液的灭菌粉(例如 冻干粉）。优选地，冻干粉还可含有常用的药学可接受添加剂，只要添加剂不抑制IL-22二聚 体的功能。代表性的添加剂包括(但不限于）：缓冲剂、PH调节剂。优选地，用于溶解冻干粉的 溶剂包括(但不限于)葡萄糖溶液、氯化钠溶液。
[0192] 在一些实施方式中，本文所述IL-22二聚体可静脉内施用，例如静脉内推注或静脉 内输注。
[0193] 用于局部施用的本发明IL-22二聚体形式包括软膏剂、粉剂、贴剂、喷射剂和吸入 剂。在无菌条件下，活性成分可以与生理可接受载剂及任何防腐剂、缓冲剂、或必要时的推 进剂一起混合。
[0194] 本发明的IL-22二聚体可以单独施用，或者与任何其它药学可接受化合物联合施 用。
[0195] 含有本发明IL-22二聚体的微胶囊可用作持续释放系统。重组蛋白质的持续释放 微胶囊系统已成功应用于重组人生长激素(rhGH)、重组人干扰素(rhIFN)、IL-2和MNrgpl20 (Johnson等，Nat.Med.,2:795-799(1996);Yasuda，Biomed.Ther 27:1221-1223(1993);W0 97/03692,WO 96/40072,WO 96/07399；US 5,654,010)〇
[0196] 本发明IL-22二聚体的持续释放系统可用具有优秀生物相容性和宽泛生物可降解 性的聚(乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)制备。PLGA的降解产物，乳酸和乙醇酸在人体中能很快清 除。而且，该聚合物的降解性可随其分子量和组成而从几个月到几年变化（Lewis， "Controlled release of bioactive agents form lactide/glycolide polymer，''in: M.Chasin and R.Langer(Eds.),Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker:New York,1990),pp.1-41))〇
[0197] 本发明的药物组合物的剂量和浓度可根据实际使用情况而调整。本领域技术人员 应知道如何根据实际需求去选择合适的施用剂量和途径。对于不同物种如小鼠和人之间的 调整原则可参见Mordenti ,J.和Chappell ,W. "The use of interspecies scaling in toxicokinetics"In Toxicokinetics and New Drug Development,Yacobi等；Pergamon Press,New York 1989,pp.42-96。
[0198] 本发明也提供在合适的包装中包含本文所述组合物的制品。适合于本文所述组合 物的包装在本领域是已知的，包括例如管形瓶(如密封管形瓶）、容器(如密封容器）、安瓿、 瓶、罐、软包装(例如密封的迈拉(Mylar)或塑料袋）、诸如此类。可以进一步灭菌和/或密封 这些制品。也提供包含本文所述组合物的单位剂型。这些单位剂型可以以单个或多个单位 剂量保存在合适的包装中，并且也可以进一步灭菌和密封。
[0199] 本发明也提供包含本文所述组合物(或单位剂型和/或制品）的药盒，并且可以进 一步包括使用组合物的方法的说明书，如本文进一步描述的使用。在一些实施方式中，本发 明的药盒包括上文描述的包装。在其它实施方式中，本发明的药盒包括上文描述的包装。本 文所述药盒可以进一步包括从商业和使用者的观点而言需要的其它材料，包括其它缓冲 剂、稀释剂、滤器、针、注射器、以及带有关于实施本文所述任何方法的说明书的包装插页。
[0200] 本发明的主要优点包括，但不限于：
[0201] 1.与IL-22单体相比，在体内IL-22二聚体的生物活性显著强于IL-22单体。
[0202] 2.IL-22二聚体在动物模型中已证实有效预防和/或治疗胰腺炎。IL-22二聚体能 够显著降低患有胰腺炎的个体中血清淀粉酶和/或脂肪酶的水平，在体内减轻胰腺水肿，在 体内抑制胰腺腺泡细胞和/或脂肪细胞的坏死以及减轻炎症细胞浸润。在等摩尔IL-22剂 量，与IL-22单体相比，IL-22二聚体在胰腺炎动物模型中显示更好的治疗功效。
[0203] 3.首次令人惊讶地发现，静脉内注射IL-22二聚体显示卓越的耐受性和安全性，而 皮下注射IL-22二聚体导致注射部位迟发的不良事件。
[0204] 4.IL-22二聚体在人体内具有显著的生物学活性，显著提高血清CRP、SAA水平，降 低血清TG水平。
[0205] 5.施用IL-22二聚体在人体内未导致炎性细胞因子的血清水平上升。应理解，本文 所述发明的方面和实施方式包括"由……组成"和/或"基本上由……组成"的方面和实施方 式。
[0206] 本文中提到"大约"一个值或参数包含（和描述）指向该值或参数本身的变化。例 如，提到"大约X"的描述包含"X"的描述。
[0207] 如本文和所附权利要求书中所用，除非上下文另有明确说明，单数形式"一个"、 "或"、和"所述"包含复数所指物。应理解，本文所述发明的方面和变化包括"由……组成" 和/或"基本上由……组成"的方面和变化。
[0208] 下面的例示性实施方式进一步描述本发明。虽然说明书提到了特定实施方式，但 是本领域技术人员会清楚，可以对本发明实施这些具体细节的改动。因此，本发明不应解读 为限于本文所列实施方式。而且，对于未描述实验方法细节的实施方式，此类方法按照常规 条件来进行，如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中描述的或制造商建议的。 实施例
[0209] 实施例1: IL-22或IL-22二聚体对C〇1〇205细胞的增殖作用 [0210]〇)1〇205细胞培养于1^01640 10%?83培养基中，细胞生长至对数期。弃上清，加 入I3BS洗去残留培养基，加入2-5mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化。加入培养基，通过吹打混合 均匀。混合物1500rpm离心5分钟，收集细胞，然后用基础培养基配制成5.0 X IO5个细胞/mL 的细胞悬液。于96孔板各孔分别添加 IOOyL/孔悬液，于37 °C、5 %⑶2培养箱中过夜。次日，取 出CO2培养箱中的96孔板，于4°C 800rpm离心5分钟。从各孔抽出细胞上清液90yL，并补入90 yL 0.1 %BSA/RPMI1640，加入IL-22二聚体（由两个单体亚基组成，每个单体亚基包含SEQ ID N0:4所示序列）至终浓度l·4、4·l、12·3、37·0、lll·l、333·3、1000、3000ng/mL，加入IL-22(rhIL-22，即重组人IL-22)至终浓度0·01、0·04、0·12、(h37、l·l、3·3、10、30ng/mL。混合 物于37°C，5 %⑶2培养箱中温育20小时，收集细胞上清液，采用IL-22ELISA试剂盒(R&D，产 品目录号S1000B)测试OD值。
[0211] 如图4所示，IL-22二聚体的半数有效浓度(EC50)值为229ng/mL(2,675pM)，IL-22 的EC50为0.54ng/mL(32.4pM)。在体外活性实验中，IL-22二聚体的生物活性远低于IL-22单 体。
[0212] 实施例2:IL-22或IL-22二聚体对C〇1〇205细胞中STAT3的激活作用
[0213] C〇1〇205细胞培养于RPMI1640 10%FBS培养基中，细胞生长至对数期。弃上清，加 入I3BS洗去残留培养基，加入2-5mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化。加入培养基，通过吹打混合 均匀。混合物1500印111离心5分钟，收集细胞，然后用基础培养基1^01640配制成2.0\105个 细胞/mL的细胞悬液。悬液于96孔板各孔分别添加 lOOyL/孔，于37 °C、5 % CO2培养箱温育6小 时。悬液用不同浓度的rhIL-22或IL-22二聚体（由两个单体亚基组成，每个单体亚基包含 SEQ ID N0:4所示序列）处理1小时。弃上清，在各孔中加入40yL细胞裂解缓冲液（Cell Signal ling，产品目录号9803S)。离心收集上清。采用Bradford法测定蛋白质浓度。采用 ELISA法STAT3[pY705]phosphor ELISA试剂盒（Invitrogen，产品目录号KH00481)测量 PSTAT3磷酸化水平。通过检测得到的pSTAT3浓度除以蛋白质浓度来计算pSTAT3含量。
[0214] 如图5所示，IL-22二聚体激活STAT3的半数有效浓度（EC50)值为119.5ng/mL (1394pM，使用IL-22二聚体的理论分子量85 · 7KD计算），IL-22的EC50为0 · 14ng/mL(6 · 9pM， 使用IL-22的分子量16.7KD计算）。
[0215] 实施例3: IL-22二聚体在SD大鼠器官组织中的分布
[0216] 18只SD大鼠随机分成三组，每组6只动物（雌雄各半）。动物接受尾静脉注射125I- IL-22二聚体（由两个单体亚基组成，每个单体亚基包含SEQ ID NO:4所示序列）（Iodogen法 标记），剂量为30yg/kg。动物分别于注射后2、24和48小时处死。收集器官组织，称重，直接测 量放射性计数。计算每克组织的放射性计数。
[0217] 结果表明：注射后48小时内，IL-22二聚体稳定存在于胰腺内。如图6所示，IL-22二 聚体注射后24、48小时在胰腺中的浓度分别下降至2小时浓度的56%、21%<JL-22二聚体注 射后24小时和48小时在肝脏中的浓度分别下降至2小时浓度的28%和9%。注射后2小时， IL-22二聚体在胰腺中的浓度为肝脏中的浓度的大约1/5。
[0218] 实施例4: IL-22二聚体在食蟹猴器官组织中的分布
[0219] 食蟹猴3只，雄性，体重4.3-4.6kg，接受静脉内注射IL-22二聚体（由两个单体亚基 组成，每个单体亚基包含SEQ ID NO: 4所示序列），剂量为100yg/kg。注射后2小时处死动物。 收集器官组织，于液氮保存。然后称取组织，加入裂解缓冲液裂解，制备组织匀浆液。离心， 取上清测定蛋白质浓度。用ELISA法(人IL-22ELISA试剂盒，Biolegend，产品目录号434506) 测量IL-22二聚体在组织中的浓度。
[0220]结果表明：IL-22二聚体在胰腺中的浓度相当低(大约0.76ng/mg蛋白质）。如图7所 示，该浓度远低于IL-22二聚体在肝脏中的浓度(肝脏中的浓度的大约1/5)。
[0221] 实施例5: IL-22二聚体在健康人类受试者中的临床安全性
[0222] 方法：
[0223] 入组健康男性志愿者，随机分成6个剂量组：
[0224] 安慰剂组(n = 8):经静脉内输注接受单剂等体积的5%葡萄糖/盐水。
[0225] IL-22二聚体2.0yg/kg SC给药组(n = 6)(SC组）：接受单剂皮下2.0yg/kg IL-22二 聚体。
[0226] IL-22二聚体2 · Oyg/kg IV给药组(n = 6) (IV组）：IL-22二聚体溶于 100mL5 % 葡萄 糖/盐水溶液，经由静脉内输注施用单剂2. Oyg/kg。
[0227] IL-22二聚体 10yg/kg IV给药组(n = 6)(IV组）：IL-22二聚体溶于 100mL5%葡萄 糖/盐水溶液，经由静脉内输注施用单剂I 〇yg/kg。
[0228] IL-22二聚体30yg/kg IV给药组(n = 6)(IV组）：IL-22二聚体溶于 100mL5%葡萄 糖/盐水溶液，经由静脉内输注施用单剂30?/!?。
[0229] IL-22二聚体45yg/kg IV给药组(n = 6)(IV组）：IL-22二聚体溶于 100mL5%葡萄 糖/盐水溶液，经由静脉内输注施用单剂45yg/kg。
[0230] 其中，IL-22二聚体由两个单体亚基组成，每个单体亚基包含SEQ ID NO: 4所示序 列。
[0231] 通过体格检查、实验室测试、体重、生命体征、心电图、和腹部超声等评价安全性。 另外，测定药物浓度、SAA-I、CRP、TG和细胞因子的血清水平。
[0232]结果：
[0233] A.不良事件
[0234] IL-22二聚体2.0yg/kg SC给药组:共有6例不良事件认为与调查药物相关，包括注 射部位皮肤干燥(3例）、红斑(2例）、和钱币样湿疹(1例）。
[0235] IL-22二聚体2.0yg/kg IV给药组:未观察到不良事件。
[0236] IL-22二聚体10yg/kg IV给药组:观察到2例不良事件，包括畏寒(输注相关反应） (1例)和头痛(1例）。
[0237] IL-22二聚体30yg/kg IV给药组:观察到6例不良事件，包括局部皮肤干燥(4例）、 过敏性皮炎(1例）、和输液相关反应(1例）。
[0238] IL-22二聚体45yg/kg IV给药组:观察到12例不良事件，包括局部皮肤干燥(6例）、 眼痒(3例）、红斑疹(2例）、和嗜睡（1例）。
[0239] 安慰剂组:观察到不良事件，包括上呼吸道感染（1例）、嗜睡（1例)和多汗（1例）。
[0240] 不良事件、体格检查、实验室测试、体重、生命体征、心电图、和腹部超声数据、等结 果显示，高达45yg/kg剂量IL-22二聚体单次静脉内施用表现出优秀的安全性概况，未观察 到严重不良事件或者危及生命的不良事件。与2.Oyg/kg剂量水平的SC相比，IL-22二聚体经 由IV给药后报告的不良事件更少，表明研究受试者对IV的耐受要好得多（表2)。结果