中的右屯、室收缩压在施用miR-145抑制剂后是降低的。
[0096] 可W用本发明的方法治疗的肺高血压形式包括但不限于特发性PAH、遗传性或家 族性PAH、和继发性肺高血压（例如源自肺栓子、肺气肿、肺纤维化、和先天性屯、脏病的高血 压）。PAH的家族性或遗传性形式已经与某些基因中的突变联系起来。例如，70%具有PAH的可遗传形式的患者具有编码骨形态发生蛋白度MP)2型受体度MPR2)的基因中的突变 (Morrell等，2001)。如此，在一些实施方案中，要用本发明的方法治疗的受试者有风险形 成PAH。在一个实施方案中，有风险的受试者（例如人）具有编码BMPR2的基因中的突变。
[0097] 在另一个实施方案中，状况是高血压，包括系统性高血压。高血压可W是任何类 型，包括原发性或本质性（essential)高血压、继发性高血压、恶性高血压、孤立性收缩期 高血压、或抗性高血压。原发性高血压是最常见的类型，并且似乎没有可鉴定的原因。继 发性高血压一般由可逆的因素引起。在一些实施方案中，继发性高血压由肾损伤、肿瘤、肾 上腺过度活性、甲状腺功能障碍、主动脉收缩、妊娠相关状况、睡眠呼吸暂停、药物、食物、或 饮料引起。恶性高血压是最重度的形式，并且可W是进行性的。在一些病例中，恶性高血压 可W导致屯、力衰竭、肾损伤或脑出血、或死亡。一般地，恶性高血压由癌症或恶性引起。孤 立性收缩期高血压是在收缩血压一贯高于160mmHg,并且舒张血压低于90mm化时，并且 可W来自年龄相关的动脉弹性丧失，其可W是由于动脉硬化所致。在血液不能降低到低于 140/99mmHg(尽管有=重药物方案）时，高血压通常分型为抗性高血压。
[0098] 在一个实施方案中，本发明提供了用于在有此需要的受试者中治疗或预防高血压 (诸如原发性高血压、继发性高血压、恶性高血压、孤立性收缩期高血压、或抗性高血压的方 法，其包括对受试者施用miR-145表达和/或活性的抑制剂。
[0099] 本发明进一步提供了包含本文中公开的寡核巧酸的药物组合物。在涵盖临床应用 的情况中，会W适合于意图应用的形式制备药物组合物。一般地，运将必需制备基